王翔飛　潘旭東　劉雯霞　譚　勇

【摘要】目的：本文以新疆產(chǎn)瓦松作為研究對(duì)象，采用比色法，測(cè)定瓦松有效成分總?cè)频暮?。方法：以齊墩果酸作為對(duì)照品，以5%香草醛-冰醋酸、高氯酸作為顯色劑，在540nm波長(zhǎng)處處測(cè)定樣品吸收度。結(jié)果：齊墩果酸在4～16μg／ml線(xiàn)性范圍內(nèi)，線(xiàn)性關(guān)系良好，其回歸方程為：A=0.1082C+0.1105，r=0.9981，所測(cè)瓦松中總?cè)瞥煞譃?.51％,RSD=1.31%。

【關(guān)鍵詞】瓦松;總?cè)?比色法

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1007-8517(2009)10-0011-01

黃花瓦松(Orostachys spinosa (L.) C.A. Mey.)為景天科瓦松屬(Orostachys)二年生肉質(zhì)草本植物，又名昨葉荷草、向天草，為我國(guó)傳統(tǒng)用藥^[1]。其性味酸、苦、涼（《唐本草》等），歸肝、肺、脾經(jīng)（《本草再新》），具有清熱解毒、涼血止血、利濕消腫、抗菌消炎等功效，中國(guó)藥典(2005年版)對(duì)其進(jìn)行了收錄。瓦松屬植物全世界約有13種，主要分布于溫帶地區(qū)，我國(guó)約有10種，在新疆也有著廣泛的分布（新疆藥用植物志第三冊(cè)）。經(jīng)研究表明，萜類(lèi)化合物是其主要有效化學(xué)成分之一。為了更好地利用和開(kāi)發(fā)其藥用成分，本實(shí)驗(yàn)以齊墩果酸為對(duì)照，采用5%香草醛-冰醋酸、高氯酸顯色的方法，首次對(duì)瓦松中總?cè)祁?lèi)成分的含量進(jìn)行測(cè)定，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供了可靠的鑒定依據(jù)。

1試藥及儀器

試藥：所用試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，黃花瓦松采自新疆農(nóng)九師165團(tuán)。齊墩果酸對(duì)照品購(gòu)于武漢卓康科技發(fā)展有限公司。儀器：水浴鍋（SB-1000上海愛(ài)明儀器有限公司）、分光光度計(jì)（722N型上海精密科學(xué)儀器有限公司）

2方法^[2~5]及結(jié)果

2.1對(duì)照液的制備精確稱(chēng)取齊墩果酸對(duì)照品20mg，置于100ml容量瓶中。加甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，備用。

2.2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇將齊墩果酸對(duì)照品加顯色劑后，于分光光度計(jì)上掃描，得吸收光譜圖，結(jié)果如圖1，齊墩果酸在540nm處有一吸收峰，故確定540nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.3顯色劑用量及條件選擇

2.3.15％香草醛-冰醋酸溶液用量的選擇取齊墩果酸對(duì)照品溶液1.0ml5份，水浴揮干，分別加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，各加入高氯酸1.4ml，置70水浴加熱15min，冰浴冷卻后，轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度。搖勻，在540nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收值，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明5%香草醛-冰醋酸用量為0.4ml時(shí)最佳。

2.3.2高氯酸的用量的選擇取齊墩果酸對(duì)照品溶液1.0ml5份，水浴揮干，分別加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸1.0、1.2、1.4、1.6、1.8ml，置70℃水浴加熱15 min，冰浴冷卻后，轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度。搖勻，在540nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收值，結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，高氯酸用量為1.6ml時(shí)最佳。

2.4對(duì)照曲線(xiàn)的制備精確吸取對(duì)照液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml，分別置具塞試管中，揮去溶劑，準(zhǔn)確加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混勻，置7O℃恒溫水浴中加熱15min，冷卻至室溫，并轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，在540nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以不加對(duì)照品溶液而直接加5%香草醛-冰醋酸0.4ml，高氯酸1.6ml，用乙酸乙酯稀釋至刻度的混合溶液為空白對(duì)照，并以A對(duì)濃度C回歸得方程：A=0.1082C + 0.1105，r =0.9981，線(xiàn)性范圍在4～16μg/ml。

2.5供試品溶液的置備精確稱(chēng)取瓦松25mg。置25ml容量瓶中。加乙醚15ml。超聲提取3O分鐘，再添加乙醚至刻度。精密吸取15.0ml，置于25ml容量瓶?jī)?nèi)，揮干溶劑，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

2.6含量測(cè)定方法精確稱(chēng)取供試液溶液3ml，加入10ml容量瓶?jī)?nèi)，揮干溶劑，加乙酸乙酯至刻度，再?gòu)闹芯芪?ml溶液加入10ml容量瓶?jī)?nèi)，揮干溶劑后，加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6 ml，混勻，并由乙酸乙酯稀釋至刻度，按樣品測(cè)定項(xiàng)下操作。代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程，計(jì)算含量。結(jié)果表明總?cè)祁?lèi)成分含量為1.51%(n=5)，RSD=1.31%。2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)同一份樣品按上述方法處理，在1日之內(nèi)，隔1h測(cè)定，共測(cè)6次，得平均含量為1.50，RSD為1.58%，結(jié)果說(shuō)明顯色反應(yīng)在6h基本穩(wěn)定。

2.8加樣回收率試驗(yàn)精密稱(chēng)取已知含量的瓦松粉末0.2g，6份，精密加入齊墩果酸對(duì)照品1mg，照供試品溶液制備方法制成10ml樣品液，各吸取0.1ml，依法顯色后測(cè)定吸收度，見(jiàn)表3，計(jì)算回收率，得平均回收率為98.718%，RSD=0.8644%。

3討論

三萜類(lèi)化合物為藥用植物中主要的有效化學(xué)成份之一，對(duì)藥用植物黃花瓦松中總?cè)瞥煞值臏y(cè)定未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，本文所得結(jié)果表明黃花瓦松中三萜類(lèi)成分含量較高，作為我國(guó)的傳統(tǒng)用藥，可對(duì)其進(jìn)行更深入的研究與開(kāi)發(fā)。比色法是測(cè)定三萜類(lèi)化合物常用方法，本文探討了顯色條件以及反應(yīng)后放置時(shí)間對(duì)含量測(cè)定的影響，結(jié)果表明，香草醛-冰醋酸溶液以及高氯酸用量等因素的影響較為顯著，反應(yīng)后的放置時(shí)間在6h內(nèi)基本穩(wěn)定，此方法簡(jiǎn)單可行，

其結(jié)果較穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，為測(cè)量瓦松中活性成分總?cè)祁?lèi)成分提供了一種有效可靠的分析方法。

參考文獻(xiàn)

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(收稿日期：2009.03.14)