劉麗穎

摘要：且的，建立中藥(青絲線草)中多糖的含量測定方法。方法，采用苯酚一硫酸比色法。結(jié)果，測得含量為13.74％，精密度及重復(fù)性良好，回收率為99 35％.RSD為1.3％。結(jié)論，此方法操作簡便，準(zhǔn)確性好，為中藥(青絲線草)的質(zhì)量控制提供了一個定量方法和參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：青絲線草多糖檢測

0引言

為了檢測中藥的藥效，現(xiàn)以青絲線草為例對其含糖量做以檢測。青絲線草為爵床科Acanthacea槍刀藥屬植物槍刀藥Hypoestes purple(L.)Soland的全草。槍刀藥屬植物中國產(chǎn)3種，均可藥用，分布于中國臺灣、廣東、廣西。味甘淡，性微寒。功能清熱解毒，消炎，消腫散淤，涼血止血，健脾，止咳，生津止渴。用于治療支氣管炎、肺結(jié)核咳血、咳嗽、消渴、糖尿病、刀傷出血、跌打腫痛。據(jù)文獻(xiàn)報道，青絲線草中主要含有氨基酸、生物堿、酚類、糖類等?，F(xiàn)代藥理研究證明，多糖物質(zhì)及其衍生物具有藥用價值，尤其在抗凝、抗血栓、調(diào)血脂、調(diào)節(jié)免疫功能和抗腫瘤、抗放射方面均有顯著的藥理作用與療效。多糖類中藥常作為有效的免疫調(diào)節(jié)劑，能明顯調(diào)節(jié)T，B，CTL，NK和Mφ等細(xì)胞功能；促進(jìn)1g類抗體含量提高，促進(jìn)IL-2產(chǎn)生和IL-2L的表達(dá)，誘導(dǎo)IL-6和TNF的產(chǎn)生。青絲線草中多糖的含量，作為評價該草藥質(zhì)量的指標(biāo)之一。

1儀器與材料

1.1儀器WFH-207B三用紫外分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)；SB-5200超聲波提取器(上海新芝生物技術(shù)研究所)；AB204-N電子分析天平(梅特勒一托利多儀器有限公司)；TDA-8002型恒溫水浴箱(余姚工業(yè)儀器二廠)。

1.2試劑無水葡萄糖(批號：0403251，廣州新成化工廠，AR級)，其余化學(xué)試劑均為國產(chǎn)AR級。

1.3樣品青絲線草產(chǎn)自廣東江門地區(qū)，為爵床科槍刀藥屬植物槍刀藥Hvpoestes purpurea(L.)Soland的全草。

2方法與結(jié)果

2.1青絲線草多糖的提取與精制稱取青絲線草粗粉50g，置圓底燒瓶中，加石油醚(60～90℃)400ml，浸泡2h，回流提取1h，濾過，濾渣揮干溶媒，以80％乙醇400ml回流提取2次；1h／次，濾過，濾渣置圓底燒瓶中，加蒸餾水600ml浸泡1h后回流提取1h，濾過，再加蒸餾水400ml回流提取1h，濾過，濾液合并，濃縮至200ml，Sevage法除蛋白后加95％乙醇使含醇80％，靜置過夜，抽濾，濾渣以無水乙醇、丙酮依次洗滌多次，得精制多糖，60℃烘干備用。

2.2苯酚試液的配制取苯酚100g，加鋁片0.1g和碳酸氫鈉0.05g，蒸餾，收集182℃餾分。稱取5g，加水溶解，定容于100ml棕色容量瓶(臨用前新配)。

2.3測定波長的選擇精密吸取0.02mo1／ml葡萄糖溶液2.0ml,置15ml具塞試管中，加苯酚試劑1.0ml混勻，加濃硫酸5.0ml，混勻，放置15min，置40℃水浴中加熱10min.取出放置15min，以蒸餾水同法操作為空白，在460～510nm測定吸收度，確定最大吸收波長為488nm。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的無水葡萄糖505.6mg，置50ml量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得標(biāo)準(zhǔn)液貯備液。取此貯備液分別稀釋為0.005 056，0.010 112，0.020 224，0.040 448，0.050 560 mg／ml的5個不同濃度的對照品溶液。精密吸取溶液各2.0ml置10ml具塞試管中，加苯酚試劑1.0ml混勻，再迅速加人濃硫酸5.0ml混勻，放置15min后置40℃水浴中加熱10min，取出放置15min，以相應(yīng)試劑為空白，照分光光度法在488nm處測定吸收度。求得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：A=12.975C+0.012，r=0.9998(n=5)。樣品在0.005～0.05 mg／ml的范圍內(nèi)線性良好。

2.5換算因素的測定取60℃干燥至恒重的精制青絲線草多糖約10mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取該溶液2.0ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制各項(xiàng)下方法，自“加苯酚試劑1.0ml起，依法測定吸收度，按下式計(jì)算換算因素：f=Cs／C(Cs為多糖液濃度，C為多糖液中葡萄糖濃度)，計(jì)算得f=3.930

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取樣品溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液及精制多糖溶液各2.0ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下方法，自“加苯酚試劑1.0ml，”起，依法測定吸收度，并分別于0，5，10，15，20，25，30，35，40，50，60min測定，結(jié)果表明樣品液至少在1h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7精密度實(shí)驗(yàn)取樣品約0.2g，精密稱定，按樣品測定項(xiàng)下操作，測吸收度，結(jié)果RSD=0.82％(n=6)。

2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取藥材粉末6份，精密稱定，按樣品測定項(xiàng)下操作，測吸收度，計(jì)算得RSD=0.75％(n=6)。結(jié)果表明該方法具有較好的重復(fù)性。

2.9回收率實(shí)驗(yàn)取藥材粉末6份，每份約0.1g，精密稱定，精密加入精制多糖約13mg，按樣品測定項(xiàng)下操作，測吸收度。

回收率(％)=(測得量－樣品中多糖含量)／多糖加入量×100％

2.10樣品測定取樣品粉末約0.2g，精密稱定，加80％乙醇100ml，超聲振蕩提取20min，過濾，藥渣用熱80％乙醇洗滌，揮干乙醇后加蒸餾水100ml超聲振蕩提取20min，過濾，濾渣再加80ml蒸餾水超聲振蕩提取20min，過濾，殘?jiān)脽崴礈?，洗液并入提取液，待冷后轉(zhuǎn)移于250ml容量瓶，加蒸餾水稀釋至刻度，精密吸取2.0ml，置10ml具塞試管中，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線”項(xiàng)下方法自“加苯酚試劑1.0ml”起，依法操作，測得吸收度，計(jì)算樣品中多糖含量。

3討論

本文利用苯酚一硫酸法測定了青絲線草的主要活性成分一多糖，作為評價該草藥質(zhì)量的指標(biāo)之一。此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究為首次報道，本文對青絲線草的主要化學(xué)成分的研究結(jié)果為開拓新藥源提供了新的科學(xué)用藥依據(jù)。多糖含量的測定有多種方法，本文選用苯酚一硫酸法，生成橙黃色溶液，在488nm處有特征吸收。此方法方便簡單，最為常用，但需嚴(yán)格控制水解條件，否則誤差較大。本實(shí)驗(yàn)方法操作簡單，所用儀器簡單，消耗成本低，在缺乏先進(jìn)檢測儀器的基層單位，實(shí)為一種可靠、簡單的檢測方法。