摘要：顯微鏡的正確使用直接關(guān)系到觀察對象的準確指認。文章結(jié)合實驗教學實踐經(jīng)驗，分析了實驗教學中學生使用顯微鏡存在的問題及產(chǎn)生的原因，對相關(guān)問題提出了相應對策。

關(guān)鍵詞：臨床檢驗學；實驗教學；顯微鏡

臨床檢驗學（以下簡稱臨檢）實驗中對有形成分的形態(tài)觀察，顯微鏡是必需的工具。顯微鏡的種類繁多，最常使用的是普通光學顯微鏡（以下簡稱顯微鏡）。實驗時，是否正確和規(guī)范地使用顯微鏡關(guān)系到能否準確指認觀察對象。如何通過實驗教學，讓學生很好地掌握顯微鏡的使用方法，促進學生提高使用顯微鏡的能力，提高實驗教學

質(zhì)量，滿足臨床實驗對學生素質(zhì)的要求，是教學工作者應該認真思考、積極探索并致力解決的問題。筆者認為，

目前實驗教學中學生使用顯微鏡存在以下問題。

不了解顯微鏡的結(jié)構(gòu)

在臨檢實驗教學中，通過對幾個年級學生的書面問卷調(diào)查，筆者發(fā)現(xiàn)很多學生對顯微鏡結(jié)構(gòu)知道得不是很全面，如調(diào)焦系統(tǒng)的粗動調(diào)焦（以下稱粗調(diào)）與微動調(diào)焦（以下稱微調(diào)），反光鏡、聚光器及光圈等。不熟悉顯微鏡的結(jié)構(gòu)，學生便很難正確和規(guī)范地使用顯微鏡，更談不上把握使用要領(lǐng)和使用能力的提高，使相關(guān)的形態(tài)學實驗教學很被動。針對這一問題，筆者在教學計劃中專門安排具體的實驗課，詳細講解顯微鏡的結(jié)構(gòu)及其作用，同時充分利用課余時間讓學生熟悉顯微鏡的結(jié)構(gòu)，把顯微鏡的使用作為技能考核內(nèi)容，同時也把顯微鏡的一些重要結(jié)構(gòu)及其作用的內(nèi)容在理論考試中體現(xiàn)出來。通過觀察、練習和不斷強化，學生能較快地熟悉顯微鏡的結(jié)構(gòu)特征，并能準確地說出其相應部件的作用，為正確、規(guī)范使用顯微鏡奠定了堅實的基礎(chǔ)。

不能正確認識光線強弱對標本觀察效果的影響

很多學生片面認為：觀察標本時，視野（通過顯微鏡所能看到的標本所在的空間范圍）的光線越強，視野會越清楚，標本會越清晰。其實不然。辨別和指認標本，主要是利用不同有形成分或同一成分不同結(jié)構(gòu)在觀察視野中的顏色或（和）亮度反差。這種反差愈大，結(jié)構(gòu)的典型特征愈突出、愈明顯、愈容易辨認。如果視野光線太強，血涂片中染色的有形成分（如白細胞）各部位亮度和顏色對比反差減低，細微結(jié)構(gòu)模糊不清，不同成分的典型特征（如白細胞核染色質(zhì)、胞漿中的顆粒）不明顯，造成錯誤的指認；液體中有形成分（如尿液中的管型、細胞）與液體環(huán)境的亮度反差本來就小，如果光線太強，則很難找到要被觀察的對象，即使找到，也很難鑒別。另外，視野光線太強容易造成視覺疲勞。因此，觀察標本時，視野的光線要明暗適宜。要有理想的明暗適宜的光線，需要把調(diào)節(jié)反光鏡、聚光器的位置及光圈的大小有機地結(jié)合起來。實驗教學中除了用講解和演示的方法教會學生怎樣調(diào)節(jié)光線之外，還應該有意識地讓學生比較視野中強光線和明暗適宜的光線，比較兩種光線條件下有形成分的觀察效果。

另外，學生在轉(zhuǎn)換物鏡時不注意調(diào)節(jié)光線。不同倍數(shù)的物鏡在同樣的光線下通過通光孔時，視野中的光線強弱會不同。高倍鏡轉(zhuǎn)低倍鏡時，視野光線變強；低倍鏡轉(zhuǎn)高倍鏡時，光線又變?nèi)?。因此，在轉(zhuǎn)換物鏡時要及時調(diào)節(jié)光線，才能觀察到良好的物像。在實驗教學中，教師要詳細講解和規(guī)范示教，更應讓學生對比光線的變化對物像觀察的影響。通過對比，印象鮮明、深刻、持久，真正起到事半功倍的效果。

不了解調(diào)焦系統(tǒng)，盲目調(diào)節(jié)

（一）不熟悉粗調(diào)與微調(diào)的作用方向，盲目調(diào)節(jié)

顯微鏡焦距的調(diào)節(jié)需要通過粗調(diào)或微調(diào)來實現(xiàn)。粗調(diào)與微調(diào)的作用方向是一致的，只是調(diào)節(jié)的幅度大小不同而已。它們的作用方向是：使物鏡頭與標本分離、靠攏。

熟悉和掌握粗調(diào)和微調(diào)的兩種作用的方向，對于觀察標本時顯微鏡的調(diào)焦非常有用，特別是物鏡頭轉(zhuǎn)換（如高倍鏡轉(zhuǎn)換到低倍鏡、低倍鏡直接轉(zhuǎn)換到油鏡頭等）后，如何快速、簡便、準確地調(diào)節(jié)焦距獲得清晰的物象，尤其重要。在實驗教學中，對顯微鏡的使用方法，教師應充分利用教學資源進行分析講解。通過示范操作，使學生了解粗調(diào)和微調(diào)的兩種作用方向；通過分組指導，使用教學標本（如血涂片），讓學生實際操作，使學生熟悉并掌握粗調(diào)和微調(diào)的作用方向。學生通過反復調(diào)節(jié)、細心體會，使用顯微鏡的能力有了長足的進步，很快便能準確地完成焦距調(diào)節(jié)。

另外，多數(shù)學生在剛開始使用顯微鏡觀察有形成分時，沒有很好地使用微調(diào)。其實，微調(diào)的作用不僅在于調(diào)節(jié)焦距。當調(diào)節(jié)到觀察標本所需的焦距而辨別和指認有形成分時，再次使用微調(diào)非常重要。觀察標本時，明暗適宜的光線能形成標本的顏色、亮度反差，對微調(diào)來回地進行小幅度的順時針和反時針調(diào)節(jié)，可以增加這種反差。因此，觀察標本時，應該充分利用微調(diào)，才能獲得較好的觀察效果。

（二）把物鏡頭置于離載玻片很近的位置來調(diào)節(jié)焦距

物鏡頭轉(zhuǎn)換和調(diào)焦是應用顯微鏡時非常重要的步驟，它可以直接影響標本的觀察效果。部分學生錯誤地認為，物鏡離載玻片（標本）越近，越容易調(diào)到焦距，越方便找到物象。其實，這樣容易壓壞蓋玻片或載玻片，弄臟和損壞物鏡頭。導致這種錯誤認識的原因是學生不了解物鏡放大倍數(shù)、焦距、工作距離、長度的相互關(guān)系。

放大倍數(shù)是指顯微鏡經(jīng)多次成像最終所成的像大小相對于原物體大小的比值。放大倍數(shù)由接目鏡（簡稱目鏡）和物鏡共同放大而成。工作距離是指物鏡前表面中心到被觀察標本之間滿足工作要求的距離范圍。工作距離通?？梢越频販y出。物鏡焦距（mm）等于相當光學筒長與放大倍數(shù)的比值。相當光學筒長是物鏡上焦平面到目鏡下焦平面的距離，一般為160mm。通過實際測定近似值和計算，可獲得如表1中物鏡放大倍數(shù)與焦距及工作距離的數(shù)據(jù)。

從上面表中的數(shù)據(jù)不難看到，物鏡的放大倍數(shù)增加，焦距和工作距離反而變小。反之亦然。另外，我們通過觀察顯微鏡的物鏡頭長度，不難發(fā)現(xiàn)顯微鏡配套的物鏡頭長度與放大倍數(shù)的關(guān)系是：放大倍數(shù)增加，物鏡頭長度也增加。因此，轉(zhuǎn)換物鏡頭時要注意到焦距、工作距離和物鏡頭長度的變化，而不是盲目地把物鏡頭置于離標本很近的距離，心中毫無把握地調(diào)節(jié)。

另外，筆者發(fā)現(xiàn)一種非常有用也切實可行的轉(zhuǎn)換物鏡及調(diào)焦的方法。對于配套的物鏡頭，低倍鏡轉(zhuǎn)換到高倍鏡時，低倍鏡找到清晰的物象后，觀察標本需要轉(zhuǎn)換到高倍鏡或油鏡頭，可利用低倍鏡的調(diào)焦結(jié)果直接轉(zhuǎn)換到高倍鏡或油鏡頭，觀察者的眼睛不必離開觀察視野，然后調(diào)節(jié)微調(diào)便可找到清晰的物象，微調(diào)的作用方向應使物鏡和標本分離；高倍鏡或油鏡頭轉(zhuǎn)換到低倍鏡時，則與上面步驟剛好相反。當然，不管如何轉(zhuǎn)換物鏡，都要同時調(diào)節(jié)光線，才能獲得清晰的物象。

使用物鏡觀察標本時不按先低倍鏡后高倍鏡的順序

部分學生剛開始使用物鏡觀察標本時，直接用所需放大倍數(shù)的物鏡，而不按先低倍鏡后高倍鏡的順序。不同放大倍數(shù)的物鏡，能觀察到的視野范圍不同，倍數(shù)越高，觀察到的視野范圍越小，反之亦然。不管用何種放大倍數(shù)的高倍鏡或油鏡觀察標本，先用低倍鏡觀察都是實驗中不可或缺的重要步驟。如染色血片細胞的分類計數(shù)，先使用低倍鏡可以觀察細胞的染色情況、細胞的分布情況以及是否有染料雜質(zhì)覆蓋在細胞上，這些均可以為準確指認細胞及觀察細胞的質(zhì)和量的變化提供有力的依據(jù)。

觀察液體標本中的有形成分（如細胞、管型），先使用低倍鏡同樣重要。這些標本中不同特征的成分可能分布在不同的液層。適宜的視野光線條件下，用高倍鏡觀察同一種成分可獲得內(nèi)容物（如胞漿中的顆粒）較清晰的物象效果。但是，在使用高倍鏡觀察不同液層的有形成分時，調(diào)節(jié)焦距時可移動的距離比低倍鏡要小。對于剛接觸顯微鏡的學生來說，容易把物鏡頭浸泡到液體中壓壞載玻片或蓋玻片。使用低倍鏡觀察調(diào)節(jié)焦距時，由于可移動的距離較大，方便查找、觀察不同的有形成分。

參考文獻：

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[2]叢玉隆，王淑娟.今日臨床檢驗學[M]．北京：科學技術(shù)出版社，1997．

[3]袁繡芬，韓文祥，王曉萍．顯微鏡使用的誤區(qū)［J］．檢驗醫(yī)學教育，2002，（2）．

作者簡介：

曾順良（1972—），男，湖南益陽人，廣東省潮州衛(wèi)生學校講師，主要從事《臨床檢驗學》、《生物化學》等課程教學。

（本文責任編輯：楊在良）