王正波 王偉麗 高 芳 孟建升

[摘要] 目的 建立溶栓膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用HPLC法對(duì)溶栓膠囊中丹酚酸B的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果 溶栓膠囊中丹酚酸B的含量在0.158-2.37μg的范圍內(nèi),有良好的線性關(guān)系,r=0.9999,平均回收率為99.91%,RSD為1.09%。結(jié)論 建立了溶栓膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),該方法操作易行,穩(wěn)定可靠,用于溶栓膠囊中丹酚酸B的含量,可以用于該制劑的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 溶栓膠囊;丹酚酸B;HPLC

[中圖分類(lèi)號(hào)] R927.2[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1004-8650(2009)12-170-02

溶栓膠囊是經(jīng)批準(zhǔn)生產(chǎn)的醫(yī)院中藥制劑,處方由葛根,當(dāng)歸,紅花,水蛭等七味藥組成,具有活血、破瘀、通經(jīng)散結(jié)、抗凝血,主治血瘀閉經(jīng),可降血壓降低血液黏稠度,防止血栓的形成和預(yù)防及治療中風(fēng)、冠心病等,經(jīng)過(guò)多年的臨床應(yīng)用證明其療效顯著。其主藥葛根的主要成分是丹酚酸B,因此,測(cè)定溶栓膠囊制劑中丹酚酸B含量對(duì)控制溶栓膠囊的質(zhì)量有著十分積極的意義。所以為了進(jìn)一步提高標(biāo)準(zhǔn),保證制劑的穩(wěn)定可靠,我們采用高效液相法對(duì)制劑中的丹酚酸B進(jìn)行了含量測(cè)定。

1儀器與試藥

Agilent1200高效液相色譜儀;色譜柱Agilent-C18(5μm,4.6mm×150mm),AEU-210電子天平,丹酚酸B對(duì)照品(批號(hào):111562-200504,中國(guó)藥品生物制品檢定所),溶栓膠囊為商丘市中醫(yī)院提供(批號(hào)為090508,090509,090510),缺位陰性對(duì)照樣品由商丘市中醫(yī)院提供。甲醇為色譜純,水為純化水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件[1]

Agilent-C18色譜柱(150mm×4.6mm,5μm),流動(dòng)相:甲醇-乙腈-冰醋酸-水(30:10:1:59),檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm,柱溫:25℃,流速為1.0ml/min,進(jìn)樣量10μl。

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取對(duì)照品丹酚酸B 15.80mg,置100ml的量瓶中,加75%甲醇溶解至刻度,搖勻,即得。

2.3供試品溶液的制備[1-2]

取供試品去除囊殼,傾出內(nèi)容物研細(xì),混勻,精密稱(chēng)定1.0g,置具塞錐形瓶中,精密加入75%的甲醇50ml,稱(chēng)定重量,加熱回流1小時(shí),放冷,再稱(chēng)定重量,用75%的甲醇補(bǔ)足減失重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,用0.45μm 微孔濾膜濾過(guò),即得。

2.4陰性對(duì)照品溶液的制備

除丹參外,其他各藥按供試品處方量投料按溶栓膠囊的制備工藝制成陰性對(duì)照品,然后按供試品的制備方法,制成陰性對(duì)照品溶液的制備。

2.5系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

2.5.1 線性關(guān)系考察:分別吸取對(duì)照品溶液(0.158mg/ml)2.5、5、8、10、12、15μl各進(jìn)樣兩次,記錄峰面積分值,以丹酚酸B峰面積積分值對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸,得到回歸曲線Y=33.919X-18.628,r=0.9999。結(jié)果表明其線性關(guān)系良好,線性范圍為:0.158-2.37μg 。

2.5.2 精密度試驗(yàn):精密吸取上述對(duì)照品溶液10μL ,重復(fù)進(jìn)樣6 次,按上述色譜條件測(cè)定峰面積。結(jié)果, RSD = 0.34% ,表明儀器精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn):精密稱(chēng)取同一批(批號(hào):090508) 樣品6 份,照“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按上述色譜條件進(jìn)樣,測(cè)定。結(jié)果,平均含量為1.53mg/粒,RSD=0.27% ,表明本方法重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn):取供試品溶液(批號(hào): 090508),分別于0、1、2、4、8、12h 各精密吸取10μl,按上述色譜條件測(cè)定峰面積積分值。結(jié)果,RSD=0.51%,表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn):取已知含量的樣品6份各約0.5g,精密稱(chēng)重,分別精密加入一定量的丹酚酸B對(duì)照品,照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按上述色譜條件進(jìn)樣10μl,測(cè)定,計(jì)算回收率。結(jié)果詳見(jiàn)表1。

3 樣品含量測(cè)定

按上述含量測(cè)定方法測(cè)定樣品中丹酚酸B含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

4結(jié)論

在供試品制備的過(guò)程中,也曾考慮到其他樣品對(duì)葛根提取以及含量測(cè)定的影響[3],考察了用不同濃度的乙醇進(jìn)行提取,結(jié)果發(fā)現(xiàn)以30%乙醇照中國(guó)藥典2005版一部葛根項(xiàng)下規(guī)定的提取,效果較好,峰面積較大,所以本試驗(yàn)供試品的處理方法為中國(guó)藥典葛根項(xiàng)下的方法。

溶栓膠囊是醫(yī)院制劑,在長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐中證明,就有良好的療效,但是長(zhǎng)期以來(lái),以薄層鑒別作為該藥的標(biāo)準(zhǔn),沒(méi)有具體的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),葛根是溶栓膠囊的主藥之一,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)用HPLC法對(duì)溶栓膠囊中丹酚酸B的含量進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn),建立了溶栓膠囊制劑的質(zhì)量控制方法,該方法穩(wěn)定可靠,操作簡(jiǎn)便,專(zhuān)屬性較強(qiáng),可以作為溶栓膠囊制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的參考。

參考文獻(xiàn):

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:52.

[2] 楊翠微,張俊偉.HPLC測(cè)定參蘇丸中丹酚酸B的含量[J].湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2000,6(16):36.

[3] 邵陸,李振志.HPLC法測(cè)定愈風(fēng)寧心膠囊中丹酚酸B的含量[J].齊魯藥事,2001,(4):23.

(收稿日期2009-08-23)