陳正國(guó)

摘 要:我院182例嬰兒鼻咽拭子細(xì)胞培養(yǎng)沙眼衣原體22%(40/182)呈陽(yáng)性,筆者認(rèn)為鼻咽拭子與鼻咽部抽吸物培養(yǎng)效果相當(dāng),前者更適宜于臨床應(yīng)用;另從標(biāo)本采集與貯藏溫度角度提出方法學(xué)改進(jìn)以提高培養(yǎng)的靈敏度,總結(jié)出嬰兒沙眼衣原體肺炎常見(jiàn)的特征性癥狀體征,從而引起兒科醫(yī)師對(duì)本病的高度重視。

關(guān)鍵詞:沙眼衣原體;嬰兒;肺炎;細(xì)胞培養(yǎng)

中圖分類(lèi)號(hào):R374+.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1673-2197(2009)06-0073-02

沙眼衣原體(Chlamydia Trachomatis,CT)是西方發(fā)達(dá)國(guó)家最常見(jiàn)的性病病原體[1],嬰兒CT感染主要是通過(guò)被感染的產(chǎn)道獲得。宮頸CT感染者其陰道產(chǎn)兒60%~70%可被感染,其中20%~50%發(fā)生包涵體結(jié)膜炎,10%~20%發(fā)生CT肺炎[2]。為探討嬰兒CT肺炎的發(fā)病情況及臨床特點(diǎn),筆者對(duì)我院2007年6月-2008年5月收治的182例肺炎患兒進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室檢查及臨床分析。

1 資料和方法

1.1 資料

1.1.1 研究對(duì)象 2007年6月-2008年5月,于本院就診的肺炎患兒182例,其中男嬰110例,女?huà)?2例;剖宮產(chǎn)兒31例。納入標(biāo)準(zhǔn):年齡2周-3月;病史和體檢診斷為感染性肺炎;X胸片證實(shí)為肺炎。

1.1.2 主要材料 McCoy細(xì)胞株(小鼠細(xì)胞)為本室保存,RP-MI1640培養(yǎng)基,胎牛血清。

1.2 檢測(cè)方法

按美國(guó)CDC推薦方法并略作改良[3]:

1.2.1 標(biāo)本采集

①鼻咽拭子:將套上無(wú)菌小塑料管的特制竹簽脫脂棉拭子經(jīng)鼻前庭插入鼻咽部,用力旋轉(zhuǎn)約5s后立即退入塑料管內(nèi),隨管一并取出以免被鼻腔內(nèi)細(xì)菌污染;②鼻咽抽吸物:將無(wú)菌新生兒胃管經(jīng)鼻插入鼻咽部,用20mL無(wú)菌空針抽吸,見(jiàn)抽吸物量>0.2mL后拔管,將所采集的標(biāo)本充分混懸于2SP轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中,擠盡液體棄去棉拭子。不能在8h內(nèi)接種者置-70℃保存。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)

(1)單層細(xì)胞的準(zhǔn)備。培養(yǎng)瓶中生長(zhǎng)良好的McCoy細(xì)胞用0.02%EDTA消化后,加入RPMI1640培養(yǎng)液均勻混懸細(xì)胞,以1mL分裝于24孔培養(yǎng)板中,使細(xì)胞濃度為1×105/mL～2×105/mL,36℃0.5%CO₂孵箱內(nèi)孵育48h,使之長(zhǎng)為均勻融合的細(xì)胞單層。

(2)標(biāo)本接種、培養(yǎng)。冰壺保存者直接接種。-70℃保存者先用37℃水浴融解,再用滴管用力吹打標(biāo)本后,接種于準(zhǔn)備好的細(xì)胞單層,3000rpm35℃離心1h,再35℃孵育2h,棄上清換含防線菌酮(1ng/L)和70g/L聚乙二醇的1640培養(yǎng)基,36℃5%CO₂下孵育48h后,-70℃凍融3次再盲傳2代。

(3)碘染色、鏡檢。棄培養(yǎng)液用PBS輕輕沖洗細(xì)胞2次,以無(wú)水甲醇固定10min后加過(guò)濾的John氏染液1mL染色20～30min,1∶1碘甘油封固。在400倍光學(xué)顯微鏡下發(fā)現(xiàn)被染色細(xì)胞胞漿中有棕黑色包涵體者為陽(yáng)性。所有鏡檢均在盲傳后48～72h內(nèi)完成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

χ²檢驗(yàn)(SAS統(tǒng)計(jì)軟件)。

2 結(jié)果

2.1 鼻咽拭子培養(yǎng)

182例鼻咽拭子培養(yǎng)中,除去被細(xì)菌污染的17例,CT培養(yǎng)陽(yáng)性率為23.6(40/165)。臨床特點(diǎn)如下:①剖宮產(chǎn)兒CT均陰性.而非剖宮產(chǎn)兒CT陽(yáng)性率27.2%(40/147),差異有顯著性,χ²=15.13,P<0.01;②低熱(腋溫37.5℃～38℃或24h內(nèi)體溫波動(dòng)>1℃)24例(60.0%),無(wú)熱15例(37.8%),僅2例高熱(2.5%);③40例均有呼吸增快,34例(85.0%)有陣陣單咳,28例(70.0%)有紫紺,27例(67.5%)有中細(xì)濕啰音,7例(17.5%)有喘鳴音;④16例(40.0%)有結(jié)膜炎或結(jié)膜炎史;⑤X線胸片均顯示不同類(lèi)型的浸潤(rùn)陰影,肺紋理增粗,33例(82.5%)有過(guò)度充氣;⑥平均病理期為21d。

2.2 鼻咽拭子與鼻咽抽吸物培養(yǎng)結(jié)果

對(duì)63名患兒作自身配對(duì)經(jīng)左右鼻孔同時(shí)取鼻咽拭子和鼻咽抽吸物培養(yǎng),前者CT陽(yáng)性11例(17.46%),略高于后者10例(15.87%),經(jīng)χ²檢驗(yàn)兩者污染率χ²=0.315,P>0.05及陽(yáng)性率χ²=0.05,P>0.05之間無(wú)顯著差別。

3 討論

細(xì)胞培養(yǎng)是確診CT感染的傳統(tǒng)金標(biāo)準(zhǔn),其特異性為100%,可從以下兩方面提高培養(yǎng)的陽(yáng)性率:①標(biāo)本采集:CT肺炎的診斷以從呼吸道獲取標(biāo)本為主,可為鼻咽拭子和氣管或鼻咽抽吸物,3者中以氣管抽吸物的特異性最好,但取材困難,需借助喉鏡或支氣管鏡,鼻咽抽吸物和鼻咽拭子取材則較容易,對(duì)診斷CT肺炎亦有較高特異性。本實(shí)驗(yàn)鼻咽拭子陽(yáng)性率高的原因,主要是采樣時(shí)均用無(wú)菌塑料管套住拭子,防止了鼻腔內(nèi)其它菌污染拭子;②標(biāo)本貯藏溫度:室溫(23℃)貯存1d陽(yáng)性率銳減到34.4%,2d則降為0%;4℃貯存1d陽(yáng)性率可保存95.7%,3d降為56.4%,8d即降為0%;-70℃貯存3d保存91.7%的陽(yáng)性率。本文標(biāo)本均為當(dāng)時(shí)接種或-70℃凍存,得出少數(shù)民族地區(qū)小嬰兒CT肺炎發(fā)病率為20.9%,發(fā)病常在4周~11周,常不發(fā)熱或僅有低熱,開(kāi)始可有上呼吸道感染癥狀;下呼吸道主要表現(xiàn)為呼吸增快和特征性的陣發(fā)性單聲咳嗽,呼吸增快有時(shí)可為唯一的線索;X線胸片顯示雙肺過(guò)度充氣,散在的雙側(cè)間質(zhì)性浸潤(rùn)或小片肺泡浸潤(rùn)。對(duì)年齡在6個(gè)月內(nèi)尤其是3個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)上述特征的、病程>1周以上的嬰兒,用青霉素類(lèi)、氨基糖甙類(lèi)或頭孢菌素類(lèi)治療無(wú)效者應(yīng)考慮為CT肺炎。治療首選紅霉素50mg/kg/d持續(xù)14d,一般用藥5~7d癥狀即可改善,同時(shí)CT培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰,約1個(gè)月內(nèi)X線胸片轉(zhuǎn)為正常。嬰兒患CT肺炎后數(shù)年遷延不愈可發(fā)生慢性呼吸功能不全,因此,嬰兒CT肺炎應(yīng)引起廣大兒科醫(yī)師的高度重視。

參考文獻(xiàn):

[1] SCHACHTER J.Epidemiology of chlamydia trachomatis infections.Proceedings 7th international symposium on chlamydia infections[M]. Cambridge:Cambridge university press,1995.

[2] REMINGRON JS,KLEIN JO.Infectious diseases of fetus and newborn infants[M]. Philadelphia:Saunders,1990.

[3] BIRD BR,FORRESTER FT(全國(guó)性病防治中心譯).沙眼衣原體感染的臨床和實(shí)驗(yàn)室診斷[M].南京:全國(guó)性病防治中心,1990.

[4] WEISS SG,NNEWEOMB RW,BEEM MO.Pulmonary assessment of children after chlamydia trachomatis pneumoia in infancy[J]. pediatr,1986,6(2):36.

(責(zé)任編輯:姜付平)