段　啟　莊義修　陳華師

摘 要:目的:測(cè)定不同產(chǎn)地梔子中梔子苷的含量。方法:采用外標(biāo)法,大連依利特ODS(4.6mm×200mm,5μm)色譜柱,流動(dòng)相:乙腈-水(15∶85),流速為1.0mL/min,柱溫25℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm。結(jié)果:測(cè)得7產(chǎn)地的10批梔子中梔子苷含量最高為7.06%,最低為2.89%。結(jié)論:不同產(chǎn)地梔子中梔子苷含量由于土壤等各種因素的影響,差異較為明顯。

關(guān)鍵詞:梔子;梔子苷;高效液相色譜法

中圖分類號(hào):R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1673-2197(2009)06-0020-02

梔子為茜草科植物梔子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果實(shí),為臨床常用中藥,其性寒味苦,無毒,入心、肝、肺、三焦經(jīng),具有瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒之功效。梔子藥理研究表明其具有抗炎、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、保肝利膽、抗凝血等作用[1],環(huán)烯醚萜類化合物和二萜色素類化合物是梔子的主要成分,也是其主要生物活性物質(zhì)。梔子苷是梔子的主要活性成分,具有抗炎、解熱、利膽等作用;水提取物有利膽、降壓、抗菌消炎作用;醇提取物有解熱、鎮(zhèn)靜作用。本文建立了HPLC測(cè)定梔子中梔子苷含量的方法[2],對(duì)7產(chǎn)地的10批梔子中梔子苷含量進(jìn)行了測(cè)定,為中藥梔子的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

美國(guó)Agillent 1100高效液相色譜儀,二級(jí)陣列檢測(cè)器,1100色譜工作站。梔子苷(Geniposide)對(duì)照品(批號(hào)110749-200309)購自中國(guó)藥品生物制品檢定所。乙腈和甲醇均為色譜純,水為純化水。藥材及中試飲片樣品購自不同產(chǎn)地,其中江西泰和、江西秀谷、浙江淳安各2批,江西永豐、湖南瀏陽、浙江蒼南、福建貫嶺各1批。經(jīng)廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院中藥標(biāo)本館鑒定為茜草科植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

大連依利特ODS(4.6mm×200mm,5μm)色譜柱。流動(dòng)相:乙腈-水(15∶85),流速為1.0mL/min,柱溫25℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm,進(jìn)樣量10μL。色譜圖見圖1。

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2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取梔子苷對(duì)照品0.74mg,置于20mL容量瓶中,用50%甲醇溶解定容至刻度,制成含有梔子苷0.037mg/mL的儲(chǔ)備液,即得。

2.3 供試品溶液的制備

稱取梔子粉末(過2號(hào)篩)約0.50g,精密稱定,置于具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25mL,稱定質(zhì)量,超聲20min,放涼,補(bǔ)重,用0.45μm微孔濾膜過濾即可進(jìn)樣。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取梔子苷對(duì)照品儲(chǔ)備液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL,在上述色譜條件下進(jìn)行分析,以梔子苷色譜峰面積(Y)對(duì)質(zhì)量濃度(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明:梔子苷在0.74~37μg/mL范圍內(nèi),峰面積與質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系,回歸方程為:Y=1153X+17.045,r=0.9996。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取梔子供試品溶液,在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次,分別測(cè)定梔子苷的峰面積,結(jié)果RSD為:0.09%。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取梔子6份各約0.50g,精密稱定,按“2.3”項(xiàng)下操作,按上述色譜條件測(cè)定各樣品的峰面積,計(jì)算各對(duì)照品的質(zhì)量分?jǐn)?shù),梔子苷的RSD為:0.87%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取梔子供試品溶液,分別于0、1、2、4、6、8h在上述色譜條件下進(jìn)樣分析。計(jì)算梔子苷的含量,RSD為:0.18%,結(jié)果表明供試品在8h內(nèi)穩(wěn)定(n=6)。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

稱取已知量的梔子藥材粉末約0.20g,精密稱定,分別按相當(dāng)于藥材中梔子苷100%的量加入對(duì)照品溶液,按“2.3”項(xiàng)下操作,配制成高、中、低3個(gè)水平的加樣供試品溶液(各水平平行操作3份),在上述色譜條件下進(jìn)樣分析,計(jì)算回收率。梔子苷的平均回收率為100.88%,RSD為1.75%。

2.9 樣品測(cè)定

按上述方法對(duì)各產(chǎn)地梔子進(jìn)行測(cè)定,進(jìn)樣量為10μL,以外標(biāo)法計(jì)算梔子苷的含量。結(jié)果見表1。

3 討論

(1)本文利用DAD檢測(cè)器獲得梔子苷的HPLC圖譜;出峰時(shí)間適中,峰形對(duì)稱,分離度符合要求;所用樣品含量測(cè)定提取方法的方法學(xué)考察符合要求;簡(jiǎn)化了梔子含量測(cè)定的繁瑣步驟,為探索制訂完善梔子原藥材、炮制飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。檢測(cè)結(jié)果表明:不同產(chǎn)地梔子含量差別明顯,福建產(chǎn)梔子苷含量較高,為7.06%;江西永豐產(chǎn)梔子苷較低,為2.89%。2005年版藥典規(guī)定梔子中梔子苷(C₁₇H₂₄O₁₀)含量不得低于1.8%[3],說明10批藥材含量均符合標(biāo)準(zhǔn)要求,但同時(shí)表明藥材產(chǎn)地的不同環(huán)境和土壤條件對(duì)藥材內(nèi)在活性成分影響明顯。

(2)檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇:經(jīng)過Agilent 1100 DAD三維圖譜分析,梔子苷在238nm處有最大吸收,因此確定238nm為其檢測(cè)波長(zhǎng)。

(3)流動(dòng)相的選擇:本實(shí)驗(yàn)曾經(jīng)試過乙腈-水、甲醇-水等不同的流動(dòng)相系統(tǒng),發(fā)現(xiàn)乙腈-水系統(tǒng)可獲得較好峰形和適合的極性范圍;進(jìn)而嘗試了不同的乙腈-水流動(dòng)相比例,結(jié)果乙腈-水(15∶85)流動(dòng)相洗脫,獲得較好的分離,3個(gè)成分的分離度均大于1.5,拖尾因子在0.95～1.05。

(4)提取方法的選擇:分別考察了甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等不同提取溶劑,超聲、回流等不同提取方式,并進(jìn)行了提取時(shí)間為10min、15min、20min、30min、1h,提取次數(shù)為1次、2次的考察,結(jié)果表明,以甲醇超聲20min 1次即可提取完全,與長(zhǎng)時(shí)間的提取結(jié)果相差很小,因此確定該提取方法。

(5)如今市場(chǎng)上藥材良莠不齊,本實(shí)驗(yàn)對(duì)10批主產(chǎn)地梔子藥材中梔子苷含量做了測(cè)定,可為中藥梔子的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供一定的科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn):

[1] 朱振家,錢之玉,陸麗華,等.梔子提取物京尼平苷和西紅花苷利膽作用的研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2007,13(11):841.

[2] 趙靜,游國(guó)鈞,李輝,等.不同采收時(shí)期梔子中梔子苷的含量測(cè)定[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2007,13(7):102.

[3] 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

(責(zé)任編輯:姜付平)

Determination of Jasminoidin in Gardenia from Different Areas by HPLC

Duan Qi1,Zhuag Yixiu1,Chen Huashi2

Abstract:Object:To develop a method using HPLC for determination content of Jasminoidin in Gardenia from different areas. Methods:Column: ODS C18(4.6mm×200mm,5μm),mobile phase: acetonitrile–water(15∶85),detected wavelength:238nm. The column temperature was maintained at 25℃. Results:To determination of Jasminoidin in Gardenia from ten areas, the highest was 7.06% and the lowest was 2.89%. Conclusion: The HPLC method is simply and suitable to control quantitative of Gardenia, many facts show a influence on the contents of Jasminoidin in Gardenia from different areas.

Key words:Gardenia;Jasminoidin;HPLC