于洪波
【摘要】 目的 評(píng)價(jià)白帶中白色念珠菌的致病性和指導(dǎo)抗真菌藥物的合理使用。方法 對(duì)大慶市中醫(yī)醫(yī)院2003年1月至2004年12月白帶標(biāo)本中分離的300株白色念珠菌進(jìn)行蛋白酶測(cè)定,同時(shí)測(cè)定氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果 300株白色念珠菌全部檢出蛋白酶,其中蛋白酶活力高、中、低檢出率分別為83.7%(251株)、12.7%(37株)、4.0%(12株)。4種抗真菌藥物的耐藥率分別是17.3%、11.3%、63.3%和44.6%。結(jié)論 白帶中白色念珠菌具有致病性,臨床應(yīng)密切關(guān)注。
【關(guān)鍵詞】白色念珠菌;白帶;蛋白酶;耐藥性
白色念珠菌是人體正常菌群之一,主要寄生于人體的體表及口腔咽喉等部位,是引起女性生殖道感染的常見(jiàn)菌。筆者對(duì)我院2003年1月至2004年12月300株白帶標(biāo)本分離的白色念珠菌酸性蛋白酶(acid proteinase,AP)以及白色念珠菌對(duì)氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐藥性進(jìn)行檢測(cè),以期闡明白帶中白色念珠菌的致病性和耐藥性,指導(dǎo)臨床合理治療。
1 資料與方法
1.1 材料
1.1.1 菌珠 我院檢驗(yàn)科2003年1月至2004年12保存的白帶標(biāo)本中分離的白色念珠菌300株。經(jīng)形態(tài)學(xué)、芽管生成、假菌絲、厚膜孢子、糖同化等試驗(yàn)系統(tǒng)鑒定,確定為白色念珠菌。
1.1.2 培養(yǎng)基 哥倫比亞血平板(重慶市龐通科貿(mào)有限公司);產(chǎn)酶培養(yǎng)基:葡萄糖20.0 g/L,酵母粉1.0 g/L,KH2PO41.0 g/L,蛋白胨20.0 g/L,pH4.5[1];YGM-牛奶培養(yǎng)基:葡萄糖20.0 g/L,酵母粉1.0 g/L,KH2PO41.0 g/L,瓊脂10.0 g/L,pH4.5[1]。滅菌后冷卻到50℃加脫脂牛奶(濃度為1.0%)。培養(yǎng)基厚度:9 cm直徑平板準(zhǔn)確加入25 ml培養(yǎng)基,約4.0 mm厚。
1.1.3 藥敏測(cè)定板 法國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn)的酵母真菌藥敏測(cè)定板ATB?FUNGUS2。
1.2 方法
1.2.1 AP活力的恢復(fù) 用產(chǎn)酶培養(yǎng)基37℃增菌24 h,轉(zhuǎn)種于哥倫比亞血平板37℃培養(yǎng)24 h,用來(lái)恢復(fù)白色念珠菌的產(chǎn)酶等生物學(xué)活性,保存于4℃?zhèn)溆谩?/p>
1.2.2 白色念珠菌AP活力測(cè)定[1]試驗(yàn)菌株點(diǎn)種于YGM-牛奶平板上,37℃培養(yǎng)72 h后,用游標(biāo)卡尺測(cè)量菌落及其周圍透明環(huán)的直徑,以透明環(huán)直徑/菌落直徑(R)來(lái)判斷酶活力的大小。
1.2.3 抗真菌藥物耐藥性測(cè)定 嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行操作,結(jié)果按照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行敏感、中介和耐藥的判定,兩性酶素B最低抑菌濃度(MIC)≥2 mg/L為耐藥。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用WHONET5.2統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
2 結(jié)果
2.1 白色念珠菌AP活力 300株白色念珠菌在其菌落周圍均出現(xiàn)透明環(huán),R的范圍是1.61~6.29,按R大小將試驗(yàn)菌株分為高活力(R≥3.0)251株,占83.7%;中等活力(2.0≤R<3.0)37株,占12.7%;低等活力(R<2.0)12株,占4.0%。
2.2 300株白色念珠菌對(duì)常用抗真菌藥物的耐藥性 300株白色念珠菌對(duì)氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐藥率為17.3%(52/300)、11.3%(34/300)、63.3%(190/300)、44.6%(134/300)。
3 討論
AP的檢測(cè)方法有多種,其中牛奶平板檢測(cè)法具有簡(jiǎn)單、靈敏、不需染色可直接觀察結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用YGM-牛奶平板法,檢測(cè)了300株從白帶標(biāo)本分離的白色念珠菌AP,結(jié)果其產(chǎn)酶率達(dá)到100%,且高活力達(dá)83.7%,而低活力僅為4.0%,中度活力占12.7%,與國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道一致。
白色念珠菌的致病性由AP、莢膜及黏附性、芽管生成和疏水性等構(gòu)成。其中AP為主要的致病因子,有文獻(xiàn)報(bào)道白色念珠菌AP的活性與毒力(r=0.994 6)、黏附(r=0.994 4)密切相關(guān)[1]。菌體表面的疏水性是白色念珠菌重要的毒性因子,疏水性白色念珠菌較親水性白色念珠菌產(chǎn)生芽管的速度快,其黏附組織、塑料、導(dǎo)管和人造瓣膜的能力強(qiáng)。
筆者測(cè)得白帶標(biāo)本中白色念珠菌對(duì)氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐藥率分別是17.3%、11.3%、63.3%、44.6%,明顯高于呼吸道中的白色念珠菌[2-4],說(shuō)明白帶中白色念珠菌對(duì)氟康唑、伊曲康唑的耐藥性已相當(dāng)嚴(yán)重,這可能與臨床局部使用過(guò)多唑類制劑,抗真菌藥物選擇壓力增大有關(guān)。因此,臨床對(duì)治療白色念珠菌陰道炎時(shí)應(yīng)慎用抗真菌藥物,避免耐藥性的積累。真菌耐藥除與選擇壓力有關(guān)外,目前研究認(rèn)為白色念珠菌耐藥性的產(chǎn)生原因?yàn)椋孩冫溄晴薮忌锖铣赏分嘘P(guān)鍵靶酶的變化;②真菌胞膜內(nèi)藥物濃度的降低;③生物被膜的形成等?,F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)許多白色念珠菌感染的發(fā)生與生物被膜形成有關(guān)[5]。
本研究通過(guò)對(duì)白帶標(biāo)本中白色念珠菌AP的測(cè)定和對(duì)常用抗真菌藥物耐藥性分析,證明白色念珠菌具有相當(dāng)?shù)闹虏⌒?,且?duì)常用抗真菌藥物已產(chǎn)生不同程度的耐藥,說(shuō)明在白帶標(biāo)本中白色念珠菌分離培養(yǎng)和藥敏分析十分重要。
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