于洪波

【摘要】 目的 評(píng)價(jià)白帶中白色念珠菌的致病性和指導(dǎo)抗真菌藥物的合理使用。方法 對(duì)大慶市中醫(yī)醫(yī)院2003年1月至2004年12月白帶標(biāo)本中分離的300株白色念珠菌進(jìn)行蛋白酶測(cè)定，同時(shí)測(cè)定氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的最低抑菌濃度（MIC）。結(jié)果 300株白色念珠菌全部檢出蛋白酶，其中蛋白酶活力高、中、低檢出率分別為83．7%（251株）、12．7%（37株）、4．0%（12株）。4種抗真菌藥物的耐藥率分別是17．3%、11．3%、63．3%和44．6%。結(jié)論 白帶中白色念珠菌具有致病性，臨床應(yīng)密切關(guān)注。

【關(guān)鍵詞】白色念珠菌；白帶；蛋白酶；耐藥性

白色念珠菌是人體正常菌群之一，主要寄生于人體的體表及口腔咽喉等部位，是引起女性生殖道感染的常見(jiàn)菌。筆者對(duì)我院2003年1月至2004年12月300株白帶標(biāo)本分離的白色念珠菌酸性蛋白酶（acid proteinase，AP）以及白色念珠菌對(duì)氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐藥性進(jìn)行檢測(cè)，以期闡明白帶中白色念珠菌的致病性和耐藥性，指導(dǎo)臨床合理治療。

1 資料與方法

1．1 材料

1．1．1 菌珠 我院檢驗(yàn)科2003年1月至2004年12保存的白帶標(biāo)本中分離的白色念珠菌300株。經(jīng)形態(tài)學(xué)、芽管生成、假菌絲、厚膜孢子、糖同化等試驗(yàn)系統(tǒng)鑒定，確定為白色念珠菌。

1．1．2 培養(yǎng)基 哥倫比亞血平板（重慶市龐通科貿(mào)有限公司）；產(chǎn)酶培養(yǎng)基：葡萄糖20．0 g/L，酵母粉1．0 g/L，KH2PO41．0 g/L，蛋白胨20．0 g/L，pH4．5^[1]；YGM-牛奶培養(yǎng)基：葡萄糖20．0 g/L，酵母粉1．0 g/L，KH2PO41．0 g/L，瓊脂10．0 g/L，pH4．5^[1]。滅菌后冷卻到50℃加脫脂牛奶（濃度為1．0%）。培養(yǎng)基厚度：9 cm直徑平板準(zhǔn)確加入25 ml培養(yǎng)基，約4．0 mm厚。

1．1．3 藥敏測(cè)定板 法國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn)的酵母真菌藥敏測(cè)定板ATB?FUNGUS2。

1．2 方法

1．2．1 AP活力的恢復(fù) 用產(chǎn)酶培養(yǎng)基37℃增菌24 h，轉(zhuǎn)種于哥倫比亞血平板37℃培養(yǎng)24 h，用來(lái)恢復(fù)白色念珠菌的產(chǎn)酶等生物學(xué)活性，保存于4℃?zhèn)溆谩?/p>

1．2．2 白色念珠菌AP活力測(cè)定^[1]試驗(yàn)菌株點(diǎn)種于YGM-牛奶平板上，37℃培養(yǎng)72 h后，用游標(biāo)卡尺測(cè)量菌落及其周圍透明環(huán)的直徑，以透明環(huán)直徑/菌落直徑（R）來(lái)判斷酶活力的大小。

1．2．3 抗真菌藥物耐藥性測(cè)定 嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行操作，結(jié)果按照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行敏感、中介和耐藥的判定，兩性酶素B最低抑菌濃度（MIC）≥2 mg/L為耐藥。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用WHONET5．2統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2．1 白色念珠菌AP活力 300株白色念珠菌在其菌落周圍均出現(xiàn)透明環(huán)，R的范圍是1．61～6．29，按R大小將試驗(yàn)菌株分為高活力（R≥3．0）251株，占83．7%；中等活力（2．0≤R＜3．0）37株，占12．7%；低等活力（R＜2．0）12株，占4．0%。

2．2 300株白色念珠菌對(duì)常用抗真菌藥物的耐藥性 300株白色念珠菌對(duì)氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐藥率為17．3%（52/300）、11．3%（34/300）、63．3%（190/300）、44．6%（134/300）。

3 討論

AP的檢測(cè)方法有多種，其中牛奶平板檢測(cè)法具有簡(jiǎn)單、靈敏、不需染色可直接觀察結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用YGM-牛奶平板法，檢測(cè)了300株從白帶標(biāo)本分離的白色念珠菌AP，結(jié)果其產(chǎn)酶率達(dá)到100%，且高活力達(dá)83．7%，而低活力僅為4．0%，中度活力占12．7%，與國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道一致。

白色念珠菌的致病性由AP、莢膜及黏附性、芽管生成和疏水性等構(gòu)成。其中AP為主要的致病因子，有文獻(xiàn)報(bào)道白色念珠菌AP的活性與毒力（r=0．994 6）、黏附（r=0．994 4）密切相關(guān)^[1]。菌體表面的疏水性是白色念珠菌重要的毒性因子，疏水性白色念珠菌較親水性白色念珠菌產(chǎn)生芽管的速度快，其黏附組織、塑料、導(dǎo)管和人造瓣膜的能力強(qiáng)。

筆者測(cè)得白帶標(biāo)本中白色念珠菌對(duì)氟胞嘧啶、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐藥率分別是17．3%、11．3%、63．3%、44．6%，明顯高于呼吸道中的白色念珠菌^[2-4]，說(shuō)明白帶中白色念珠菌對(duì)氟康唑、伊曲康唑的耐藥性已相當(dāng)嚴(yán)重，這可能與臨床局部使用過(guò)多唑類制劑，抗真菌藥物選擇壓力增大有關(guān)。因此，臨床對(duì)治療白色念珠菌陰道炎時(shí)應(yīng)慎用抗真菌藥物，避免耐藥性的積累。真菌耐藥除與選擇壓力有關(guān)外，目前研究認(rèn)為白色念珠菌耐藥性的產(chǎn)生原因?yàn)椋孩冫溄晴薮忌锖铣赏分嘘P(guān)鍵靶酶的變化；②真菌胞膜內(nèi)藥物濃度的降低；③生物被膜的形成等?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)許多白色念珠菌感染的發(fā)生與生物被膜形成有關(guān)^[5]。

本研究通過(guò)對(duì)白帶標(biāo)本中白色念珠菌AP的測(cè)定和對(duì)常用抗真菌藥物耐藥性分析，證明白色念珠菌具有相當(dāng)?shù)闹虏⌒?，且?duì)常用抗真菌藥物已產(chǎn)生不同程度的耐藥，說(shuō)明在白帶標(biāo)本中白色念珠菌分離培養(yǎng)和藥敏分析十分重要。

參考文獻(xiàn)

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［4］江艷．93例呼吸道白色念珠菌感染的臨床調(diào)查與耐藥現(xiàn)狀分析．四川省衛(wèi)生管理干部學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，22（3）：196-197．

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