陳紅英　孟　君

[摘要] 目的:建立測(cè)定骨刺寧膠囊中人參皂苷Rg1的含量測(cè)定方法。方法:采用AichromBond-1 C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-水(20∶80)為流動(dòng)相;流速:1.0 ml/min;柱溫:25 ℃。檢測(cè)波長(zhǎng):203 nm。結(jié)果:人參皂苷Rg1在3.765～10.040 μg范圍內(nèi)線性良好,回歸方程為:Y=269 005X-5 893.7,r=0.999 6,平均回收率97.33%,RSD為1.19%。結(jié)論:該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,可用于本制劑質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 骨刺寧膠囊;人參皂苷Rg1; HPLC

[中圖分類號(hào)]R927.2[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B [文章編號(hào)]1674-4721(2009)07(a)-070-02

骨刺寧膠囊是由三七、土鱉蟲(chóng)等藥材精制而成,具有活血化瘀,通絡(luò)止痛的作用。為了更好的控制骨刺寧膠囊質(zhì)量,選用君藥中有效成分人參皂苷Rg1為含量測(cè)定指標(biāo),并摸索采用HPLC法測(cè)定其含量。經(jīng)實(shí)驗(yàn),方法可行,陰性無(wú)干擾。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀;AichromBond-1 C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色譜柱。試劑:甲醇和乙腈為色譜純?cè)噭?水為重蒸水。

1.2 試驗(yàn)用藥

骨刺寧膠囊(自制,批號(hào):060801);對(duì)照品:人參皂苷Rg1(含量測(cè)定用,批號(hào)0703-200120,中國(guó)藥品生物制品檢定所)。

2 色譜條件

AichromBond-1 C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色譜柱,以水-乙腈(20∶80)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng):203 nm;柱溫:25℃;流速:1.0 ml/min;在此條件下人參皂苷Rg1與其他組分均達(dá)到基線分離。

3 溶液的制備

3.1 對(duì)照品溶液制備

取人參皂苷Rg1對(duì)照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1 ml含0.6 mg溶液,即得。

3.2 供試品溶液制備

本品適量,取約1 g,精密稱定,置錐形瓶中,精密加入甲醇50 ml,稱定重量,超聲處理30 min(功率250 W,頻率33 kHz),放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,用干燥濾紙濾過(guò),精密量取續(xù)濾液25 ml,蒸干,殘?jiān)铀?0 ml使溶解,移至分液漏斗中,用水飽和的正丁醇振搖提取3次(分別為20、20、10 ml),合并正丁醇液,用正丁醇飽和的氨試液洗滌2次,每次15 ml,棄去氨液,正丁醇液蒸干,殘?jiān)铀? ml使溶解,通過(guò)D101大孔樹(shù)脂柱(內(nèi)徑1.7 cm,長(zhǎng)18.0 cm),以30%乙醇50 ml洗脫,棄去洗脫液,再以70%乙醇50 ml洗脫,收集70%乙醇洗脫液,蒸干,殘?jiān)蛹状际谷芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,即得。

3.3 測(cè)定方法

分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液10 μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。

3.4 陰性樣品溶液制備

按處方比例稱取除三七以外的藥材,按制備工藝制成缺三七的陰性樣品,按上述供試品制備方法制成缺三七的陰性樣品溶液。

精密吸取對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液與供試品溶液各10 μl,注入液相色譜儀,測(cè)定。結(jié)果表明,供試品溶液色譜中,在與人參皂苷Rg1對(duì)照品色譜峰相應(yīng)位置上有相應(yīng)峰,而陰性樣品溶液色譜中無(wú)此峰,說(shuō)明陰性無(wú)干擾。

4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密量取人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液(1.255 mg/ml)3、4、5、6、7、8 ml于10 ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,即得,分別精密量取10 μl,按擬定色譜條件測(cè)定,分別以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程。人參皂苷Rg1線性方程為:Y=269 005X-5 893.7,r=0.999 6。人參皂苷Rg1進(jìn)樣量在3.765～10.040 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

5 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一份供試品溶液10 μl,重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)定其峰面積積分值, RSD為0.87%。結(jié)果表明:本方法精密度良好。

6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密吸取同一份供試品溶液10 μl,隔2 h進(jìn)樣,測(cè)定其峰面積積分值,結(jié)果RSD為1.50%。結(jié)果表明,供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批樣品5份,按上述條件依法處理并測(cè)定含量,結(jié)果RSD為1.2%。結(jié)果表明:本方法重現(xiàn)性好。

8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量骨刺寧膠囊(060801)5份,每份約0.5 g,精密稱定,置錐形瓶中,分別添加適量人參皂苷Rg1對(duì)照品,按供試品溶液制備方法制成供試品溶液,按擬定色譜條件測(cè)定。

9 討論

筆者曾采用甲醇、乙醇超聲或回流提取,綜合比較,以本文選用方法最為理想。三七中主含三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re及人參皂苷Rb1等,曾探索用梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re及人參皂苷Rb1的含量,結(jié)果表明,梯度洗脫時(shí)人參皂苷Rg1與人參皂苷Re二者很難達(dá)到有效分離;三七皂苷R1、人參皂苷Rb1附近均有干擾成分存在,不能達(dá)到有效分離,故選擇人參皂苷Rg1作為該制劑含量控制的指標(biāo)成分。

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(收稿日期:2009-04-10)