【摘要】 目的 觀察中藥復(fù)方活血通對(duì)糖尿病大鼠晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)的影響，探討中藥復(fù)方活血通防治糖尿病慢性并發(fā)癥的作用機(jī)制。方法 采用鏈脲佐菌素糖尿病大鼠模型，隨機(jī)分為預(yù)防組和治療組，給予中藥復(fù)方活血通灌胃，并以氨基胍作為對(duì)照，治療12周，觀察中藥復(fù)方活血通對(duì)糖尿病大鼠血糖和腎組織AGEs的影響。結(jié)果 中藥復(fù)方活血通預(yù)防組和治療組血糖、中藥復(fù)方活血通預(yù)防組、治療組和氨基胍組腎組織AGEs均較模型組為低(P<0.01);氨基胍組血糖高于中藥復(fù)方活血通預(yù)防組(P<0.05)，與模型組比較，差異也有顯著性(P<0.05)。結(jié)論 中藥復(fù)方活血通可能通過(guò)降低血糖，抑制終末期糖基化終產(chǎn)物在腎皮質(zhì)中的形成，延緩糖尿病慢性并發(fā)癥的進(jìn)一步發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】 中藥;活血通;糖尿病并發(fā)癥;晚期糖基化終產(chǎn)物

文章編號(hào):1003-1383(2009)05-0520-03

中圖分類(lèi)號(hào):R 587.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2009.05.004

Effects of hexue Composita on advanced glycation and products in kidneys of diabetic rats [HJ1*2][HJ]

XIONG Biane，LI Pu，LIU Ying， DENG Zuguo

(Department of Medicament，The people's Hospital of Qiannan Autonomous profecturefor Buyi and Miao Nationalities，Duyun 558000 China)

【Abstract】 Objective To investigate the effects of activating blood and resolving stasis hexue Composita(HXC) on advanced glycation end products(AGES) in kidneys of diabetic rats.

Methods STZ induced diabetic rats were randomized to HXC prevention group and HXC treatment group. The levels of blood glucose and AGEs in kidneys of the animals were checked after 12 weeks′treatment and compared with that of aminoguanidine (AG) treatment group.Results Blood glucose level in the HXC prevention andt reatment group，and AGEs in kidneys of the HXC prevention group and the AG group were lower than those of the non treated group (P<0.01).Blood glucose level in the AG group was higher than that in the HXC prevention group(P<0.05)，but was significantly different from that in the nontreated group (P<0.05).Con

clusion HXC might delay the development of diabetic complications by decreasing blood glucose and inhibiting AGEs formation in kidneys of STZ induced diabetic rats.

【Key words】 Traditional Chinese Medicine;hexue Composita;diabetic complications;advanced glycation end products

有研究表明，糖尿病長(zhǎng)期高血糖可引起體內(nèi)蛋白糖化，大量蛋白非酶糖化產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為不可逆的糖基化終產(chǎn)物(AGEs)。AGEs的蓄積和糖尿病各種并發(fā)癥的發(fā)生有密切

關(guān)系[1]。因此，抑制AGEs的生成對(duì)預(yù)防糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展有重要意義。我們觀察了中藥復(fù)方活血通對(duì)糖尿病大鼠腎組織AGEs的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

資料與方法

1.材料

(1)動(dòng)物 雄性SD大鼠，7周齡，體重180～220 g，由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物證號(hào):醫(yī)動(dòng)字第01～3008。

(2)試劑與藥品 鏈脈佐菌素(STZ)、牛血清白蛋白、Ⅴ型膠原酶、氨基胍均為美國(guó)sigma公司產(chǎn)品。中藥復(fù)方活血通由太子參15 g、生黃芪15 g、懷山藥15 g、蒼術(shù)12 g、玄參15 g、當(dāng)歸15 g、丹參30 g、川芎6 g、穿山甲2 g、益母草15 g、芡實(shí)6 g、金櫻子6 g、生大黃2 g、肉桂2 g組成，煎成每ml含生藥5g的液體備用。

(3)實(shí)驗(yàn)儀器 RF5000熒光分光光度計(jì)，日本京都血糖儀。

2.方法

(1)動(dòng)物模型的建立 參照于德明報(bào)道[2]的方法制作糖尿病大鼠模型，用0.1 mol/L枸椽酸鈉(pH4.5)將STZ配成0.45%的溶液，按65 mg/kg體重一次性腹腔注射建立糖尿病模型，注射STZ 72 h后，取大鼠尾靜脈血查空腹血糖(FBS)，凡血糖≥16.67 mmol/L作為糖尿病大鼠。

(2)動(dòng)物分組及處理 將入選動(dòng)物喂養(yǎng)3天后隨機(jī)分為4組，即模型組、氨基胍組、中藥復(fù)方活血通預(yù)防組(預(yù)防組)、中藥復(fù)方活血通治療組(治療組)，每組10只，并以體重鼠齡相匹配的正常大鼠10只作為正常對(duì)照組。氨基胍組給予氨基胍100 mg#8226;kg-1#8226;d-1灌胃;中藥復(fù)方活血通預(yù)防組(造模成功后立即開(kāi)始灌胃)和治療組造模成功后1個(gè)月開(kāi)始灌胃)給予活血通100 mg#8226;kg-1#8226;d-1灌胃，模型組、正常對(duì)照組同時(shí)灌胃等量自來(lái)水。

(3)指標(biāo)檢測(cè) 于治療組用藥后第6周末、第9周末、第12周末測(cè)定體重及空腹血糖1次，第12周末將大鼠處死，速取腎臟，分離腎皮質(zhì)，稱(chēng)重，速凍后，密封保存待用。采用Monnie[1]等方法，將腎皮質(zhì)剪碎，勻漿，離心去上清，沉淀加氯仿甲醇去脂，4℃搖振過(guò)夜，經(jīng)水化沖洗，在HEPES緩沖液中過(guò)夜，加入280UV型膠原酶，37℃振蕩消化24 h。離心取上清液，于波長(zhǎng)370/420 mm處測(cè)定熒光強(qiáng)度，以含280UV型膠原酶的HEPES緩沖液作為空白標(biāo)準(zhǔn)管。用1 g/L的牛血清白蛋白繪制蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，腎皮質(zhì)中AGEs含量以AUF/mg表示。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 各組數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-±s)表示，SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性意義。

結(jié)果

1.動(dòng)物飼養(yǎng)情況觀察 連續(xù)給藥12周后，正常對(duì)照組大鼠表現(xiàn)為精神狀態(tài)好，體重增加，動(dòng)作自如。模型組出現(xiàn)典型的多飲、多尿，消瘦明顯，毛豎無(wú)光澤，綣臥拱背。預(yù)防組、氨基胍組、治療組也有類(lèi)似表現(xiàn)，但程度較模型組輕。整個(gè)觀察過(guò)程中，正常對(duì)照組未出現(xiàn)動(dòng)物死亡，模型組和預(yù)防組各死亡2只，氨基胍組和治療組各死亡3只(其中死亡的原因與動(dòng)物尾部感染和灌胃有關(guān))。

2.各組糖尿病大鼠空腹血糖比較 與正常對(duì)照組比較，糖尿病模型組血糖顯著升高(P<0.01);各治療組血糖雖有不同程度下降，但與正常對(duì)照組相比仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表1。

3.各組動(dòng)物體重及腎重/體重比較 與正常對(duì)照組相比，糖尿病模型組及各治療組體重顯著降低(P<0.01);腎重/體重×103顯著升高(P<0.01);與模型組相比，第12周后中藥復(fù)方活血通預(yù)防組和治療組體重升高(P<0.05)，腎重/體重×103顯著降低(P<0.01)，氨基胍組無(wú)差異。見(jiàn)表2。

4.各組動(dòng)物腎組織AGEs比較 與正常對(duì)照組相比，糖尿病模型組AGEs顯著升高(P<0.01)，氨基胍組及中藥復(fù)方活血通預(yù)防組和治療組AGEs有所下降，與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但與模型組比較也有明顯差異(P<0.01)。見(jiàn)表3。

討論

在糖尿病狀態(tài)下，體內(nèi)葡萄糖及果糖與多種蛋白質(zhì)等物質(zhì)發(fā)生非酶促糖基化反應(yīng)生成不穩(wěn)定的schiff堿，并進(jìn)一步形成比較穩(wěn)定的，但仍然可逆的Amadori類(lèi)早期產(chǎn)物，這些早期糖化產(chǎn)物再經(jīng)過(guò)緩慢、復(fù)雜的重排，最后形成不可逆的AGEs[1]。研究表明，AGEs不僅可以直接影響細(xì)胞和組織功能，參與疾病的產(chǎn)生，也可以通過(guò)與特異受體結(jié)合，發(fā)生反應(yīng)來(lái)改變蛋白質(zhì)和細(xì)胞功能，導(dǎo)致機(jī)體的病理變化[4]。糖尿病的各種慢性并發(fā)癥被認(rèn)為與晚期糖基化產(chǎn)物有密切關(guān)系[5]，AGEs濃度的升高與糖尿病及其并發(fā)癥也密切相關(guān)[6~7]。本研究采用的對(duì)照藥氨基胍被公認(rèn)為AGEs抑制劑，可以減輕實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠的慢性并發(fā)癥，但目前仍處于實(shí)驗(yàn)階段。因此，從中藥中尋找AGEs抑制劑將有廣闊的應(yīng)用前景。

糖尿病腎病重要證侯分布特點(diǎn)研究發(fā)現(xiàn)[8]:中醫(yī)本證以氣陰兩虛證為多，中醫(yī)兼證以血瘀證發(fā)生率高;本證、兼證與糖尿病腎病分期的相關(guān)性分析顯示，早、中期糖尿病腎病出現(xiàn)率的本證為氣陰兩虛證，終末期腎病時(shí)以陰陽(yáng)兩虛證發(fā)生率高，血瘀兼證則貫穿于病程始終。血瘀證在糖尿病中具有普遍性，文獻(xiàn)報(bào)道其發(fā)生率為50%～77.3%[9]。近年來(lái)血瘀與糖尿病腎病相關(guān)的研究引人注目，許多學(xué)者對(duì)糖尿病進(jìn)行了血液流變學(xué)、血液動(dòng)力學(xué)以及血小板功能等方面的研究，提示:糖尿病合并血管病變與糖尿病伴有血瘀證者均呈現(xiàn)有明顯高凝傾向[10~11]，糖尿病患者均存在不同程度的血液流變學(xué)異常及微循環(huán)障礙[12]。中藥復(fù)方活血通采用益氣養(yǎng)陰、活血化瘀為大法。方中太子參補(bǔ)氣生津，生黃芪健脾益腎、益氣升陽(yáng)，懷山藥益氣養(yǎng)陰、補(bǔ)脾肺腎，以上三味藥為君，具有益氣生津、補(bǔ)脾肺腎之功。蒼術(shù)健脾燥濕，玄參利水通淋、滋陰補(bǔ)腎，又防止蒼術(shù)之燥，當(dāng)歸、丹參、川芎、穿山甲活血化瘀，益母草活血化瘀、利水消腫，共為臣藥。芡實(shí)補(bǔ)脾祛濕、益腎固精，金櫻子固精、縮尿，兩者合用為水陸二仙丹，具有健脾益腎、固精收澀之效。少用大黃以取通腑、瀉熱、活血。肉桂補(bǔ)火助陽(yáng)、溫通經(jīng)脈，反佐以防諸藥過(guò)于寒涼以礙胃、凝血之弊。全方共奏益氣養(yǎng)陰、健脾補(bǔ)腎、活血利水之功。本研究表明中藥復(fù)方活血通可明顯減少糖尿病大鼠腎組織AGEs含量，其作用與氨基胍相似，其預(yù)防用藥組降低血糖作用優(yōu)于氨基胍。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，第12周后糖尿病大鼠腎組織AGEs顯著升高，經(jīng)氨基胍及中藥復(fù)方活血通治療后，AGEs下降。除AGEs改變外，糖尿病大鼠在第12周末還可見(jiàn)到明顯腎臟肥大，腎重體重比明顯增加，經(jīng)中藥復(fù)方活血通治療后，腎重體重比較模型組改善，而氨基胍組無(wú)明顯變化。在治療過(guò)程中，各治療組對(duì)糖尿病大鼠血糖有不同程度下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？梢哉J(rèn)為中藥復(fù)方活血通對(duì)糖尿病及其慢性并發(fā)癥的治療是通過(guò)控制血糖，抑制醛糖還原酶糖基化，減少AGEs生成有關(guān)。抑制蛋白非酶糖化可能是其延緩糖尿病及并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的途徑之一。

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(收稿日期:2009-08-03 修回日期:2009-09-24)

(編輯:潘明志 英文審校:鐘京梓)