摘 要：以具有腋芽的嫩莖為材料，對(duì)孩兒參組織培養(yǎng)及無性系建立進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：1／2MS+BA 0.1mg／L+IAA0.1 mg／L是誘導(dǎo)孩兒參腋芽生長的理想培養(yǎng)基；MS+BA 0，4 mg／L+IAA 0，1 mg／L是孩兒參不定芽分化培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基；1／3MS+1AA 0.4 mg／L是生根培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基；河沙和爐灰渣是試管苗移栽的理想基質(zhì)。

關(guān)鍵詞：孩兒參；無性系；快速繁殖

中圖分類號(hào)：S688.4；Q943.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006—6500(2008)05-0004-04

孩兒參(Pseudostellaria heterophylla)又叫太子參、異葉假繁縷，屬于石竹科假繁縷屬多年生草本植物。根可入藥，也可代人參使用，具有滋養(yǎng)壯力、補(bǔ)氣生津、健脾等功效，能治肺虛咳嗽、脾虛心悸、口渴、食欲不振、肝炎、神經(jīng)衰弱、體弱無力、自汗盜汗等多種疾病。由于孩兒參具有多種藥用價(jià)值，并且可以代替人參使用，近年來人們的大肆采集，使本來分布量就很少的孩兒參，現(xiàn)在在遼寧南部地區(qū)已經(jīng)很難采到，于是有的農(nóng)民就開始進(jìn)行人工種植。但由于很難采集到種子和種苗，從而影響了種植。為此，筆者對(duì)孩兒參進(jìn)行組織培養(yǎng)和無性系建立的研究，以期獲得大量種苗，滿足人們的需要。

1 材料和方法

1.1 材料處理

采集河邊林蔭下生長非常旺盛的孩兒參，切去葉片，將具有頂芽和側(cè)芽的嫩莖放到磨口廣口瓶中，自來水沖洗15min后，用0.05％安利洗滌液振蕩洗滌20min左右，洗至沒有泡沫時(shí)置于超凈工作臺(tái)上。用75％乙醇滅菌10s后，迅速用無菌水洗滌3次，接著用0.1％HgCl2溶液振蕩滅菌1min，再加入等體積無菌水，繼續(xù)振蕩滅菌10min。接著用無菌水振蕩洗滌6次，即獲得無菌材料。

1.2 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基以MS、1／2MS和1／3MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的細(xì)胞分裂素BA和生長素IAA、NAA、IBA。以MS為基本培養(yǎng)基時(shí)，加蔗糖30g／L；以1／2MS為基本培養(yǎng)基時(shí)，加蔗糖15g／L；以1／3MS為基本培養(yǎng)基時(shí)，加蔗糖10g／L。培養(yǎng)基胨力強(qiáng)度為180g／cm²，pH5.8～6.0，培養(yǎng)條件14-24℃，光照10h／d，光照度20001x。

2 結(jié)果與分析

2.1 腋芽的生長培養(yǎng)

將無菌嫩莖切成長0.3cm左右具有腋芽的莖段，接種到以1／2MS為基本培養(yǎng)基，附加BA0.1 mg／L，IAA 0.1，0.4，0.7和1.0 mg／L的4種培養(yǎng)基上進(jìn)行腋芽的生長培養(yǎng)。35 d時(shí)腋芽開始生長。60d后觀察統(tǒng)計(jì)表明，在4種培養(yǎng)基上培養(yǎng)的腋芽都能生長。其中在1／2MS+BA 0.1mg／L+IAA 0.1mg／L的培養(yǎng)基上，不僅腋芽的生長率達(dá)到了100％，并且生長快而旺盛。將在這一培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生長的芽剪成具有頂芽或1～2個(gè)腋芽的莖段，在相同培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，35d又能生長成高2cm左右的芽，連續(xù)3次試驗(yàn)共13代的繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)芽的長勢保持不變。這說明1／2MS+BA 0.1 mg／L+IAA 0.1mg／L是誘導(dǎo)孩兒參腋芽生長的理想培養(yǎng)基。

2.2 芽的分化培養(yǎng)

將上述培養(yǎng)的芽剪成具有頂芽或1-2個(gè)腋芽的莖段，接種到以MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的BA、IAA、NAA的培養(yǎng)基上進(jìn)行芽的分化培養(yǎng)，每種培養(yǎng)基接種50個(gè)材料，培養(yǎng)到20d左右時(shí)開始分化，40d時(shí)觀察統(tǒng)計(jì)。由表1可見，在BA濃度為0.4mg／L、NAA濃度為0.1 mg／L這一培養(yǎng)基上，不僅分化率為96％，而且單芽分化的不定芽數(shù)達(dá)到4.5，分化的不定芽高度為1～3 cm。長勢好。把分化的不定芽剪成具有頂芽或1-2個(gè)腋芽的莖段，接種到相同的培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代分化培養(yǎng)，連續(xù)培養(yǎng)9代，其分化不定芽的分化率、單芽分化數(shù)和分化芽的長勢基本保持不變，但繼代培養(yǎng)周期縮短為35d。這說明MS+BA 0.4 mg／L+NAA 0.1mg／L是孩兒參不定芽分化培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基。

2.3 生根培養(yǎng)

將上述分化培養(yǎng)高度為1cm以上的不定芽從基部剪下，接種到以1／2MS和1／3MS為基本培養(yǎng)基，附加不同濃度IAA、NAA和IBA的生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基接種50個(gè)材料。培養(yǎng)到10d時(shí)有的培養(yǎng)基上可見形成根原基，培養(yǎng)25d時(shí)觀察統(tǒng)計(jì)。由表2可見，在附加NAA的生根培養(yǎng)基中，不能誘導(dǎo)生根；在附加IBA的生根培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)生根率也較低，生出根的長勢也較差；在含有濃度分別為0.2，0.4，0.6，0.8mg／L IAA的生根培養(yǎng)基上都能誘導(dǎo)生根；其中在IAA濃度為0.4 mg／L的1／3MS生根培養(yǎng)基上，不僅生根率達(dá)98％，而且單株平均生根數(shù)也達(dá)到了6，2條。觀察還表明，在上述1／3MS生根培養(yǎng)基上，不僅生根率高、根數(shù)多，而且試管苗長勢旺盛，培養(yǎng)至25 d時(shí)，可以長成株高為5cm左右，具有6條以上根的試管苗。將在這一培養(yǎng)基上生長的試管苗剪成具有1～2個(gè)生長點(diǎn)、長1cm左右的莖段，插于相同的生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根繼代培養(yǎng)，25d時(shí)又可長成高5-6cm的生根試管苗。連續(xù)12代生根繼代培養(yǎng)，試管苗的長勢保持不變。采用這種方法25d的增殖系數(shù)為4.1倍，并且繁殖的試管苗生長旺盛，幾乎沒有無效苗。上述試驗(yàn)證明，1／3MS+IAA 0.4 mg／L是孩兒參試管苗生根培養(yǎng)的理想培養(yǎng)基。

2.4 移栽

將生根苗培養(yǎng)瓶瓶塞打開，置于光照約4000lx、20℃左右的條件下煉苗3d后，用鑷子取出，洗去基部培養(yǎng)基，移栽到鋪有約6cm厚不同移栽基質(zhì)的溫室苗床上。25d后觀察統(tǒng)計(jì)。由表3可見，以河沙、爐灰渣為移栽基質(zhì)不僅成活率高，而且長勢較好。這說明河沙和爐灰渣是孩兒參試管苗移栽的理想基質(zhì)。小批量試驗(yàn)證明，移栽到河邊林蔭下的試管苗不僅長勢非常旺盛，而且根系相當(dāng)于野生植株的2倍。

3 討論

雖然目前已有很多石竹科植物組織培養(yǎng)的報(bào)道12-71，但迄今未見有孩兒參組織培養(yǎng)及無性系建立的報(bào)道。本研究利用孩兒參嫩莖的頂芽和腋芽為材料，以較高分化率分化出不定芽表明：孩兒參嫩莖上的頂芽和側(cè)芽在離體條件下仍具有較強(qiáng)的生長分化能力。對(duì)芽進(jìn)行分化繼代培養(yǎng)，35 d時(shí)平均每個(gè)芽可分化出4，5個(gè)芽，按照這個(gè)增殖速度，年增殖率為4.5。用生根繼代培養(yǎng)方法進(jìn)行增殖培養(yǎng)，按照25d增殖4.1倍的速度計(jì)算，年增殖率為4.1。這說明，不論采用芽增殖方法進(jìn)行快速繁殖，還是采用生根繼代的方法快速繁殖，一年內(nèi)可增殖出上千萬株孩兒參試管苗。但是，從試管苗的長勢和有效苗比率的角度看，以生根繼代方法進(jìn)行繁殖更有利于生產(chǎn)。野外小批量栽培的孩兒參試管苗也完全證明了這一點(diǎn)。因此，用生根繼代方法繁殖孩兒參試管苗，可以滿足生產(chǎn)上對(duì)孩兒參種苗的需求。在生根培養(yǎng)時(shí)，使用了3種生長素，其中IAA的生根效果最好，這是因?yàn)?AA為植物天然生長素，在光照條件下可分解。把待生根的無根苗插入到以1AA為生長素的生根培養(yǎng)基中，1周左右誘導(dǎo)形成了根原基，此時(shí)1AA因光照大部分分解，使其含量降低到不至于抑制根的伸長生長的濃度。

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