摘 要：以合歡無(wú)菌播種苗下胚軸為外植體，對(duì)建立合歡高效植株再生體系進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，細(xì)胞分裂素(6－BA)和生長(zhǎng)素(2，4－D)不同濃度組合影響合歡無(wú)菌播種苗下胚軸愈傷組織和不定芽的分化，其中較低濃度的6－BA和2，4-D配合可以顯著提高不定芽的分化頻率。合歡無(wú)菌苗下胚軸最佳愈傷組織和不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基分別為：MS+6－BA 0，5 rag／1+2，4－D 0.3 mg／L，不定芽分化頻率可達(dá)90.5％以上；最佳生根培養(yǎng)基為：1／2MS+IBA 0.3 mg／L，生根誘導(dǎo)率90％以上。移栽易獲得成功。合歡無(wú)菌苗下胚軸高效植株再生體系的建立，為合歡的細(xì)胞工程和基因工程操作及新品種的快速繁育奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：合歡；體外培養(yǎng)；種植；培養(yǎng)基；植株再生

中圖分類(lèi)號(hào)：Q943.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-6500(2008)05—0001—03

合歡(Albizia julibrissin Duraxx)屬于豆科合歡屬，別名絨毛樹(shù)、馬櫻花、夜合花、洗手粉等。落葉喬木，高達(dá)16m，樹(shù)冠扁圓形，常呈傘狀，耐寒性略差，對(duì)土壤要求不嚴(yán)，能耐干旱、瘠薄、抗污染，但不耐水澇，適合在輕度鹽堿地(0.4％左右)上生長(zhǎng)。合歡樹(shù)形優(yōu)美，葉形雅致，盛夏絨花滿樹(shù)，有色有香，能形成輕柔舒暢的氣氛，宜作庭蔭樹(shù)、行道樹(shù)。天津市地下水位高，鹽堿土多，土質(zhì)不良。合歡是天津市樹(shù)種規(guī)劃中選擇的9種喬木之一，提高合歡的耐鹽能力，使合歡能在天津?yàn)I海鹽堿城市正常生長(zhǎng)，對(duì)促進(jìn)天津園林綠化木本植物的多樣性具有現(xiàn)實(shí)意義。

利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高植物耐鹽能力方面的研究報(bào)道較多，如煙草、水稻、馬鈴薯、小麥、番茄、玉米、擬南芥和楊樹(shù)等，轉(zhuǎn)基因植株在耐鹽能力方面都有不同程度的提高，這為提高其他物種的耐鹽能力奠定了基礎(chǔ)。目前，未見(jiàn)有利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高合歡耐鹽能力的報(bào)道。為建立適合合歡遺傳轉(zhuǎn)化的受體體系，作者以合歡無(wú)菌播種苗下胚軸為外植體，只采用一種培養(yǎng)基便獲得了愈傷組織和大量再生植株，壯苗生根后，移栽獲得成功，從而建立了一種快速簡(jiǎn)便的合歡組織培養(yǎng)和再生體系。至目前為止，采用這種進(jìn)行合歡愈傷組織的誘導(dǎo)和植株再生體系建立的方法，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。

1 材料和方法

1.1 無(wú)菌外植體的獲得

將種子浸泡在1:500—800倍的多菌靈溶液中2h，自來(lái)水沖洗干凈。在75％酒精中浸泡30s，無(wú)菌水沖洗5次，然后在0.1％升汞中浸泡12min，無(wú)菌水沖洗5次，接種于pH值5.8且不含激素的MS固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。合歡成熟種子培養(yǎng)5-6d后，取出無(wú)菌播種苗，切取下胚軸長(zhǎng)2cm左右，每段0.5～1cm。

1.2 愈傷組織誘導(dǎo)與芽分化

下胚軸在以下5種誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)：(1)MS+6-BA 0.4mg／L+2，4-D 0.3 mg／L；(2)MS+6-BA 0.5mg／L+2，4-D 0.3 mg／L；(3)MS+6-BA0.6m／L+2，4-D 0.3mg／L；(4)MS+6-BA 0.7mg／L+2，4-D0.3 mg／L；(5)MS+6-BA 0.8 mg／L+2，4-D0.3mg／L。

1.3 生根培養(yǎng)

將直接分化出的再生植株在以下3種誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)：(1)1／2MS+IBA 0，3mg／L；(2)1／2MS+IBA 0.4 mg／L；(3)1／2MS+IBA0.5mg／L。

以上各種培養(yǎng)均在溫度(25±2)℃、光照強(qiáng)度1500～2000 k、光照時(shí)間13h／d條件下進(jìn)行。

1.4 組培苗移栽

將經(jīng)過(guò)煉苗的幼苗從培養(yǎng)基中取出，清水洗凈，用0.2％的多菌靈溶液浸泡后，栽植于蛭石營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)，營(yíng)養(yǎng)缽的上方用塑料薄膜蓋好，以保持濕度。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，利用合歡無(wú)菌播種苗下胚軸作為外植體在適宜培養(yǎng)基中能較容易誘導(dǎo)出誘導(dǎo)愈傷組織，最高出愈率可達(dá)90％。從表1可看出，當(dāng)2，4-D保持在0.3 mg／L，6-BA 0.4～0.7 mg／L時(shí)，誘導(dǎo)出的愈傷組織生長(zhǎng)正常，呈淺黃綠色，這說(shuō)明2，4-D和一定濃度的細(xì)胞分裂素是合歡下胚軸愈傷組織誘導(dǎo)所必須的。

2.2 不同處理時(shí)愈傷組織的芽分化結(jié)果

愈傷組織在同樣的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)12～15d后，逐漸分化出許多綠色的小芽，之后成生長(zhǎng)植株。從表2可看出，當(dāng)2，4-D保持在0.3 mg／L，6-BA 0.4-0.7mg／L時(shí)，誘導(dǎo)出的愈傷組織，不僅生長(zhǎng)正常，繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間后，均能分化出較多的再生植株。表明2，4-D和一定濃度的細(xì)胞分裂素配合能直接誘導(dǎo)愈傷組織和再生植株。特別是第2、3種處理，能獲得非常滿意的結(jié)果。

2.3 不同處理時(shí)生根培養(yǎng)的結(jié)果

我們?cè)谏囵B(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，合歡再生植株基部易產(chǎn)生愈傷組織，并影響芽苗的生長(zhǎng)，為此本研究做了大量不同激素配比試驗(yàn)，以求找到最佳配方。

從表3可看出，合歡再生植株單獨(dú)使用一種激素(IBA)就可獲得較好效果。小苗在含IBA0.4-0.5 mg／L的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)，再生植株基部不易產(chǎn)生愈傷組織，能誘導(dǎo)出較多的根系，而且植株生長(zhǎng)正常。特別是在含IBA 0.4 mg／L的MS培養(yǎng)基上，再生植株獲得的根系較多，粗壯，易于移栽，成活率高達(dá)90％以上。

3 結(jié)論

(1)本試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)2，4-D濃度保持在0.3／mg，L，6一BA 0.4-0.7 mg，L時(shí)的Ms培養(yǎng)基是合歡無(wú)菌苗下胚軸離體培養(yǎng)中愈傷組織誘導(dǎo)和芽分化較好的培養(yǎng)基。試驗(yàn)中所設(shè)6一BA與2，4-D濃度處理，均是在前期研究的基礎(chǔ)上而改良設(shè)計(jì)的。

(2)附加IBA 0.4mg／L的MS培養(yǎng)基是合歡再生植株較為理想的生根培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基上，再生植株獲得的根系較多，粗壯，易于移栽。

(3)本研究利用合歡無(wú)菌播種苗下胚軸為外植體，在適宜培養(yǎng)基中能較容易誘導(dǎo)出誘導(dǎo)愈傷組織，同時(shí)分化有效苗的頻率也高。褐化和玻璃苗是影響木本植物快速繁殖的最大障礙，本研究只采用一種培養(yǎng)基便獲得了愈傷組織和大量再生植株，具有周期短，速度快等特點(diǎn)，簡(jiǎn)化了組培育苗程序，很好地解決了這些問(wèn)題，值得推廣。

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