李迎新 黃 霖

摘要：目的 探討活血降糖膠囊對糖尿病高脂血癥大鼠血糖、血脂的調(diào)節(jié)及對動脈內(nèi)膜粥樣硬化治療的作用。方法 45只SPF級SD大鼠，隨機取8只作為空白對照組，喂普通飼料。其余以高脂高糖飲食加小劑量鏈脲佐茵素(STZ)腹腔注射誘導(dǎo)糖尿病模型。將成模大鼠分為陽性對照組、西藥組、中藥中劑量組、中藥高劑量組，連續(xù)治療1個月后，各組進行血生化指標和動脈內(nèi)膜病理檢查。結(jié)果 中藥組能明顯降低血糖、血清總膽固醇(TC)和三酰甘油(TG)，并對降低的高密度脂蛋白(HDL-C)及HDL-C/TC比值有升高作用，與陽性對照組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，陽性對照組主動脈內(nèi)膜出現(xiàn)典型粥樣硬化病變.中藥組動脈膜受損程度有所減輕。結(jié)論 活血降糖膠囊能治療實驗性大鼠糖尿病高脂血癥，有干預(yù)動脈粥樣硬化的作用。

關(guān)鍵詞：活血降糖膠囊；糖尿?。桓咧Y；動脈粥樣硬化；大鼠

中國分類號：R587.1 R255.4 文獻標識碼：A 文章編號：1672-1349(2007)07-0599-03

活血降糖膠囊是黃霖教授根據(jù)著名老中醫(yī)羅景光及自己多年治療2型糖尿病的臨床經(jīng)驗方并經(jīng)劑型改制而成的純中藥制劑，具有活血化瘀、補氣養(yǎng)陰的功效。臨床研究顯示用于治療糖尿病并發(fā)癥有明顯的療效，并能改善病人的生存質(zhì)量。本實驗研究旨在觀察其對糖尿病合并高脂血癥大鼠的血糖、血脂及主動脈內(nèi)膜粥樣硬化病變(AS)的影響，并探討其作用機制。

1 材料與方法

1．1 動物和飼料 SPF級近交系一月齡SD大鼠45只，體重140g～160g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供。動物合格證號：SCXK(粵)2003—0001?；A(chǔ)飼料購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物室。高脂高糖飼料由基礎(chǔ)飼料加入煉豬油15％、白糖20％、雞蛋5％、膽固醇1％、食鹽0.1％。

1．2 藥物 格列吡嗪(深圳市中聯(lián)制藥有限公司，批準文號：國藥準字H44021796)；活血降糖膠囊(血竭、丹參、太子參等組成，廣醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥劑科提供，批號：粵藥制字Z030222531)。

1．3 試劑和儀器 ①鏈脲佐菌素(STX)l和枸櫞酸均購自廣州威佳科技有限公司，臨用時以0.1mmol/L、pH4.2枸櫞酸鈉緩沖液配成2％的濃度；②戊巴比妥鈉由動物實驗室提供；③三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-L)試劑盒均由廣州金域體檢生化檢驗中心提供；④血糖儀及其試紙：OneTouchTM，強生Sure.StepTM醫(yī)療器材有限公司，機號IA266RB01030；⑤高速冷凍離心機(sigma.3K-30)；⑥血脂自動生化分析儀器，羅氏P模塊生化儀。

1．4 DM大鼠動脈粥樣硬化模型的制備 每籠4只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后，隨機抽取8只作為空白對照組。其余的喂高脂高糖飼料。均自由進食及飲水共4周，誘導(dǎo)胰島素抵抗。再將大鼠隔夜空腹12h后行右側(cè)腹腔注射，其中實驗組大鼠注射2％STZ：30mg/kg(未成模者在注射后1周再注射1次2％STZ30mg/kg)，并繼續(xù)喂高糖高脂飼料至第6周末。空白組注射相當劑量的枸櫞酸鈉緩沖液。成模標準為：注射后第1周、第2周末測定血糖，如隨機血糖>16.9mmol/L，或空腹血糖>11.1mmol/L。

1．5 分組及給藥 實驗組成模大鼠隨機分為中藥高、中劑量組，西藥組和陽性對照組。中藥高、中劑量組分別以1.44.g/(kg·d)，0.72g/(kg·d)活血降糖方灌胃；西藥組以格列吡嗪(美吡達)10mg灌胃；③空白組和陽性對照組以相當劑量飲用水灌胃，每天1次。每周測體重以調(diào)整用藥量，連續(xù)32d。

1．6 取材 實驗第6周末各組大鼠空腹10h從眼眶靜脈叢抽血測血脂；實驗結(jié)束前，大鼠禁食8h，在1％的巴比妥鈉[45mg/(kg·bw)]麻醉下由心臟采血，測血糖、血脂，在主動脈弓處取動脈血管。

1．7 檢測方法 血糖測定用OneTouch TM血糖儀測定。血脂測定，取血2mL，高速冷凍離心機離心，分離血清，全自動生化分析儀測TC，TG，HDL-L。病理標本的制備，取主動脈血管長約1cm，生理鹽水沖洗，于10％中性甲醛溶液中固定，逐級酒精脫水，石蠟包埋，常規(guī)切片，HE染色。Weigert彈力纖維染色以乙醇分化，二甲苯透明，中性樹膠封固，顯微鏡下攝片。

1．8 統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示，由SPSS 11.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)一處理，多組間比較用LSD檢驗；兩兩比較用t檢驗。P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 動物模型的建立 注射鏈脲佐菌素后模型組與空白組相比，其體重、隨機血糖、TC、TG均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，造成了糖尿病高脂血癥。HDL-C因TC的升高而代償性升高(P<0.05)，但HDL－C/TC較空白組顯著降低(P<0.05)，說明此時HDL－C對膽固醇的清除能力降低，引發(fā)類似人類AS的病變，建模成功。

2．2 活血降糖膠囊對血脂的影響 活血降糖方能顯著降低TG，TC及隨機血糖，與對照組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，并能上調(diào)HDL－C/TC的比值(P<0.05)。

2.3 活血降糖方對DM大鼠主動脈內(nèi)膜AS病變影響的光鏡觀察

2．3．1 HE染色 空白組主動脈內(nèi)膜完整，無炎性細胞浸潤，細胞外基質(zhì)無不定形物質(zhì)沉積，無脂質(zhì)條紋或纖維斑塊，中層平滑肌無遷移，動脈壁無增厚，內(nèi)彈力膜完整，無斷裂。陽性對照組主動脈內(nèi)膜斷裂，散在炎細胞浸潤內(nèi)膜下泡沫細胞增多，個別多達十幾層，內(nèi)皮細胞脫落，脂質(zhì)沉積，纖維組織增生，斑塊形成，部分模型血管腔可見血栓，甚至鈣鹽沉著。西藥組血管病變較模型組減輕，內(nèi)膜有少到中量不等脂質(zhì)沉積，部分吞噬脂質(zhì)成泡沫細胞樣改變，中膜平滑肌細胞增生排列紊亂。中藥高劑量組內(nèi)皮細胞可見部分脫落，有少量脂質(zhì)沉積，少見或不見彈力板斷裂。中藥中劑量組動脈壁輕度增厚，彈性纖維和平滑肌排列不規(guī)整，脫落的內(nèi)皮細胞及少許形成的血栓未完全修復(fù)，彈力板斷裂較模型組相比較有所減少。

2．3．2 Weigert彈力纖維染色 空白組內(nèi)彈力膜完整，無增生；陽性對照組內(nèi)膜有多量增生纖維，平滑肌細胞遷移入進內(nèi)膜層，排列紊亂，彈力板斷裂；西藥組中膜平滑肌細胞輕度增生，排列相對紊亂。中藥中劑量組內(nèi)膜增生不明顯，血管壁間見裂縫；中藥高劑量組內(nèi)彈力膜較完整，部分拉伸變平。

3 討論

近年來，越來越多的研究表明，2型糖尿病(T₂DM)病人比非糖尿病病人更易患AS。除肥胖、胰島素抵抗(IR)等因素外，糖、脂質(zhì)代謝紊亂，內(nèi)皮功能異常也是重要因素。

血管內(nèi)皮損傷和功能改變是AS發(fā)生的始動因素，而高血糖和血脂異常不僅破壞內(nèi)皮細胞形態(tài)及功能，也影響其形態(tài)及功能的復(fù)合；同時內(nèi)皮細胞功能障礙又反過來促使上述病理過程的發(fā)生和發(fā)展。AS是糖脂質(zhì)紊亂和內(nèi)皮損傷的共同結(jié)果：高血糖引起血管氧化應(yīng)激反應(yīng)增強，增加白細胞與血管內(nèi)皮細胞的相互作用，使全身各種蛋白質(zhì)糖基化，其產(chǎn)物積聚導(dǎo)致血管組織功能和結(jié)構(gòu)的改變；另外高血糖能夠刺激蛋白激酶C的活化，使內(nèi)皮細胞屏障功能受損。高血脂也可介導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)，促使氧自由基產(chǎn)生，加速低密度脂蛋白氧化及對內(nèi)皮細胞的損傷，導(dǎo)致內(nèi)皮細胞凋亡或壞死；促進黏附分子表達，使血中單核細胞更多的黏附于內(nèi)皮表面，遷入內(nèi)皮并攝取脂質(zhì)轉(zhuǎn)化為泡沫細胞，從而啟動AS的形成。動脈內(nèi)膜受損的形態(tài)學(xué)直接表現(xiàn)是內(nèi)皮細胞形態(tài)的改變?，F(xiàn)代觀點認為動脈粥樣硬化的形成早期事件是內(nèi)皮功能失調(diào)或內(nèi)皮功能受損，血管內(nèi)皮能合成和釋放多種生物活性物質(zhì)，并通過自分泌和旁分泌的形式調(diào)控血管張力、血液流動、血管壁的生長及重塑等，對動脈粥樣硬化的發(fā)生起第一道防線的生理防御作用。通過降低血糖、調(diào)節(jié)脂質(zhì)紊亂，保護動脈內(nèi)皮細胞，改善AS的重要環(huán)節(jié)。

糖尿病病人出現(xiàn)高糖、高血脂癥，發(fā)展至AS，具有黏、凝、聚的病理狀態(tài)，多屬中醫(yī)血瘀、痰濕的病理范疇。藥理研究表明，活血化瘀藥如丹參、血竭、三七具有降血脂、改善血液黏稠度、促進血液循環(huán)、減少及延緩并發(fā)癥發(fā)生的作用；補氣藥太子參能提高血中胰島素含量，促進胰島釋放胰島素，以降低血糖；石斛、枸杞等養(yǎng)陰藥具有良好的降糖、降脂作用。活血降糖膠囊以活血化瘀、補氣養(yǎng)陰為法擬訂。以血竭、三七、丹參活血化瘀，太子參補氣，石斛養(yǎng)陰潤燥，枸杞滋補肝腎，標本兼治，消補兩調(diào)，通過祛邪扶正發(fā)揮減少高血糖，血脂紊亂對內(nèi)皮的直接損傷，治療AS的作用。本實驗研究表明，活血降糖方能顯著降低隨機血糖、TG，并能上調(diào)HDL－C/TC的比值，與對照組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。說明其有一定降糖、改善脂代謝紊亂的作用。形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)活血降糖膠囊治療組可見動脈內(nèi)膜脂質(zhì)形成、沉積，內(nèi)皮細胞脫落，泡沫細胞層數(shù)，動脈壁增厚，彈性纖維斷裂及平滑肌增生、遷移較對照組相比較均有所減少。證實了對內(nèi)皮細胞形態(tài)學(xué)的保護作用，及保護動脈內(nèi)皮細胞的屏障功能，對主動脈內(nèi)膜粥樣斑塊形成有明顯的抑制作用。推測活血降糖方通過調(diào)節(jié)糖、脂代謝紊亂，減輕其對動脈內(nèi)膜的糖脂毒性和損害作用而起到抗AS的作用。

(本文編輯 王雅潔)