【摘要】 目的 通過建立小鼠哮喘模型，給予地塞米松治療，檢測血漿8-異前列腺素F_2α（8-iso-PGF_2α）水平變化，探討地塞米松對哮喘小鼠的治療作用。

方法 選用24只昆明種雄性小鼠，隨機分為正常對照組、哮喘組和地塞米松治療組，哮喘組和地塞米松治療組予雞卵白蛋白致敏及激發(fā)建立哮喘模型，再分別給予生理鹽水和地塞米松治療，檢測血漿8-iso-PGF_2α水平。結(jié)果 哮喘組血漿中8-iso-PGF_2α較正常對照組顯著升高（P<0.01），經(jīng)地塞米松治療后顯著下降(P<0.01)，與正常對照組比較無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論 哮喘小鼠機體存在氧化應激狀態(tài)，地塞米松對哮喘的氧化應激狀態(tài)具有明顯的干預作用。

【關鍵詞】 支氣管哮喘；氧化應激；地塞米松；8-異前列腺素F_2α

文章編號：1003-1383(2007)02-0124-03中圖分

類號：R 365文獻標識碼：A

支氣管哮喘是常見的氣道慢性炎癥性疾病，實驗與臨床資料已經(jīng)證明氧化物質(zhì)在包括哮喘在內(nèi)的許多呼吸系統(tǒng)疾病的病理生理過程中起重要作用。越來越多證據(jù)表明，在哮喘慢性氣道炎癥過程中發(fā)生氣道的氧化應激反應。而一些觸發(fā)哮喘加重的因素，例如病毒感染、空氣污染等，都會誘導氧化物質(zhì)產(chǎn)生增加，從而加重氣道炎癥反應［1］。本實驗檢測了哮喘模型小鼠予地塞米松治療后血漿8-iso-PGF_2α的變化，現(xiàn)將結(jié)果及其意義匯報如下。

材料與方法

1.實驗對象 24只清潔級昆明種純白小鼠，體重20±3 g，全部為雄性，購自廣東醫(yī)學院實驗動物中心。將實驗小鼠隨機分為：正常對照組（N，8只）和實驗組（16只），實驗組小鼠建立哮喘模型，隨機分為：哮喘模型對照組（A，8只），地塞米松組（D，8只）。

2.哮喘模型的建立方法 腹腔注射雞卵白蛋白抗原液0.5 ml（含氫氧化鋁凝膠2 mg和卵白蛋白15 μg）致敏，第7天、14天時各重復一次，第21天始以1%卵蛋白霧化吸入來誘發(fā)小鼠哮喘發(fā)作，每天2次，連續(xù)3天，正常對照組給予生理鹽水腹腔注射和霧化。

3.給藥方法 地塞米松用量參考文獻中人的用藥劑量，依據(jù)體重折算系數(shù)（小鼠和人之間為0.11）及體表面積折算系數(shù)（小鼠和人之間為387.9）［2］進行換算。地塞米松組每次霧化前分別通過灌胃給予地塞米松，劑量為：2 mg/kg。

4.檢測方法 最后一次引喘12—18小時后，清醒動物眼動脈放血，殺死小鼠，全血以EDTA-Na抗凝，3500 rpm低溫離心10 min，取上清置于液氮中備做8-iso-PGF2α測定。8-iso-PGF_2α的檢測采用酶免疫分析法。放血畢行支氣管肺泡灌洗5次，每次0.6 ml，合并5次BALF，混勻，灌板，顯微鏡下進行白細胞計數(shù)。

5.實驗儀器及試劑 ELX-800酶標儀（美國Bio-Tek公司）；JSC-A多功能超聲霧化器（遼寧省鞍山市電子醫(yī)療儀器廠）；卵白蛋白（Grade Ⅱ）（美國Sigma公司），卵磷脂（美國Sigma公司），8-iso-PGF_2αEIA Kit（美國Cayman公司），地塞米松（美國Sigma公司）。

6.統(tǒng)計學處理 各指標（計量資料）用-±s表示，SPSS11.0統(tǒng)計軟件行方差分析，組間比較用LSD（方差齊時）和Tamhane’s T2（方差不齊時），雙側(cè)P<0.05為統(tǒng)計檢驗顯著性標準。

結(jié)果

哮喘組BALF中白細胞總數(shù)較正常對照組顯著升高（P<0.01）；經(jīng)地塞米松治療后白細胞總數(shù)顯著下降（與哮喘組比較P<0.01）。哮喘組血漿中8-iso-PGF_2α較正常對照組顯著升高（P<0.01），經(jīng)地塞米松治療后均顯著下降（與哮喘組比較P<0.01），幾乎可達正常對照組水平（與正常對照組比較P>0.05）。見表1。

討論

異構(gòu)前列腺素（Isoprostanes）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新型的前列腺素，具有獨特的產(chǎn)生途徑和生物活性，通過自由基和活性氧簇(ROS)催化花生四烯酸脂質(zhì)過氧化產(chǎn)生。其中O₂^-和H₂O₂是兩種最主要的自由基，通過該途徑能生成多種Isoprostanes的異構(gòu)體，其中8-iso-PGF_2α（8-Isoprostane）是Isoprostanes最主要的成分，對其研究也最為深入［3］。研究已經(jīng)證實8-iso-PGF_2α能作為機體氧化/抗氧化狀態(tài)靈敏、可靠及準確的指標，其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定［4］，脂類樣本如血漿、組織一經(jīng)液氮冷凍后就不會發(fā)生自身氧化，在-80℃下可以貯存8個月；其水平隨著氧化應激的實驗狀態(tài)改變而改變，與疾病嚴重程度相關［5］。此外，8-iso-PGF_2α在呼吸系統(tǒng)產(chǎn)生重要的生物活性，例如能收縮人和豚鼠氣道，引起氣道阻塞［6］、能加強氣道的非特異性高反應性［7］等。

支氣管哮喘急性發(fā)作時，大量炎癥細胞在支氣管黏膜上皮聚集，釋放多種細胞因子，同時反應性氧化產(chǎn)物(ROS)增多；由補體、白三烯、內(nèi)毒素、免疫復合物等因子激活白細胞膜上NAPDH氧化酶，啟動呼吸爆發(fā)，可產(chǎn)生多種氧自由基導致氧化/抗氧化失衡，氧化應激反應對哮喘的發(fā)生、發(fā)展起了重要作用［1］。Kirschvin等［8］的研究顯示8-iso-PGF_2α水平和氣道炎癥細胞的浸潤程度相平行，8-iso-PGF_2α參與氣道的炎癥進程。本實驗中，用小鼠成功復制了卵蛋白過敏性哮喘模型，檢測哮喘模型小鼠給予地塞米松治療后小鼠血漿中8-iso-PGF_2α水平及BALF中WBC計數(shù)。結(jié)果顯示：哮喘組BALF中白細胞總數(shù)和血漿中8-iso-PGF_2α水平較正常對照組顯著升高（P<0.01），表明哮喘模型小鼠氣道存在氣道炎癥和氧化/抗氧化失衡，經(jīng)糖皮質(zhì)激素治療后白細胞總數(shù)及8-iso-PGF_2α水平顯著下降（P<0.01），表明地塞米松抑制哮喘模型小鼠的氣道炎癥反應、糾正氧化/抗氧化失衡狀態(tài)，從而對哮喘有治療作用。

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