[摘要]目的：探討NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子κB(NF—κB／P65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p—IκBα)以及真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子抑制蛋白激酶(IκKα)在皮膚SCC和BCC中的表達(dá)和三者之間關(guān)系，為臨床治療提供新思路。方法：采用免疫組化SP法檢測53例皮膚癌組織(其中SCC27例，BCC 26例)和20例正常皮膚組織中NF-κB／P65，p-IκBα和IκKα蛋白的表達(dá)。結(jié)果：與正常皮膚組織相比，NF—κB／P65，p—IκBα和IκKα三者在SCC，BCC中均高表達(dá)(ρ＜0．05)；三者在SCC和BCC中的表達(dá)具有統(tǒng)計學(xué)意義(ρ＜0．05)；IκK蛋白的表達(dá)與SCC的分化程度無明顯相關(guān)性(ρ＜0．05)。在BCC和SCC中，IκKα的表達(dá)與p-IκBα的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0．5 36，ρ＜0．05)，NF-κB／P65和p-IκBα的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0．435，ρ＜0．05)。結(jié)論：NF-κB信號傳導(dǎo)通路可能在BCC和SCC的發(fā)生中起重要作用。

[關(guān)鍵詞]真核轉(zhuǎn)錄因子κB／P65(NF-κB／P65)；磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)；NF-κB抑制蛋白激酶(IκKα)；皮膚鱗狀細(xì)胞癌；皮膚基底細(xì)胞癌：表達(dá)

[中圖分類號]Q527 R7 39．5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1008—6455(2006)12-1339-03

基金項目：河南省科技廳基金資助項目(編號：0124170636)

通訊作者：劉林嶓，主任醫(yī)師，教授，碩士研究生導(dǎo)師；主要研究方向：惡性皮膚癌的預(yù)防和治療

E-mail：liulinbo@zzu．edu．cn

皮膚鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)和基底細(xì)胞癌(basal cell carcinoma，BCC)的發(fā)病率均較高。近年來，有關(guān)學(xué)者在SCC和BCC的分子生物學(xué)方面的研究中取得了很大的進(jìn)展。真核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是重要的細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控通路，該通路包括真核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)，NF-κB抑制蛋白(IκB)以及IκB的激酶(IκK)等，其中IκKα結(jié)構(gòu)的改變是IκK激活的重要因素之一。IκBa是IκB的家族成員，其本身是NF－κB的反應(yīng)基因，是調(diào)控NF-κB活性的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，其磷酸化形式是在上游激酶IκK作用下的產(chǎn)物。為了解該通路與SCC和BCC的發(fā)生發(fā)展是否相關(guān)，本實驗采用了免疫組化SP法檢測了NF-κB／P65蛋白，磷酸化NF-κB／P65抑制蛋白(p-IκBa)和IκB激酶復(fù)合體的分子之一(IκKα蛋白)在SCC和BCC中的表達(dá)，并分析三者之間的相互關(guān)系，探討在臨床中應(yīng)用的意義。

1 材料和方法

1．1標(biāo)本來源：53例標(biāo)本取自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院整形外科手術(shù)切除標(biāo)本。SCC 27例、BCC 26例；其中男性25例，女性28例，平均年齡56．6歲。皮膚鱗狀細(xì)胞癌Ⅰ級分化20例，Ⅱ級分化5例，Ⅲ級分化2例，Ⅳ級分化0例。所有病例術(shù)前均無化療、放療等特殊治療。正常皮膚20例來自非癌需植皮的病人，均為全厚皮片。

1．2方法：采用免疫組化SP法。鼠抗人NF-κB／P65單克隆抗體、兔抗人p-IκBa多克隆抗體，SP免疫組化試劑盒，DAB顯色試劑盒均購自北京中山公司。兔抗人IκKα多克隆抗體，購自武漢博士德公司。用已知陽性切片做陽性對照；以PBS代替1抗作空白對照。

1．3結(jié)果判定：NF-κB／P65，p-IκBα和IκKα陽性表達(dá)均定位于細(xì)胞漿，呈黃色顆粒。三者陽性表達(dá)水平采用染色強度評分×陽性細(xì)胞面積評分的積分表示。染色強度分為4級：完全陰性，與背景色一致為0級；弱陽性染色，淡黃色，略高于背景色為1級；陽性染色，黃色，明顯高于背景色為2級：強陽性染色，棕褐色為3級。陽性細(xì)胞面積分為4級：陰性為0級；陽性細(xì)胞面積／細(xì)胞總面積≤10％為1級；陽性細(xì)胞面積／細(xì)胞總面積11％～50％為2級；陽性細(xì)胞面積／細(xì)胞總面積51％～75％為3級；陽性細(xì)胞面積／細(xì)胞總面積＞75％為4級。兩者定性積分表達(dá)≥2分為陽性表達(dá)。

1．4統(tǒng)計學(xué)處理：應(yīng)用SPSS13．0軟件，兩樣本率的比較采用四格表資料的卡方檢驗，不滿足卡方檢驗條件時采用Fisher精確概率檢驗法，多樣本率的比較采用行列表資料的卡方檢驗；相關(guān)分析使用Spearman相關(guān)分析。以α=0．05為檢驗水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2．1 NF-κB／P65，p-IκBα和IκKa在SCC和BCC中的表達(dá)(圖1-9，見中插2)：NF-κB／P65，p-IκBα和IκKa在正常皮膚中的陽性表達(dá)率與在SCC和BCC中的陽性表達(dá)率具有統(tǒng)計學(xué)意義(ρ＜0．05)，見表1。

2．2 NF-κB／P65、IκKα與皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織病理學(xué)分級的關(guān)系：SCC高分化有21例，中低分化有6例，IκKa在不同分化的鱗癌組織中的陽性表達(dá)率無統(tǒng)計學(xué)意義(ρ＜0．05)，而P65在不同分化的鱗癌組織中的陽性表達(dá)率無統(tǒng)計學(xué)意義(ρ＞0．05)，見表2。

2．3 NF-κB／P65，p-IκBα和IκKa在SCC和BCC中表達(dá)的關(guān)系：在SCC和BCC組織中，IκKa和p-IκBα的表達(dá)具有正相關(guān)性(r=0．536，ρ＜0．05)，p-IκBα與NF-κB／P65的表達(dá)具有正相關(guān)性(r=0．435，ρ＜0．05)，見表3。

3 討論

NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與多種腫瘤的發(fā)生有關(guān)，如食管癌，惡性黑色素細(xì)胞瘤等。該通路在刺激因素的作用下，細(xì)胞膜受體活化，募集銜接蛋白等至細(xì)胞膜，激活胞漿內(nèi)NF-κB／P65抑制蛋白激酶IκK復(fù)合物，其可使NF-κB／P65抑制蛋白IκB被磷酸化，通過泛素降解途徑使IκB由NF-κBP65／P50二聚體上解聚，從而激活了NF-κB／P65，進(jìn)而調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄：NF-κB在細(xì)胞增殖中具有核心作用，NF-κB可以通過上調(diào)細(xì)胞周期蛋白cyclinD1等基因轉(zhuǎn)錄導(dǎo)致細(xì)胞無限增殖和自主分裂；誘導(dǎo)抗凋亡基因，如上調(diào)細(xì)胞凋亡抑制蛋白(CIAP)可直接抑制Caspases3，7，9的活性從而阻止細(xì)胞的凋亡，導(dǎo)致細(xì)胞的惡性發(fā)展，這均在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要的意義。

本實驗結(jié)果顯示，與正常皮膚組織相比，NF-κB／P65，p-Iκ＜Bα和IκKa三者在SCC，BCC中均高表達(dá)(ρ＜0．05)，提示在SCC、BCC中NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的存在，TamataniT等人檢測到頭頸部腫瘤細(xì)胞株中IκKa的表達(dá)增加時，IκK的活性明顯提高，同時p-IκBα和NF-κB／P65表達(dá)亦較正常細(xì)胞中的表達(dá)水平升高，說明NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在SCC和BCC中發(fā)揮一定的作用；試驗還提示IκKa蛋白與p-IκBa蛋白具有正相關(guān)性，IκKα作為IκB的上游激酶，通過磷酸化的方式激活了IκBα；p-IκBα與NF-κBP65蛋白的表達(dá)亦呈正相關(guān)性，可見IκBα作為IκB蛋白的一分子，其被磷酸化后，激活NF-κB／P65，從而啟動腫瘤發(fā)生的過程。

在不同分化程度的SCC中，IκKα的陽性表達(dá)率與SCC的組織病理學(xué)分級無明顯相關(guān)性(ρ＞0．05)，Nakayama使用口腔鱗癌細(xì)胞株進(jìn)行試驗觀察所得結(jié)論為IκKa的高表達(dá)可以促使鱗癌細(xì)胞的惡性分化，這可能是由于腫瘤的組織學(xué)類型不同所致，或者有其他未知原因需要進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)。NF-κB／P65在不同病理分級的SCC中的陽性表達(dá)率無統(tǒng)計學(xué)意義(ρ＞0．05)。曾有報道，NF-κB／P65的激活與磷脂酰肌醇-3激酶途徑有關(guān)，持續(xù)激活A(yù)KT可導(dǎo)致IκB磷酸化，而使NF-κB／P65激活，可能由于腫瘤發(fā)生多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的相互交聯(lián)，相互作用，致使NF-κB／P65在不同分級的SCC中被廣泛激活，其與SCC的生物學(xué)行為之間的關(guān)系還需在分子水平上繼續(xù)研究。

NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與SCC和BCC的發(fā)生有關(guān)，并且IκKα，p-IκBα和NF-κB／P65存在著各級正向調(diào)節(jié)關(guān)系，提示它們共同作用于SCC和BCC；通過對該通路的因子進(jìn)行干預(yù)來抑制細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)為SCC和BCC的治療提供了新的思路。

[收稿日期]2006-08-15 [修回日期]2006-10-30

編輯／張惠娟

注：本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內(nèi)容請以PDF格式閱讀原文。