關(guān)鍵詞:薏苡(Coix lacryma-jobiL.);薏苡素;部位;生長期;積累規(guī)律
中圖分類號:S519 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A
文章編號:0439-8114(2025)07-0114-06
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2025.07.020 開放科學(xué)(資源服務(wù))標(biāo)識(shí)碼(OSID):
The dynamic accumulation pattern of coixol in different parts and growth periods of Coix lacryma-jobi L.
WANGYao,LIFu-min,WANGMin,YANGTian-ming,SUNDa-li (Schoolof Public Health,Guizhou Medical University,Guiyang 561113,China)
Abstract:Thecontentlevelsofcoixolinrots,stems,leavesandseedsofcoix(Coix lacryma-jobiL.)during six growthperiods, namely,seding,iling,otingoingloongndatuiterevesiatedndhsisdclai ofcoixolicoixplantswereclarifed.Samplesofroots,stems,leavesandsedsofcoixwerecolectedduringdiferentgrowthpriods, extractedbytheultrasound-asistedextractionmetod,andthecontentofcoixolwasdetectedbyliquidchromatogaphycoupledwith mass spectrometry(UPLC-MS/S).Theresultsshowedthathereweresignificantdiferencesinthecontentofcoixolindifrentparts of coix at different growth stages,and the highest content of coixol was found in roots[(661.06±52.41) mg/kg ],followed byleaves [(80.73±2.31) mg/kg],seeds[(14.56±0.29) mg/kg]and stems ?(9.80±0.44)mg/kg? . The content of coixol in each part was negativelycorelatedwithplantheigt,otlngth,andfreshweight.Comparisonofdiferentpartsofteplantrevealedtatcoxbaed the greatestcoixolyieldat thebotingstage[(112.47±9.20)mg/plant],follwedbythebloomingstage[(51.42±7.96)mg/plant]. Coixolyieldperplantwaspositivelyorelatdwithplantheight,otlengthndfreshweightItouldbesentatthemaxiuaccumulation of coixol was in the roots at the booting stage.
Key words:Coix lacryma-jobi L.; coixol;part;growth period;accumulation pattern
薏苡(Coixlacryma-jobiL.)別稱薏仁米、藥玉米、六谷子等,為禾本科(Gramineae)薏苡屬 (Coix) 一年或多年生草本植物,具有較高的藥用、保健和營養(yǎng)價(jià)值,為中國傳統(tǒng)藥食兩用作物,在歐洲享有“生命健康之禾\"的美譽(yù)[1-3]。中國是薏苡的種植大國,在南北方各省均有廣泛分布,全國種植總面積約為7.3萬 hm2 。貴州省薏苡產(chǎn)量和種植面積位居全國第一,尤其是作為主產(chǎn)區(qū)的興仁市已成為全國薏苡種植、加工和銷售的集散地[4-6]。薏苡整株均可入藥,具有除痹止瀉、健脾利濕以及清熱排膿等功效7。薏苡仁是薏苡的成熟干燥種仁,除了富含淀粉、脂肪、蛋白質(zhì)、氨基酸和礦物質(zhì)等營養(yǎng)成分之外,還含有甾醇、三萜類、生物堿等其他生物活性物質(zhì)。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為薏苡仁具有利尿、消腫、祛風(fēng)濕、利腸胃、強(qiáng)筋骨以及補(bǔ)正氣等作用8?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究顯示,其還具有提高免疫力、抗腫瘤、降血糖和降血壓等藥用價(jià)值[9-13]
薏苡素又名薏苡內(nèi)酯,化學(xué)名稱為6-甲氧基-2-苯唑啉酮,是薏苡中獨(dú)特的有效活性成分,因具有多種生物活性而受到關(guān)注[14-17]。有研究表明,薏苡素具有抗癌、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、抗衰老、美容等功效,在醫(yī)學(xué)上,可作為多種癌癥、糖尿病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病的輔助治療藥物,臨床反應(yīng)小且用藥較為安全[18-22]。以薏苡仁油(主要成分為薏苡素)為原料的康萊特注射液已廣泛用于非小細(xì)胞肺癌及原發(fā)性肝癌等多種癌癥的臨床治療[23.24]。此外,還有多款薏苡素保健食品和藥膳在市場上有售。然而,薏苡素的產(chǎn)量遠(yuǎn)不能滿足其在醫(yī)療及保健品開發(fā)等領(lǐng)域中的使用需求。因此,急需提高薏苡素的產(chǎn)量。
植物中有效成分的合成、代謝、儲(chǔ)存部位會(huì)隨著植株的生長發(fā)育不斷發(fā)生轉(zhuǎn)移,通常具有組織、器官、種屬以及生長發(fā)育時(shí)期的特異性[25]。薏苡中活性成分薏苡素在醫(yī)療、保健品、美容行業(yè)具有重要的應(yīng)用價(jià)值,但生產(chǎn)上對薏苡素在生長過程中的合成、積累、儲(chǔ)存部位及其與生長期的關(guān)系知之甚少[26]因此,本研究通過探究薏苡不同生長期、不同部位薏苡素積累情況,明確薏苡素在薏苡不同生長發(fā)育階段的積累變化規(guī)律,這對薏苡資源開發(fā)利用具有重要的指導(dǎo)意義。
1 材料與方法
1.1材料
薏苡仁為市售,挑選顆粒飽滿、無蟲蛀霉?fàn)€的薏苡仁。
試劑:薏苡素標(biāo)準(zhǔn)品(純度 ?98% ,批號J26GB152842),上海源葉生物科技有限公司;甲醇(分析純,批號20231108),重慶川東化工有限公司;甲醇、乙腈(均為色譜純,批號分別為52901440、30611440),上海麥克林生化科技有限公司;純凈水,杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司。
1.2 儀器與設(shè)備
超高效液相色譜串聯(lián)三重四極液質(zhì)聯(lián)用儀,美國鉑金埃爾默公司;AgilentZORBAXSB-C18色譜柱 250mm×4.6mm,5μm) ,美國安捷倫科技有限公司;KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司;RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、YR-PTB型循環(huán)水真空泵,上海亞榮生化儀器廠;DJ-A2000型電子天平,華志電子科技有限公司;BJ-750A型多功能粉碎機(jī),杭州拜杰科技有限公司;XGQ-2000型電熱鼓風(fēng)干燥箱,余姚市星辰儀表廠;SorvallST8R型高速冷凍離心機(jī),賽默飛世爾科技有限公司。
1.3 方法
1.3.1樣品處理與采集研究所用薏苡仁種子均產(chǎn)自貴州省興義市。去除小粒、干癟的種子,選出飽滿健壯的種子,采用溫水浸種法(水溫 60°C 、時(shí)間30min. )對種子進(jìn)行處理,以促進(jìn)種子萌發(fā),并防治黑穗病。于2023年5月18日在直徑 25cm 、深 29cm 的園藝塑料大號花盆中裝土播種,每盆裝等量土壤,以確保相同的試驗(yàn)條件。采集薏苡幼苗期(S1)、分蘗期(S2)、拔節(jié)期(S3)、孕穗期(S4)、抽穗開花期(S5)和成熟期(S6)的全株,洗凈根部泥土后,立即保存于 -80°C 冰箱內(nèi)。
1.3.2生長指標(biāo)測定采集樣品時(shí),需對株高、根長、鮮重等指標(biāo)進(jìn)行測定。用直尺測量從植株基部到幼苗葉片最高處的垂直距離,作為薏苡的株高 (cm) ;用直尺測量從植株基部到根尖生長點(diǎn)之間的長度( (cm) ,作為根長;將薏苡從土中取出,用純凈水沖洗掉根部殘留的泥王,用濾紙吸干水分后,用分析天平稱取植株重量,作為鮮重(g)。
1.3.3薏苡素樣品的制備準(zhǔn)確稱取干燥( 40°C 烘干 24h 后的根、莖、葉、種子粉末各 0.1g ,放入離心管中,加入 5mL80% 甲醇溶液,超聲波處理 70min ,冷卻, 4000r/min 離心 10min ,取上清液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至 2mL ,然后用微孔濾膜 (0.45μm) 過濾至進(jìn)樣小瓶,于 -20°C 冰箱內(nèi)保存待測。
1.3.4檢測條件采用AgilentZORBAX SB- ?C18 ( 250mm×4.6mm,5μm) 的液相色譜柱對目標(biāo)化合物進(jìn)行色譜分離,通過UPLC-MS/MS測定薏苡素含量。色譜條件:流動(dòng)相為乙晴-水 (25:75,V/V) ,流速為 1.0mL/min ,色譜柱溫度為 25°C ,進(jìn)樣量為20μL ,檢測波長為 232nm 。
質(zhì)譜條件:離子源 ESI+ ,電噴霧電壓(IS) 5500V :霧化氣壓力(GS1) 344.74kPa ;氣簾氣壓力(CUR)172.37kPa ;輔助加熱氣壓力 (GS2)413.69kPa ;離子源溫度(TEM) 550°C ;入口電壓(EP) 10V ;碰撞室出口電壓(CXP)15V;檢測模式MRM-IDA-EPI。具體質(zhì)譜參數(shù)見表1。在上述條件下,獲得薏苡素標(biāo)準(zhǔn)品和薏苡樣品色譜圖(圖1)。
1.3.5標(biāo)準(zhǔn)品的配制用分析天平精密稱取薏苡素標(biāo)準(zhǔn)品 1mg ,加甲醇溶解定容至 10mL ,配制成質(zhì)量濃度為 100μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。按\"1.3.4\"中色譜條件,取標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣分析。
表1薏苡素的質(zhì)譜參數(shù)
圖1薏苡素標(biāo)準(zhǔn)品 )(A)和薏苡根(B)、莖(C)、葉(D)、種子(E)樣品色譜圖
1.3.6線性關(guān)系精確吸取 5mL 薏苡素標(biāo)準(zhǔn)品溶液,用甲醇定容至 10mL ,配制成 50μg/mL 薏苡素標(biāo)準(zhǔn)品溶液。從 50μg/mL 薏苡素標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取一定量溶液配制成 40μg/mL 薏苡素標(biāo)準(zhǔn)品溶液。以此類推,從高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中精密吸取一定量溶液配制成低濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液,濃度分別為20.00、10.00,5.00,1.00,0.50,0.10,0.05,0.01μg/mL, 。精密吸取 1mL 標(biāo)準(zhǔn)品溶液,經(jīng) 0.2μm 尼龍膜過濾,測定峰面積。以標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,計(jì)算得到線性回歸方程,檢驗(yàn)線性情況。
1.3.7薏苡素含量的測定分別吸取不同生長期各部位的薏苡素樣品,根據(jù)樣品測得的色譜吸收峰的峰面積,按外標(biāo)法計(jì)算薏苡素含量,每個(gè)樣品重復(fù)3次,取平均值。薏苡素含量 (x) 的計(jì)算公式如下。
x=cV/m
式中, x 為樣品中薏苡素的含量 (mg/kg);c 為通過標(biāo)準(zhǔn)曲線求出的薏苡素含量 ; V 為薏苡素樣品的定容體積 (mL);m 為薏苡樣品的質(zhì)量
。
1.4 數(shù)據(jù)處理與分析
上述所有試驗(yàn)均重復(fù)3次,結(jié)果以平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。使用SPSS27軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,并使用GraphPadPrism8軟件進(jìn)行繪圖。
2 結(jié)果與分析
2.1 線性關(guān)系
精密量取薏苡素標(biāo)準(zhǔn)品溶液,按上述色譜條件依次進(jìn)樣并記錄峰面積響應(yīng)值。結(jié)果表明,薏苡根、莖、葉、種子樣品溶液對應(yīng)薏苡素標(biāo)準(zhǔn)曲線的決定系數(shù) (r2) 分別為 0.9784,0.9980,0.9925,0.9984 對應(yīng)薏苡素標(biāo)準(zhǔn)曲線分別為 y=546272x+736429 1749726x+17492 ,線性范圍分別為 0.50~20.00μg/mL
線性關(guān)系良好。
2.2 不同生長期生長指標(biāo)的變化情況
從圖2A可以看出,隨著薏苡植株的生長發(fā)育,株高在幼苗期(S1)至成熟期(S6)呈顯著遞增趨勢,其中分蘗期至拔節(jié)期增幅尤為顯著。從圖2B可以看出,根長隨生長期推進(jìn)(S1至S6)呈顯著遞增趨勢,成熟期(S6)根長達(dá)最大值。從圖2C可以看出,鮮重在分蘗期(S2)至孕穗期(S4)顯著遞增,孕穗期(S4)達(dá)峰值;后續(xù)隨植株發(fā)育、種仁成熟,抽穗開花期(S5)至成熟期(S6)鮮重逐步降低。綜上,薏苡不同生長期內(nèi)株高與根長的變化趨勢一致(均呈持續(xù)遞增趨勢),鮮重隨薏苡植株的生長發(fā)育先顯著增加后逐漸降低。
2.3 不同生長期薏苡素含量的變化情況
2.3.1不同生長期各部位薏苡素含量的變化情況由表2可知,根據(jù)不同生長期薏苡植株的農(nóng)藝性狀劃分為根、莖、葉、種子等開展薏苡素含量測定。其中,薏苡素含量排前三的樣品分別為幼苗期(S1)拔節(jié)期(S3)和孕穗期(S4)的根部;幼苗期(S1)根中薏苡素含量最高,達(dá)( 2 393.65±69.77 ) mg/kg ;薏苡素含量較低的樣品為成熟期(S6)莖、成熟期(S6)種子、抽穗開花期(S5)莖,其中成熟期(S6)莖含量最低,為( 4.21±0.86 ) mg/kg ,為最高含量(幼苗期根)的0.18% 。薏苡在抽穗開花期和成熟期時(shí),根、莖、葉、種子4個(gè)部位薏苡素含量呈現(xiàn)明顯的差異,且分布趨勢大體一致。抽穗開花期、成熟期根系薏苡素含量遠(yuǎn)高于其他部位,分別為( 661.06±52.41 ) mg/kg 和0 284.37±32.32)log/kg ;其次,兩生長期中葉片薏苡素含量相對較高,分別為 (80.73±2.31 ) mg/kg 和( 18.82±7.59 ) mg/kg ;種子與莖中薏苡素含量偏低,種子薏苡素含量[成熟期 (4.71±0.14)mg/kg] 略高于莖[成熟期 (4.21±0.86)mg/kg] ,兩者含量接近。
圖2薏苡不同生長期生長指標(biāo)的變化情況
A.株高;B.根長;C.鮮重;S1.幼苗期;S2.分蘗期;S3.拔節(jié)期;S4.孕穗期;S5.抽穗開花期;S6.成熟期。不同小寫字母表示不同生長期之間差異顯著( -1-20.05 )
表2薏苡不同生長期各部位薏苡素含量
注:不同小寫字母表示同一生長期不同部位之間差異顯著 Plt;0.05 )
2.3.2根系、葉片和單株植株薏苡素含量的變化情況從圖3A可以看出,薏苡根系中薏苡素含量在幼苗期至分蘗期時(shí)顯著下降,分蘗期至拔節(jié)期時(shí)顯著增加,拔節(jié)期后逐漸降低,整體呈下降趨勢,根中薏苡素含量在成熟期時(shí)達(dá)最低值,為 (284.37±32.32)log/kg 為幼苗期根中薏苡素總含量的 11.9% 。從圖3B可以看出,薏苡葉片中薏苡素含量隨植株生長發(fā)育進(jìn)程顯著下降,幼苗期達(dá)最高值,為 (757.29±34.63)mg/kg :成熟期達(dá)最低值,為 (18.82±7.59)mg/kg ,下降了 97.5% 。從圖3C可以看出,單株薏苡素產(chǎn)量在分蘗期至孕穗期顯著增加,孕穗期達(dá)最高值,為 (112.47±9.20) mg/株,其次為抽穗開花期( 51.42±7.96 ) mg/ 株;孕穗期至成熟期顯著下降。
2.4薏苡素含量與薏苡生長指標(biāo)的相關(guān)分析
對不同生長期薏苡根系(Rootcoixolcontent,RCC)和葉片(Leafcoixolcontent,LCC)的薏苡素含量及單株薏苡素產(chǎn)量(Coixolyield,CY)與株高(Plantheight,PH)、根長(Rootlength,RL)、鮮重(Freshweight,F(xiàn)W)等生長指標(biāo)開展Pearson相關(guān)分析。相關(guān)系數(shù)結(jié)果如圖4所示,單株薏苡素產(chǎn)量與株高、根長、鮮重呈顯著正相關(guān)。其中,鮮重與單株薏苡素產(chǎn)量的相關(guān)系數(shù)為0.90,高于株高與單株薏苡素產(chǎn)量、根長與單株薏苡素產(chǎn)量的相關(guān)系數(shù),兩者呈強(qiáng)正相關(guān),表明鮮重對單株薏苡素產(chǎn)量的影響更突出。薏苡根系、葉片的薏苡素含量與株高、根長和鮮重呈顯著負(fù)相關(guān),且根系薏苡素含量與株高、根長、鮮重的負(fù)相關(guān)系數(shù),高于葉片薏苡素含量與對應(yīng)指標(biāo)的負(fù)相關(guān)系數(shù)。
圖3薏苡不同生長期的薏苡素含量變化
圖4薏苡素含量與薏苡生長指標(biāo)的相關(guān)分析
PH.株高;RL.根長;FW.鮮重;RCC.根系薏苡素含量;LCC.葉片薏苡素含量;CY.單株薏苡素產(chǎn)量;\"*\"表示顯著相關(guān)( ?Plt;0.05 )
3 小結(jié)與討論
3.1不同部位薏苡素含量的差異
本研究通過對薏苡整個(gè)生長期的生長指標(biāo)及各部位的薏苡素含量進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),薏苡素含量最高的部位為幼苗期根,薏苡素含量最低的部位為成熟期莖,為最高含量(幼苗期根)的 0.18% ;在抽穗開花期和成熟期,薏苡素含量在4個(gè)部位呈現(xiàn)明顯的分布差異,薏苡素含量大小表現(xiàn)為根 gt; 葉 gt; 種子 gt; 莖,這與黃克俊等[27]、李厚聰?shù)萚28]的研究結(jié)果一致,據(jù)此建議將根和葉作為薏苡素人藥的主要部位。在植物的不同生長部位,薏苡素的含量可能會(huì)有所不同,這是由于這些部位在植物的生理過程中扮演著不同的角色。例如,根部可能負(fù)責(zé)吸收水分和養(yǎng)分,而葉則主要進(jìn)行光合作用。因此,不同部位的代謝活動(dòng)和生物合成途徑可能調(diào)控薏苡素的積累。
3.2 不同時(shí)期薏苡素含量的差異
本研究通過對薏苡整個(gè)生長周期各部位薏苡素含量進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),薏苡根、莖、葉、種子等部位的薏苡素含量隨著薏苡生長發(fā)育的進(jìn)程基本呈下降趨勢。植物生長發(fā)育過程中經(jīng)常受到各種環(huán)境因素的影響,如干旱、洪澇、病蟲害等,而次生代謝物是植物對各種逆境的適應(yīng)。苯并惡唑嗪酮(Benzoxa-zinoids,BXs)是植物體內(nèi)一種具有防御性的重要次生代謝物,廣泛存在于玉米、小麥、薏苡等禾本科作物中[29],薏苡素作為眾多BXs化合物之一,也參與了植物抗病、抗蟲及化感等多種防御作用。薏苡處于生長初期時(shí),幼苗對外界環(huán)境影響的適應(yīng)能力弱,容易受到刺激,進(jìn)而分泌大量次生代謝物,從而使各部位薏苡素含量增加,抵御各種不良影響,對自身形成保護(hù),之后隨著生長發(fā)育進(jìn)程的推移,薏苡對外界環(huán)境的適應(yīng)能力逐步增強(qiáng),不易受到刺激而大量分泌次生代謝物,致使各部位薏苡素含量逐漸降低。
3.3薏苡素含量與薏苡生長指標(biāo)的關(guān)系
植物由營養(yǎng)生長向生殖生長的過渡期是其物質(zhì)積累與分配的重要轉(zhuǎn)折點(diǎn),且不同生長期植物的生理狀態(tài)和代謝活動(dòng)也會(huì)隨時(shí)間而變化。本研究結(jié)果表明,隨著株高、根長和鮮重的增加,各部位薏苡素含量基本呈下降趨勢,且根長與鮮重的負(fù)相關(guān)程度高于株高,其中株高與薏苡素含量的關(guān)系更為密切。單株薏苡素產(chǎn)量則先顯著增加而后逐漸降低,在孕穗期獲得最大產(chǎn)量,這與鮮重隨著薏苡生長發(fā)育進(jìn)程變化情況一致,說明鮮重對薏苡全株薏苡素產(chǎn)量的積累影響較大,高于株高和根長,這可能與植物的生物量積累程度有關(guān)。雖然薏苡各部位薏苡素含量隨著發(fā)育進(jìn)程逐步降低,但是總體來看薏苡的生物量是逐漸顯著增加的,也就是鮮重仍在不斷升高,單株薏苡素產(chǎn)量增加的趨勢遠(yuǎn)高于各部位薏苡素含量的下降,在孕穗期鮮重和單株薏苡素產(chǎn)量均達(dá)到最高值。孕穗期是植物生長周期中的一個(gè)階段,此時(shí)植物開始形成花穗,代謝活動(dòng)增強(qiáng),薏苡素產(chǎn)量增加,可能是由于這一時(shí)期薏苡植株體內(nèi)激素水平的變化、代謝途徑的激活或特定生物合成酶的表達(dá)增加所致。
綜上所述,薏苡不同部位薏苡素含量存在明顯的分布差異,從高到低依次為根、葉、種子、莖,且隨著株高、根長、鮮重的增加而減小,單株薏苡素產(chǎn)量則隨著株高、根長、鮮重的增加而上升,與鮮重積累規(guī)律一致,在孕穗期薏苡獲得最大薏苡素產(chǎn)量。本研究旨在使薏苡素的資源得到充分利用,在健康領(lǐng)域發(fā)揮更大價(jià)值,為薏苡素在中醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展奠定基礎(chǔ)。
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(責(zé)任編輯 丁艷紅)