摘" 要：滯綠基因（STAY-GREEN，SGR）基因是一個(gè)調(diào)控植物葉綠素降解的關(guān)鍵基因，在調(diào)控植物衰老方面發(fā)揮著重要作用，。為研究SGR基因在辣椒果實(shí)著色過(guò)程中的調(diào)控作用，采用同源基因克隆法，利用PCR技術(shù)從辣椒果實(shí)cDNA中擴(kuò)增出CaSGR基因，對(duì)其蛋白序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，并構(gòu)建病毒誘導(dǎo)基因沉默（VIGS）載體，初步驗(yàn)證基因功能。結(jié)果表明：CaSGR基因的ORF為792"bp，編碼263個(gè)氨基酸；生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，茄科作物SGR基因相對(duì)保守，克隆的CaSGR蛋白與番茄、馬鈴薯的SGR蛋白進(jìn)化關(guān)系較近；構(gòu)建CaSGR VIGS載體并注射辣椒葉片，成功獲得沉默植株，沉默植株葉片白化，果實(shí)顏色改變，CaSGR基因的表達(dá)量顯著降低，果實(shí)中葉綠素與β-胡蘿卜素含量明顯增高。本研究為深入解析CaSGR基因在辣椒果實(shí)著色中的分子調(diào)控機(jī)制提供基礎(chǔ)，并為培育高類胡蘿卜素含量的辣椒新品種提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：辣椒；CaSGR基因；VIGS技術(shù)；葉綠素；β-胡蘿卜素中圖分類號(hào)：S641.3 """""文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Cloning and Functional Analysis of the SGR Gene in Capsicum annum Fruits

QIN Yuling， LIU Weixia， CAO Zhenmu， LIU Lin， ZHU Dan， YIN Xiaomin， LIU Ziji^*

Institute of Tropical Crops Genetic Resources， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences， Haikou， Hainan 571101， China

Abstract： STAY-GREEN （SGR） is a key gene that regulates chlorophyll degradation in plants and plays an important role in controlling plant senescence. To investigate the regulatory role of the SGR gene in the fruit coloration process of pepper， the homologous gene cloning method was employed to amplify the CaSGR gene from pepper fruit cDNA using PCR technology in this study. Bioinformatics analysis was conducted on its protein sequence， and a virus-induced gene silencing （VIGS） vector was constructed to preliminarily verify the gene function. The results showed that ORF of CaSGR was 792 bp， encoding 263 amino acids. Bioinformatics analysis revealed that SGR was relatively conserved among Solanaceae crops， and SGR had a closer evolutionary relationship with SGR from tomato and potato. CaSGR VIGS vector was constructed and injected into pepper leaves， successfully obtaining silenced plants. The silenced plants exhibited leaf whitening， fruit color changed， and CaSGR expression levels reduced significantly. Additionally， the chlorophyll and β-carotene content in the fruits of the silenced plants increased markedly. This study would provide a foundation for further elucidating the molecular regulatory mechanisms of CaSGR in pepper fruit coloration and offer theoretical support for breeding new pepper varieties with high carotenoid content.

Keywords： Capsicum annum; CaSGR gene; VIGS technology; chlorophyll; β-carotene

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2025.07.004

辣椒（Capsicum spp.）是全球重要的蔬菜和調(diào)味品，近幾年我國(guó)辣椒種植面積均穩(wěn)定在210萬(wàn)hm²左右，產(chǎn)業(yè)規(guī)模居蔬菜首位^[1-3]。辣椒果色是最直觀的外在品質(zhì)性狀和經(jīng)濟(jì)性狀，辣椒果實(shí)因含有類胡蘿卜素種類不同而呈現(xiàn)不同的顏色，同時(shí)辣椒果實(shí)著色過(guò)程伴隨葉綠素的降解和類胡蘿卜素的合成^[4]。

滯綠基因（Stay-green， （SGR）可延遲植物衰老過(guò)程中的葉綠素降解，而導(dǎo)致葉片保持綠色，對(duì)植物生物量、品質(zhì)和保鮮有重要影響。SGR基因在高等植物中是以基因家族形式存在，一般有2個(gè)或3個(gè)同源基因，都參與植物葉綠素降解調(diào)控^[5-6]，目前SGR基因在擬南芥^[7]、番茄^[8]、辣椒^[9]等作物中研究較多。SATO等^[10]在擬南芥中過(guò)表達(dá)AtSGR1會(huì)加速葉片葉綠素的的降解，而呈現(xiàn)葉片黃化；SAKURABA等^[11]研究發(fā)現(xiàn)，擬南芥中的STAY-GREEN2（SGR2）基因是一個(gè)負(fù)調(diào)控因子，它在葉片衰老過(guò)程中抑制葉綠素降解，可見(jiàn)其與在擬南芥的中同源基因發(fā)揮的功能完全不同；劉宇華^[6]在研究辣椒果實(shí)著色中發(fā)現(xiàn)，CaSGR2和CaSGR- LIKE在果實(shí)發(fā)育的整個(gè)過(guò)程中不表達(dá)或低表達(dá)，葉綠素降解主要是由CaSGR1調(diào)控的；番茄果實(shí)中RNA沉默SISGR1或CRISPR/Cas9編輯SISGR1，會(huì)使成熟番茄果實(shí)呈現(xiàn)棕色，番茄紅素和β-胡蘿卜素含量增加，研究發(fā)現(xiàn)是SISGR1與SIPSY1相互作用，從而調(diào)控番茄果實(shí)番茄紅素的積累^[12-14]。

對(duì)于尚未建立穩(wěn)定的遺傳轉(zhuǎn)化體系的植物來(lái)說(shuō)，利用病毒誘導(dǎo)的基因沉默（virus-induced gene silencing，VIGS）方法驗(yàn)證基因功能，是較高效、便捷的手段^[15]。ZHOU等^[16]建立了高效的辣椒VIGS體系，在多個(gè)品種實(shí)現(xiàn)高達(dá)100%的沉默效率；ZHANG等^[17]通過(guò)構(gòu)建與辣椒花青素合成相關(guān)的TRV2-MYB載體，發(fā)現(xiàn)MYB轉(zhuǎn)錄因子抑制辣椒花青素的合成；利用VIGS沉默辣椒素合成的基因（Comt、pAmt、Kas），辣椒果實(shí)中辣椒素含量明顯降低^[18]；申龍斌等^[19]研究發(fā)現(xiàn)，在海南黃燈籠辣椒沉默凱氏帶膜蛋白CASP，沉默植株中基因的表達(dá)量顯著下降，可見(jiàn)VIGS技術(shù)在辣椒基因功能研究中具有廣闊的應(yīng)用前景。

本課題組前期在辣椒果實(shí)不同著色時(shí)期的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)SGR基因差異表達(dá)顯著，本研究從辣椒果實(shí)中克隆CaSGR基因，利用生物信息學(xué)軟件分析CaSGR基因亞細(xì)胞定位及進(jìn)化關(guān)系等，構(gòu)建VIGS載體，分析沉默植株的基因表達(dá)以及葉綠素、β-胡蘿卜素的含量，以期為研究CaSGR在辣椒果實(shí)著色中的調(diào)控作用提供基礎(chǔ)。

1 "材料與方法

1.1" 材料

提取RNA的實(shí)驗(yàn)材料來(lái)自于自主選育的辣椒高代自交系17SCa2m，種植于海南省儋州試驗(yàn)場(chǎng)五隊(duì)（19°33.66′N，109°31.63′E），采取成熟辣椒果實(shí)，去除胎座和種子，立即放入液氮中，?80"℃冰箱保存。

1.2" 方法

1.2.1" 辣椒果實(shí)RNA提取及cDNA合成 "根據(jù)天根多糖多酚RNA提取試劑盒（DP441）說(shuō)明書提取辣椒果實(shí)RNA，使用全式金反轉(zhuǎn)錄試劑盒（AE311）反轉(zhuǎn)錄cDNA，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA完整性，使用NanoDrop檢測(cè)RNA濃度。

1.2.2" 辣椒果實(shí)CaSGR基因克隆" 利用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)CaSGR-F和CaSGR-R的引物（表1），以上述得到的cDNA為模板，PCR擴(kuò)增目的片段。PCR反應(yīng)體系為：10×PCR Buffer 5 μL、2 mmol/L dNTPs 5 μL、25 mmol/L MgSO₄ 3 μL、引物1.5 μL、TOYOBO KOD-Plus-Neo酶1 μL、cDNA 2 μL、ddH₂O 32.5"μL。PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4"℃ 2 min；98"℃ 10 s，58"℃ 30 s，72"℃ 30 s，循環(huán)30次；72"℃ 10 min；4"℃保存。用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，將膠回收PCR產(chǎn)物、連接pEASY-T1 Cloning Kit載體和轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞DH5α，菌落PCR篩選陽(yáng)性克隆送至生工生物工程（（上海））股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。

1.2.3" SGR基因生物信息學(xué)分析" 通過(guò)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)的ORF finder（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/ orffinder/）工具找出基因的開放閱讀框ORF和翻譯出的蛋白序列；在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)Blastp并下載擬南芥和茄科作物的SGR蛋白序列，使用MEGA 7 軟件采用neighbour joining（NJ）系統(tǒng)發(fā)育方法分析進(jìn)化關(guān)系^[20]，并用ITOL（https：//itol.embl.de/）在線軟件美化；使用ProtParam（https：//web.expasy. org/protparam/）和Cell-PLoc 2.0（http：//www.csbio. sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/）^[21]在線軟件預(yù)測(cè)分子量、等電點(diǎn)和亞細(xì)胞定位；使用DNAMAN軟件對(duì)SGR蛋白序列進(jìn)行多重比對(duì)分析。

1.2.4" VIGS載體的構(gòu)建 "利用SGN VIGS（https：// vigs.solgenomics.net/）在線軟件設(shè)計(jì)CaSGR VIGS片段，根據(jù)片段設(shè)計(jì)引物（表1），用以上述1.2.2中的陽(yáng)性質(zhì)粒為模板PCR擴(kuò)增VIGS片段，經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證后，與酶切后的TRV2連接，轉(zhuǎn)化到DH5α感受態(tài)細(xì)胞，。經(jīng)雙酶切驗(yàn)證后，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到GV3101感受態(tài)細(xì)胞，PCR檢測(cè)成功的菌液用于VIGS注射實(shí)驗(yàn)。

1.2.5" 注射辣椒幼苗" 待辣椒幼苗生長(zhǎng)至3～4片真葉期，分別挑取TRV2-CaPDS、TRV2-CaSGR、TRV2和TRV1已轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101的單克隆，在含有卡那霉素的液體LB培養(yǎng)基中28"℃震蕩培養(yǎng)24"h，4000 r/min離心20 min，收集菌體。用添加乙酰丁香酮的MES緩沖液重懸浮2次，調(diào)整TRV1的OD₆₀₀為0.4，TRV2-CaPDS、TRV2-CaSGR和TRV2的OD₆₀₀為0.2，將TRV2-CaPDS、TRV2-CaSGR和TRV2和分別與TRV1等量混合，28"℃黑暗放置3～4 h。用2 mL的注射器將菌液注入到辣椒子葉和真葉中，于16"℃，16 h光照/8 h黑暗培養(yǎng)3"d。移到23"℃ 16"h光照，、20"℃ 8"h黑暗的環(huán)境下培養(yǎng)，直至出現(xiàn)白化表型和目標(biāo)表型。

1.2.6 "CaSGR基因表達(dá)分析" 注射120 d后，采取紅熟期的辣椒，去除果柄、胎座和種子，利用試劑盒提取辣椒果實(shí)RNA，通過(guò)Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)CaSGR基因的qRT-PCR特異性引物（表1）。qRT-PCR反應(yīng)體系（20"μL）為：SYBR 10"μL，cDNA模板1 μL，正反向引物各0.8 μL，ddH₂O 7.4 μL。qRT-PCR反應(yīng)程序：95"℃ 1"min；95"℃ 10"s，55"℃ 30"s，72"℃ 15"s，40個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣品3次重復(fù)，以actin作為內(nèi)參基因，采用2^–??Ct的方法分析目標(biāo)基因的表達(dá)情況，利用Excel軟件作圖，利用SPSS軟件作顯著性分析。

1.2.7" 葉綠素與β-胡蘿卜素的測(cè)定" 以未注射辣椒為對(duì)照（CK），對(duì)照植株和沉默植株在23"℃ 16"h光照，、20"℃ 8"h黑暗的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)約120"d左右，采取辣椒果實(shí)，取樣方法同1.2.6，采用分光光度法測(cè)定葉綠素的含量^[22]；β-胡蘿卜素的含量測(cè)定參照QIN等^[23]的方法。

2 "結(jié)果與分析

2.1 "辣椒CaSGR基因的克隆

利用特異引物CaSGR-F/R和高保真酶，以辣椒果實(shí)的cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，經(jīng)瓊脂糖電泳檢測(cè)，得到1條約800 bp的條帶（圖1）。測(cè)序后經(jīng)過(guò)NCBI的ORF finder工具分析發(fā)現(xiàn)，該基因的ORF為792 bp，編碼263個(gè)氨基酸。將該基因在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)Blast，發(fā)現(xiàn)與辣椒（EU196733.1、AM746208.2、NM_001324918.1）的SGR基因一致，將其命名為CaSGR。

2.2 "茄科作物SGR基因家族成員的性質(zhì)分析

利用克隆的基因核苷酸序列在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索分析，獲得茄科作物中的27個(gè)SGR基因，其中辣椒SGR基因3個(gè)，番茄SGR基因4個(gè)，馬鈴薯SGR基因8個(gè)，煙草SGR基因12個(gè)，另外在數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索到擬南芥SGR基因2個(gè)。辣椒CaSGR同源基因的序列長(zhǎng)度差異明顯，最短的為801"bp，最長(zhǎng)的為1281"bp。茄科作物之間的SGR蛋白質(zhì)序列長(zhǎng)度和分子量差異不明顯，說(shuō)明不同種屬間SGR基因相對(duì)保守。理論等電點(diǎn)均大于7，表明SGR均是堿性蛋白。亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)顯示，有5個(gè)SGR蛋白定位在葉綠體，12個(gè)同時(shí)定位在葉綠體、細(xì)胞核，4個(gè)同時(shí)定位在細(xì)胞膜、細(xì)胞核，7個(gè)定位在細(xì)胞核（表2）。

2.3" SGR蛋白序列的多序列比對(duì)和進(jìn)化關(guān)系分析

利用DANMAN軟件將克隆的CaSGR基因編碼的蛋白序列與辣椒、番茄的SGR蛋白序列進(jìn)行多序列比對(duì)，結(jié)果結(jié)果表明顯示，蛋白序列相似度為88.94%，與數(shù)據(jù)庫(kù)中辣椒SGR蛋白的序列相比，CaSGR在155～157處有3個(gè)氨基酸（VLK）缺失（圖2）。

利用MEGA 7軟件將CaSGR蛋白序列與擬南芥、茄科作物的SGR蛋白序列進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)，CaSGR蛋白與番茄、馬鈴薯的SGR蛋白進(jìn)化關(guān)系較近，與煙草和擬南芥的SGR蛋白進(jìn)化關(guān)系較遠(yuǎn)（圖3）。

2.4" CaSGR VIGS載體的構(gòu)建

使用帶有酶切位點(diǎn)的特異性引物擴(kuò)增CaSGR基因的病毒誘導(dǎo)基因沉默（VIGS）靶片段。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，條帶大小一致（圖4）。回收靶片段，同時(shí)雙酶切回收產(chǎn)物和TRV2載體，并將酶切后的片段與TRV2載體連接，轉(zhuǎn)化到DH5α感受態(tài)細(xì)胞中，對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定（圖5），并送公司測(cè)序，經(jīng)比對(duì)和靶片段一致，表明成功構(gòu)建CaSGR VIGS載體。

2.5" VIGS沉默植株獲得及基因表達(dá)分析

采用葉片注射法將TRV2-CaSGR與TRV1等比例混合，注射到辣椒葉片中，22"d左右葉片出現(xiàn)較為明顯的白化現(xiàn)象。注射120"d后觀察植株表型，注射TRV2-CaPDS的植株白化依然明顯，大部分葉片呈白化特征，辣椒果實(shí)也有變化，比對(duì)照和注射TRV2-CaSGR的顏色略淺（圖6）。

為檢測(cè)基因的沉默效率，取沉默植株的辣椒果實(shí)，利用qRT-PCR分析CaSGR基因的表達(dá)量。結(jié)果顯示（圖7），3組實(shí)驗(yàn)組辣椒果實(shí)中CaSGR基因的表達(dá)量顯著低于對(duì)照組，說(shuō)明成功沉默該基因。

2.6 "葉綠素與β-胡蘿卜素的測(cè)定

測(cè)定對(duì)照和3個(gè)沉默辣椒植株的果實(shí)葉綠素與β-胡蘿卜素含量，結(jié)果顯示（表3），3個(gè)沉默辣椒植株的果實(shí)葉綠素與β-胡蘿卜素含量顯著高于對(duì)照相，葉綠素含量分別是對(duì)照的2.35、4.92、2.07倍，β-胡蘿卜素含量分別是對(duì)照的2.60、3.21、3.22倍。

3" 討論

本研究通過(guò)克隆辣椒CaSGR基因，構(gòu)建VIGS載體，并測(cè)定沉默株系中與辣椒果實(shí)著色相關(guān)的葉綠素和β-胡蘿卜素含量，為深入研究該基因在辣椒果實(shí)著色過(guò)程中的作用提供有力支撐。

本研究成功獲得了長(zhǎng)度為792"bp、編碼263個(gè)氨基酸的基因片段，與數(shù)據(jù)庫(kù)中辣椒SGR蛋白序列相比，CaSGR在第155～157位置存在3個(gè)氨基酸缺失，這一差異并未對(duì)辣椒果實(shí)的葉綠素降解產(chǎn)生影響。但在他人研究中指出編碼區(qū)單堿基的突變可引起SGR基因功能的缺失^[6]，如LIU等^[9]在辣椒滯綠突變體中發(fā)現(xiàn)CaSGR1編碼區(qū)第342位核苷酸由G突變成A，導(dǎo)致第114位氨基酸轉(zhuǎn)化成終止密碼子，翻譯提前終止；EFRATI等^[24]研究葉綠素滯綠基因cl時(shí)發(fā)現(xiàn)，第340位核苷酸處堿基T突變成C，氨基酸由Trp變?yōu)锳rg；在番茄^[8]、豌豆^[25]等滯綠突變體中也均發(fā)現(xiàn)有堿基突變，從而導(dǎo)致氨基酸的改變。

CaSGR VIGS載體的成功構(gòu)建為研究該基因的功能提供了關(guān)鍵技術(shù)手段，。本研究通過(guò)葉片注射法實(shí)現(xiàn)了CaSGR基因的沉默，沉默植株葉片出現(xiàn)明顯白化現(xiàn)象，果實(shí)顏色也發(fā)生變化，同時(shí)基因表達(dá)量顯著降低，證明了CaSGR基因在辣椒果實(shí)著色過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。而沉默植株果實(shí)中葉綠素與β-胡蘿卜素含量的顯著增加，這與前人在研究SGR基因沉默后陽(yáng)性植株的表型不太一致。如楊亮等^[14]利用CRISPR/Cas9技術(shù)編輯番茄SlSGR1基因，陽(yáng)性植株的番茄果實(shí)葉綠素、β-胡蘿卜素和番茄紅素含量顯著提高；HU等^[12]干擾沉默番茄的SlSGR1，沉默植株葉片和果實(shí)的葉綠素降解變低；ZHOU等^[26]通過(guò)RNA干擾MsSGR獲得沉默紫花苜蓿株系，沉默株系中苜蓿仍呈現(xiàn)綠色。但與SAKURABA等^[11]研究擬南芥中的STAY- GREEN2（SGR2）基因功能是一致，該研究發(fā)現(xiàn)是一個(gè)負(fù)調(diào)控因子，在葉片衰老過(guò)程中抑制葉綠素降解，本研究中的CaSGR基因可能與擬南芥SGR2基因是同一類型，也有可能是3個(gè)氨基酸的缺失導(dǎo)致的沉默植株中葉綠素降解延緩。

本研究明確了CaSGR基因與辣椒果實(shí)葉綠素和β-胡蘿卜素含量的關(guān)聯(lián)，但具體的分子調(diào)控機(jī)制尚不清楚，有待進(jìn)一步探索。未來(lái)可利用酵母雙雜交、免疫共沉淀等技術(shù)篩選與CaSGR蛋白相互作用的蛋白，構(gòu)建其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。同時(shí)，還可以為分析該基因的啟動(dòng)子序列是否與葉綠素降解和類胡蘿卜素合成過(guò)程中結(jié)構(gòu)基因有相互作用奠定基礎(chǔ)。摸清CaSGR在辣椒果實(shí)著色過(guò)程中的調(diào)控作用，將有助于培育高類胡蘿卜素含量的辣椒新品種，提升辣椒的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和商品價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

1. 鄒學(xué)校， 胡博文， 熊程， 戴雄澤， 劉峰， 歐立軍， 楊博智， 劉周斌， 索歡， 徐昊， 朱凡， 遠(yuǎn)方. 中國(guó)辣椒育種60年回顧與展望[J]. 2022， 園藝學(xué)報(bào)， 2022， 49（10）： 2099-2118.ZOU X X， HU B W， XIONG C， DAI X Z， LIU F， OU L J， YANG B Z， LIU Z B， SUO H， XU H， ZHU F， YUAN F. Review and prospects of pepper breeding for the past 60 years in China[J]. Acta Horticulturae Sinica， 2022， 49（10）： 2099-2118. （in Chinese）
2. 鄒學(xué)校， 楊莎， 戴雄澤， 胡博文， 徐昊， 朱凡， 裴宋宇， 遠(yuǎn)方. 中國(guó)辣椒產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展40年回顧與展望[J]. 園藝學(xué)報(bào)， 2025， 52（1）： 247-258.ZOU X X， YANG S， DAI X Z， HU B W， XU H， ZHU F， PEI S Y， YUAN F. The rapid development of China’s chili pepper industry over the past 40 years[J]. Acta Horticulturae Sinica， 2025， 52（1）： 247-258. （in Chinese）
3. ZHANG K， YU H L， ZHANG L K， CAO Y C， LI X， MEI Y J， WANG X， ZHANG Z H， LI T Y， JIN Y， FAN W Y， GUAN C C， WANG Y H， ZHOU D Y， CHEN S M， WU H M， WANG L H， CHENG F. Transposon proliferation drives ge-n-ome architecture and regulatory evolution in wild and do-m-esticated peppers[J]. Nature Plants， 2025， 11（2）： 359-375.
4. 秦于玲， 申龍斌， 曹振木. 辣椒不同發(fā)育時(shí)期果實(shí)著色的轉(zhuǎn)錄組分析[J]. 分子植物育種， 2020， 18（17）： 5576-5583.QIN Y L， SHEN L B， CAO Z M. Transcriptome analysis of fruits coloration at different developmental stages in Capsicum annum [J]. Molecular Plant Breeding， 2020， 18（17）： 5576-5583. （in Chinese）
5. CHEN J Y， REN G D， KUAI B K. The mystery of mendel's stay-green： magnesium stays chelated in chlorophylls[J]. Molecular Plant， 2016， 9 （12）： 1556-1558.
6. 劉宇華.， 基于轉(zhuǎn)錄組學(xué)與靶向代謝組學(xué)解析辣椒果實(shí)顏色的形成[D]. 長(zhǎng)沙： 湖南大學(xué)， 2020.LIU Y H. Analysis of pepper fruit color formation mechanism based on transcriptomics and targeted metabolomics[D]. Changsha： Hunan University， 2020. （in Chinese）
7. REN G D， AN K， LIAO Y， ZHOU X， CAO Y J.， ZHAO H F， GE X C， KUAI B K. Identification of a novel chloroplast protein AtNYE1 regulating chlorophyll degradation during leaf senescence in Arabidopsis[J]. Plant Physiology， 2007， 144（3）： 1429-1441.
8. BARRY C S， MCQUINN R P， CHUNG M Y， BESUDEN A， GIOVANNONI J J. Amino acid substitutions in homologs of the STAY-GREEN protein are responsible for the green- flesh and chlorophyll retainer mutations of tomato and pepper[J]. Plant Physiology， 2008， 147： 179-187.
9. LIU Y H， OU L J， LIU Z B， LYU J H， WANG J， SONG J S， YANG B Z， CHEN W C， YANG S， LIU W， ZOU X X. A novel single-base mutation in CaSGR1 confers the stay- green phenotype in pepper[J]. Horticultural Plant Journal， 2023， 9 （2）： 293-305.
10. SATO T， SHIMODA Y， MATSUDA K， TANAKA A， ITO H. Mg-dechelation of chlorophyll a by stay-green activates chlorophyll b degradation through expressing non-yellow coloring 1 in Arabidopsis thaliana[J]. Journal of Plant Physiology， 2018， 222： 94-102.
11. SAKURABA Y， PARK S Y， KIM Y S， WANG S H， YOO S C， H?RTENSTEINER S， PAEK N C. Arabidopsis STAY- GREEN2 is a negative regulator of chlorophyll degradation during leaf senescence[J]. Molecular Plant， 2014， 7（8）： 1288- 1302.
12. HU Z L， DENG L， YAN B， PAN Y， LU M， CHEN X Q， HU T Z， CHEN G P. Silencing of the LeSGR1 gene in tomato inhibits chlorophyll degration and exhibits a stay-green phenotype[J]. Biologia Plantarum， 2011， 55（1）： 27-34.
13. LUO Z D， ZHANG J H， LI J H， YANG C X， WANG T T， OUYANG B， LI H X， GIOVANNONI J， YE Z B. A STAY- GREEN protein SISGR1 regulates lycopene and β-carotene accumulation by interacting directly with SIPSY1 during riping processes in tomato[J]. New Phytologist， 2013， 198（2）： 442-452.
14. 楊亮， 劉歡， 馬燕勤， 李菊， 王海娥， 周玉潔， 龍海成， 苗明軍， 李志， 常偉. 利用CRISPR/Cas9技術(shù)創(chuàng)制高番茄紅素番茄新材料[J]. 園藝學(xué)報(bào)， 2024， 51（2）： 253-265.YANG L， LIU H， MA Y Q， LI J， WANG H E， ZHOU Y J， LONG H C， MIAO M J， LI Z， CHANG W. Creating high lycopene fruit using CRISPR/Cas9 technology in tomato[J]. Acta Horticulturae Sinica， 2024， 51（2）： 253-265. （in Chinese）
15. 李杰， 羅江宏， 萬(wàn)子龍， 楊萍. VIGS技術(shù)在辣椒基因功能研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2021， 50（6）： 9-15.LI J， LUO J H， WAN Z L， YANG P. Application progress of VIGS technology in the research of pepper gene function[J]. Journal of Henan Agricultureal Sciences， 2021， 50（6）： 9-15. （in Chinese）
16. ZHOU Y Z， DENG Y T， LIU D， WANG H Z， ZHANG X， LIU T T， WANG J B， LI Y， OU L J， LIU F， ZOU X X， OUYANG B， LI F. Promoting virus-induced gene silencing of pepper genes by a heterologous viral silencing suppressor[J]. Plant Biotechnology Journal， 2021， 19（12）： 2398- 2400.
17. ZHANG Z， LI D W， JIN J H， YIN Y X， ZHANG H X， CHAI W G， GONG Z H. VIGS approach reveals the modulation of anthocyanin biosynthetic genes by CaMYB in chili pepper leaves[J]. Frontiers in Plant Science， 2015， 7（6）： 500.
18. ABRAHAM-JUáREZ M D R， ROCHA-GRANADOS M D C， LóPEZ M G， RIVERA-BUSTAMANTE R F， OCHOA- ALEJO N. Virus-induced silencing of Comt， pAmt and Kas genes results in a reduction of capsaicinoid accumulation in chili pepper fruits[J]. Planta， 2008， 227（3）： 681-695.
19. 申龍斌， 秦于玲， 劉子記， 曹振木. 黃燈籠辣椒CcCASP1基因的克隆與VIGS載體構(gòu)建[J]. 分子植物育種， 2022， 20（20）： 6742-6749.SHEN L B， QIN Y L， LIU Z J， CAO Z M. Molecular cloning and VIGS expression vector construction of CcCASP1 gene in Capsicum chinense[J]. Molecular Plant Breeding， 2022， 20（20）： 6742-6749. （in Chinese）
20. KUMAR S， STECHER G， TAMURA K. MEGA7： molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for bigger datasets[J]. Molecular Biology amp; Evolution， 2016， 33（7）： 1870-1874.
21. CHOU K C， SHEN H B. Cell-PLoc 2.0： an improved package of web-servers for predicting subcellular localization of proteins in various organisms[J]. Natural Science， 2010， 3（2）： 153-162.
22. ARNON D I. Copper enzymes in isolated chloroplasts polyphenoloxidase in beta vulgaris[J]. Plant Physiology， 1949， 24（1）： 1-15.
23. QIN Y L， DJABOU A S M， AN F F， LI K M， LI Z G， YANG L， WANG X J， CHEN S B. Proteomic analysis of injured storage roots in cassava （Manihot esculenta Crantz） under postharvest physiological deterioration[J]. PLoS One， 2017， 12（3）： e0174238.
24. EFRATI A， EYAL Y， PARAN I. Molecular mapping of the chlorophyll retainer （cl） mutation in pepper （Capsicum spp.） and screening for candidate genes using tomato ESTs homologous to structural genes of the chlorophyll catabolism pathway[J]. Genome， 2005， 48（2）： 347-351.
25. SATO Y， MORITA R， NISJIMURA M， YAMAGUCHI H， KUSABA M. Mendel’s green cotyledon gene encodes a positive regulator of chlorophyll-degrading pathway[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences， 2007， 104 （35）： 14169-14174.
26. ZHOU C， HAN L， PISLARIU C， NAKASHIMA J， FU C X， JIANG Q Z， QUAN L， BLANCAFLOR E B， TANG Y H， BOUTON J H， UDVARDI M， XIA G M， WANG Z Y. From model to crop： functional analisis of a STAY-GREEN gene in the model legume Medicago truncatula and effective use of the gene for alfalfa impronement[J]. Plant Physiology， 2011， 157（3）： 1483-1496.