摘要：目的 探究阿霉素（Adriamycin，ADM）調(diào)控MRP1/Nrf2通路誘導慢性髓細胞白血病（Chronic myeloid leukemia，CML）細胞自噬機制。方法 MTT法檢測ADM和自噬抑制劑氯喹（Chloroquine，CQ）對K562和K562/ADR細胞增殖抑制的影響；Gene Expression Omnibus（GEO）數(shù)據(jù)庫收集ADM敏感株K562和耐藥株K562/ADR的基因集各三組并進行mRNA表達水平分析和差異基因KEGG富集分析；流式細胞術(shù)檢測細胞內(nèi)ADM的平均熒光強度（Mean fluorescence intensity，MFI）；丹酰戊二胺法檢測胞質(zhì)酸化程度；Western blotting檢測耐藥和自噬相關(guān)蛋白的表達水平。結(jié)果 ADM對K562和K562/ADR細胞生長均表現(xiàn)為抑制且量效和時效遞增趨勢較為一致；GEO數(shù)據(jù)庫結(jié)果顯示K562和K562/ADR細胞含有較高的LC3-Ⅱ，P62，Nrf2和MRP1 mRNA表達水平；分子對接顯示ADM與P62，Nrf2和MRP1呈現(xiàn)較高的結(jié)合活性（結(jié)合能lt;-7.0 kcal·mol^-1）；ADM抑制MRP1和Nrf2的蛋白表達水平和促進LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值上升和抑制P62的表達；CQ拮抗自噬后，ADM對耐藥株K562/ADR細胞的抑制作用明顯增強，細胞內(nèi)MFI增強。結(jié)論 ADM抑制Nrf2和MRP1的表達并誘導細胞自噬，自噬抑制提高K562和K562/ADR細胞對ADM的敏感性，促進了ADM的攝取和減輕細胞耐藥性。

關(guān)鍵詞：阿霉素；慢性髓細胞白血病；MRP1；Nrf2；自噬；耐藥；攝取

中圖分類號：中圖分類號R733.72文獻標志碼：A文獻標識碼

DOI：10.13880/j.cnki.65-1174/n.2024.22.038

文章編號：1007-7383（2025）01-0029-08

Adriamycin induced autophagy in chronic myeloid leukemia cells via MRP1/Nrf2 pathway

CHEN" Peng1，MA" Yuxian1，CHANG" Xiao1，ZHOU" Zongyuan2，ZHANG" Bo^1，2*

（1 School of Pharmacy/Key Laboratory of Xinjiang Endemic Phytomedicine Resources， Shihezi University， Shihezi， Xinjiang 832000， China;

2" Ministry of Education School of Pharmacy Chengdu University/Sichuan Antimicrobial Industry Research Institute， Chengdu， Sichuan 610000， China）

Abstract：" Objective To investigate the mechanism of autophagy induction in chronic myeloid leukemia （CML） cells by Adriamycin （ADM） regulating MRP1/Nrf2 pathway. Methods MTT assay was used to detect the effects of ADM and autophagy inhibitor Chloroquine （CQ） on the inhibition of cell proliferation in K562 and K562/ADR cells; Gene Expression Omnibus （GEO） database was used to collect three sets of genes each of ADM-sensitive and ADM-resistant strains of K562 and K562/ADR cells， and the mRNA expression levels were analysed and differential gene KEGG-enriched genes were analysed. Three sets of gene sets of ADM sensitive strain K562 and resistant strain K562/ADR were collected from the GEO database and analysed for mRNA expression level and KEGG enrichment of differential genes; Mean fluorescence intensity （MFI） of ADM in cells was detected by flow cytometry; the degree of cytoplasmic acidification was detected by the MDC assay; and the expression level of drug-resistant and autophagy-related proteins was detected by Western blotting. Results ADM inhibited the growth of both K562 and K562/ADR cells with a consistent trend of increasing quantitative and temporal effects; GEO database showed that K562 and K562/ADR cells contained high levels of LC3-II， P62， Nrf2 and MRP1 mRNA; molecular docking showed high binding activity （binding energy lt; -7%） between ADM and P62， Nrf2 and MRP1; ADM inhibited the protein expression levels of MRP1 and Nrf2 and promoted the increase of LC3-II/LC3-Ⅰ ratio and inhibited the expression of P62; after CQ antagonism of autophagy， the inhibitory effect of ADM on K562/ADR cells was significantly strengthened， and intracellular MFI was enhanced. Conclusion ADM inhibited the expression of Nrf2 and MRP1 and induced cellular autophagy， and autophagy inhibition increased the sensitivity of K562 and K562/ADR cells to ADM， which promoted ADM uptake and attenuated cellular drug resistance.

Key words： Adriamycin;chronic myeloid leukaemia;MRP1;Nrf2;autophagy;drug resistance;uptake

0 引言

慢性髓細胞白血病（Chronic myeloid leukemia，CML）是一種由染色體異常而引發(fā)的造血功能異常、骨髓異常增生性血液系統(tǒng)疾病^［1］。根據(jù)全球疾病負擔研究數(shù)據(jù)統(tǒng)計，白血病患病率已排在第九位，我國CML占成人白血病病例的15％，年發(fā)病率為每百萬中3.6人^［2-3］。CML的化療治療周期較長，在使用藥物治療的過程中，部分患者會對伊馬替尼，尼羅替尼等酪氨酸酶抑制劑（首選一線治療藥物）產(chǎn)生耐藥性以及不良反應，這對后續(xù)藥物的選擇增添較大難度。近年來研究發(fā)現(xiàn)CML耐藥伴隨有自噬的產(chǎn)生^［4］，但因?qū)嶓w瘤細胞自噬對化療的抵抗作用與血液系統(tǒng)腫瘤細胞自噬對化療的增敏作用之間存在爭議，尚不明確CML上細胞自噬對耐藥性的影響。

Nrf2的過表達會導致不良預后和化療耐藥^［5］。有報道顯示CML和PI3K/Akt/Nrf2信號通路之間存在密切的聯(lián)系，即通過抑制PI3K/Akt/Nrf2途徑顯著降低細胞活力并抑制多藥耐藥相關(guān)蛋白1（MRP1）介導的細胞耐藥^［6］。因此，Nrf2被認為是一個潛在的治療靶點，在耐藥機制中起著重要的研究價值。臨床試驗發(fā)現(xiàn)通過化療藥物聯(lián)用自噬抑制劑羥基氯喹或氯喹以提高療效，其中報道P62等基因調(diào)控細胞生長、細胞微環(huán)境和細胞分化等生物過程，且在自噬誘導的腫瘤發(fā)生和耐藥中起重要作用^［7］。已有研究說明P62參與Nrf2通路和自噬通路，自噬的失調(diào)與P62依賴的Nrf2激活相關(guān)^［8］。

蒽環(huán)類化療藥代表藥物阿霉素（Adriamycin，ADM）對CML具有較好的療效，細胞毒性殺傷以誘導凋亡為主，且在一些細胞上發(fā)現(xiàn)其還能誘導自噬^［9］。K562/ADR 細胞的基礎(chǔ)自噬水平和耐藥蛋白MRP1表達較K562細胞高^［10］。因此，本文選擇CML代表株K562和K562/ADR細胞，探究化療藥物阿霉素調(diào)控MRP1/Nrf2通路誘導慢性髓細胞白血病自噬以及自噬水平對耐藥性的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑

RPMI 1640培養(yǎng)基（C3010-0500，上海達特希爾生物科技有限公司），青-鏈霉素混合液100×（P1400，北京索萊寶科技公司）。阿霉素（25316-40-9，MCE公司），氯喹（54-05-7，MCE公司），二甲基亞砜（D8370，北京索萊寶科技公司）。RAPI細胞高效裂解液（R0010，北京索萊寶科技公司），磷酸激酶抑制劑（PR20015，武漢三鷹生物技術(shù)有限公司），蛋白激酶抑制劑（P0100-01，北京索萊寶科技公司）。丹酰戊二胺（Monodansylcadaverine， MDC）自噬試劑盒（G0170，北京索萊寶科技公司）。Beta-actin抗體（1∶1 000，GB11001，武漢賽維爾生物科技有限公司），MRP1抗體（1∶5 000，67228-1，武漢三鷹生物技術(shù)有限公司），Nrf2抗體（1∶2 000，16396-1，武漢三鷹生物技術(shù)有限公司），p62抗體（1∶1 000，88588S，Cell Signaling Technology），LC3 Ⅰ/Ⅱ抗體（1∶1 000，12741T，Cell Signaling Technology）。HRP標記的山羊抗兔IgG（ZB-2301）和HRP標記的山羊抗小鼠（ZB-2305），均購自北京中山金橋生物技術(shù)公司。

1.2 儀器

CO2細胞培養(yǎng)箱（美國Thermo公司）；超低溫離心機（德國Eppendorf公司），多功能酶標儀（3001，美國Thermo公司），Q-5000（美國Quawell公司），蔡斯正置熒光顯微鏡（Axio Imager A2，德國Zeiss公司），化學發(fā)光凝膠成像儀（天能5200，中國天能公司）。

1.3 細胞培養(yǎng)

K562和K562/ADR細胞購于中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心。K562細胞使用含9%胎牛血清的RPMI培養(yǎng)基，K562/ADR使用含9%胎牛血清和1 μg·mL^-1 ADM的RPMI 1640培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中均含1%的青-鏈霉素混合液。K562和K562/ADR細胞在37℃、5% CO2飽合濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.4 GEO數(shù)據(jù)庫K562和K562/ADR的基因集和差異分析

以“K562”和“Drug resistance”作為檢索詞在GEO數(shù)據(jù)庫（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）中檢索，獲取數(shù)據(jù)集為GSE93942，篩取阿霉素敏感的K562細胞和耐藥的K562/ADR細胞的基因集^［11］。其中基因集GSM2465472，GSM2465473和GSM2465474為ADM敏感組，GSM2465466，GSM2465467和GSM2465468為ADM耐藥組。以校正后Plt;0.05且log2FC＞1為篩選條件得到差異基因并進行差異基因分析（http：//www.bioinformatics.com.cn/）。

1.5 分子對接

分子對接評估藥物和關(guān)鍵靶標結(jié)合活性。PubChem中檢索阿霉素結(jié)構(gòu)，并保存3D結(jié)構(gòu)（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）。蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫下載目標蛋白質(zhì)的晶體結(jié)構(gòu)（https：//www.rcsb.org/structure/）^［12］。AutodockTools（版本號：1.5.7）對所下載的蛋白與小分子進行對接，采取盲性對接的方式，設(shè)置對接次數(shù)為50次，根據(jù)對接的結(jié)果選擇結(jié)合位點最好的位置作為小分子與蛋白的結(jié)合能，再利用PyMOL軟件對所對接的結(jié)果進行可視化處理。

1.6 阿霉素對K562和K562/ADR細胞的增殖抑制作用

取對數(shù)生長期的K562和K562/ADR細胞進行實驗，按照每孔5×103個細胞接種于96孔板，K562細胞和K562/ADR細胞實驗組分別加入不同濃度（0、0.5、1、2、4、8、16 μmol·L^-1）的阿霉素，對照組不加藥，每組設(shè)4個復孔，按照培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)24 h和48 h，每孔加入5 g·L^-1的MTT或者CCK-8溶液10 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，MTT法使用2 400 r·min^-1離心5 min棄上清，加入DMSO 150 μL，振蕩10 min，酶標儀檢測570 nm或者450 nm處的吸光度（OD）值。按照細胞生長抑制率公式以及細胞耐藥指數(shù)公式計算細胞增殖抑制率和耐藥倍數(shù)。計算公式為：細胞活力（%）=1-（對照組OD值-實驗組OD值）/對照組OD值×100% ，耐藥系數(shù)=耐藥株IC50/敏感株IC50。

1.7 細胞內(nèi)ADM熒光的定量檢測

取對數(shù)生長的細胞按照每孔1×106個細胞接種于6孔板，按照實驗分組進行給藥。48 h后收集細胞于1.5 mL EP管中，PBS洗滌細胞，2 400 rpm離心3 min，棄上清。每管加入3 μmol·L^-1阿霉素重懸細胞，37℃孵育0.5 h，PBS洗滌細胞2次，流式細胞儀（Ex=488 nm，Em=580 nm）測定細胞內(nèi)ADM的熒光強度（MFI）。

1.8 MDC染色法分析細胞酸化水平

按照1.6的方法收集細胞，吸取90 μL細胞懸液加入10 μL MDC染液，37℃孵育0.5 h，PBS洗滌細胞1次，然后吸取20 μL細胞滴于載玻片上，蓋上蓋玻片，在正置熒光顯微鏡下觀察細胞酸化水平（Ex=512 nm）。

1.9 Western blotting 法檢測耐藥和自噬相關(guān)蛋白的表達

取對數(shù)生長的細胞按照每孔1×106個細胞接種于6孔板，按照實驗分組進行給藥并收集細胞。每管加入300 μL細胞裂解液（RAPI細胞高效裂解液：磷酸酶抑制劑：PMSF=100∶1∶1）提取蛋白質(zhì)，Q5000檢測蛋白質(zhì)濃度，補充電泳液和上樣緩沖液進行濃度調(diào)平，并水浴煮沸7 min。蛋白樣品經(jīng)9%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白，300 mA恒流電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉+TBST封閉1.5 h，TBST洗滌4次，按抗體稀釋比例進行一抗孵育過夜，TBST再洗滌4次，二抗室溫孵育1 h，TBST洗滌4次，用化學發(fā)光儀進行拍照并分析。

1.10 統(tǒng)計學分析

所有實驗重復3次，采用GraphPad Prism 8.0.2.263統(tǒng)計軟件分析，實驗結(jié)果以均值±標準差（±SD）表示，各組間比較采用2-way ANOVA分析檢驗。

2 結(jié)果

2.1 ADM對K562細胞及K562/ADR細胞的增殖抑制作用

ADM對K562和K562/ADR細胞的抑制率隨給藥濃度和作用時間呈現(xiàn)一定的時效和量效關(guān)系（圖1A，圖1B）。

給藥48 h后細胞形態(tài)變小，在K562細胞中24 h和48 h的IC50分別為4.721 μmol·L^-1和0.1284 μmol·L^-1。與K562相比，ADM對K562/ADR細胞的抑制作用較小，24 h和48 h的 IC50分別為12.03 μmol·L^-1和4.798 μmol·L^-1，24 h和48 h的耐藥系數(shù)分別達到2.548倍和37.37倍內(nèi)容詳見表1。

2.2 ADM抑制耐藥相關(guān)蛋白Nrf2和MRP1的表達

GEO數(shù)據(jù)庫中檢索得到對ADM敏感和耐藥的細胞株基因集GSE93942，其中ADM敏感株（K562細胞）和ADM耐藥株（K562/ADR細胞）共有496個差異基因，其中上調(diào)基因221個，下調(diào)基因275個（圖2A）。基因集中K562/ADR細胞株中MRP1和Nrf2的mRNA表達較K562高（圖2B）。通過檢測ADM對兩株細胞的耐藥蛋白的蛋白表達水平，發(fā)現(xiàn)ADM濃度與蛋白表達呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。其中，1 μmol·L^-1 ADM能很好的抑制K562細胞中MRP1和Nrf2的表達（圖2C）。而在K562/ADR細胞中，8 μmol·L^-1 ADM對MRP1和Nrf2顯著抑制（圖2D）。

2.3 ADM誘導K562和K562/ADR細胞自噬

K562和K562/ADR具有較高的基礎(chǔ)自噬水平。通過對GEO數(shù)據(jù)庫中基因集GSE93942進行差異基因KEGG富集分析，發(fā)現(xiàn)差異基因主要富集在腫瘤（MicroRNAs in cancer），自噬（Autophagy-other）等信號通路（圖3A）。進一步挖掘基因集中自噬相關(guān)基因的表達，發(fā)現(xiàn)K562細胞中MAP1LC3B（LC3-Ⅱ）的mRNA表達較高，但與K562/ADR細胞相比沒有顯著性（圖3B）。K562/ADR細胞中SQSTM1（P62）mRNA表達水平與K562細胞相比增加，且有顯著性（圖3B）。通過檢測ADM對K562和K562/ADR細胞中自噬相關(guān)蛋白P62和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表達，發(fā)現(xiàn)自噬相關(guān)蛋白P62表達被抑制，自噬關(guān)鍵蛋白LC3-Ⅰ表達明顯下降，低濃度ADM中LC3-Ⅱ的增加不明顯，1 μmol·L^-1 ADM增加K562細胞LC3-Ⅱ的表達水平，8 μmol·L^-1 ADM增加K562/ADR細胞LC3-Ⅱ的表達水平，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ整體比值隨ADM濃度遞增而增加（圖3C，圖3D）。

A：基因集GSE93942差異基因KEGG通路分析；B：基因集GSE93942中K562細胞和K562/ADR細胞自噬相關(guān)基因mRNA的表達；**Plt;0.01，K562/ADR細胞 vs. K562細胞 C：K562細胞中自噬相關(guān)蛋白的表達；D：K562/ADR細胞中自噬相關(guān)蛋白的表達；*Plt;0.05，**Plt;0.01，ADM組 vs. 對照組，（±SD，n=3）。圖3 ADM誘導K562和K562/ADR細胞自噬

2.4 ADM與MRP1/Nrf2/P62分子對接結(jié)果

為進一步驗證ADM對MRP1，Nrf2和P62的結(jié)合活性。本研究將ADM與MRP1（PBD ID：2cbz），Nrf2（PBD ID：7k2j）和P62（PBD ID：6 khz）進行結(jié)合能力預測，通過結(jié)合能來判斷活性成分與靶點的匹配度，一般結(jié)合能值lt;-7.0 kcal·mol^-1 則說明具有"" 強烈的結(jié)合活性。由表2和圖4可知，ADM與上述3種蛋白均呈現(xiàn)較好的結(jié)合活性。

2.5 自噬抑制對K562和K562/ADR細胞的ADM攝取影響

較高的自噬水平對ADM的攝取不利，為了確定自噬對ADM的攝取影響。本研究使用20 μmol·L^-1 CQ分別預處理K562細胞和K562/ADR細胞1 h，分別加入1 μmol·L^-1 ADM和8 μmol·L^-1 ADM處理48 h。

發(fā)現(xiàn)在K562細胞中，ADM+CQ組（C_A組）抑制率達到75.2%，是ADM單獨給藥的1.2倍，而在K562/ADR細胞中，C_A組組抑制率63.8%，是ADM單獨給藥的1.8倍（圖5A）。

與ADM相比，C_A組的抑制效果較好且具有顯著差異（Plt;0.01）?；贙562和K562/ADR細胞本身具有較高的自噬水平，MDC作為酸性探針指示了自噬溶酶體的位點，發(fā)現(xiàn)對照組有小部分細胞有明顯亮斑，而CQ組的MDC熒光強度較弱且均一，多數(shù)細胞內(nèi)無明顯亮斑，提示K562和K562/ADR細胞自噬水平被抑制（48 h）。與CQ組相比，C_A組的MDC熒光強度較弱，溶酶體的數(shù)量較低（圖 5B）。進一步檢測細胞內(nèi)ADM的含量，在K562細胞中，CQ組比空白組MFI低，C_A組MFI是空白組的1.2倍（Plt;0.01），比ADM單獨給藥組高，但是沒有顯著性。而在K562/ADR細胞中，CQ組比Control組MFI高（Plt;0.01），C_A組MFI是空白組的1.5倍（Plt;0.01），比ADR單獨給藥組高，但沒有顯著性（圖5C）。ADM在細胞核和細胞質(zhì)中較少，可能與細胞耐藥程度相關(guān)，當自噬被抑制后，細胞內(nèi)熒光強度增加，ADM在細胞內(nèi)積累增加。

3 討論

白血病化療藥物和骨髓移植為主，阿霉素（ADM）是治療白血病的傳統(tǒng)抗腫瘤藥物之一^［13］。目前已有多種癌癥治療方法被證明能誘導自噬，多數(shù)觀點支持自噬的產(chǎn)生促進腫瘤細胞存活并導致耐藥性的假說，但對于自噬抑制是否有益于臨床化療仍存在爭議^［4］。本文中ADM對CML細胞也有較好的抑制增殖作用，且K562/ADR對ADM的敏感性低于K562細胞。已有研究報道ADM可抑制K562和K562/ADM細胞增殖同時誘導自噬（12 h和24 h）^［14］?；贕EO數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果顯示，K562和K562/ADR細胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ的mRNA表達水平較高，兩者表現(xiàn)為較高的基礎(chǔ)自噬水平。同時也發(fā)現(xiàn)0.25和0.5 μmol·L^-1 ADM可以使K562細胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值增加，2和4 μmol·L^-1 ADM也可以使K562/ADR細胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值增加（48 h）。但是LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值增加是以LC3-Ⅰ的減少而體現(xiàn)的。1 μmol·L^-1 ADM增加K562細胞和8 μmol·L^-1 ADM增加K562/ADR細胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值增加是以LC3-Ⅱ的積累實現(xiàn)的。此外，本文MDC結(jié)果也顯示，未經(jīng)藥物處理的細胞具有亮斑，顯示出較高的自噬水平。有報道稱LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值增加不足以說明誘導自噬，使用LC3-Ⅱ/β-actin上調(diào)更為妥當^［15］。因此較高濃度的ADM誘導K562和K562/ADR細胞自噬是必要條件。

多藥耐藥性是導致癌癥化療失敗的主要因素之一，能量依賴性藥物外排泵的過度表達是多藥耐藥性的主要原因之一。多藥耐藥相關(guān)蛋白1（MRP1）是三磷酸腺苷（ATP）結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白超家族的成員，它可以結(jié)合并水解ATP，并以谷胱甘肽（GSH）結(jié)合物的形式流出多種抗癌藥物（如阿霉素和甲氨蝶呤），而MRP1受Nrf2/ARE途徑調(diào)控^［6］。另有研究發(fā)現(xiàn)K562/ADR細胞較K562細胞自噬基礎(chǔ)水平和耐藥蛋白MRP1表達高，3-甲基腺嘌呤抑制自噬后MRP1的表達降低^［10］。本文發(fā)現(xiàn)K562/ADR比K562株含有更高的Nrf2和MRP1 mRNA表達水平，1 μmol·L^-1 ADM和8 μmol·L^-1 ADM可以顯著抑制K562和K562/ADR細胞MRP1和Nrf2的表達，并呈現(xiàn)較高的親和活性。P62對連接自噬和耐藥起著重要作用，本文發(fā)現(xiàn)ADM能夠顯著降低P62的表達水平。

自噬在腫瘤發(fā)生過程中的調(diào)節(jié)是雙面的，一方面實體瘤在血管新生完成前因細胞缺少能量可以“犧牲”部分自噬細胞來間接提供有限的能量供給周圍細胞生存^［16］。另一方面，血液系統(tǒng)腫瘤并不存在著上述營養(yǎng)缺乏的必要條件與病理生理意義，這提示白血病細胞的自噬可能有其它生物學意義。研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)伊馬替尼治療后激活的細胞發(fā)生自噬，可能是其產(chǎn)生耐藥性的原因^［17］。在慢性髓細胞白血病體系中，發(fā)現(xiàn)抑制自噬可以促進K562耐藥細胞和原代CML干細胞的死亡^［18］。本文也發(fā)現(xiàn)在K562/ADR細胞中，ADM的IC50較K562細胞高，可能源于K562/ADR較高的基礎(chǔ)自噬水平和細胞的固有耐藥性。研究也顯示抑制Hedgehog途徑可以誘導自噬，與單獨的Hedgehog抑制劑和自噬抑制劑相比，兩者聯(lián)合增加CML細胞死亡并顯著誘導凋亡^［19］。雖然本文觀察的自噬現(xiàn)象不顯著，結(jié)合GEO數(shù)據(jù)庫K562和K562/ADR細胞內(nèi)P62的mRNA的高表達，以及ADM對P62的抑制作用，說明1 μmol·L^-1 ADM和8 μmol·L^-1 ADM還是會分別誘導K562和K562/ADR細胞自噬。因此，本文使用氯喹（CQ）抑制細胞自噬，再聯(lián)合ADM給藥發(fā)現(xiàn)K562/ADR和K562細胞的增殖被明顯抑制，且細胞內(nèi)ADM的MFI值增加。這說明自噬抑制可增加K562/ADR和K562細胞對ADM的敏感程度，從而增加了對ADM的攝取。提示自噬可能與耐藥的產(chǎn)生相關(guān)，自噬抑制劑能夠增加細胞內(nèi)ADM的積累。

本文研究了阿霉素通過MRP1/Nrf2通路誘導慢性髓細胞白血病細胞自噬以及自噬在耐藥中的作用。1 μmol·L^-1 ADM和8 μmol·L^-1 阿霉素顯著抑制K562和K562/ADR細胞MRP1/Nrf2/P62的表達并誘導細胞自噬，抑制自噬后，增加K562/ADR細胞對阿霉素的攝取和降低細胞耐藥性，從實驗角度解釋了MRP1/Nrf2通路與慢性髓細胞白血病耐藥相關(guān)性和與自噬抑制劑聯(lián)用對抗慢性髓細胞白血病耐藥的治療方法。

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（責任編輯：編輯唐慧）

基金項目：國家自然科學基金項目（U1603122）；四川省天府峨眉創(chuàng)新領(lǐng)軍人才項目（1811）

作者簡介：陳鵬（1996—），女，碩士研究生，專業(yè)方向為腫瘤藥理學。

*通信作者：中文通信作者張波（1978—），男，教授，博士生導師，從事系統(tǒng)藥理學與中藥藥理學研究，e-mail：bozhang_lzu@126.com。