摘要：以猴耳環(huán)（Pithecellobium clypearia（Jack） Benth.）莖葉為試材，采用超聲波輔助提取法提取總黃酮和沒(méi)食子酸，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，用響應(yīng)面法對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，猴耳環(huán)總黃酮提取工藝中各因素影響大小順序?yàn)榱弦罕萭t;超聲功率gt;超聲時(shí)間gt;乙醇濃度，猴耳環(huán)總黃酮最佳提取工藝為料液比1∶90，乙醇濃度75%，超聲功率170 W，超聲時(shí)間40 min，此條件下總黃酮得率為2.29%（理論值2.37%）；沒(méi)食子酸提取工藝中各因素影響大小順序?yàn)橐掖紳舛萭t;料液比gt;超聲時(shí)間，沒(méi)食子酸最佳提取工藝為料液比1∶70，乙醇濃度65%，超聲時(shí)間60 min，此條件下沒(méi)食子酸提取率為5.98%（理論值6.04%）。本研究構(gòu)建的模型擬合效果好，試驗(yàn)值與擬合值高度相關(guān)，對(duì)猴耳環(huán)中總黃酮和沒(méi)食子酸提取具有較強(qiáng)的指導(dǎo)性，可為其后續(xù)研究提供科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：猴耳環(huán)（Pithecellobium clypearia（Jack） Benth.）；總黃酮；沒(méi)食子酸；超聲波輔助法；響應(yīng)面優(yōu)化

中圖分類號(hào)：R284.2" " " " "文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2025）01-0109-10

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2025.01.020 開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Optimization of ultrasonic assisted extraction of total flavonoids and gallic acid from Pithecellobium clypearia （Jack） Benth. by response surface methodology

XIAO Ni-jie1，DENG Li-li1，CHEN Shuo2，SHI Yan-cai1

（1.Guangxi Institute of Botany， Chinese Academy of Sciences， Guilin" 541006，Guangxi，China； 2.Guangxi Normal University， Guilin" 541006， Guangxi， China）

Abstract：Taking the stems and leaves of Pithecellobium clypearia（Jack） Benth. as experiment materials， the total flavonoids and gallic acid were extracted by ultrasonic assisted extraction method. On the basis of single factor experiment， the extraction process was optimized by response surface methodology. The results showed that the order of influence of different factors on extraction of total flavonoids from Pithecellobium clypearia（Jack） Benth. was ratio of material and liquid gt; ultrasonic power gt; ultrasound time gt; ethanol concentration. The optimal extraction condition was ratio of material and liquid 1∶90， ethanol concentration 75%， ultrasonic power 170 W and ultrasound time 40 min. Under this condition， the yield of total flavonoids was 2.29% （theoretical value 2.37%）. The order of influencing factors on gallic acid extraction was ethanol concentration gt; ratio of material and liquid gt; ultrasound time. The optimal extraction condition was ratio of material and liquid 1∶70， ethanol concentration 65% and ultrasonic time 60 min. Under this condition， the extraction rate of gallic acid was 5.98% （theoretical value 6.04%）. The model established in this study had a good fitting effect， and the experimental values were highly correlated with the fitting values， which had strong guidance for the extraction of total flavonoids and gallic acid from Pithecellobium clypearia （Jack） Benth.， and could provide a scientific basis for the subsequent research.

Key words：Pithecellobium clypearia （Jack） Benth.；total flavonoids；gallic acid；ultrasonic assisted method；response surface optimization

猴耳環(huán)（Pithecellobium clypearia （Jack） Benth.）為豆科猴耳環(huán)屬喬木植物，別名圍涎樹(shù)、蛟龍木、洗頭木、落地金錢、三不正等，主要分布于中國(guó)的東南部和西南部。猴耳環(huán)以嫩枝葉入藥，味微苦澀，性微寒，具有清熱解毒、涼血消腫、止瀉的功效［1-4］，民間外用于燒傷、燙傷、瘡癰癤腫的治療［5］，臨床上常用于治療上呼吸道感染、急性咽喉炎、急性扁桃體炎、急性胃腸炎等癥［6-8］。目前，關(guān)于猴耳環(huán)的研究主要集中在植物資源來(lái)源［9］、化學(xué)成分［10，11］、藥理作用［12］、生理特性［13］等方面。據(jù)報(bào)道，猴耳環(huán)中含有三萜類、黃酮類、酚酸類等諸多化學(xué)成分，總黃酮和沒(méi)食子酸是其主要活性成分［14，15］，具有抗炎、抗真菌、抗病毒、抗腫瘤、抗胃潰瘍等功效，在猴耳環(huán)發(fā)揮藥效過(guò)程中起著重要的作用［12，16］。然而有關(guān)猴耳環(huán)總黃酮和沒(méi)食子酸這兩類化學(xué)成分提取工藝方面的研究還未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究先采用單因素試驗(yàn)對(duì)猴耳環(huán)總黃酮和沒(méi)食子酸超聲波輔助提取工藝進(jìn)行探索，再通過(guò)響應(yīng)面法對(duì)提取工藝進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化組合，以期為猴耳環(huán)資源的有效開(kāi)發(fā)和利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

材料：供試的猴耳環(huán)材料于2020年7月采自廣西植物研究所標(biāo)本園。取猴耳環(huán)成年植株的莖和葉，剪碎后放入電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中55 ℃烘干，然后用微型粉碎機(jī)粉碎，過(guò)60目篩，裝于封口袋中備用。

試劑：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品（上海源葉生物科技有限公司）；乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、乙酸乙酯（四川西隴科學(xué)有限公司）均為分析純?cè)噭?/p>

儀器：TU-1901型雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；MJN-681C型電子分析天平（瑞金市甬衡電子衡器有限公司）；DL-720E型智能超聲波清洗器（上海五相儀器儀表有限公司）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）；B-260型恒溫水浴鍋、RE-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 猴耳環(huán)總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，50%乙醇溶解并定容至50 mL，制得濃度為0.2 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取0.2 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1、2、3、4、5、6 mL置于25 mL容量瓶中，加50%乙醇至6 mL，加5%的亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，再加入1 mL的10%硝酸鋁溶液，搖勻，放置6 min，加4%氫氧化鈉試液10 mL，50%乙醇定容，搖勻，放置15 min。以50%乙醇為空白對(duì)照，選用510 nm波長(zhǎng)作為檢驗(yàn)波長(zhǎng)測(cè)定吸光度。以蘆丁質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)（x），以相應(yīng)吸光度為縱坐標(biāo)（y），得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程y=12.596x-0.017（R2=0.999 1）。

1.2.2 總黃酮提取工藝 稱取樣品0.5 g，按料液比1∶46加50%乙醇23 mL，60 ℃恒溫水浴提取30 min，超聲波頻率為高頻（61 kHz），超聲波功率為250 W。過(guò)濾，50%乙醇定容至50 mL，即得供試品溶液。按照“1.2.1”項(xiàng)方法測(cè)定吸光度并計(jì)算總黃酮濃度，再根據(jù)以下方程計(jì)算總黃酮得率：總黃酮得率=（C×V）/M×100%，其中，C為測(cè)得總黃酮濃度（mg/mL），V為提取液體積（mL），M為猴耳環(huán)樣品質(zhì)量（g）。

1.2.3 提取總黃酮單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1）料液比對(duì)猴耳環(huán)總黃酮提取率的影響。精密稱取猴耳環(huán)樣品0.5 g，分別按照料液比1∶30、1∶60、1∶90、1∶120、1∶150的比例加入50%的乙醇溶液，60 ℃恒溫水浴提取30 min，超聲功率為250 W，超聲頻率為高頻（61 kHz），后續(xù)操作同“1.2.2”。

2）乙醇濃度對(duì)猴耳環(huán)總黃酮提取率的影響。精密稱取猴耳環(huán)樣品0.5 g，按料液比1∶90（此料液比為上一步試驗(yàn)所得最佳料液比），分別加入30%、45%、60%、75%、90%乙醇45 mL，60 ℃水浴中提取30 min，超聲功率為250 W，超聲頻率為高頻（61 kHz），后續(xù)操作同“1.2.2”。

3）超聲功率對(duì)猴耳環(huán)總黃酮提取率的影響。精密稱取猴耳環(huán)樣品0.5 g，按料液比1∶90（此料液比為第一步試驗(yàn)所得最佳料液比）加入75%乙醇45 mL（此為第二步所得最佳乙醇濃度），60 ℃水浴提取" 30 min，超聲功率分別為50、100、150、200、250 W，超聲頻率為高頻（61 kHz），后續(xù)操作同“1.2.2”。

4）超聲時(shí)間對(duì)猴耳環(huán)總黃酮提取率的影響。精密稱取猴耳環(huán)樣品0.5 g，按料液比1∶90（此料液比為第一步試驗(yàn)所得最佳料液比）加入75%乙醇45 mL（此為第二步所得最佳乙醇濃度），60 ℃水浴分別提取20、40、60、80、100 min，超聲功率為150 W（此為第三步所得最佳超聲功率），超聲頻率為高頻（61 kHz），后續(xù)操作同“1.2.2”。

5）提取溫度對(duì)猴耳環(huán)總黃酮提取率的影響。精密稱取猴耳環(huán)樣品0.5 g，按料液比1∶90（此料液比為第一步試驗(yàn)所得最佳料液比）加入75%乙醇45 mL（此為第二步所得最佳乙醇濃度），分別在40、50、60、70、80 ℃水浴提取40 min（此為第四步所得最佳超聲時(shí)間），超聲功率為150 W（此為第三步所得最佳超聲功率），超聲頻率為高頻（61 kHz），后續(xù)操作同“1.2.2”。

1.2.4 總黃酮響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì) 結(jié)合猴耳環(huán)總黃酮的單因素試驗(yàn)結(jié)果，選取料液比（A）、乙醇濃度（B）、超聲功率（C）及超聲時(shí)間（D）作為因素，進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)試驗(yàn)，因素及水平見(jiàn)表1。

1.2.5 猴耳環(huán)沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精確稱取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，溶于50%乙醇并定容至" "50 mL，制得0.2 mg/mL沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別吸取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL上述標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，50%乙醇定容。270 nm處測(cè)定吸光度，以質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)（x），吸光度為縱坐標(biāo)（y），得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=68.682x+0.036 2（R2=0.999 6）。

1.2.6 沒(méi)食子酸提取工藝 稱取猴耳環(huán)樣品0.5 g，按1∶50料液比加50%乙醇，60 ℃超聲60 min，過(guò)濾，蒸干濾液，去離子水溶解并定容至100 mL。吸取 10 mL上述溶液，用飽和碳酸鈉調(diào)pH至9，乙酸乙酯萃取2次，取水相并定容至50 mL，吸取3 mL上述溶液定容至25 mL，即為供試品溶液。按“1.2.5”項(xiàng)方法測(cè)定吸光度并計(jì)算沒(méi)食子酸濃度，根據(jù)以下方程計(jì)算沒(méi)食子酸得率：沒(méi)食子酸得率=（C×V）/M×100%，C為測(cè)得沒(méi)食子酸濃度（mg/mL），V為提取液體積（mL），M為猴耳環(huán)樣品質(zhì)量（g）。

1.2.7 提取沒(méi)食子酸單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1）料液比對(duì)猴耳環(huán)沒(méi)食子酸含量的影響。稱取猴耳環(huán)樣品0.5 g，分別按1∶10、1∶30、1∶50、1∶70、" " 1∶90料液比加50%乙醇，60 ℃加熱，超聲（功率和頻率分別為250 W和61 kHz）提取60 min，后續(xù)操作同“1.2.6”。

2）乙醇濃度對(duì)猴耳環(huán)沒(méi)食子酸含量的影響。稱取猴耳環(huán)樣品0.5 g，按料液比1∶50分別加入10%、30%、50%、70%、90%的乙醇，60 ℃加熱，超聲（功率和頻率分別為250 W和61 kHz）提取60 min，后續(xù)操作同“1.2.6”。

3）超聲時(shí)間對(duì)猴耳環(huán)沒(méi)食子酸含量的影響。稱取猴耳環(huán)樣品0.5 g，按料液比1∶50加50%乙醇，60 ℃加熱，超聲（功率和頻率分別為250 W和61 kHz）分別提取30、60、90、120、150 min，后續(xù)操作同“1.2.6”。

4）提取溫度對(duì)猴耳環(huán)沒(méi)食子酸含量的影響。稱取猴耳環(huán)樣品0.5 g，按料液比1∶50加50%乙醇，分別于30、45、60、75、90 ℃加熱，超聲（功率和頻率分別為250 W和61 kHz）提取60 min，后續(xù)操作同“1.2.6”。

1.2.8 沒(méi)食子酸響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì) 結(jié)合單因素試驗(yàn)結(jié)果，采用Box-Behnken設(shè)計(jì)，選取料液比（A）、乙醇濃度（B）、超聲時(shí)間（C）為響應(yīng)因子，以沒(méi)食子酸含量為響應(yīng)值，進(jìn)行三因素三水平響應(yīng)面試驗(yàn)，具體見(jiàn)表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 猴耳環(huán)總黃酮提取單因素試驗(yàn)結(jié)果

由圖1a可知，當(dāng)料液比為1∶30至1∶90時(shí)，總黃酮得率呈上升趨勢(shì)，料液比為1∶90時(shí)總黃酮得率達(dá)到最大值（2.46%）。繼續(xù)提高溶劑體積，總黃酮得率略有降低?？赡苁且?yàn)榱弦罕仍?∶90時(shí)沒(méi)食子酸已被完全浸提出來(lái)，再增大溶劑體積提取率也難以有明顯升高。理想的料液比是既能充分地提取出總黃酮，還可保持最低的生產(chǎn)成本。綜合考量，料液比以1∶90為宜。

由圖1b可知，在乙醇濃度為30%～75%范圍內(nèi)，猴耳環(huán)總黃酮得率呈上升趨勢(shì)。乙醇濃度為75%時(shí)，總黃酮得率達(dá)到最大值（2.55%）。繼續(xù)提高乙醇濃度則總黃酮得率逐漸降低。這可能是由于在乙醇濃度為60%～75%的條件下猴耳環(huán)總黃酮溶出量最高，再增加乙醇濃度，則加快猴耳環(huán)中其他物質(zhì)的溶出量［17］。因此，以75%為乙醇最佳提取濃度。

由圖1c可知，當(dāng)超聲功率為50～150 W時(shí)，猴耳環(huán)中總黃酮提取率呈上升趨勢(shì)。當(dāng)功率為150 W時(shí)，總黃酮得率達(dá)最大值（2.98%）。超聲功率繼續(xù)增大后總黃酮得率逐漸下降。這是因?yàn)檫m當(dāng)?shù)某暡ㄝo助提取可促進(jìn)總黃酮溶出，但超聲功率過(guò)高時(shí)則會(huì)導(dǎo)致其他物質(zhì)更先溶出。因此，超聲功率以150 W為佳。

由圖1d可知，當(dāng)超聲時(shí)間在20～80 min時(shí)，猴耳環(huán)總黃酮得率呈先升后降趨勢(shì)，在超聲時(shí)間為40 min時(shí)總黃酮得率達(dá)到最大值（2.82%）?？赡苁嵌虝r(shí)超聲能促進(jìn)總黃酮的溶出，當(dāng)超聲時(shí)間為40 min時(shí)，猴耳環(huán)中總黃酮已基本溶出?？紤]實(shí)際情況，超聲時(shí)間以40 min最佳。

由圖1e可知，隨著溫度的升高（40～80 ℃），猴耳環(huán)總黃酮提取率呈上升趨勢(shì)。可能是升高提取溫度會(huì)導(dǎo)致樣品中分子活性增強(qiáng)，總黃酮溶滲透速率加快，從而提取率不斷增加。同時(shí)，生產(chǎn)中提取溫度過(guò)高也會(huì)導(dǎo)致溶劑快速揮發(fā)，增加能耗和成本。綜合考慮，浸提溫度以60 ℃為宜。

2.2 響應(yīng)面優(yōu)化總黃酮提取工藝結(jié)果

2.2.1 總黃酮提取響應(yīng)面設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果 基于單因素試驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)行了4因素3水平響應(yīng)面試驗(yàn)（29個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)，5個(gè)零點(diǎn)），各試驗(yàn)點(diǎn)的總黃酮得率如表3所示。

2.2.2 總黃酮回歸模型及顯著性分析 采用Design-Expert 10.0.7軟件擬出的猴耳環(huán)總黃酮提取物回歸方程為Y=2.39+0.023A-0.003 592B-0.008 767C-0.003 833D - 0.007 318AB + 0.067AC - 0.003 515AD +0.007 890BC + 0.012BD + 0.036CD - 0.17A2 - 0.20B2-0.093C2-0.18D2。響應(yīng)模型的顯著性分析結(jié)果如表4所示，回歸模型極顯著（Plt;0.01），失擬項(xiàng)不顯著（Pgt;0.05），矯正系數(shù)R2adj=0.933 9，相關(guān)系數(shù)R2=0.967 0，表明模型擬合效果較好，試驗(yàn)值與擬合值高度相關(guān)，該模型可用于猴耳環(huán)總黃酮得率的預(yù)測(cè)和分析。一次項(xiàng)A和交互項(xiàng)AC具有顯著性，二次項(xiàng)A2、B2、C2、D2具有極顯著性。影響因素對(duì)總黃酮得率影響大小順序?yàn)锳（料液比）gt;C（超聲功率）gt;D（超聲時(shí)間）gt;B（乙醇濃度）。

2.2.3 響應(yīng)面交互因素分析 響應(yīng)因素間的交互作用如圖2至圖7所示。響應(yīng)曲面圖坡度代表交互因素對(duì)總黃酮得率影響大小，坡度越陡表明交互作用影響越大。等高線橢圓程度代表各因素交互作用影響程度，如等高線為橢圓形則表明兩者交互作用顯著［18，19］。AC、BC和CD交互項(xiàng)間的等高線都為橢圓形，說(shuō)明這些因素的交互作用具有顯著性，AB、AD和BD交互項(xiàng)間的等高線為近圓形，說(shuō)明其交互作用不顯著。

2.2.4 總黃酮優(yōu)化工藝驗(yàn)證結(jié)果 根據(jù)總黃酮提取模型得到猴耳環(huán)總黃酮最佳提取工藝為料液比1∶90.5，乙醇濃度75.3%，超聲功率172.1 W，超聲時(shí)間42.5 min，總黃酮得率為2.37%。根據(jù)實(shí)際情況將工藝條件調(diào)整為料液比1∶90，乙醇濃度75%，超聲功率170 W，超聲時(shí)間40 min，在該條件下進(jìn)行5次驗(yàn)證試驗(yàn)，得總黃酮得率為2.29%?？梢?jiàn)，響應(yīng)面擬合模型預(yù)測(cè)結(jié)果與實(shí)際結(jié)果接近。

2.3 猴耳環(huán)沒(méi)食子酸提取單因素試驗(yàn)結(jié)果

由圖8a可知，料液比為1∶10至1∶90時(shí)，猴耳環(huán)沒(méi)食子酸提取率呈先升后降的趨勢(shì)，在料液比為" " "1∶70時(shí)沒(méi)食子酸得率達(dá)最大值（5.06%）。這可能是因?yàn)殡S著提取溶劑的增加，猴耳環(huán)粉末與溶劑的接觸面不斷增大，造成提取量不斷升高。當(dāng)料液比為1∶70時(shí)沒(méi)食子酸幾乎全部溶出，故隨后呈遞減趨勢(shì)。

由圖8b可知，猴耳環(huán)沒(méi)食子酸提取率隨乙醇濃度（10%～90%）升高呈先增后減的趨勢(shì)，當(dāng)乙醇濃度為70%時(shí)，猴耳環(huán)沒(méi)食子酸提取率達(dá)最大值（5.21%）。這可能是由于隨著乙醇濃度升高，提取液濃度增大，極性過(guò)強(qiáng)導(dǎo)致沒(méi)食子酸不易從猴耳環(huán)中分離出。

由圖8c可知，隨著超聲時(shí)間（30～60 min）增加，猴耳環(huán)中沒(méi)食子酸提取率呈上升趨勢(shì)，繼續(xù)延長(zhǎng)超聲時(shí)間，沒(méi)食子酸提取率降低。這可能是由于長(zhǎng)時(shí)間超聲提取過(guò)程中形成的超聲波熱效應(yīng)和空化效應(yīng)破壞了沒(méi)食子酸結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，從而導(dǎo)致得率降低［20］。此外，長(zhǎng)時(shí)間的超聲提取也會(huì)導(dǎo)致其他雜質(zhì)大量滲出，導(dǎo)致沒(méi)食子酸測(cè)定受到干擾。綜合可行性和經(jīng)濟(jì)性考慮，超聲時(shí)間以60 min為佳。

由圖8d可知，提取溫度為30～75 ℃時(shí)，沒(méi)食子酸提取率呈遞增趨勢(shì)，在75 ℃時(shí)沒(méi)食子酸得率達(dá)最高（5.24%），繼續(xù)升高溫度，沒(méi)食子酸得率略有降低。這可能是由于到一定溫度時(shí)，猴耳環(huán)結(jié)構(gòu)被破壞，沒(méi)食子酸被提取出來(lái)。沒(méi)食子酸相對(duì)較耐高溫［21］，升高溫度對(duì)其含量無(wú)大的影響。

2.4 響應(yīng)面優(yōu)化猴耳環(huán)沒(méi)食子酸提取工藝結(jié)果

2.4.1 沒(méi)食子酸提取響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果 基于上述單因素試驗(yàn)結(jié)果，選料液比、乙醇濃度、超聲時(shí)間為自變量，猴耳環(huán)沒(méi)食子酸得率為響應(yīng)值，通過(guò)Box-Benhnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化沒(méi)食子酸提取工藝，各試驗(yàn)點(diǎn)的沒(méi)食子酸得率如表5所示。

2.4.2 沒(méi)食子酸回歸模型及顯著性分析結(jié)果 采用Design-Expert 10.0.7軟件擬合得到猴耳環(huán)沒(méi)食子酸提取回歸方程為Y=6.00+0.055A-0.44B+0.002 526C+0.029AB + 0.023AC - 0.090BC - 0.57A2 - 1.03B2-0.53C2。響應(yīng)模型顯著性分析結(jié)果如表6所示。模型具極顯著性（Plt;0.01），表明模型具有意義；失擬項(xiàng)不顯著（Pgt;0.05），表明模型理論值與試驗(yàn)值差異較?。籖2adj=0.971 8，表明模型可解釋97.18%的響應(yīng)值的變化；相關(guān)系數(shù)R2=0.987 7，表明模型擬合結(jié)果較好，可用于預(yù)測(cè)和分析。一次項(xiàng)B和二次項(xiàng)A2、B2、C2均達(dá)極顯著水平，各因素對(duì)沒(méi)食子酸得率的影響大小順序?yàn)锽（乙醇濃度）gt;A（料液比）gt;C（超聲時(shí)間）。

2.4.3 響應(yīng)面交互因素分析 沒(méi)食子酸提取各因素間相互作用分析結(jié)果如圖9至圖11所示。從曲面陡峭度來(lái)看，乙醇濃度對(duì)沒(méi)食子酸得率的影響大于料液比，料液比對(duì)沒(méi)食子酸得率的影響稍大于超聲時(shí)間，乙醇濃度對(duì)沒(méi)食子酸得率的影響大于超聲時(shí)間。

2.4.4 優(yōu)化工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 采用Design-Expert 10.0.7從建立的預(yù)測(cè)模型得出猴耳環(huán)沒(méi)食子酸提取工藝最佳條件為料液比1∶70.9，乙醇濃度65.7%，超聲時(shí)間60.7 min，沒(méi)食子酸提取率為6.04%。根據(jù)實(shí)際情況將工藝調(diào)整為料液比1∶70，乙醇濃度65%，超聲時(shí)間60 min，重復(fù)試驗(yàn)5次，平均提取率為5.98%，表明通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化得到最佳工藝與理論的最佳提取工藝提取效果相近，最終確定的提取工藝適于猴耳環(huán)沒(méi)食子酸提取。

3 小結(jié)

本研究結(jié)合單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化了猴耳環(huán)中總黃酮和沒(méi)食子酸的提取工藝，確定總黃酮最佳提取工藝為料液比1∶90，乙醇濃度75%，超聲功率170 W，超聲時(shí)間40 min，總黃酮得率為2.29%（理論值為2.37%）；沒(méi)食子酸最佳提取工藝為料液比1∶70，乙醇濃度65%，超聲時(shí)間60 min，沒(méi)食子酸提取率為5.98%（理論值為6.04%）。響應(yīng)面法優(yōu)化得出的猴耳環(huán)總黃酮和沒(méi)食子酸的提取效果與理論值相差較小，表明該方法是可行的，可為猴耳環(huán)總黃酮和沒(méi)食子酸進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供支撐。

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