摘 要：目的：建立氣相色譜法測(cè)定醬油中對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)防腐劑的方法。方法：樣品經(jīng)酸化處理后，用乙酸乙酯提取，氣相色譜儀分離和定量分析。結(jié)果：8種對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)防腐劑在4～100 μg·mL-1線(xiàn)性關(guān)系良好，檢出限和定量限分別在0.27～0.32 mg·kg-1和0.90～1.08 mg·kg-1；在3個(gè)加標(biāo)水平下，加標(biāo)回收率和精密度均符合要求。結(jié)論：該方法前處理簡(jiǎn)單、操作時(shí)間短、回收率高，適用于大批量醬油中對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)防腐劑的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)；防腐劑；氣相色譜法；醬油

Optimization of Determination of Preservatives for Parabens by Gas Chromatography

SHI Qingli， MA Yilin， ZHOU Yi， LIN Jing*

（College of Food and Quality management， Nanning University， Nanning 530200， China）

Abstract： Objective： To establish a gas chromatography method for the determination of parabens preservatives in soy sauce. Method： The samples were treated with acidification， extracted with ether， and then separated and quantitatively analyzed by gas chromatography. Result： The eight parabens had good linear relationship in the range of 4 μg·mL-1 to 100 μg·mL-1， and the limits of detection and quantification were 0.27 mg·kg-1 to 0.32 mg·kg-1 and

0.90 mg·kg-1 to 1.08 mg·kg-1， respectively; the recovery rate and precision meet the requirements at three spiked levels. Conclusion： The method has the advantages of simple pretreatment， short operation time and high recovery， and is suitable for the determination of parabens preservatives in large quantities of soy sauce.

Keywords： parabens; preservatives; gas chromatography; soy sauce

對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)防腐劑也稱(chēng)尼泊金酯，作為國(guó)家批準(zhǔn)限量使用的食品添加劑，主要用于食品、藥品和護(hù)膚品中[1]。研究表明，對(duì)羥基苯甲酸酯是一種雌激素，其活性會(huì)隨著碳鏈的增加而增強(qiáng)，從而影響人體的內(nèi)分泌，甚至可能與乳腺癌的發(fā)生存在聯(lián)系[2-4]，因此對(duì)其進(jìn)行精準(zhǔn)檢測(cè)十分必要。當(dāng)前，醬油中對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)的測(cè)定主要參考《食品中對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)的測(cè)定》（GB 5009.31—2016）[5]。然而，采用國(guó)標(biāo)法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)防腐劑的加標(biāo)回收率和靈敏度均不高。因此，本文建立氣相色譜法測(cè)定醬油中多種對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)防腐劑的方法，以實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

醬油，市售。

7890B安捷倫氣相色譜儀，美國(guó)安捷倫有限公司；ML204電子天平，瑞士梅特勒-托利多公司；Rotina 460R離心機(jī)，德祥科技有限公司；BUCHI/R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，瑞士BUCHI公司；BF-200040T氮?dú)鉂饪s儀，北京八方世紀(jì)公司；Multi Reax多管式渦旋振蕩器，德國(guó)Heidolph公司。

無(wú)水乙醚、無(wú)水乙醇、鹽酸、氯化鈉、無(wú)水硫酸鈉、碳酸氫鈉、濃硫酸和碳酸鈉（均為分析純），南寧匯鑫化玻儀器有限公司；對(duì)羥基苯甲酸甲酯（99.89%）、羥基苯甲酸乙酯（99.82%）、對(duì)羥基苯甲酸丙酯（99.34%）、對(duì)羥基苯甲酸丁酯（99.60%）、對(duì)羥基苯甲酸異丙酯（99.80%）和對(duì)羥基苯甲酸異丁酯（99.35%），德國(guó)Dr.Ehrenstrofer GmbH公司；對(duì)羥基苯甲酸異丙酯（99.80%）、羥基苯甲酸芐酯（99.30%）和對(duì)羥基苯甲酸正庚酯（99.80%），曼哈格BePure公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)原液（1 mg·mL-1）：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.05 g各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于50.0 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋、定容到刻度線(xiàn)，搖勻。

對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)中間液（200 μg·mL-1）：取10.0 mL標(biāo)準(zhǔn)原液于50 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋、定容到刻度線(xiàn)，搖勻。

對(duì)羥基苯甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別取一定量對(duì)羥基苯甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)中間液于10.0 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋并定容至刻度線(xiàn)，配制成濃度分別為4、10、20、50 μg·mL-1和100 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.2 樣品前處理

稱(chēng)取5 g某廠(chǎng)家醬油試樣（精確到0.001 g）于50 mL塑料離心管中，加入5 mL水、1 mL 10%硫酸溶液、10 mL乙酸乙酯，在渦旋器上渦旋10 min。以4 600 r·min-1離心5 min，準(zhǔn)確量取5 mL上清液轉(zhuǎn)移至15 mL塑料離心管中，用氮?dú)鉂饪s儀在40 ℃下氮吹至干，加入2 mL無(wú)水乙醇溶解殘留物和400 mg無(wú)水硫酸鈉，渦旋5 min，再離心5 min，過(guò)0.22 μm的有機(jī)濾膜，溶液待測(cè)。

1.2.3 氣相色譜條件

色譜柱：弱極性石英毛細(xì)管柱（60 m×0.25 mm，0.25 μm），柱固定液為苯基-甲基聚硅氧烷（5∶95，V/V）；進(jìn)樣口溫度：220 ℃；進(jìn)樣量：1 μL；分流比：10∶1；檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器，溫度為260 ℃；載氣：氮?dú)猓兌葹?9.99%，流量為

2.0 mL·min-1，尾吹流量為25 mL·min-1；氫氣，流量為30 mL·min-1；空氣，流量為300 mL·min-1。柱箱升溫程序：在80 ℃保持1 min，以10.0 ℃·min-1升至120 ℃，然后以10.0 ℃·min-1升至120 ℃，再以20.0 ℃·min-1升至170 ℃，以12.0 ℃·min-1升至220 ℃保持1 min，以10.0 ℃·min-1升至250 ℃保持6 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜分析

參考1.2.3色譜條件將對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)對(duì)照混合溶液進(jìn)行檢測(cè)分析，對(duì)照品混合溶液中物質(zhì)均完全分離，8種防腐劑（對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯、對(duì)羥基苯甲酸異丙酯、對(duì)羥基苯甲酸異丁酯、對(duì)羥基苯甲酸芐酯和對(duì)羥基苯甲酸正庚酯）峰高、峰形均表現(xiàn)良好。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

按照1.2.1的方法配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，分別以峰面積和濃度為縱橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。結(jié)果顯示，對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯、對(duì)羥基苯甲酸異丙酯、對(duì)羥基苯甲酸異丁酯、對(duì)羥基苯甲酸芐酯和對(duì)羥基苯甲酸正庚酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程分別為Y=1.008 80X-0.407 69、Y=1.060 70X-0.486 63、Y=1.119 79X-0.424 02、Y=1.125 84X-0.553 36、Y=1.094 42X-0.770 20、Y=1.119 18X-0.443 41、Y=0.852 745X-0.706 31和Y=1.017 81X-0.453 71，相關(guān)系數(shù)均超過(guò)0.998。8種防腐劑在4～100 μg·mL-1內(nèi)呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.3 檢出限與定量限

分別以3倍、10倍信噪比計(jì)算檢出限、定量限，結(jié)果如表1所示。測(cè)得檢出限在0.27～0.32 mg·kg-1，定量限在0.90～1.08 mg·kg-1。GB 5009.31—2016中規(guī)定，對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯和對(duì)羥基苯甲酸丁酯的方法檢出限為0.6 mg·kg-1，定量限為2.0 mg·kg-1。本方法的檢出限、定量限結(jié)果均低于該限值。

2.4 回收率和精密度

國(guó)標(biāo)法和本方法樣品前處理的氮吹過(guò)程分別取10 mL和5 mL待測(cè)樣，為確保兩種方法待測(cè)液的濃度一致，國(guó)標(biāo)法在10、20、100 mg·kg-1的3個(gè)水平下進(jìn)行加標(biāo)，而本方法則在20、40、200 mg·kg-1的3個(gè)水平下進(jìn)行加標(biāo)，每個(gè)水平平行測(cè)定6次，兩種方法的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。國(guó)標(biāo)法的加標(biāo)回收率在66.80%～74.86%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（Relative Standard Deviation，RSD）在0.36%～4.30%。本方法的加標(biāo)回收率在90.26%～98.25%，RSD在0.21%～1.77%，優(yōu)于國(guó)標(biāo)方法。

3 結(jié)論

本文建立了檢測(cè)醬油中對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)防腐劑的方法。本方法線(xiàn)性良好，前處理簡(jiǎn)便，可檢測(cè)的防腐劑種類(lèi)較多，檢出限、定量限、加標(biāo)回收率和精密度結(jié)果均優(yōu)于GB 5009.31—2016中方法。該方法簡(jiǎn)化了醬油中對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)防腐劑的檢驗(yàn)檢測(cè)流程，可為未來(lái)的食品監(jiān)管工作提供更為便捷的技術(shù)支持。

參考文獻(xiàn)

[1]呂穩(wěn)，張靜雅，胡貝，等.氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定化妝品中苯甲酸酯類(lèi)和對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)16種防腐劑[J].日用化學(xué)工業(yè)（中英文），2023，53（2）：239-244.

[2]SHARFALDDIN A，DAVAASUREN B，EMWAS A H，et al.Single crystal， Hirshfeld surface and theoretical analysis of methyl 4-hydroxybenzoate， a common cosmetic， drug and food preservative：experiment versus theory[J].PloS one，2020，15（10）：e0239200.

[3]魏一婷，吳媛，丁琳，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定調(diào)味品中7種對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)防腐劑及其水平調(diào)查[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2023，39（5）：612-617.

[4]張祝燕.工作場(chǎng)所空氣中乙醚的溶劑解析-氣相色譜法[J].造紙裝備及材料，2021，50（2）：106-108.

[5]國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)的測(cè)定：GB 5009.31—2016[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.