摘 要：目的：分析2019—2021年延慶區(qū)腹瀉病例致瀉性大腸埃希氏菌感染狀況和耐藥性。方法：現(xiàn)收集2019年1月—2021年12月延慶區(qū)醫(yī)院內(nèi)收治的腹瀉患者肛拭子標(biāo)本和糞便標(biāo)本，進(jìn)行熒光定量PCR檢測，鑒定標(biāo)本中致瀉性大腸埃希氏菌的分型，對致瀉性大腸埃希氏菌的耐藥性進(jìn)行分析。結(jié)果：2019—2021年共計1 112例樣本，腸集聚性黏附性大腸埃希菌（Enteroaggregative Escherichia coli，EAEC）檢出率為5.57%，腸道致病性大腸埃希菌（Enteropathogenic Escherichia coli，EPEC）檢出率為1.80%、產(chǎn)腸毒素性大腸埃希菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）檢出率為1.35%，腸道侵襲性大腸埃希菌（Enteroinvasive Escherichia coli，EIEC）檢出率為0.27%，未檢測出腸出血性大腸埃希菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）；2019年6月檢出率最高，2020年7月、8月檢出率最高，2021年7月檢出率最高；2019年36株致瀉性大腸埃希氏菌（Diarrheagenic Escherichia coli，DEC）對磺胺異噁唑耐藥率（91.7%）最高，2020年32株DEC對磺胺異噁唑的耐藥率（100.0%）最高，2021年32株DEC對萘啶酸的耐藥率（75.0%）最高。結(jié)論：2019—2021年延慶區(qū)腹瀉病例致瀉性大腸埃希氏菌感染狀況基本穩(wěn)定，且其耐藥性方面獲得了較好的控制，臨床效果比較明顯。

關(guān)鍵詞：腹瀉病例；致瀉性大腸埃希氏菌；耐藥性

Analysis of Diarrheal Cases Caused by Diarrheagenic Escherichia coli Infection and Drug Resistance

LI Jingjing， CUI Yujuan， ZHANG Ying

（Beijing Yanqing District Center for Disease Control and Prevention， Beijing 102100， China）

Abstract： Objective： To analyze the infection status and drug resistance of diarrhea causing Escherichia coli in Yanqing district from 2019 to 2021. Method： Anal swab specimens and fecal specimens of diarrhea patients admitted to Yanqing district hospital from January 2019 to December 2021 were collected for fluorescence quantitative PCR detection to identify the types of diarrhea causing Escherichia coli in the specimens and analyze the drug resistance of diarrhea causing Escherichia coli. Results： A total of 1 112 samples were collected from 2019 to 2021. The detection rate of enteroaggregative Escherichia coli （EAEC） was 5.57%， the detection rate of enteropathogenic Escherichia coli （EPEC） was 1.80%， the detection rate of enterotoxic Escherichia coli （ETEC） was 1.35%， and the detection rate of enteroinvasive Escherichia coli （EIEC） was 0.27%， and no enterohemorrhagic Escherichia coli （EHEC） was detected. The detection rate was the highest in June 2019， July and August 2020， and July 2021. In 2019， 36 strains of diarrheagenic Escherichia coli （DEC） had the highest resistance rate to sulfamethoxazole （91.7%）， in 2020， 32 strains of DEC had the highest resistance rate to sulfamethoxazole （100.0%）， and in 2021， 32 strains of Dec had the highest resistance rate to nalidixic acid （75.0%）. Conclusion： The status of diarrhea causing Escherichia coli infection in diarrhea cases in Yanqing district from 2019 to 2021 is basically stable， and its drug resistance has been well controlled， and the clinical effect is relatively obvious.

Keywords： diarrhea cases; diarrheagenic Escherichia coli; drug resistance

致瀉性大腸埃希氏菌（Diarrheagenic Escherichia coli，DEC）是引起人體以腹瀉癥狀為主的全球性疾病的常見病原菌，在我國引起感染性腹瀉的發(fā)病率居所有傳染病之首[1]。致瀉性大腸埃希氏菌分為產(chǎn)腸毒素性大腸埃希菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）、腸道侵襲性大腸埃希菌（Enteroinvasive Escherichia coli，EIEC）、腸道致病性大腸埃希菌（Enteropathogenic Escherichia coli，EPEC）、腸集聚性黏附性大腸埃希菌（Enteroaggregative Escherichia coli，EAEC）以及腸出血性大腸埃希菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）。由于DEC在腹瀉患者中檢出率較高，且在相關(guān)的研究中指出[2]，受臨床用藥的影響，DEC出現(xiàn)了一定的耐藥性，對腹瀉病例的治療效果造成了影響。為此，筆者針對2019—2021年延慶區(qū)腹瀉病例致瀉性大腸埃希氏菌感染狀況、耐藥性進(jìn)行研究，為延慶區(qū)腹瀉治療提供可參考資料。

1 資料與方法

1.1 樣本采集

現(xiàn)收集2019年1月—2021年12月期間延慶區(qū)醫(yī)院內(nèi)收治的腹瀉患者作為本次研究對象，共計納入745例，所有患者均出現(xiàn)腹瀉癥狀，即糞便性狀異常，具體包括水樣便、稀便、米干便、血便和黏液便，每天排便次數(shù)在3次以上。對所有患者的社會信息學(xué)、人口學(xué)、臨床癥狀等流行學(xué)因素進(jìn)行統(tǒng)計，共計采集肛拭子標(biāo)本以及糞便標(biāo)本1 112份。

1.2 研究方法

1.2.1 制備細(xì)菌模板

將采集好的肛拭子標(biāo)本以及糞便標(biāo)本懸液接種在5 mL的大腸埃希氏菌（Escherichia coli，EC）肉湯（青海博生物）中，在37 ℃的環(huán)境下培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為18 h。培養(yǎng)結(jié)束后取適量菌液在10 000 r·min-1條件下離心

5 min，去除上清液，沉淀使用滅菌超純水懸浮，使細(xì)菌濃度達(dá)到3×109 CFU·mL-1，在100 ℃的水溫下持續(xù)煮沸10 min，然后放入冰浴中冷卻。冷卻后在

10 000 r·min-1、4 ℃條件下離心10 min，最后取1 μL上清液作為PCR模板。

1.2.2 大腸埃希氏菌多重PCR分型

本次研究采用熒光定量PCR法對大腸埃希氏菌進(jìn)行分型檢測，即EPEC、ETEC、EIEC、EHEC和EAEC共5種分型。具體檢測步驟按照ABT 5種DEC多重PCR檢測試劑盒（青海博生物）中的相關(guān)說明進(jìn)行操作。

1.2.3 細(xì)菌的分離和鑒定

將經(jīng)多重PCR檢測結(jié)果為陽性的肉湯培養(yǎng)液接種于大腸顯色平板（青海博生物）上，培養(yǎng)形式為單菌落分離培養(yǎng)。從顯色板上選取藍(lán)綠色菌落，每個平板上可選取5～7個菌落，對其進(jìn)行單個毒力基因確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)和革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定卡對上述菌株進(jìn)行生化鑒定，結(jié)合生化鑒定結(jié)果和毒力基因結(jié)果共同判定DEC菌株。

1.2.4 藥敏試驗(yàn)最低抑菌濃度測定

將經(jīng)上述環(huán)節(jié)確定為DEC的32株菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)方法為肉湯稀釋法，試驗(yàn)操作過程以及試驗(yàn)結(jié)果判定參考上海星佰腸道細(xì)菌A3和A4藥敏板說明書進(jìn)行操作和判定。依據(jù)CLSI M100-S28中相關(guān)指標(biāo)判定敏感、中介和耐藥?？咕幬锇ò逼S西林、氨芐西林-舒巴坦、四環(huán)素、氯霉素、復(fù)方新諾明、頭孢唑林、頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢西丁、慶大霉素、亞胺培南、萘啶酸、阿奇霉素、磺胺異噁唑、環(huán)丙沙星、阿莫西林-克拉維酸、頭孢噻肟-克拉維酸、頭孢他啶-克拉維酸、多粘菌素E、多粘菌素B、米諾環(huán)素、阿米卡星和氨曲南共計23種抗菌藥物。耐藥菌株為R、中介菌株為I、敏感菌株為S，質(zhì)控對照標(biāo)準(zhǔn)為大腸埃希氏菌國際標(biāo)準(zhǔn)株ATCC 25922。

2 結(jié)果與分析

2.1 5種致瀉性大腸埃希氏菌檢出率

2019—2021年共計1 112例樣本，其中EAEC檢出率為5.57%，EPEC檢出率為1.80%、ETEC檢出率為1.35%，EIEC檢出率為0.27%，未檢測出EHEC，具體見表1。

2.2 2019—2021年5種致瀉性大腸埃希氏菌檢出月份分布情況

2019年共檢測樣本367份，5種致瀉性大腸埃希氏菌以6月的檢出率最高，其次為7月和8月，再次為2月、4月、5月，在1月、10月、11月和12月期間均未檢出。2020年共檢測樣本370份，

5種致瀉性大腸埃希氏菌以7月和8月的檢出率最高，其次為6月，再次為4月和5月，在1月、2月、

3月、11月和12月期間均未檢出。2021年共檢測樣本375份，5種致瀉性大腸埃希氏菌以7月檢出率最高，其次為6月和5月，再次為4月、8月和10月，最后為9月，其中在1月、2月、3月、11月和12月

期間均未檢出，見表2。

2.3 2019—2021年藥敏試驗(yàn)結(jié)果

2019年，36株DEC對磺胺異噁唑耐藥率（91.7%）最高，其次為四環(huán)素（69.4%），再次為氨芐西林（63.9%）和萘啶酸（55.6%）。DEC對多粘菌素B的敏感性（88.9%）最高，其次為頭孢他啶，為83.3%，再次為頭孢他啶-克拉維酸和多粘菌素E，均為（80.6%）。2020年，32株DEC對磺胺異噁唑的耐藥率（100.0%）最高，其次為氨芐西林（75.0%），再次為四環(huán)素（71.9%）和萘啶酸（62.5%），剩余藥物的耐藥率均在60%以下。DEC對亞胺培南的敏感性（100.0%）最高，其次為頭孢噻肟-克拉維酸、頭孢他啶-克拉維酸、多粘菌素E、多粘菌素B和阿米卡星，均為90.6%，再次為頭孢西?。?4.4%）。2021年，32株DEC對萘啶酸的耐藥率（75.0%）最高，其次為氨芐西林（62.5%），再次為四環(huán)素（59.4%）和磺胺異噁唑（56.3%），剩余藥物的耐藥率均在50%以下。DEC對頭孢他啶、頭孢西丁、亞胺培南、頭孢噻肟-克拉維酸以及頭孢他啶-克拉維酸的敏感率均為100.0%，其次為多粘菌素E、多粘菌素B、阿米卡星敏感率均為96.9%，環(huán)丙沙星為93.8%，阿奇霉素90.6%。見表3。

2.4 2019—2021年各性狀便檢測結(jié)果

水樣便、稀便和粘液便以EAEC菌為主，泔樣便檢出EAEC菌和ETEC菌，血便則無檢出菌，具體見表4。

3 結(jié)論與討論

本研究針對2019—2021年延慶區(qū)腹瀉病例致瀉性大腸埃希氏菌感染狀況進(jìn)行分析，并對其耐藥性以及病原學(xué)特征進(jìn)行總結(jié)。本次研究結(jié)果顯示，參與檢測1 112份樣本中，EAEC檢出率為5.57%，EPEC檢出率為1.80%、ETEC檢出率為1.35%，EIEC檢出率為0.27%，未檢測出EHEC，其中EAEC檢出率最高這一結(jié)果與相關(guān)研究中，吉林和上海等地區(qū)5種致瀉性大腸埃希氏菌情況基本一致[3-4]。在對5種致瀉性大腸埃希氏菌檢出月份分布情況分析和總結(jié)后發(fā)現(xiàn)，2019年發(fā)病月份比較廣泛，而2020年和2021年兩年期間均以夏秋兩季為主要發(fā)病時間，其主要原因在于受污染的食品食用前未經(jīng)徹底加熱，而夏秋兩季延慶區(qū)天氣炎熱，食品容易受污染，且露天飲食攤位也會增加，導(dǎo)致發(fā)病率上升[5]，從研究結(jié)果中還可以發(fā)現(xiàn)，2020年和2021年大腸埃希菌的感染情況得到了一定的緩解，呈逐年下降的趨勢，這主要是由于延慶區(qū)2020年在了解DEC的流行趨勢之后，進(jìn)行了相應(yīng)的飲食和市場管理，進(jìn)而在8月份降低了DEC的檢出率。

在本次研究中顯示，2019年36株DEC對磺胺異噁唑耐藥率（91.7%）最高，對多粘菌素B的敏感性（88.9%）最高。2020年，32株DEC對磺胺異噁唑的耐藥率（100.0%）最高，對亞胺培南的敏感性（100.0%）最高。2021年DEC對萘啶酸的耐藥率（75.0%）最高，對頭孢他啶、頭孢西丁、亞胺培南、頭孢噻肟-克拉維酸、頭孢他啶-克拉維酸的敏感率均為100.0%。2020年DEC整體耐藥率最高，但是2021年與2020年相比整體耐藥性已經(jīng)有所下降，且每個藥物的耐藥性均出現(xiàn)了下降。從藥物的敏感性方面來看，2021年，DEC的敏感性達(dá)到100.0%的藥物由亞胺培南1種上升至5種，以頭孢類藥物為主。2019—2021年期間DEC耐藥品性呈正弦波形特點(diǎn)，其中2019年的耐藥性較低，且敏感性藥物較少，2020年則出現(xiàn)耐藥性的藥物品種增加，且耐藥性較高，敏感性藥物較少，2021年DEC敏感性藥物有了大幅度上升且出現(xiàn)耐藥的品種和耐藥性有所下降，這可能與臨床規(guī)范合理用藥有一定的關(guān)系[6]。目前來看，延慶區(qū)在腹瀉病例致瀉性大腸埃希氏菌感染狀況基本穩(wěn)定，且其耐藥性方面獲得了較好的控制，臨床效果比較明顯。

綜上所述，2019—2021年延慶區(qū)腹瀉病例致瀉性大腸埃希氏菌感染狀況基本穩(wěn)定，且其耐藥性方面獲得了較好的控制，臨床效果比較明顯。

參考文獻(xiàn)

[1]楊杰，李文，冀國強(qiáng)，等.順義區(qū)2018年腹瀉病例糞便中致瀉大腸埃希氏菌耐藥監(jiān)測結(jié)果分析[J].安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2020，26（5）：386-389.

[2]朱旭慧，周俞，侯紅艷，等.急性腹瀉患兒致瀉性大腸埃希菌流行病學(xué)研究和耐藥性分析[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2019，42（3）：214-218.

[3]石奔，趙薇，孫景昱，等.吉林省致瀉大腸埃希氏菌分子分型與耐藥性研究[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2020，24（10）：

1697-1702.

[4]桑灝，崔燕，顧文超，等.2015—2018年上海市兒童腹瀉流行特征及致瀉性大腸埃希菌耐藥分析[J].疾病監(jiān)測，2019，34（6）：559-564.

[5]傅祎欣，陳偉偉，葉素貞，等.2019年福建省哨點(diǎn)醫(yī)院腹瀉患者中致瀉大腸埃希菌感染狀況及病原學(xué)特征分析[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2020，32（5）：539-543.

[6]宮霄歡，陳洪友，肖文佳，等.上海市2014—2017年成年人感染性腹瀉門診病例的季節(jié)分布及病原學(xué)特征分析[J].中華流行病學(xué)雜志，2019，40（8）：889-894.