摘要為探究MS-222對異育銀鯽（Carassiusauratusgibelio）麻醉效果、復(fù)蘇效果以及抗氧化酶活性的影響，采用7個不同濃度（50、60、70、80、90、100和110mg/L）MS-222對異育銀鯽（5.88±0.78）g進(jìn)行麻醉，通過記錄麻醉分期及其時間、鰓中抗氧化酶活性和相關(guān)基因的表達(dá)，確定異育銀鯽的最適MS-222麻醉濃度和時間。結(jié)果表明：在MS-222濃度為60、70、80、90和100mg/L時，異育銀鯽均可進(jìn)入麻醉第Ⅰ期和第Ⅱ期，均能在10min內(nèi)復(fù)蘇；濃度低于50mg/L時，異育銀鯽難以進(jìn)入深度麻醉；濃度高于100mg/L時，異育銀鯽累計死亡率為40%。選擇MS-222濃度為60和100mg/L進(jìn)行麻醉，進(jìn)一步分析不同麻醉劑濃度對魚體的潛在氧化損傷。100mg/LMS-222深度麻醉異育銀鯽（約4min）后，鰓中GSH活性和MDA含量均顯著上升（Plt;0.05）；HSP70、keap1、PIK3A1、nrf1、MAPK3和caspase3的mRNA相對表達(dá)量顯著上調(diào)（Plt;0.05）；放入清水復(fù)蘇6h時，鰓中POD活性顯著下降（Plt;0.05），caspase3和LYZ基因表達(dá)量顯著上調(diào)（Plt;0.05），異育銀鯽逐漸恢復(fù)到麻醉前水平；60mg/LMS-222深度麻醉異育銀鯽（24h）后，鰓中GSH活性上升（P＜0.05）；NQO、keap1、PIK3A1、Nrf1和MAPK3基因表達(dá)量顯著上調(diào)（P＜0.05），放入清水復(fù)蘇1min后，所測指標(biāo)與麻醉前差異不顯著（Pgt;0.05）。異育銀鯽運輸過程中適宜的MS-222濃度為60～100mg/L，科研試驗中MS-222較適宜的濃度為100mg/L。

關(guān)鍵詞麻醉劑；MS-222；異育銀鯽；氧化損傷

中圖分類號S96"文獻(xiàn)標(biāo)識碼A"文章編號0517-6611（2025）02-0077-07

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.02.018

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

EffectsofMS-222onAnesthesiaRecoveryandAntioxidantEnzymeActivityofCarassiusauratusgibelio

MAZhi-hao"YUANJian-mei"QIUMing2etal

（1.CollegeofFisheriesandLifeScience，DalianOceanUniversity，Dalian，Liaoning116023;2.CollegeofMarineandBioengineering，YanchengInstituteofTechnology，Yancheng，Jiangxu224051;3.JiangsuMarineFisheriesResearchInstitute，Nantong，Jiangsu"226007）

AbstractInordertoinvestigatetheeffectsofMS-222onanestheticlevel，recoveryrateandantioxidantenzymeactivityofCarassiusauratusgibelio（5.88±0.78g），sevendifferentconcentrationsofMS-222（50，60，70，80，90，100"and110mg/L）wereset.TheoptimalanesthesiaconcentrationandtimeofMS-222toC.gibelioweredeterminedbasedontheanesthesiastageandtime，activitiesofantioxidantenzymesinthegillandmRNAexpressionofantioxidant-relatedgenes.TheresultshowedthatC.gibeliocouldenterthestageIandstageIIofanesthesiawhileanaesthetizedatconcentrationsof60，70，80，90and100mg/L，andcouldrecoverwithin10min.C.gibeliocouldnotenterdeepanesthesiawhiletheanestheticconcentrationlowerthan50mg/L，andthecumulativemortalitywas40%whiletheconcentrationhigherthan100mg/L.Furthermore，twoconcentrationsofMS-222at60mg/Land100mg/Lwereset，andC.gibelioexposedfordifferenttimetostudytheoxidativedamageofMS-222togills.Resultsshowedthatdeepanesthesiawith100mg/LMS-222（about4min），GSHactivityandMDAcontentingillsofC.gibelioweresignificantlyincreased（Plt;0.05）.ThemRNArelativeexpressionofHSP70，keap"PIK3A"nrf"MAPK3andcaspase3weresignificantlyup-regulated（Plt;0.05）.ThePODactivity，andmRNArelativeexpressionofcaspase3andLYZinthegillswererecoveredtothebasallevelafter6hofrecovery.Afterdeepanesthesiawith60mg/LMS-222（about24h），GSHactivityingillsincreasedandPODdecreasedsignificantly（Plt;0.05）.ThetranscriptionofgenesNQO，keap"PIK3A"Nrf"MAPK3andcaspase3weresignificantlyup-regulated（Plt;0.05）.After1minofrecoverywithinwater，therewasnosignificantdifferencewiththembeforeanesthesia.ThisstudysuggestedthattheappropriateconcentrationofMS-222inthetransportprocessofC.gibelioismorethan60mg/L，andtheconcentrationinscientificresearchesislessthan100mg/L.

KeywordsAnesthetic;MS-222;Carassiusauratusgibelio;Oxidativedamage

異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）是我國主要的淡水養(yǎng)殖魚類之一，具有生長周期短、產(chǎn)量高、經(jīng)濟(jì)效益高及易于飼養(yǎng)等特點。在飼養(yǎng)、繁育、捕撈、運輸、銷售以及試驗過程中，不恰當(dāng)?shù)娜斯げ僮鲿甬愑y鯽的應(yīng)激反應(yīng)^［1］，影響魚體健康，導(dǎo)致其發(fā)病甚至死亡，影響?zhàn)B殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展^［2-4］。

麻醉是各種水產(chǎn)養(yǎng)殖操作過程中使用的緩解應(yīng)激技術(shù)之一。麻醉劑可使魚體鰓動頻率下降，限制魚體的活動能力，使魚體保持鎮(zhèn)靜，避免掙扎或創(chuàng)傷。一種理想的漁用麻醉劑應(yīng)具備無毒、價廉、易實施、可迅速麻醉、易于蘇醒和應(yīng)激損傷較小等特點^［5］，目前常用的漁用麻醉劑有MS-222（又稱魚安定）、丁香酚、2-苯氧乙醇、CO2、乙醚、苯佐卡因等，其中，MS-222具有藥物濃度低、麻醉快、復(fù)蘇快、無毒副作用等特點，是美國食品和藥物管理局（FDA）唯一批準(zhǔn)用于食用魚的麻醉劑^［6］。MS-222被用于棘鱸（Sander lucioperca）、圓尾魚（Cyclopterus lumpus）和遠(yuǎn)東鯰魚（Silurus asotus）等魚類的麻醉和轉(zhuǎn)運^［7-9］，效果良好。如體質(zhì)量為（112.50±13.01） g棘鱸在MS-222濃度小于100 mg/L、23 ℃養(yǎng)殖條件下，復(fù)蘇24 h后血清中葡萄糖、總蛋白和乳酸鹽指數(shù)可回歸正常水平^［7］；體質(zhì)量為（0.97±0.45） g圓尾魚，在MS-222濃度為60 mg/L、12 ℃條件下麻醉效果較好，復(fù)蘇時間短，具有良好的安全性^［8］。

麻醉劑的濃度和麻醉時間對魚體的生理狀況產(chǎn)生不同的影響。已報道，一定劑量的MS-222會使西伯利亞鱘（Acipenser baerii）幼魚的血液生化指標(biāo)發(fā)生變化，甘油三酯（TGL）濃度和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性升高，MS-222濃度為60 ～ 90 mg/L麻醉效果較為理想^［10］；胡望嬌等^［11］以體質(zhì)量為（13.78±3.15） g的松江鱸（Trachidermus fasciatus）為試驗對象，研究不同濃度MS-222的麻醉效果，結(jié)果表明，松江鱸進(jìn)入麻醉狀態(tài)的時間隨著MS-222濃度的升高而縮短，但復(fù)蘇時間不斷延長；MS-222（40 mg/L）麻醉大黃魚幼魚24 h后，幼魚SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化相關(guān)酶活性升高，該條件下對大黃魚肝臟、鰓絲和腦組織有一定損傷^［12］。由此可知，理想的麻醉劑及合適的濃度在魚類試驗與生產(chǎn)實踐中至關(guān)重要，但目前尚缺乏針對異育銀鯽的MS-222最適麻醉濃度和麻醉時間的系統(tǒng)研究。

魚鰓具有許多重要功能，如呼吸、滲透調(diào)節(jié)、排泄、免疫屏障等；魚鰓又是與養(yǎng)殖水體直接相通，常被作為魚類健康狀況的表征之一^［13］。筆者研究不同濃度MS-222對異育銀鯽的麻醉效果；在高、低濃度麻醉下，以鰓組織為靶器官，通過測定抗氧化酶活性和相關(guān)基因mRNA表達(dá)，分析MS-222引起異育銀鯽潛在的氧化損傷，確定異育銀鯽最適麻醉濃度，以期為MS-222在異育銀鯽生產(chǎn)實踐和試驗操作過程中的使用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和技術(shù)指導(dǎo)。

1材料與方法

1.1試驗材料

異育銀鯽購自江蘇鹽城某苗種養(yǎng)殖基地，低溫充氧運回實驗室后，在（35×30×28）cm的養(yǎng)殖桶中暫養(yǎng)14d。養(yǎng)殖桶使用高錳酸鉀消毒，自來水經(jīng)曝氣過濾48h后作為試驗養(yǎng)殖用水。選取體長為（4.28±0.25）cm、體質(zhì)量為（5.88±0.78）g的健康異育銀鯽用于試驗，試驗期間水溫為（25.0±0.5）℃、pH為6.8～7.3、溶解氧（DO）大于5mg/L。每日投喂商品飼料（粗蛋白含量為32.25%，粗脂肪5.90%，總鈣1.17%和總磷1.23%，通威股份有限公司）3次，投喂時間分別為7：00、12：00和18：00，日投餌量為魚體重的3%。1d換水1次，日換水量為1/3～1/2，1d清理1次殘餌和糞便。

MS-222純度為99%，購自北京綠恒興貿(mào)易有限公司。

1.2試驗方法

1.2.1不同濃度MS-222對異育銀鯽麻醉效果的影響。

試驗設(shè)置7個MS-222不同濃度組（50、60、70、80、90、100和110 mg/L）和對照組（CK），每組10尾魚，觀察并記錄試驗魚的麻醉狀況；并參考魚類麻醉過程6期和復(fù)蘇過程4期的特點（表1）^{［7，14-16］}，根據(jù)異育銀鯽的行為特征判定麻醉和復(fù)蘇階段的具體時期。麻醉24 h后記錄試驗魚存活率，然后轉(zhuǎn)入相同水溫和pH的清水中復(fù)蘇。

1.2.2MS-222對異育銀鯽鰓中抗氧化酶活性的影響。

1.2.2.1試驗設(shè)計。

根據(jù)“1.2.1”試驗結(jié)果，設(shè)置3個處理，分別為100mg/LMS-222、60mg/LMS-222和CK，每組10尾魚。100mg/LMS-222麻醉5min，60mg/LMS-222麻醉24h后，當(dāng)魚體完全喪失肌肉張力，鰓蓋張合頻率變慢時，將其轉(zhuǎn)入相同水溫的清水中進(jìn)行復(fù)蘇，分別于復(fù)蘇期0h（即深度麻醉期）、0.5和6.0h采集異育銀鯽鰓組織，每處理每次采集3尾魚，同時采集CK鯽鰓進(jìn)行對比分析，研究麻醉劑對鰓的氧化損傷及其程度。

1.2.2.2抗氧化酶活性的測定。

用預(yù)冷的無菌生理鹽水（0.85%NaCl）洗去鰓中雜物，濾紙吸去組織樣品表面水分后，剪碎，稱重，按組織樣品重量的10%加入預(yù)冷的生理鹽水，然后用組織勻漿器勻漿，4℃2000r/min離心15min，取上清。使用商品試劑盒（購自南京建成生物工程研究所）測定試驗組和對照組鯽鰓中谷胱甘肽氧化酶（GSH-Px）活性、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、過氧化物酶（POD）活性、過氧化氫酶（CAT）活性。

1.2.3MS-222對異育銀鯽鰓中抗氧化相關(guān)基因表達(dá)的影響。

1.2.3.1樣品采集及RNA提取。

試驗設(shè)置同“1.2.2.1”，將保存于RNAisoPlus中的鰓組織樣品于高通量組織破碎儀（QIAgentissuelyserⅡYM1405）中充分勻漿，靜置5min后于4℃12000r/min離心5min，緩慢吸取上清液置入新的1.5mL滅菌EP管中，加入1/5RNAisoPlus體積量的氯仿，蓋緊管口，振蕩15s混勻，靜置5min后于4℃12000r/min離心15min，小心吸取不多于80%的上層水轉(zhuǎn)入新的1.5mLEP管中，加入等量的異丙醇充分混勻，室溫靜置10min后于4℃12000r/min離心10min，棄去異丙醇，用1mL75%乙醇（DEPC水配制）洗滌沉淀后于4℃12000r/min離心5min，棄上清，短暫離心后吸出殘余乙醇，室溫下晾干RNA沉淀。用適量DEPC水溶解RNA沉淀，-80℃保存待用。

1.2.3.2反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。

使用NanoDrop2000（ThermoScientific，Wilmington，DE，USA）測定樣品RNA質(zhì)量與濃度，OD260/OD280值在1.8～2.0的樣品為合格樣品。RNA濃度調(diào)整至400ng/μL后，根據(jù)HiFiScriptgDNARemovalRTMasterMix試劑盒說明書，反轉(zhuǎn)錄總RNA合成cDNA。20μL反應(yīng)體系如下：1.0μL10×gDNAEraserBuffer，0.5μLgDNAEraser，1.0μLTemplateRNA，用RNaseFreeWater補(bǔ)充至10μL，混勻離心后42℃孵育2min；加1μLHiFiScript、1μLPrimerMixI、4μL5×RTBuffer和4μLRNaseFreeWater，在PCR反應(yīng)儀中合成cDNA，反應(yīng)條件為42℃15min，85℃5min，合成的cDNA于-80℃保存待用。

1.2.3.3熒光定量PCR法測定基因mRNA相對表達(dá)。

根據(jù)TB Green^TM Premix Ex Taq^TM II的使用說明書進(jìn)行實時熒光定量PCR（qRT-PCR）。反應(yīng)體系為25 μL，包含cDNA樣品2.0 μL、上、下游引物（10 μmol/L）各1.0 μL、SYBR Premix Ex Taq TM 12.5 μL以及滅菌去離子水8.5 μL。qRT-PCR反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性30 s；40個循環(huán)（95 ℃變性5 s；56.9～64.3 ℃退火32 s，65 ℃延伸5 s）。

共測定8個基因，包括HSP70、NQO、keap1、MAPK3、nrf1、caspase3、TPJ和LYZ，qRT-PCR所用引物序列見表2。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

所有試驗結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，通過LSD法進(jìn)行多重比較。P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著，P＞0.05表示差異不顯著。所得數(shù)據(jù)用GraphPadPrism8.0進(jìn)行分析處理并作圖。

2結(jié)果與分析

2.1不同濃度MS-222對異育銀鯽麻醉的影響

由表3可知，MS-222質(zhì)量濃度影響魚體麻醉程度、麻醉時間和復(fù)蘇時間，其隨質(zhì)量濃度的增加而縮短。當(dāng)MS-222質(zhì)量濃度為50mg/L時，異育銀鯽只能進(jìn)入麻醉第Ⅰ期，不適合進(jìn)行生產(chǎn)實踐操作和運輸；MS-222濃度為60mg/L時，麻醉第Ⅱ期所處的時間最長，并能在2min內(nèi)復(fù)蘇；當(dāng)MS-222濃度為90mg/L時，接近5min時魚體進(jìn)入麻醉第Ⅳ期；當(dāng)MS-222濃度為100mg/L時，魚體進(jìn)入麻醉第Ⅳ期時間超過5min，麻醉24h后，該組魚的復(fù)蘇率仍為100%；當(dāng)MS-222濃度為110mg/L時，魚體雖快于濃度100mg/L組進(jìn)入麻醉第Ⅳ期，但存活率僅為60%。基于生產(chǎn)實踐中魚體進(jìn)入麻醉第Ⅱ期時最適宜進(jìn)行運輸，以及科研試驗中需要快速進(jìn)入麻醉期而不引起死亡的實際需要，擬選定60mg/L和100mg/LMS-222濃度組進(jìn)行深入研究，以確定MS-222是否能引起鯽鰓氧化應(yīng)激及其損傷程度。

2.2不同濃度MS-222對異育銀鯽鰓中抗氧化酶活性的影響

2.2.1高濃度MS-222對異育銀鯽鰓中抗氧化酶活性的影響。

從圖1可見，高濃度MS-222（100mg/L）對異育銀鯽鰓中CAT、SOD和POD活性影響不顯著，當(dāng)魚體處于麻醉第Ⅵ期時，高濃度MS-222可顯著提高異育銀鯽鰓中GSH-Px活性和MDA含量（Plt;0.05），但復(fù)蘇0.5hGSH-Px活性下降，顯著高于CK（Plt;0.05）；復(fù)蘇6.0h后GSH-Px活性與CK差異不顯著（Pgt;0.05），均復(fù)蘇到麻醉前水平。復(fù)蘇0.5hMDA含量與CK差異不顯著（Pgt;0.05），復(fù)蘇到麻醉前水平。

2.2.2低濃度MS-222對異育銀鯽鰓中抗氧化酶活性的影響。

從圖2可見，低濃度MS-222（60mg/L）對異育銀鯽鰓中CAT、SOD、POD活性和MDA含量影響不顯著（Pgt;0.05），但顯著影響GSH-Px活性（P＜0.05）。低濃度MS-222麻醉異育銀鯽后，鰓中GSH-Px活性顯著升高，復(fù)蘇0.5h后GSH-Px活性下降，但仍顯著高于CK（P＜0.05），復(fù)蘇6.0h時復(fù)蘇至麻醉前水平。

高濃度組深度麻醉時異育銀鯽鰓中GSH-Px活性和MDA含量升高水平高于低濃度組，其分別為CK的4.71倍和1.66倍，而低濃度組MDA含量無明顯變化，GSH活性僅為CK2.69倍；高濃度組復(fù)蘇0.5h時GSH-Px活性升高水平低于低濃度組，高濃度組和低濃度組分別為CK的2.59倍和3.14倍。

2.3不同MS-222濃度對異育銀鯽鰓中抗氧化相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響

2.3.1高濃度MS-222對異育銀鯽鰓中抗氧化相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響。從圖3可見，

高濃度MS-222麻醉異育銀鯽5min后，鰓中NQO、TPJ和LYZ的mRNA相對表達(dá)量無顯著差異，而且復(fù)蘇0.5h和6.0h后，這些基因的相對表達(dá)量仍無顯著差異，也就是說這些基因的相對表達(dá)量不受MS-222麻醉的影響。高濃度MS-222麻醉后（0h），基因HSP70、keap1、MAPK3、PIK3A1、nrf1和caspase3的mRNA相對表達(dá)量顯著上調(diào)（P＜0.05），keap1、MAPK3、PIK3A1和caspase3的相對表達(dá)量分別上調(diào)了6.25、2.47、3.06和2.87倍；放入清水復(fù)蘇后，這些基因的相對表達(dá)量逐漸下調(diào)，復(fù)蘇6.0h時復(fù)蘇到麻醉前水平。

2.3.2低濃度MS-222對異育銀鯽鰓中抗氧化相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響。從圖4可見，低濃度MS-222麻醉異育銀鯽后，鰓中HSP70、caspase3、TPJ和LYZ基因的mRNA相對表達(dá)量無顯著差異，而且復(fù)蘇0.5h和6.0h后，這些基因的相對表達(dá)量仍無顯著差異，也就是說這些基因的相對表達(dá)量不受MS-222麻醉的影響。從圖4可見，低濃度MS-222麻醉后（0h），基因NQO、keap1、MAPK3、PIK3A1、nrf1的mRNA相對表達(dá)量顯著上調(diào)（P＜0.05），表達(dá)量上調(diào)最高的是PIK3A其次為NQO，分別上調(diào)了10.5倍和3.19倍；放入清水復(fù)蘇后，這些基因的相對表達(dá)量逐漸下調(diào)，復(fù)蘇6.0h時復(fù)蘇至麻醉前水平。

與低濃度組相比，高濃度組HSP70和caspase3表達(dá)量顯著上調(diào)，而低濃度組無顯著變化；相對低濃度麻醉組，除NQO、PIK3A1外，高濃度組相對表達(dá)量的上調(diào)倍數(shù)更高。

3結(jié)論

麻醉劑濃度對魚類的麻醉效果產(chǎn)生直接影響，濃度過低易引起魚類的應(yīng)激反應(yīng)，濃度過高則容易引起魚體鰓蓋張合停止，休克窒息，甚至死亡^［17］。因此，確定不同條件下異育銀鯽最適麻醉濃度對運輸以及試驗工作的有效開展具有重要意義。已有研究表明，體質(zhì)量為（97.97±9.56） g的大黃魚在水溫為（16±1） ℃下，MS-222質(zhì)量濃度為50～60 mg/L時，魚體能進(jìn)入麻醉Ⅱ期，麻醉24 h后大黃魚幼魚復(fù)蘇率為100%^［12］；適用于運輸在水溫8 ℃條件下，體質(zhì)量為0.5 kg的大菱鲆（Scophthalmus maximus）的MS-222 濃度為40 mg/L^［18］；該研究中在MS-222質(zhì)量濃度為60 mg /L時，魚體能夠進(jìn)入麻醉第Ⅱ期，麻醉24 h后異育銀鯽復(fù)蘇率為100%，這與章霞等^［12］研究結(jié)果一致，卻低于羅虎魚（Rohu labeo rohita）幼魚的最適麻醉濃度（125 mg/L）^［19］，高于黃顙魚的最適麻醉濃度（20 mg/L）^［20］，這種差異與魚種、個體大小有關(guān)。該研究中，體質(zhì)量為（5.88±0.78）g的異育銀鯽在水溫為（25.0±0.5）℃下，使用質(zhì)量濃度為100 mg/L MS-222麻醉3～5 min可進(jìn)入麻醉第Ⅳ期，存活率為100%；對于體質(zhì)量為（0.97±0.45） g的圓尾魚（Cyclopterus lumpus），在水溫12 ℃下，60 mg/L MS-222麻醉3～5 min后，魚體可進(jìn)入麻醉第Ⅱ期，存活率為100%^［8］。因此，在飼養(yǎng)、繁育、捕撈、運輸、銷售以及試驗過程中需輔以科學(xué)理論作為參考，進(jìn)行多次嘗試再用藥。已有研究表明，麻醉Ⅳ期是試驗操作的最佳時期^［14，7］，麻醉Ⅱ期是運輸?shù)倪m宜時期^{［15，16］}。因此，異育銀鯽運輸?shù)壬a(chǎn)實踐活動時，筆者建議使用60 mg/L MS-222進(jìn)行淺度麻醉較為適宜；短期科研試驗操作時，建議選用濃度小于或接近于100 mg/L MS-222進(jìn)行深度麻醉較為適宜，而且復(fù)蘇后對機(jī)體影響較小。

MS-222是一種良好的麻醉劑，對異育銀鯽鰓中抗氧化酶活性影響較小，主要影響GSH-Px活性，CAT、SOD和POD活性未發(fā)生顯著變化。當(dāng)魚體處于壓力環(huán)境下，會導(dǎo)致活性氧（ROS）水平的急劇增加，而活性氧水平的增加會導(dǎo)致蛋白質(zhì)損傷、DNA突變和酶失活等一系列細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的損害，即氧化應(yīng)激^［21］，ROS是常見的機(jī)體損傷指標(biāo)。復(fù)蘇期0 h時，GSH-Px活性和MDA含量顯著上升（P＜0.05），并在0.5 h呈下降趨勢，故可推測復(fù)蘇期0 h時異育銀鯽的機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)；復(fù)蘇期0.5 h GSH-Px活性和MDA含量下降，但仍高于CK。因此該試驗結(jié)果表明，100 mg/L MS-222對異育銀鯽抗氧化酶活力有增強(qiáng)作用，這是由于谷胱甘肽（GSH）幫助生物體維持正常的免疫系統(tǒng)功能，是體內(nèi)清除H2O2和多種有機(jī)氫過氧化物的重要酶，具有抗氧化和解毒作用^［22］。MS-222麻醉使魚體產(chǎn)生了應(yīng)激反應(yīng)，復(fù)蘇前期呼吸加快產(chǎn)生大量的自由基，引起GSH-Px活性上升。而MDA作為脂質(zhì)過氧化的主要產(chǎn)物之一，其可對生物膜產(chǎn)生損傷，與蛋白結(jié)合引起蛋白質(zhì)分子內(nèi)和分子間的交聯(lián)，使其具有細(xì)胞毒性^［23］，MDA含量上升同樣可以表明，高濃度MS-222麻醉會對異育銀鯽鰓產(chǎn)生一定的氧化應(yīng)激，但這種應(yīng)激在復(fù)蘇0.5 h后出現(xiàn)弱化的趨勢，復(fù)蘇6.0 h下降至對照水平。對比高濃度麻醉結(jié)果，60 mg/L MS-222對抗氧化指標(biāo)的影響較小，此時魚體生理機(jī)能基本為正常水平。由此可見，低濃度MS-222可引起輕微的氧化應(yīng)激，100 mg/L MS-222對異育銀鯽鰓的影響是可復(fù)蘇的，此時魚體生理機(jī)能尚能復(fù)蘇至正常水平，這與MS-22作用金頭鯛（Sparus aurata L.）的研究結(jié)果相似^［24］。

MS-222深度麻醉時異育銀鯽的一些基因表達(dá)上調(diào)，但隨著復(fù)蘇時間的延長，基因表達(dá)量與對照組差異不顯著。HSP70具有抗氧化活性，可使機(jī)體內(nèi)源性抗氧化劑的合成和釋放增加^［25］。HSPs及其結(jié)合物可以激活蛋白激酶，增強(qiáng)蛋白酶活性，促進(jìn)ATF生成SOD，從而使細(xì)胞免受或減輕過氧化物造成的損害^［25］。MS-222 100 mg/L試驗中HSP70在復(fù)蘇期0 h時的表達(dá)量顯著上調(diào)（P＜0.05），隨著復(fù)蘇時間下降，變化趨勢與抗氧化酶活性一致。Caspase3可通過與眾多蛋白因子的相互作用調(diào)控細(xì)胞凋亡^［26］，是細(xì)胞凋亡過程中最主要的終末剪切酶，也是CTL細(xì)胞殺傷機(jī)制的重要組成部分^［27］。PIK-akt作為細(xì)胞凋亡和癌變的重要信號通路，其失調(diào)會導(dǎo)致細(xì)胞癌變，主要機(jī)理是當(dāng)PIK-akt與生長因子受體結(jié)合后，可改變Akt的蛋白結(jié)構(gòu)并使其活化，并以磷酸化作用激活或抑制下游一系列底物如凋亡相關(guān)蛋白Caspase9活性，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及遷移等表型^［27］。PIK3CA基因編碼的PI3K擴(kuò)增或其他多種因素導(dǎo)致Akt的過度活化^［28］。該研究得出，高濃度深度麻醉顯著上調(diào)PIK3A1和caspase3的表達(dá)，說明鰓細(xì)胞凋亡上升，但隨復(fù)蘇時間推移逐漸下調(diào)，變化趨勢與抗氧化酶活性一致。nrf1屬于CNC調(diào)節(jié)蛋白家族，正常生理情況下，nrf1與其抑制劑Keap1結(jié)合，以非活性狀態(tài)存在于胞漿中^［29］。當(dāng)細(xì)胞受到活性氧或其他親核劑刺激后，nrf1與keap1解偶聯(lián)，活化的Nrf1轉(zhuǎn)運進(jìn)入細(xì)胞核，與Maf蛋白結(jié)合成異質(zhì)二聚體后與ARE結(jié)合，激活靶基因表達(dá)，調(diào)控Ⅱ相代謝酶、抗氧化酶或藥物轉(zhuǎn)運體的轉(zhuǎn)錄活性，從而發(fā)揮抗氧化損傷作用^［30-31］。因此，NQO1能夠阻止環(huán)境脅迫對DNA造成氧化損傷^［30-31］。nrf2是正常內(nèi)穩(wěn)態(tài)和氧化應(yīng)激條件下NQO1表達(dá)的中心控制因子。該研究中高濃度深度麻醉時keap1和nrf1的相對表達(dá)量均顯著上調(diào)（Plt;0.05），說明此時氧化應(yīng)激反應(yīng)激烈，生成的活性氧對細(xì)胞產(chǎn)生刺激，與抗氧化酶活性結(jié)果一致。

與高濃度麻醉組相比，低濃度麻醉對異育銀鯽抗氧化相對基因表達(dá)量的影響較小。低濃度麻醉復(fù)蘇0h時，NQO、keap1、MPAK3、nrf1和PIK3A1相對表達(dá)量顯著上調(diào)，隨復(fù)蘇時間延長逐漸下調(diào)，6.0h與CK差異不顯著；與高濃度麻醉情況不同的是HSP70無明顯變化，說明低濃度麻醉雖對異育銀鯽氧化應(yīng)激產(chǎn)生影響，但影響程度小于高濃度麻醉，與低濃度抗氧化酶活情況一致。該研究表明，適宜異育銀鯽的MS-222最適麻醉濃度為60～100mg/L，運輸?shù)葘嵺`作業(yè)時建議使用低濃度麻醉如60mg/L，科研試驗等短期快速麻醉時建議使用高濃度麻醉如100mg/L。

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