摘要：目的" 研究酶聯(lián)免疫吸附法在萍鄉(xiāng)市無(wú)償獻(xiàn)血人群人類(lèi)嗜T淋巴細(xì)胞病毒（HTLV）篩查結(jié)果中的應(yīng)用價(jià)值。方法" 選取2022年3月-2023年6月在我站無(wú)償獻(xiàn)血者12 172例為研究對(duì)象，首先采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行HTLV篩查，初檢陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試，復(fù)試陽(yáng)性標(biāo)本提取樣本血液核酸，使用熒光定量核酸擴(kuò)增（PCR）儀進(jìn)行病毒核酸擴(kuò)增檢驗(yàn)，采用ROC曲線(xiàn)分析酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV的靈敏度、特異度，Kappa檢驗(yàn)分析酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV與熒光定量PCR確證結(jié)果的一致性。結(jié)果" 12 172例無(wú)償獻(xiàn)血者通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法初篩發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性標(biāo)本29份，初篩陽(yáng)性率為0.24%；采用熒光定量PCR確證陽(yáng)性3份，確證陽(yáng)性率為0.0247%；酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV的靈敏度為66.67%、特異度為99.78%，ROC曲線(xiàn)顯示，AUC=1（Plt;0.05），Youden 指數(shù)最大為0.99；酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV陽(yáng)性率與熒光定量PCR確證陽(yáng)性結(jié)果具有一般的一致性（Kappa=0.257，P=0.025）。結(jié)論" 酶聯(lián)免疫吸附法在無(wú)償獻(xiàn)血人群中篩查HTLV具有一定價(jià)值，但是靈敏度相對(duì)較低，存在一定的漏診、誤診。因此，臨床應(yīng)結(jié)合核酸檢驗(yàn)方法對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)一步檢測(cè)，以提高檢驗(yàn)準(zhǔn)確率，進(jìn)而保障輸血安全。

關(guān)鍵詞：酶聯(lián)免疫吸附法；萍鄉(xiāng)市；無(wú)償獻(xiàn)血人群；HTLV篩查

中圖分類(lèi)號(hào)：R181.3；R446" " " " " " " " " " " " " " " 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A" " " " " " " " " " " " " "DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.17.034

文章編號(hào)：1006-1959（2024）17-0154-04

Application Value of Enzyme-linked Immunosorbent Assay in HTLV Screening

Results of Voluntary Blood Donors in Pingxiang City

WEI Juan

（Laboratory Department of Pingxiang Central Blood Station，Pingxiang 337000，Jiangxi，China）

Abstract：Objective" To study the application value of enzyme-linked immunosorbent assay in human T-lymphocyte virus （HTLV） screening results of unpaid blood donors in Pingxiang City.Methods" A total of 12 172 voluntary blood donors from March 2022 to June 2023 in our station were selected as the research objects. Firstly， enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was used to screen HTLV. The initial positive samples were retested by two holes. The blood nucleic acid of the retested positive samples was extracted， and the viral nucleic acid amplification test was carried out by fluorescence quantitative nucleic acid amplification （PCR） instrument. The sensitivity and specificity of enzyme-linked immunosorbent assay for screening HTLV were analyzed by ROC curve. Kappa test was used to analyze the consistency between enzyme-linked immunosorbent assay for screening HTLV and fluorescence quantitative PCR confirmation results.Results" Totally 29 positive samples were found in 12 172 voluntary blood donors by enzyme-linked immunosorbent assay， and the positive rate was 0.24%. Three positive samples were confirmed by fluorescence quantitative PCR， and the positive rate was 0.0247%. The sensitivity and specificity of enzyme-linked immunosorbent assay for screening HTLV were 66.67% and 99.78%， respectively. The ROC curve showed that AUC=1 （Plt;0.05）， and the maximum Youden index was 0.99. The positive rate of HTLV screening by enzyme-linked immunosorbent assay was generally consistent with the positive results confirmed by fluorescence quantitative PCR （Kappa=0.257， P=0.025）.Conclusion" Enzyme-linked immunosorbent assay has certain value in screening HTLV in voluntary blood donors， but the sensitivity is relatively low， and there are some missed diagnosis and misdiagnosis. Therefore， the clinical should be combined with nucleic acid test method for further detection of blood samples， in order to improve the accuracy of the test， so as to ensure the safety of blood transfusion.

Key words：Enzyme-linked immunosorbent assay;Pingxiang City;Voluntary blood donors;HTLV screening

輸血（blood transfusion）是以輸同型血為原則、通過(guò)靜脈輸注，搶救患者生命的一種急救措施，可幫助患者自身血液稀釋?zhuān)纳蒲貉h(huán)和新陳代謝[1]。但由于血液來(lái)源較為復(fù)雜，輸血也有可能導(dǎo)致艾滋病、乙肝、人類(lèi)嗜T淋巴細(xì)胞病毒（HTLV）等疾病傳播[2]。因此，如何保證血液安全是臨床值得重視的問(wèn)題。HTLV是人類(lèi)逆轉(zhuǎn)錄病毒，會(huì)引起T細(xì)胞白血病和毛細(xì)胞白血病的病原體[3]。相關(guān)研究顯示[4，5]，HTLV可通過(guò)輸血、注射或性接觸等途徑傳播，也可經(jīng)胎盤(pán)、產(chǎn)道或哺乳等垂直傳播。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是臨床進(jìn)行血液篩查的查用檢驗(yàn)方法，但是對(duì)HTLV的篩查價(jià)值尚存在爭(zhēng)議[5]。本研究選擇2022年3月-2023年6月我站無(wú)償獻(xiàn)血標(biāo)者12 172例血液樣本，了解萍鄉(xiāng)市無(wú)償獻(xiàn)血人群HTLV感染情況，考察對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者抗-HTLV的檢測(cè)是否作為該地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者血液篩查的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，并探究酶聯(lián)免疫吸附法在無(wú)償獻(xiàn)血人群HTLV篩查結(jié)果中應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料" 選取2022年3月-2023年6月萍鄉(xiāng)市中心血站無(wú)償獻(xiàn)血者12 172例為研究對(duì)象，男6172例，女6000例；年齡18～60歲，平均年齡（45.19±3.23）歲。每份血液樣品分別用7 ml和5 ml EDTA 真空抗凝管進(jìn)行留樣保存。12 h內(nèi)進(jìn)行離心，3000 r/min 離心15 min，取離心后上層血漿，加蓋，于2～8 ℃冷藏保存48 h，若保存時(shí)間長(zhǎng)于48 h，應(yīng)置于-20 ℃進(jìn)行保存，需長(zhǎng)期保存應(yīng)在-40 ℃的條件下進(jìn)行。

1.2方法

1.2.1儀器" TECAN EVO 200、TECAN EVO 150全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)，F(xiàn)AME24/30全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)，340RT酶標(biāo)儀。試劑：北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的抗-HTLV試劑盒。

1.2.2酶聯(lián)免疫吸附法" 采用北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的抗-HTLV試劑盒對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行HTLV篩查，初檢陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試。復(fù)試陽(yáng)性標(biāo)本提取樣本進(jìn)行確證檢驗(yàn)[6]。

1.2.3熒光定量核酸擴(kuò)增檢驗(yàn)" 對(duì)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)果為陰性的標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測(cè)。使用8∶1核酸混合模式進(jìn)行檢測(cè)，使用全自動(dòng)混樣機(jī)將8個(gè)血液標(biāo)本進(jìn)行混合，再進(jìn)行病毒核酸的提取和純化，使用 PCR擴(kuò)增技術(shù)對(duì)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)果為陰性和單試劑陽(yáng)性標(biāo)本實(shí)行HBV、HCV、HIV核酸檢測(cè)。若混檢呈非反應(yīng)性，則為陰性，混檢呈反應(yīng)性將標(biāo)本拆分檢測(cè)，拆分后的每個(gè)結(jié)果若呈非反應(yīng)性，判定為陰性，反之為陽(yáng)性[7，8]。

1.3觀察指標(biāo)" 觀察酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV陽(yáng)性率、熒光定量PCR確證陽(yáng)性率、酶聯(lián)免疫吸附法HTLV篩查結(jié)果的靈敏度、特異度，酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV與熒光定量PCR確證結(jié)果的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法" 采用統(tǒng)計(jì)軟件包SPSS 21.0版本對(duì)本研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用（x±s）表示符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，使用Kappa 檢驗(yàn)進(jìn)行一致性分析，Plt;0.05說(shuō)明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1酶聯(lián)免疫吸附法篩查結(jié)果" 12 172例無(wú)償獻(xiàn)血人群，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法初篩，陽(yáng)性標(biāo)本29份，初篩陽(yáng)性率為0.24%（29/12 172）。

2.2熒光定量PCR確證陽(yáng)性結(jié)果" 采用熒光定量PCR檢測(cè)確證，陽(yáng)性3份，確證陽(yáng)性率為0.0247%（3/12 143）。

2.3酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV的靈敏度、特異度" 酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血人群進(jìn)行HTLV篩查，靈敏度為66.67%、特異度為99.78%，見(jiàn)表1；ROC曲線(xiàn)分析顯示，AUC=1（Plt;0.05），Youden 指數(shù)最大為0.99，見(jiàn)圖1。

2.4酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV與熒光定量PCR確證結(jié)果的一致性" 酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV陽(yáng)性率與熒光定量PCR確證陽(yáng)性結(jié)果具有一般的一致性（Kappa=0.257，P=0.025）。

3討論

HTLV的篩查技術(shù)主要有核酸檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)兩種，核酸檢測(cè)方法最常用的是PCR法，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)不僅能判斷人血液中是否存在病毒基因序列，還可以精確評(píng)估病毒的載量[9，10]。 目前，HTLV 監(jiān)測(cè)工作的各試點(diǎn)篩查地區(qū)大多采用酶免試劑（單試劑）檢測(cè)獻(xiàn)血者血液標(biāo)本中的抗-HTLV，酶免反應(yīng)性標(biāo)本再使用PCR法進(jìn)行確證[11]。因?yàn)椋琀TLV 目前還不是國(guó)家法定的血液篩查項(xiàng)目，因而缺少有關(guān)檢測(cè)方法的研究，并且具體的篩查方法無(wú)明確標(biāo)準(zhǔn)，如何進(jìn)行科學(xué)合理選擇是當(dāng)前研究的重點(diǎn)問(wèn)題。酶聯(lián)免疫檢測(cè)具有試劑成本低，自動(dòng)化程度高，檢測(cè)通量大，實(shí)驗(yàn)耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)，是目前HTLV篩查最主要的方法[12，13]。然而目前關(guān)于酶聯(lián)免疫吸附法在無(wú)償獻(xiàn)血人群HTLV篩查中價(jià)值的相關(guān)研究存在差異，具體的初篩價(jià)值還需要臨床進(jìn)一步探究證實(shí)[14]。

本研究結(jié)果顯示，12 172例血液標(biāo)本通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法初篩，陽(yáng)性標(biāo)本29份，初篩陽(yáng)性率為0.24%，表明該地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血人群存在HTLV感染，且初篩陽(yáng)性率高于已有相關(guān)研究[15]。因此，在該地區(qū)增加HTLV篩查作為無(wú)償獻(xiàn)血檢測(cè)項(xiàng)目，以預(yù)防HTLV的感染，提高輸血安全性[16]。但是相關(guān)研究顯示[17]，造成HTLV假陽(yáng)性的影響因素較多，因此把對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者抗-HTLV的檢測(cè)作為無(wú)償獻(xiàn)血者血液篩查的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目需要待研究。故，為確保血液安全和受血者的健康，建議在非常規(guī)檢測(cè)HTLV的區(qū)域，使用去白細(xì)胞的血液成分或存放14 d以上的血液成分，有效阻斷HTLV的經(jīng)輸血傳播[18]。同時(shí)研究顯示，采用熒光定量PCR確證，陽(yáng)性3份，確證陽(yáng)性率為0.0247%，提示酶聯(lián)免疫吸附法初篩29份陽(yáng)性，核酸確診陽(yáng)性3份，可見(jiàn)核酸檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確，這也與孫曉通等[19]的研究相符。同時(shí)也進(jìn)一步表明酶聯(lián)免疫吸附法初篩存在較高的假陽(yáng)性。因此，如果只對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血人群血液標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)HTLV進(jìn)行篩查，存在假反應(yīng)性結(jié)果，不僅會(huì)導(dǎo)致血液資源的浪費(fèi)，而且還會(huì)給獻(xiàn)血者增加不必要的心理負(fù)擔(dān)，所以對(duì)酶聯(lián)免疫吸附法反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行確證具有重要的意義。本研究發(fā)現(xiàn)，酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血人群進(jìn)行HTLV篩查，靈敏度為66.67%、特異度為99.78%，ROC曲線(xiàn)分析顯示，AUC=1（Plt;0.05），Youden 指數(shù)最大為0.99，提示對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血人群應(yīng)用進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附法HTLV篩查敏感度較低，存在較高的假陽(yáng)性。對(duì)此，無(wú)償獻(xiàn)血人群HTLV篩查應(yīng)采用酶聯(lián)免疫吸附法聯(lián)合核酸檢測(cè)，以降低假陽(yáng)性。因?yàn)?，核酸檢測(cè)靈敏度和特異度均較高，可彌補(bǔ)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)的不足，減少漏檢情況的發(fā)生，使假陽(yáng)性標(biāo)本檢出率進(jìn)一步降低[20]。需要注意的是，雖然核酸檢測(cè)技術(shù)可以減少血液傳染病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，但該技術(shù)在我國(guó)仍處于起步階段，在標(biāo)本處理、操作流程等方面仍存在不足之處，臨床還需進(jìn)一步收集相關(guān)數(shù)據(jù)信息，提升血液篩查質(zhì)量，保證輸血安全性。此外，酶聯(lián)免疫吸附法篩查HTLV陽(yáng)性率與熒光定量PCR確證陽(yáng)性結(jié)果具有一般的一致性（Kappa=0.257，P=0.025），提示酶聯(lián)免疫吸附法篩查無(wú)償獻(xiàn)血人群HTLV陽(yáng)性率與熒光定量PCR確證陽(yáng)性率結(jié)果具有一般的一致性，容易造成誤診和漏診。

綜上所述，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)HTLV的靈敏度低，應(yīng)注意假陽(yáng)性問(wèn)題，臨床可通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)降低假陽(yáng)性，以提高HTLV篩查質(zhì)量、輸血安全，進(jìn)一步避免血液浪費(fèi)和無(wú)償獻(xiàn)血人群流失。

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收稿日期：2023-09-14；修回日期：2023-09-24

編輯/成森