摘 要：目的：利用薄層色譜（Thin-Layer Chromatography，TLC）鑒別方法確定杞苓氨基酸口服液的特征成分，制訂產(chǎn)品控制指標。方法：采用《中華人民共和國藥典》（2020版）薄層色譜法（通則0502）對主要成分枸杞子進行定性鑒別。結(jié)果：枸杞子的薄層色譜斑點清晰可見，在與對照藥材相應的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點，陰性樣品無干擾影響。結(jié)論：枸杞子鑒別方法操作簡便、重復性好、專屬性強，檢測結(jié)果穩(wěn)定可靠，可作為杞苓氨基酸口服液的質(zhì)量控制方法之一。

關鍵詞：口服液；薄層鑒別；枸杞子；方法學

Study on Thin-Layer Identification Method of Wolfberry in Qiling Amino Acid Oral Liquid

LIU Dewen1， CHEN Tianye1， ZHOU Yanru2，3， LIU Lianyu1， ZOU Song1， SHENG Wensheng1，2*

（1.Jiangxi Deshang Pharmaceutical Research Institute Co.， Ltd.， Zhangshu 331200， China;

2.Jiangxi Deshang Pharmaceutical Co.， Ltd.， Zhangshu 331200， China;

3.Jiangxi Guanglai Health Industry Co.， Ltd.， Zhangshu 331200， China）

Abstract： Objective： Identifying the characteristic components of Qiling amino acid oral liquid use thin-layer chromatography （TLC） method and establish product control indicators. Method： The thin-layer chromatography method （General Method No. 0502 in Pharmacopoeia of China， 2020 edition） was used to qualitatively identify the main components of wolfberry. Result： The thin-layer chromatography spots of wolfberry were clearly visible， and the same colored fluorescent spots appeared at the corresponding position with the control herbal materials. No interference was observed in the negative sample. Conclusion： The identification method for wolfberries is easy to operate， good repeatability， strong specificity， and stable and reliable detection results. It can be used as one of the quality control methods for Qiling amino acid oral liquid.

Keywords： oral liquid; thin-layer chromatography; Chinese wolfberry; methodology

枸杞子為茄科枸杞（Lycium barbarum L.）的干燥成熟果實，味甘，性平，入肝腎兩經(jīng)，滋陰而不致陰衰，興陽常使陽舉，更止消渴，尤補勞傷[1-2]。枸杞子富含多種活性成分，包括枸杞多糖、枸杞總黃酮、甜菜堿、類胡蘿卜素、多種維生素和氨基酸、微量元素（K、Na、Ca、Mg和Cu）等[3]，具有抗氧化、抗腫瘤、抗輻射、調(diào)節(jié)免疫和減輕炎性反應等作用[4]。枸杞子主要分布在華北、西北地區(qū)，其中寧夏枸杞作為久負盛名的傳統(tǒng)道地藥材，在寧夏已有千余年的栽培歷史，深受消費者青睞，被譽稱為“紅寶”，是珍貴的中藥材和高級滋補品[5]，現(xiàn)代醫(yī)藥多用于增強免疫功能、改善視網(wǎng)膜病變、溫腎助陽、延緩衰老等[6]。

杞苓氨基酸口服液參考《本草綱目》中經(jīng)典方（七寶美髯丸）[7]配伍，以復合氨基酸粉（來源蠶蛹）、枸杞子、茯苓為主要原料，以白砂糖、山梨酸、純化水為輔料，運用現(xiàn)代工藝精制而成。為更好控制產(chǎn)品原料采購、生產(chǎn)工藝和成品質(zhì)量，本文擬建立該產(chǎn)品中枸杞子的薄層色譜（Thin-Layer Chromatography，TLC）鑒別方法，為杞苓氨基酸口服液質(zhì)量檢驗提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

1.1.1 材料與試劑

寧夏枸杞子（江西康寶堂中藥飲片有限公司，批號：20231201）；枸杞子對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：121072-202112）；乙酸乙酯（佛山西隴化工有限公司，批號：221126-1，分析純）；三氯甲烷（佛山西隴化工有限公司，批號：220301-1，分析純）；甲苯（佛山西隴化工有限公司，批號：240117-2，分析純）；甲酸（佛山西隴化工有限公司，批號：230911-1，分析純）；硅膠G板（青島海洋化工有限公司、德國默克、煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司，規(guī)格：100 mm×100 mm）；杞苓氨基酸口服液（江西德致生物科技有限公司，批號：20240602、20240603、20240604和20240605），這4批次樣品下文依次用A、B、C和D代替；缺枸杞的杞苓氨基酸口服液（江西德致生物科技有限公司，批號：20240606），下文用E代替。

1.1.2 儀器

WFH-203B暗箱式紫外分析儀，杭州齊威儀器有限公司；BSA124S電子天平，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；SHZ-B水浴振蕩器，上海博訊醫(yī)療生物儀器股份有限公司；UPT-II-10T超純水機，武漢優(yōu)普儀器設備有限公司；HH-4恒溫水浴鍋，上海江星儀器有限公司；P-1型玻璃展開缸（100 mm×100 mm），河南沃林儀器設備有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 杞苓氨基酸口服液和陰性對照樣品的制備

①杞苓氨基酸口服液的制備。以復合氨基酸粉（來源蠶蛹）、枸杞子、茯苓、白砂糖、山梨酸和純化水為原輔料，經(jīng)提取（加8倍量水煎煮2次，每次2 h）、過濾、濃縮、混合、配制、濕熱滅菌（105 ℃，30 min）和包裝等主要工藝加工制成。②缺枸杞的杞苓氨基酸口服液的制備。按照杞苓氨基酸口服液的制備工藝步驟，制備時不添加枸杞子原料，對應最終樣品中不足的量用純化水補足，作為枸杞子鑒別陰性對照樣品。

1.2.2 枸杞子薄層鑒別供試品溶液制備

①參照《中華人民共和國藥典》（2020版）[8]一部中枸杞子鑒別方法，取杞苓氨基酸口服液A"10 mL，加入純化水25 mL，混合均勻，再加入乙酸乙酯15 mL，振搖提取，分取乙酸乙酯液，濃縮至1 mL，作為供試品溶液。②取枸杞子對照藥材0.5 g，加水35 mL，加熱煮沸15 min，放涼，過濾，濾液用乙酸乙酯15 mL振搖提取，分取乙酸乙酯液，濃縮至1 mL，作為對照藥材溶液。③另取缺枸杞的杞苓氨基酸口服液E 10 mL，后續(xù)處理按供試品溶液制備方法制備，作陰性對照品溶液。

1.2.3 方法學考察

（1）不同展開劑比例比較。按擬訂鑒別方法，選用杞苓氨基酸口服液A、枸杞子對照藥材溶液，考察3種展開劑體系的分離效果和方法適用性，展開劑1為乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3∶2∶1），展開劑2為甲苯-乙酸乙酯-甲酸（3∶7∶1）[9]，展開劑3為三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶3∶1）[10]，展開后顯色觀察。

（2）不同薄層硅膠板的比較。按擬訂鑒別方法，選A、B、C這3批杞苓氨基酸口服液和枸杞子對照藥材溶液，考察不同生產(chǎn)廠家來源[11]的G薄層硅膠板（青島海洋板、德國默克板、煙臺板），驗證方法耐用性。

（3）不同批次產(chǎn)品比較。按擬訂鑒別方法對B、C、D這3批次杞苓氨基酸口服液和枸杞子對照藥材溶液用青島海洋G薄層硅膠板進行枸杞子薄層鑒別方法驗證。

（4）不同實驗人員比較。按擬訂鑒別方法，安排兩名實驗員L、W，同一環(huán)境下選擇A、B、C這3批杞苓氨基酸口服液和枸杞子對照藥材溶液進行實驗，考察方法耐用性。

（5）不同實驗室間比較。將A、B、C這3批次杞苓氨基酸口服液送檢至具備CMA認定資質(zhì)的第三方檢驗機構(gòu)，開展實驗室間對比，按照擬訂方法開展驗證。

1.2.4 枸杞子的薄層鑒別鑒別方法確定

按照《中華人民共和國藥典》（2020版）四部通則0502中薄層色譜法進行試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學考察

2.1.1 不同展開劑比例比較

由圖1可知，3種不同展開劑體系展開后，薄層效果下熒光斑點清晰，分離度好[12]，方法適用性強。但展開劑3存在拖尾現(xiàn)象，分離效果不理想；展開劑2中使用的甲苯溶劑，氣味過重，毒害性較大。故確定展開劑1，即乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3∶2∶1）為本方法的最適展開劑體系。

2.1.2 不同薄層硅膠板的比較

由圖2可知，3種不同廠家來源的G薄層硅膠板，均能顯示清晰的熒光斑點，分離程度較好，在對照品相應位置上均能找到相同顏色熒光斑點，一定程度反映了擬訂方法的穩(wěn)定可靠。但考慮價格和采購便捷性，優(yōu)選青島海洋G薄層硅膠板為實驗用板。

2.1.3 不同批次產(chǎn)品比較

由圖3可知，不同批次的杞苓氨基酸口服液供試品色譜中，與對照藥材溶液色譜相應的位置上均顯相同顏色的熒光斑點，且斑點清晰可辨。這說明方法適用性強，重復性好，易于操作。

2.1.4 不同實驗人員比較

由圖4可知，不同實驗人員操作下得到杞苓氨基酸口服液供試品色譜中，與對照藥材溶液色譜相應的位置上均能顯相同顏色的熒光斑點，證明該方法穩(wěn)定，重復性好。

2.1.5 不同實驗室間比較

由圖5可知，第三方檢驗機構(gòu)使用3批次的杞苓氨基酸口服液和枸杞子對照藥材溶液開展鑒別實驗，3批次樣品均能在對照藥材色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點，外檢結(jié)果與研究結(jié)論保持一致，較好地證明了該實驗設計科學合理，方法進一步得到驗證。

2.2 枸杞子的鑒別方法確定

通過分析方法學考察研究結(jié)果，發(fā)現(xiàn)在紫外光365 nm檢視下，供試品薄層色譜在對應的位置，與枸杞子對照藥材顯示相同的熒光斑點，且陰性對照品溶液無對應相同斑點，可作為判斷依據(jù)[11]。而圖6實驗結(jié)果表明，主特征熒光斑點分離完好，清晰明亮，且陰性對照品無明顯干擾，擬訂方法科學合理，可作為產(chǎn)品中枸杞子的鑒別實驗方法。

3 討論

薄層色譜是中藥鑒別、保健食品成方制劑質(zhì)量標準的主要研究和控制手段之一[13]。該方法雖然簡單快捷，但易受到樣品處理、展開劑體系、薄層硅膠板廠家、實驗環(huán)境和實驗人員等條件的干擾影響。依據(jù)《中華人民共和國藥典（2020版）一部》枸杞子藥材鑒別實驗方法，取樣量0.5 g，而杞苓氨基酸口服液為在售成品，產(chǎn)品規(guī)格定為250 mL/瓶，所以對該產(chǎn)品的取樣量，根據(jù)配方添加量進行了換算，配方每瓶投料量為12.5 g枸杞，換算成產(chǎn)品檢測所用體積應取10 mL，同時為與藥典方法保持一致，取純化水補足至35 mL，再進行有機相萃??；杞苓氨基酸口服液產(chǎn)品生產(chǎn)制備中有煎煮、過濾工藝，故不額外進行加熱煮沸處理，對照藥材沿用藥典方法進行處理，不作變動；選擇乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3∶2∶1）為展開劑體系，發(fā)現(xiàn)熒光斑點分離完好、清晰，選用的青島海洋薄層硅膠板，分離度好，斑點明亮，經(jīng)濟實用，結(jié)果滿意。經(jīng)方法學驗證，薄層色譜鑒別方法的專屬性、重現(xiàn)性、耐用性均能滿足要求[14-15]。

4 結(jié)論

本研究以對照藥材為參照進行了杞苓氨基酸口服液中枸杞子的薄層色譜鑒別研究。產(chǎn)品中枸杞子鑒別實驗考察了供試品溶液的制備方法、展開劑體系、G薄層硅膠板廠家、不同批次、實驗環(huán)境和實驗人員等因素的影響，驗證了方法的專屬性、耐用性、重復性，結(jié)果表明，薄層色譜圖斑點清晰可見、分離明顯，陰性對照實驗無干擾，證明該方法重復性好、檢測結(jié)果可靠穩(wěn)定，產(chǎn)品中枸杞子鑒別方法可行，可作為杞苓氨基酸口服液質(zhì)量監(jiān)控指標方法，納入產(chǎn)品企業(yè)內(nèi)控標準。

參考文獻

[1]YANG J，WEI Y，DING J，et al.Research and application of Lycii Fructus in medicinal field[J].Chinese Herbal Medicines，2018，10（4）：339-352.

[2]吳勵萍，盧有媛，李海洋，等.不同干燥方法對枸杞子藥材多類型功效成分的影響及其分析評價[J].中草藥，2022，53（7）：2125-2136.

[3]劉倩，余意，梁琰，等.枸杞子活性成分及分析方法研究進展[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報，2018，20（11）：56-59.

[4]WANG Z W，SUN Q R，F(xiàn)ANG J X，et al.The anti-aging activity of Lycium barbarum polysaccharide extracted by yeast fermentation： in vivo and in vitro studies[J].Int Biol Macromol，2022，209：2032-2041.

[5]張磊，鄭國琦，滕迎鳳，等.不同產(chǎn)地寧夏枸杞果實品質(zhì)比較研究[J].西北藥學雜志，2012，27（3）：195-197.

[6]張敏，岳坤，姜交華，等.枸杞子及其有效成分的藥理作用研究進展[J].藥物評價研究，2023，46（7）：1611-1619.

[7]張晗.基于網(wǎng)絡藥理學、分子對接與實驗驗證探討七寶美髯丹延緩皮膚光老化的機制研究[D].武漢：湖北中醫(yī)藥大學，2021.

[8]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2020年版）：第1部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020.

[9]朱希，尹華，李月，等.補腎活血顆粒的薄層鑒別研究[J].江西中醫(yī)學院學報，2012，24（4）：33-37.

[10]賀清輝，羅進，杜軍，等.人參黃精膏質(zhì)量標準研究[J].廣東藥科大學學報，2022，38（3）：38-42.

[11]周軍，張茉，王杰.益肺清化膏質(zhì)量標準研究[J].天津藥學，2015，27（4）：10-13.

[12]徐芳琴，馬晨超，曹金一，等.露源膠囊中枸杞子、女貞子的薄層色譜鑒別研究[J].中國藥業(yè)，2016，25（20）：

57-59.

[13]李向軍，王超，王永，等.中藥薄層色譜影響因素分析及應用[J].中國藥業(yè)，2011，20（14）：13-15.

[14]陶善斌，汪電雷.穿黃消炎膠囊的質(zhì)量控制研究[J].安徽醫(yī)藥，2013，17（6）：932-934.

[15]劉珍.中藥薄層色譜指紋圖譜方法學基礎研究[D].成都：四川大學，2005.