摘 要：本文采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測水產(chǎn)品中的磺胺類獸藥殘留。結(jié)果表明，在2～800 ng·mL-1的線性范圍下，5種磺胺類獸藥的相關(guān)系數(shù)均大于0.99，說明方程的線性關(guān)系良好；5種磺胺類獸藥的方法檢出限為0.002～0.120 μg·kg-1，定量限為0.012～0.370 μg·kg-1；在25 μg·kg-1、50 μg·kg-1、100 μg·kg-1的加標水平下，5種磺胺類獸藥在水產(chǎn)品中的平均回收率為58.10%～124.37%，相對標準偏差為5.63%～15.03%。

關(guān)鍵詞：獸藥殘留檢測；液相色譜；質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)；流動相參數(shù)

Optimization of Veterinary Drug Residue Detection Method Based on Liquid Chromatography-Mass Spectrometry/Mass Spectrometry

LIN Yang

（Shenzhen Zhongjian Joint Testing Co.， Ltd.， Shenzhen 518000， China）

Abstract： This article uses liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry to detect residues of sulfonamide veterinary drugs in aquatic products. The results showed that within the linear range from 2 ng·mL-1 to 800 ng·mL-1， the correlation coefficients of the five sulfonamide veterinary drugs were all greater than 0.99， indicating a good linear relationship of the equation; the detection limit of five sulfonamide veterinary drugs rang from

0.002 μg·kg-1 to 0.120 μ g·kg-1， and the quantification limit range from 0.012 μg·kg-1 to 0.370 μg·kg-1; at spiked levels of 25 μg·kg-1， 50 μg·kg-1， and 100 μg·kg-1， the average recovery rates of five sulfonamide veterinary drugs in aquatic products was 58.10% to 124.37%， with a relative standard deviation of 5.63% to 15.03%.

Keywords： veterinary drug residue detection; liquid chromatography; mass spectrometry combined technology; mobile phase parameters

隨著食品生產(chǎn)規(guī)模的擴大，食品安全問題成為當前消費者關(guān)注的重點[1]?；前奉愃幬飳儆谒a(chǎn)品中常用獸藥成分之一，人體若攝入過量，可能導致泌尿系統(tǒng)受到影響，造成泌尿系統(tǒng)結(jié)石或堵塞，同時該成分會使人體產(chǎn)生過敏反應，刺激機體生成抗體[2]。為了解磺胺類獸藥成分在水產(chǎn)品中的殘留問題，早期研究采用免疫分析法檢測獸藥殘留量，但免疫分析法需要確定檢測獸藥的種類，通過抗原抗體結(jié)合識別的方法定量檢測殘留成分，對于多種獸藥成分的檢測效率不佳。氣相色譜方法對于多種成分的檢測效果較好，但該方法對于沸點較高的成分需要以衍生化產(chǎn)物形式檢測，衍生化成分可能導致檢測存在假陽性問題[3]。為了兼顧獸藥殘留檢測的精度和廣度，本文提出了基于液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的獸藥殘留檢測方法，通過優(yōu)化磺胺類獸藥成分的檢測參數(shù)與試劑條件得到一種檢測精度較高的水產(chǎn)品獸藥殘留檢測技術(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

鯽魚、沼蝦、黃鱔和河蟹，均購自成都水產(chǎn)農(nóng)貿(mào)市場。甲醇、乙腈和甲酸，色譜純，德國Merck公司；正己烷、乙酸乙酯、甲醇和乙腈，分析純，國藥集團；磺胺嘧啶（98.0%）、磺胺異惡唑（98.0%）、磺胺二甲基嘧啶（99.0%）、磺胺多辛（97.0%）、磺胺5-甲氧嘧啶（99.0%），德國Sigma公司。4000 Q-Trap質(zhì)譜儀，Applied Biosystems；HZT-A500電子天平，Mettler toledo；5810R離心機，Eppendorf；Acquity UPLC I-Class液相色譜儀、Waters Oasis HLB固相萃取裝置，Waters；N-EVAP 112氮吹儀，Organomation。

1.2 樣品前處理

①樣品預處理。分別將水產(chǎn)品（鯽魚、沼蝦、黃鱔和河蟹）分為3個樣品組，每個樣品組至少選取

3個個體進行等質(zhì)量取樣，取樣部位為內(nèi)臟組織、肌肉組織及外表皮組織。所取樣品裝入滅菌樣品管中冷凍保存，待檢測前取出。②混合渦旋。準確稱取一定量的待測樣品，加入對應比例的緩沖溶液進行混合渦旋。③萃取。萃取過程加入萃取劑提取樣品，先用渦旋儀振蕩1 min，再用超聲儀處理8 min。④凈化。待測樣品在4 ℃條件下離心，10 000 r·min-1，5 min。經(jīng)過樣品預處理、混合渦旋、萃取和凈化等操作提取樣本內(nèi)容，待上機檢測。

1.3 標準溶液的配制

①儲備液的配制。分別稱取5種磺胺類標準品各10 mg，用甲醇定容至10 mL，得儲備液的濃度為1 mg·mL-1，在-18 ℃下避光保存。②工作液的配制。以空白樣品進行樣品預處理獲取空白基質(zhì)溶液，用空白基質(zhì)溶液稀釋儲備液，配制標準系列工作液的濃度梯度為2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、400 ng·mL-1和800 ng·mL-1。

1.4 提取過程優(yōu)化

①提取試劑的優(yōu)化。分別選擇甲醇、乙酸乙酯和乙腈為提取試劑，通過加標實驗檢測提取效果。②填料的優(yōu)化。為了優(yōu)化獸藥的檢測效果，分別以常規(guī)填料與多壁碳納米填料為柱填充，檢測樣品回收率，確定納米填料的吸附效果。③淋洗液甲醇濃度及洗脫液甲醇用量的優(yōu)化。分別研究不同甲醇濃度（5%、10%、15%）和不同甲醇體積（4 mL、6 mL、8 mL和10 mL）對檢測回收率的影響。

1.5 儀器條件

（1）色譜條件。BEHC18色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μL）；流動相A相為5 mmol·L-1濃度的乙酸銨溶液-0.10%濃度甲醇；B相為甲醇；測試柱溫為30 ℃；樣品進液流速為0.6 mL·min-1，進液量體積為5 μL；樣品檢測溫度為10 ℃。

（2）質(zhì)譜條件。母離子（m/z）的掃描范圍為50～600，子離子（m/z）的檢測范圍為50～400[4-5]；質(zhì)譜檢測采用多反應監(jiān)測掃描模式；毛細管電壓為4.0 kV；脫溶劑氣流速為800 L·h-1，溫度為450 ℃；錐孔氣流速和電壓為30 L·h-1、40 V。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取過程優(yōu)化

①提取試劑的優(yōu)化。乙酸乙酯的樣品平均回收率為45.26%～62.38%，乙腈的樣品平均回收率為67.44%～81.45%，而甲醇的樣品平均回收率為81.3%～96.8%，相較于乙酸乙酯和乙腈的提取效果更好，因此最終選用甲醇為提取溶劑。②填料的優(yōu)化。常規(guī)填料的樣品平均回收率為47.15%，多壁碳納米填料的樣品平均回收率為89.42%，因此采用多壁碳納米作為實驗填料。③淋洗液甲醇濃度及洗脫液甲醇用量的優(yōu)化。當甲醇濃度為5%時，大部分磺胺類物質(zhì)的洗脫效率較低，平均回收率僅有30.15%～53.64%；當甲醇濃度為10%時，平均回收率為62.41%～85.15%；當甲醇濃度為15%時，平均回收率為61.33%～82.07%。8 mL甲醇用量的平均回收率為92.15%，4 mL、6 mL、10 mL甲醇用量的平均回收率分別為78.42%、84.04%、86.12%。根據(jù)綜合洗脫效果選擇10%的甲醇水溶液為淋洗液，洗脫過程的甲醇用量為8 mL。

2.2 獸藥殘留的線性方程、方法檢出限與定量限

以標準品的濃度（x）為橫軸，以標準品的檢測峰面積與內(nèi)標峰面積比值為縱軸（y），繪制標準曲線。由表1可知，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，說明線性關(guān)系良好；磺胺類獸藥的方法檢出限為0.002～

0.120 μg·kg-1，定量限為0.012～0.370 μg·kg-1。

2.3 磺胺類獸藥的回收率與精密度

在空白基質(zhì)中，分別添加5種磺胺類獸藥標準品（濃度分別為25 μg·kg-1、50 μg·kg-1、100 μg·kg-13個梯度），重復測定5次。由表2可知，5種磺胺類獸藥的平均回收率為58.10%～124.37%，相對標準偏差為5.63%～15.03%，其中磺胺多辛在加標濃度為25 μg·kg-1時的回收率略低，可能是由于磺胺多辛的回收難度較高，而低加標濃度下易受到基質(zhì)效應影響，導致測定回收率偏低。水產(chǎn)樣品中5種獸藥成分的檢測精密度存在差異，磺胺異惡唑獸藥成分在加標濃度為25 μg·kg-1和磺胺二甲基嘧啶獸藥成分在加標濃度為50 μg·kg-1時的相對標準偏差數(shù)據(jù)都偏高，可能是由于低加標濃度下，獸藥成分測定值受到基質(zhì)的影響，導致存在結(jié)果偏差，其他獸藥成分的檢測相對偏差都在10%的范圍內(nèi)，說明研究方法可以用于水產(chǎn)品中磺胺類獸藥的檢測。

2.4 水產(chǎn)品獸藥殘留檢測

為了評估本方法的實際檢測效果，抽樣選取水產(chǎn)品進行獸藥殘留的檢測，每組檢測的樣品數(shù)量不低于3個個體，得到5種磺胺類獸藥成分的檢測數(shù)據(jù)如圖1所示。圖1中顯示SDZ和SMD兩種獸藥成分在樣品中的檢出率較高。其他磺胺類獸藥成分的殘留量較低，符合檢測標準。水產(chǎn)品檢測結(jié)果中，沼蝦和鯽魚中的磺胺類獸藥成分的殘留量較低，黃鱔與河蟹中的磺胺類獸藥成分檢測量明顯超出殘留量要求。因此監(jiān)管部門可以根據(jù)檢測結(jié)果監(jiān)管水產(chǎn)用藥，規(guī)范養(yǎng)殖用藥標準，確保食品安全。

3 結(jié)論

本方法對于5種磺胺類獸藥在水產(chǎn)品中的平均回收率為58.10%～124.37%，不同加標濃度下的獸藥檢測相對標準偏差為5.63%～15.03%，說明研究方法能用來檢測磺胺類獸藥在水產(chǎn)品中的殘留量。

參考文獻

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