摘要：雞傳染性喉氣管炎（Avian Infectious Laryngotracheitis，AILT）是由傳染性喉氣管炎病毒引起的一種急性接觸性上部呼吸道傳染病。病雞臨床癥狀主要表現(xiàn)為呼吸困難、咳嗽。剖檢可見喉頭、氣管黏膜腫脹，嚴(yán)重時(shí)可見出血和血性栓塞。本研究通過人工攻毒雞傳染性喉氣管炎病毒致雞只發(fā)病，對(duì)比中藥方劑、緊急免疫接種、中藥方劑配合緊急接種三種方案的治療效果。驗(yàn)結(jié)果表明，中藥方劑配合緊急接種的治療效果優(yōu)于其他兩種方法，單獨(dú)使用中藥治療或緊急接種都不能獲得最理想的治療效果。

關(guān)鍵詞：雞傳染性喉氣管炎；中藥；治療方案

雞傳染性喉氣管炎的病原屬皰疹病毒科，α-皰疹病毒亞科，皰疹病毒I型，病毒核酸為雙股DNA[1]。雞是AILT（雞傳染性喉氣管炎）目前已知的唯一自然宿主。病雞臨床特征為呼吸困難，甩頭，咳嗽等。剖檢可見喉頭、氣管不同程度出血，嚴(yán)重時(shí)血塊和滲出物會(huì)形成栓塞。本病于1925年首次發(fā)現(xiàn)于美國，繼而在日本、澳大利亞和英國等十幾個(gè)國家發(fā)生，目前在世界各地均有發(fā)生[2]。由于本病傳播迅速，且在產(chǎn)蛋雞造成嚴(yán)重的產(chǎn)蛋下降，因而成為近年來國內(nèi)外危害蛋雞養(yǎng)殖業(yè)的重要傳染病之一。

由于部分康復(fù)雞以及無癥狀雞帶毒并不斷向外界排毒，導(dǎo)致本病不易被撲滅，因而本病在全國范圍內(nèi)常呈現(xiàn)出地方性流行。目前對(duì)AILT最有效的防控方法還是接種疫苗，但接種后會(huì)使雞帶毒，并向周圍環(huán)境排毒，造成非免疫雞群的感染。因此，未發(fā)生AILT的地區(qū)通常不接種疫苗，而這些地區(qū)一旦發(fā)生AILT，則會(huì)在一定區(qū)域內(nèi)迅速傳播[3]。隨著近年來AILT在學(xué)術(shù)界的被重視程度不斷提高，如何減少AILT引起的高死亡率和嚴(yán)重降低產(chǎn)蛋率給蛋雞養(yǎng)殖業(yè)帶來的危害成為一個(gè)重要的課題。

本研究對(duì)比了中藥方劑、免疫接種、中藥方劑配合緊急接種三種治療方法，通過人工攻毒試驗(yàn)對(duì)其治療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期得出具有臨床參考價(jià)值的AILT治療方案。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：30日齡SPF雞50只。

2）主要藥物與試劑。中藥方劑：板藍(lán)根、金銀花、白芷、魚腥草、貝母、杏仁、連翹、甘草、麻黃（中藥常規(guī)煎法提取液）。

疫苗：ILT活毒疫苗。

生理鹽水：0.9% NaCl水溶液，pH=7.4。

營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨10 g、牛肉膏3 g、氯化鈉5 g、瓊脂15 g，pH=7.4（每1 000 mL）。

鮮血瓊脂培養(yǎng)基：胰蛋白胨15 g、大豆蛋白胨5 g、氯化鈉5 g、瓊脂13 g，pH=7.4（每1 000 mL）。

1.2 試驗(yàn)方法

1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和菌毒種材料：SPF雞分為5組，飼養(yǎng)于雞隔離器中，每組10只。AILTV病毒為本實(shí)驗(yàn)室前期分離的強(qiáng)毒野毒株。

2）實(shí)驗(yàn)室診斷。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采集動(dòng)物組織，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

細(xì)菌培養(yǎng)：無菌采取氣管、氣管分泌物，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)72 h。采集眶下竇分泌物、鼻腔分泌物接種于含V因子的鮮血瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃下恒溫培養(yǎng)48 h[4]。

熒光定量PCR：將采集的組織研磨勻漿，提取DNA。引物序列為：5'-CCTTGCGTTTGAATTTTTCTGT-3'，5'-TTCGTGGGTTAGAGGTCTGT-3'。特異探針為：5'-FAM-CAGCTCGGTGACCCCATTCTA-BHQ-1-3'[5]。

3）人工攻毒。AILTV病毒用無菌生理鹽水稀釋至102 EID50/mL，以0.2 mL/只接種于40只SPF雞，接種方式為滴鼻、點(diǎn)眼各0.1 mL。將其分為4組，每組10只。第5組為健康對(duì)照組，以同樣方法接種無菌生理鹽水[6]。

4）中藥組方。目前認(rèn)為本病尚無特效藥物可供使用，高免血清效果比較理想，但成本過高，沒有經(jīng)濟(jì)價(jià)值。臨床上治療本病一般采用給予抗菌消炎的藥物，以盡量避免繼發(fā)感染[7]。近年來有關(guān)通過中藥療法進(jìn)行治療的報(bào)道逐漸增多，發(fā)現(xiàn)施用一些止咳平喘，清溫解表的方劑能有效治療本病[8]。

組方：板藍(lán)根29g，金銀花29g，白芷23g，魚腥草23g，貝母23g，杏仁23g，連翹17g，甘草17g，麻黃17g（藥物劑量皆為平均100只雞每天的用量）。給藥方法為藥物加水煎煮，所得藥液混飲給藥。參考李勝利，趙盼盼等[9]的中藥綜合應(yīng)用于AILT中的研究，選用能夠清解體內(nèi)熱毒、驅(qū)逐病邪、治療咽喉腫痛、止咳化痰的板藍(lán)根、金銀花、甘草等進(jìn)行組方，主要具有清熱、止咳、解毒功效[10]。中藥按照常規(guī)中藥煎法煎取藥液，混飲服用。

5）治療方法。對(duì)攻毒組雞只采取不同治療方法。第1組給予中藥方劑治療；第2組給予緊急接種；第3組給予中藥方劑配合緊急接種。第4組為攻毒對(duì)照組，第5組為健康對(duì)照組，均不予治療。具體治療方法為：中藥方劑混飲，平均0.5 mL/只，1次/天。AILT緊急接種（接種方式為單側(cè)眼、鼻各1滴），1次/天。觀察10天內(nèi)各組的發(fā)病和死亡情況并記錄。

6）療效判斷標(biāo)準(zhǔn)。將治療效果分為治愈、有效和無效三個(gè)等級(jí)。若雞群咳嗽、啰音消失，采食量恢復(fù)正常，產(chǎn)蛋率回升，雞只呼吸正常，呼吸困難消失，甩頭、咳血痰現(xiàn)象消失，精神恢復(fù)正常，則判定為治愈；雞群咳嗽、啰音減輕，采食量回升，雞只呼吸困難減輕，甩頭、咳血痰現(xiàn)象基本消失，精神恢復(fù)正常，則判定為有效；雞群咳嗽、啰音逐漸加重，采食量下降，產(chǎn)蛋率下降，雞只呼吸困難加重，咳血痰現(xiàn)象增多，精神沉郁乃至死亡，判定為無效。治愈率=治愈數(shù)量/雞總數(shù)×100%；有效率=（有效數(shù)量+治愈數(shù)量）/雞總數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌培養(yǎng)

所有樣品在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)72 h后無細(xì)菌生長(zhǎng)，鮮血瓊脂培養(yǎng)基上48 h后無細(xì)菌生長(zhǎng)。結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)雞無細(xì)菌混合感染，無副雞嗜血桿菌存在。

2.2 熒光定量PCR

攻毒對(duì)照組樣品均出現(xiàn)特異性曲線，表明實(shí)驗(yàn)雞存在雞傳染性喉氣管炎感染。

2.3 人工攻毒試驗(yàn)

通過對(duì)人工攻毒試驗(yàn)的治療結(jié)果進(jìn)行觀察，評(píng)價(jià)治療效果，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表1。

3 討論

3.1 人工攻毒試驗(yàn)

通過各組試驗(yàn)雞死亡率可以看出，第一組中藥方劑治療的雞10只，無效3只，有效率70.0%；第二組緊急接種治療的雞10只，無效4只，有效率60.0%；第三組綜合療法組治療的雞10只，無效0只，有效率100.0%；第四組攻毒對(duì)照組雞10只，無效10只，有效率0%。第五組健康對(duì)照組雞只未出現(xiàn)死亡?？梢园l(fā)現(xiàn)通過綜合療法治療的雞，有效率高于其他三組。而單純采取中藥療法或西醫(yī)療法治療的雞，能起到一定效果，但不如采取綜合療法效果好。

3.2 關(guān)于中藥制劑在疫病治療中的現(xiàn)狀

隨著現(xiàn)代中醫(yī)藥的發(fā)展，以及抗藥菌株的不斷產(chǎn)生導(dǎo)致的西藥在臨床上越來越不盡如人意，同時(shí)在畜牧養(yǎng)殖業(yè)西藥針對(duì)病毒性疾病存在各個(gè)方面的不足。因此，中藥在畜牧業(yè)的應(yīng)用越來越得到重視。中藥逐漸成為目前臨床上治療病毒性疾病的最佳選擇，而且隨著中藥化學(xué)的發(fā)展，人們對(duì)中藥的認(rèn)識(shí)逐漸加深，中藥在過去表現(xiàn)出的一系列缺陷正在逐步被攻克。中藥具有多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，能夠產(chǎn)生調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力，抑制病毒的復(fù)制增殖，阻止病毒致細(xì)胞病變，改善臨床癥狀等多重效果，在治療病毒性疾病上得到廣泛應(yīng)用[11]。

3.3 中藥西用與中西醫(yī)結(jié)合療法的應(yīng)用前景

本次研究中使用的中藥制劑，為通過化學(xué)方法對(duì)中藥材有效成分進(jìn)行萃取和提純。區(qū)別于傳統(tǒng)的中藥粉劑、水劑等，經(jīng)過提純的中藥萃取液，其有效成分的濃度得到了大幅提升，有助于提高其在治療中的效果。中藥西用解決了長(zhǎng)期以來由于有效成分含量不足，導(dǎo)致的中藥見效慢、效果不明顯等缺陷，提高了中藥的臨床應(yīng)用價(jià)值。有研究顯示，將傳統(tǒng)中藥制劑以不同給藥途徑綜合應(yīng)用于患病動(dòng)物，能夠達(dá)到很好的治療效果，也是通過提高其有效成分的劑量而提高治療效果。

然而實(shí)驗(yàn)顯示，單純應(yīng)用中藥萃取劑仍然不能達(dá)到最佳治療效果。采用中西醫(yī)結(jié)合療法，以中藥制劑為主要治療手段，輔以西醫(yī)理論中的緊急接種，能夠達(dá)到更好的治療效果。韓梅英等[12]早在2006年就提出了中西醫(yī)結(jié)合治療AILT的治療思路，取得了良好效果。

3.4 需要進(jìn)一步開展的工作

受限于實(shí)驗(yàn)條件，本研究中使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量較少、樣本量小，這在一定程度上增加了隨機(jī)誤差對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。同時(shí)，在實(shí)際養(yǎng)殖環(huán)境中，動(dòng)物會(huì)受到更復(fù)雜的環(huán)境壓力的影響，因此本研究所提出的治療方法在實(shí)際生產(chǎn)中的有效性仍待田間試驗(yàn)論證。

4 結(jié)論

本研究對(duì)比了三種方案對(duì)AILT的治療效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：AILT感染后，發(fā)病率100%；采用中藥治療方法有效率為70%；采用緊急免疫接種，有效率為60%；同時(shí)采用兩種方案進(jìn)行綜合治療，有效率為100%。中西醫(yī)結(jié)合的綜合療法比單純使用一種療法的治療效果更好。

參考文獻(xiàn)：

[1] C L KEELER， J W HAZEL， J E HASTINGS， et al. American association of avian pathologists allen press restriction endonuclease analysis of delmarva field isolates of infectious laryngotracheitis[J].Avian Diseases， 1993，37：418-426.

[2] 羅滿林.動(dòng)物傳染病學(xué)[M].北京：中國林業(yè)出版社，2013：360-363.

[3] 鄧素平，鄭繼方，羅永江，等.中藥防治雞傳染性喉氣管炎的研究進(jìn)展[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（9）：2275-2278.

[4] 范根成，杜元釗，朱萬光，等.雞傳染性喉氣管炎的診斷報(bào)告[J].中國動(dòng)物檢疫，1996（5）：17-18.

[5] 蔣露.雞傳染性喉氣管炎病毒致病性評(píng)價(jià)及2株分離株基因組序列分析[D].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2015.

[6] 謝菲，郝滿良，王慎行，等.雞傳染性喉氣管炎人工感染試驗(yàn)[J].中國畜牧獸醫(yī)，2008（3）：106-109.

[7] 肖建松，黃鋒，歐陽喜雄，等.一例傳染性雞喉氣管炎的診治及體會(huì)[J].湖南畜牧獸醫(yī)，2013（5）：26-28.

[8] 于云東.雞傳染性喉氣管炎疾病的診斷與治療[J].中國動(dòng)物保健，2017（4）：39-40.

[9] 李勝利，趙盼盼.試述中藥綜合應(yīng)用于雞喉氣管炎治療中的有效性[J].中國動(dòng)物保健，2016（9）：27-28.

[10] 劉振宇，王懷章.雞傳染性喉氣管炎采用中藥治療的效果觀察[J].中國動(dòng)物保健，2017（1）：22-23

[11] 李才應(yīng)，歐玉飛.中藥綜合治療雞喉氣管炎的效果分析[J].南方農(nóng)業(yè)，2015（36）：149-150.

[12] 韓梅英，劉國華，張瑞山.中西結(jié)合治療雞傳染性喉氣管炎[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2007（3）：56-57.