【摘 要】目的：探索人臍帶間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基（human umbilical cord mesenchymal stem cell conditional medium，uMSCCM）對放創(chuàng)復合傷（combined radiation and wound injury，CRWI）的促愈作用及相關(guān)機制。方法：42只雄性C57BL小鼠被隨機分成單純創(chuàng)傷組、放創(chuàng)復合傷對照組和放創(chuàng)復合傷治療組（n=14）；以4 Gy γ射線全身輻照聯(lián)合直徑1 cm全層皮膚缺損創(chuàng)面構(gòu)建小鼠皮膚放創(chuàng)復合傷模型，放創(chuàng)復合傷治療組隔天1次腹腔注射5 mg/kg uMSC-CM，其余2組注射等體積無血清DMEM培養(yǎng)基，采用拍照及HE染色評估創(chuàng)面愈合情況；CD31免疫熒光染色檢測血管形成；α-SMA免疫組化染色檢測細胞遷移；Masson染色檢測膠原沉積；Ki67和TUNEL染色檢測增殖和凋亡；Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白和 PI3K/AKT信號通路蛋白表達水平；小鼠皮膚原代成纖維細胞分為對照組、輻照組和輻照治療組；采用Edu染色和集落形成實驗檢測增殖；細胞劃痕和Transwell實驗檢測遷移；流式細胞術(shù)檢測凋亡；Western blot檢測PI3K/AKT信號通路蛋白表達水平。結(jié)果：uMSC-CM對CRWI創(chuàng)面具有明顯促愈效果（Plt;0.05）；組織學結(jié)果提示，uMSC-CM可促進CRWI創(chuàng)面血管生成、細胞遷移和膠原纖維沉積，進一步分析顯示uMSC-CM處理后創(chuàng)面細胞增殖增加且凋亡減少（Plt;0.05）；組織Western blot結(jié)果顯示，uMSC-CM促進CRWI創(chuàng)面PI3K、AKT蛋白磷酸化表達水平（Plt;0.05）；體外細胞實驗結(jié)果顯示，uMSC-CM促進輻照后小鼠真皮成纖維細胞增殖和遷移并減少凋亡（Plt;0.05）；Western blot結(jié)果顯示，uMSC-CM促進輻照后成纖維細胞PI3K、AKT蛋白磷酸化（Plt;0.05）。結(jié)論：uMSC-CM加速CRWI創(chuàng)面愈合，這可能與激活PI3K/AKT信號通路促進成纖維細胞的增殖、遷移并抑制凋亡有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】人臍帶間充質(zhì)干細胞；條件培養(yǎng)基；放創(chuàng)復合傷；創(chuàng)面愈合；PI3K/AKT信號通路

【中圖分類號】R641 【文獻標志碼】A 【收稿日期】2024-06-10

輻射損傷合并創(chuàng)傷稱為放創(chuàng)復合傷（combinedradiation and wound injury，CRWI），多發(fā)生在臨床腫瘤患者放療后手術(shù)，也可見于核爆炸、核恐怖主義襲擊、核放射源暴露等事件，其顯著特點是傷口愈合延遲，甚至遷延不愈、反復潰爛，嚴重影響患者生活質(zhì)量，目前仍缺乏有效的治療手段[1]。多項研究提示間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cell，MSCs）在治療難愈性創(chuàng)面中具有巨大潛力，然而，MSCs因移植效率低、惡變風險高、免疫原性強和醫(yī)學倫理障礙等問題，限制其臨床廣泛應用[2-4]。最近研究發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基（mesenchymal stem cellconditioned medium，MSC-CM）具有與MSCs移植類似治療效果，且極大降低了上述免疫原性、惡變風險等問題，具有較好的臨床應用前景[5]。MSC-CM的療效通常受細胞來源、培養(yǎng)及提取方法、制備工藝等因素影響，因此，課題組前期自主建立了人臍帶間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基（human umbilical cordmesenchymal stem cell conditional medium， uMSCCM）的標準化制備流程和方法，發(fā)現(xiàn)其可促進慢性放射性皮膚潰瘍創(chuàng)面愈合[6-7]。然而，uMSC-CM 對CRWI創(chuàng)面愈合的影響尚未見相關(guān)報道，基于此，本研究通過構(gòu)建CRWI小鼠皮膚模型，明確uMSC-CM對CRWI的促愈作用及潛在機制，旨在為CRWI治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 動物

42只雄性6～8周C57BL小鼠，體質(zhì)量18～20 g，購于陸軍軍醫(yī)大學實驗動物中心，許可證號：SCXK（渝）2022-0011，購入后在SPF級動物房適應性喂養(yǎng)1周后進行動物實驗，動物實驗過程嚴格遵循動物福利“3R”原則，實驗方案通過陸軍軍醫(yī)大學動物倫理委員會批準（批號：AMUWEC2020688）。

1.2 方法

1.2.1 小鼠原代真皮成纖維細胞提取及培養(yǎng)方法 將新生乳鼠安樂死，乙醇浸泡消毒后，分離背部全層皮膚，胰酶4 ℃消化過夜，然后將皮膚真皮層組織剪碎，用1 mg/mL的膠原酶Ⅳ在37 ℃消化30 min，經(jīng)無菌濾網(wǎng)過濾、離心機1 200 r/min離心3 min后，用DMEM完全培養(yǎng)基重懸，接種于培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)在37 ℃含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中。

1.2.2 uMSC-CM的制備 將培養(yǎng)瓶中生長狀態(tài)良好、四代以內(nèi)、細胞密度為80%的人臍帶間充質(zhì)干細胞的細胞培養(yǎng)液更換為無血清DMEM培養(yǎng)基，并放入細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h，然后，收集培養(yǎng)瓶中的條件培養(yǎng)基，經(jīng)超濾膜4 ℃濃縮、0.22 μm除菌濾器過濾、超低溫冷凍4 h形成uMSC-CM凍干粉，最后，用DMEM 培養(yǎng)基稀釋成濃度為0.5 mg/mL、10 μg/mL分別用于動物及細胞實驗。

1.2.3 主要試劑 Masson染色液（南京建成，中國）；CD31兔抗、α-SMA 兔抗、Ki67 兔抗、555-山羊抗兔IgG（abcam，英國）；PI3K兔抗（Affinity，中國）、P-PI3K兔抗（正能，中國）；兔二步法試劑盒（中杉金橋，中國）；TUNEL 染色試劑盒（Roche，瑞士）；Edu-555細胞增殖檢測試劑盒、HRP標記山羊抗兔IgG（碧云天，中國）；AKT、P-AKT兔抗（CST，美國）；GAPDH、Bax兔抗（proteintech，中國）；Bcl-2兔抗（圣克魯斯，美國）；7-AAD、Annexin V-PE（BD，美國）。

1.2.4 動物實驗分組、放創(chuàng)復合傷動物模型構(gòu)建和處理措施 參考文獻[8]方法建立模型，隨機將實驗小鼠分為單純創(chuàng)傷組、放創(chuàng)復合傷對照組和放創(chuàng)復合傷治療組（n=14）。單純創(chuàng)傷組不輻照，其余2組給予單次4 Gy γ射線全身照射，輻照結(jié)束待小鼠麻醉后，用電動剃毛刀去掉背部毛發(fā)，在小鼠背部正中剪一直徑為1 cm的全層皮膚缺損創(chuàng)面，隨后治療組給予腹腔注射5 mg/kg uMSC-CM，單純創(chuàng)傷組、放創(chuàng)復合傷對照組注射等體積無血清DMEM培養(yǎng)基（1次/2 d），持續(xù)治療至14 d。分別于建模后4、15 d隨機安樂死7只小鼠，取背部創(chuàng)面皮膚及心、肝、脾、肺、腎等臟器，部分皮膚及臟器組織常規(guī)脫水、包埋后，制成4 μm病理切片，剩余組織放入-80 ℃冰箱冷凍保存以備用。

1.2.4.1 小鼠質(zhì)量稱量和創(chuàng)面愈合評價 模型構(gòu)建后0、4、7、10、15 d稱量小鼠質(zhì)量并拍攝創(chuàng)面照片，用Image J軟件計算創(chuàng)面愈合率[創(chuàng)面愈合率=（初始創(chuàng)面體積-當前創(chuàng)面體積）/初始創(chuàng)面體積×100%]。

1.2.4.2 HE 染色 病理切片經(jīng)二甲苯脫蠟和梯度乙醇水化，用蘇木素染液染色3 min，流水沖洗后，將切片放入1%鹽酸乙醇中分化10 s，然后置于60 ℃溫水中返藍1 min，接下來將切片放入伊紅染液中浸染20 s，烘干透明后封片，于顯微鏡下采集圖像。

1.2.4.3 Masson染色 病理切片經(jīng)常規(guī)脫蠟復水，用漿染液滴染60 s、分色液分色6 min、復染液滴染3 min，然后將切片烘干透明后封片，于顯微鏡下采集圖像。

1.2.4.4 免疫熒光染色 病理切片經(jīng)常規(guī)脫蠟復水，檸檬酸鈉抗原修復液高溫修復20 min、免疫染色封閉液室溫封閉10 min，4 ℃過夜孵育兔抗Ki67、兔抗CD31，接下來，室溫避光孵育山羊抗兔熒光二抗1 h，最后，DAPI染色液染核、抗熒光淬滅封片液封片，于熒光顯微鏡下采集圖像。

1.2.4.5 免疫組化染色 將常規(guī)脫蠟復水后的病理切片，放入EDTA抗原修復液中修復20 min，然后用內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑阻斷過氧化物酶，及免疫染色封閉液室溫封閉10 min，隨后，4 ℃過夜孵育兔抗α-SMA、室溫孵育HRP標記山羊抗兔IgG 1 h，接下來，用DAB顯色液顯色、蘇木素染核，最后將切片烘干透明后封片，于顯微鏡下采集圖像。

1.2.4.6 TUNEL染色 病理切片常規(guī)脫蠟復水后，用20 μg/mL蛋白酶K室溫孵育20 min，PBS清洗后，加入適量TUNEL工作液，在37 ℃孵箱中避光孵育40 min，隨后，用DAPI染色液染細胞核，最后加入抗熒光淬滅封片液封片并在熒光顯微鏡下采集圖像。

1.2.4.7 Western blot 用含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液在冰上提取總蛋白，并用BCA試劑盒進行上樣蛋白定量，然后凝膠電泳分離樣品并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，隨后4 ℃過夜孵育按照1∶1 000比例稀釋的兔抗GAPDH、Bax、Bcl-2、PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT，接下來室溫條件孵育按照1∶1 000比例稀釋的HRP標記的山羊抗兔二抗1 h，最后在化學發(fā)光條件下進行蛋白條帶顯色。

1.2.5 細胞實驗分組及處理措施 小鼠原代真皮成纖維細胞分為對照組、輻照組和輻照治療組。對照組不輻照，輻照組及輻照治療組給予4 Gy γ射線照射，輻照結(jié)束后，輻照治療組給予10 μg/mL的uMSC-CM。

1.2.5.1 Edu染色 各組細胞處理72 h后，向培養(yǎng)基中加入配好的Edu試劑，使其最終濃度為10 μmol/mL，在培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育2 h，然后用4% 多聚甲醛室溫固定15 min、0.3%Triton X-100室溫通透15 min、Click反應液室溫避光孵育30min、Hoechst室溫避光孵育10 min，最后用洗滌液清洗后在熒光顯微鏡下采集圖像。

1.2.5.2 集落形成實驗 各組細胞培養(yǎng)至9 d，用4%多聚甲醛固定10 min，然后結(jié)晶紫室溫染色10 min，隨后清洗后晾干并采集圖像。

1.2.5.3 細胞凋亡檢測 各組細胞處理72 h后，用胰酶消化并收集細胞，每個樣品加入5 μL PE和5 μL 7-AAD室溫避光染色20 min，然后用流式細胞儀檢測凋亡細胞比例。

1.2.5.4 細胞劃痕實驗 待接種于6孔板的各組細胞長滿后，用200 μL槍頭在6孔板上劃痕，分別于0、24 h在顯微鏡下拍照，并用Imaje J軟件計算24 h細胞的相對遷移率。

1.2.5.5 Transwell 實驗 將各組處理后的細胞懸液加入Transwell小室中，孵育24 h后取出，用4%多聚甲醛固定、結(jié)晶紫染色，PBS清洗后，于顯微鏡下觀察并采集圖像。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用GraphPad Prism 8.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，2組間比較采用t 檢驗，3組及以上采用單因素方差分析，進一步組間多重比較采用LSD-t法，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 uMSC-CM促進CRWI創(chuàng)面愈合

為了評估uMSC-CM對CRWI創(chuàng)面的促愈合作用，本研究采用如圖1A所示的實驗方案，在15 d的觀察周期中，與單純創(chuàng)傷組比較，放創(chuàng)復合傷對照組在各個時間點的創(chuàng)面愈合率均明顯降低，而uMSC-CM處理明顯促進CRWI的傷口愈合（F=17.470、14.410、18.320、44.500，P 放創(chuàng)復合傷對照組=0.000、0.000、0.000、0.000，P 放創(chuàng)復合傷治療組=0.000、0.000、0.006、0.000，圖1B）；接下來，通過HE染色評價創(chuàng)面愈合質(zhì)量，結(jié)果表明，與單純創(chuàng)傷組比較，放創(chuàng)復合傷對照組皮膚真皮和表皮成熟延遲，15 d未形成完整的皮膚結(jié)構(gòu)，創(chuàng)面仍有較多的肉芽組織和炎性細胞浸潤，而放創(chuàng)復合傷治療組15 d細胞排列整齊，形成較連續(xù)的真皮和表皮，且未見明顯的炎性浸潤（圖1C）；本研究治療期間對放創(chuàng)復合傷對照組和治療組小鼠的質(zhì)量進行測量，結(jié)果顯示，2組小鼠質(zhì)量變化差異無統(tǒng)計學意義（t=0.632、0.925、0.945、0.918，P=0.539、0.373、0.364、0.377，圖1D）。此外，放創(chuàng)復合傷對照組和治療組的重要臟器HE染色結(jié)果無明顯區(qū)別（圖1E）。以上結(jié)果表明，uMSCCM可以有效挽救輻射對傷口閉合的抑制效應，且不會造成明顯的毒副作用。

2.2 uMSC-CM促進CRWI創(chuàng)面血管生成、細胞遷移和膠原纖維沉積

本研究通過免疫熒光染色檢測了新生血管特異性標志物CD31 的表達，結(jié)果顯示，與單純創(chuàng)傷組比較，放創(chuàng)復合傷對照組15 d 新生血管數(shù)量減少，而uMSC-CM 治療明顯增加創(chuàng)面新生血管的形成（F=17.020，P 放創(chuàng)復合傷對照組=0.002，P 放創(chuàng)復合傷治療組=0.034，圖2A）；α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）在創(chuàng)面修復過程中促進細胞遷移并收縮創(chuàng)面，結(jié)果表明，uMSC-CM 治療能明顯促進α-SMA 在CRWI創(chuàng)面中的表達（F=13.340，P 放創(chuàng)復合傷對照組=0.004，P 放創(chuàng)復合傷治療組=0.017，圖2B）；Masson染色結(jié)果顯示，與單純創(chuàng)傷組比較，放創(chuàng)復合傷對照組15 d膠原纖維數(shù)量減少，uMSC-CM處理明顯增加創(chuàng)面膠原纖維沉積（F=24.970，P 放創(chuàng)復合傷對照組=0.001，P 放創(chuàng)復合傷治療組=0.002，圖2C）。這些結(jié)果表明，uMSC-CM可促進CRWI創(chuàng)面血管生成、細胞遷移和膠原纖維沉積。

2.3 uMSC-CM 改善CRWI 創(chuàng)面細胞增殖抑制并減少細胞凋亡

Ki67免疫熒光結(jié)果顯示，治療4 d，與單純創(chuàng)傷組比較，放創(chuàng)復合傷對照組細胞增殖水平降低，而uMSC-CM能夠改善CRWI 創(chuàng)面細胞的增殖抑制（F=20.990，P 放創(chuàng)復合傷對照組=0.001，P 放創(chuàng)復合傷治療組=0.031）；治療15 d，隨著單純創(chuàng)傷組和放創(chuàng)復合傷治療組的創(chuàng)面修復結(jié)束，細胞增殖水平逐漸恢復到正常水平，而放創(chuàng)復合傷對照組由于尚未完成創(chuàng)面組織修復，從而出現(xiàn)放創(chuàng)復合傷對照組在15 d的細胞增殖水平高于其余兩組，這進一步證實其增殖異常（F=11.470，P 放創(chuàng)復合傷對照組=0.006，P 放創(chuàng)復合傷治療組=0.026，圖3A）。TUNEL 染色結(jié)果顯示，與單純創(chuàng)傷組比較，放創(chuàng)復合傷對照組4 d和15 d細胞凋亡比例增加，而uMSC-CM治療有效減少CRWI創(chuàng)面細胞凋亡（F=115.800、17.540，P 放創(chuàng)復合傷對照組=0.000、0.003，P 放創(chuàng)復合傷治療組=0.000、0.005，圖3B），此外，Westen blot結(jié)果表明，uMSC-CM可降低凋亡相關(guān)蛋白Bax 的表達（F=48.690，P 放創(chuàng)復合傷對照組=0.000，P 放創(chuàng)復合傷治療組=0.000），并增加抗凋亡蛋白Bcl-2表達水平（F=13.300，P 放創(chuàng)復合傷對照組=0.004，P 放創(chuàng)復合傷治療組=0.047，圖3C）。本研究檢測了4 d各組皮膚創(chuàng)面組織PI3K/AKT通路蛋白表達水平，結(jié)果顯示，uMSC-CM能夠上調(diào)磷酸化PI3K和磷酸化AKT蛋白表達水平（F=84.410、8.812，P 放創(chuàng)復合傷對照組=0.000、0.016，P 放創(chuàng)復合傷治療組=0.000、0.025，圖3D）。這些結(jié)果表明，uMSC-CM可能通過激活PI3K/AKT信號通路，從而改善CRWI創(chuàng)面細胞增殖抑制并減少細胞凋亡。

2.4 uMSC-CM 促進輻照后成纖維細胞增殖、遷移并抑制凋亡

根據(jù)體內(nèi)實驗結(jié)果，本研究通過提取小鼠原代真皮成纖維細胞作為體外實驗研究對象，以進一步明確uMSC-CM對細胞增殖、遷移和凋亡的影響。Edu和集落形成實驗結(jié)果表明，與對照組比較，輻照后成纖維細胞增殖水平明顯降低，而uMSC-CM 可以挽救輻照對細胞的增殖抑制（F=47.520、43.890，P 輻照組=0.000，0.000，P 輻照治療組=0.000、0.009，圖4A、B）；細胞劃痕和Transwell試驗結(jié)果顯示，與對照組比較，輻照后成纖維細胞遷移能力明顯降低，而uMSC-CM可促進輻照后成纖維細胞遷移（F=20.020、100.500，P 輻照組=0.001、0.000，P 輻照治療組=0.015、0.000，圖4C、D）；接下來，通過流式細胞術(shù)檢測uMSC-CM對輻照后成纖維細胞凋亡的影響，如圖4E結(jié)果所示，uMSC-CM可以有效降低輻照后細胞凋亡比例（F=3671.000，P 輻照組=0.000，P 輻照治療組=0.000），最后，Westernblot結(jié)果顯示，uMSC-CM能夠上調(diào)P-PI3K和P-AKT蛋白表達水平（F=13.440、29.610，P 輻照組=0.037、0.001，P 輻照治療組=0.004、0.000，圖4F）；以上結(jié)果表明，uMSC-CM 促進輻照后成纖維細胞增殖和遷移，并減少凋亡，這可能與激活PI3K/AKT信號通路有關(guān)。

3 討 論

CRWI由于輻射和創(chuàng)傷的相互影響，使得創(chuàng)面愈合延遲，甚至難以閉合，多年以來人們研究了多種干預策略。然而，傳統(tǒng)的輻射保護劑不良反應大[9]；紅光治療尚缺乏統(tǒng)一、規(guī)范、標準的參數(shù)[10]；3D生物材料生產(chǎn)效率低、適應證受限、安全性不高[11]；維生素B12易引起皮膚不良反應[12]；中藥找尋、提取和分離活性成分困難[13]；瘦素[14]、生長因子[15]、生長激素釋放肽[16]半衰期短，不能在體內(nèi)持續(xù)、穩(wěn)定發(fā)揮作用。因此，臨床上迫切需要更加安全有效的治療方案。近年來，MSC-CM 作為新的無細胞療法，因在難愈性創(chuàng)面突出的治療效果越來越受到研究者的關(guān)注。

MSCs主要通過旁分泌因子介導發(fā)揮生物學效應[17-18]，已有研究報道MSC-CM保留了親本細胞的治療效果，含有大量生物活性因子，同時能夠最大限度地減少受體排斥反應，且滿足大量生產(chǎn)需求，以及對儲存和運輸要求條件較低[19]，此外，課題組前期研究結(jié)果表明uMSC-CM可促進慢性放射性皮膚潰瘍創(chuàng)面愈合[7]。因此，雖尚無uMSC-CM 促進CRWI創(chuàng)面愈合的相關(guān)研究報道，但基于課題組前期數(shù)據(jù)，從而推測uMSM-CM 在CRWI中具有治療效果。本研究結(jié)果表明，uMSC-CM 能夠明顯提高小鼠皮膚CRWI模型的創(chuàng)面愈合率和愈合質(zhì)量，且不會造成明顯的毒副作用。

CRWI創(chuàng)面難愈與輻射直接導致傷口修復過程中細胞增殖、遷移下降和凋亡增加有關(guān)，尤其是成纖維細胞增殖、遷移受抑會影響肉芽組織形成、傷口收縮、膠原纖維沉積和組織重塑[20]。Xia WZ等[21]研究表明，增強創(chuàng)面組織中成纖維細胞的增殖和遷移能力有利于小鼠皮膚創(chuàng)面修復。還有研究發(fā)現(xiàn)，MSC-CM可刺激成纖維細胞的增殖、遷移和分化為新的肌成纖維細胞，這是組織重塑所必需的[22]。Zhang B等[23]報道，人臍帶間充質(zhì)干細胞來源的外泌體可通過調(diào)節(jié)細胞增殖、遷移和凋亡，從而促進大鼠皮膚燒傷模型的傷口愈合。本研究結(jié)果表明uMSC-CM可促進膠原纖維沉積，并改善CRWI創(chuàng)面增殖能力降低，抑制細胞凋亡，進一步通過Edu、集落形成、細胞劃痕、Transwell和細胞凋亡檢測實驗結(jié)果表明，uMSC-CM 可促進輻照后成纖維細胞增殖、遷移及抑制凋亡。

PI3K/AKT信號通路是調(diào)節(jié)細胞增殖、遷移和凋亡的重要途徑，通常由血小板衍生因子和表皮生長因子與受體酪氨酸激酶結(jié)合而啟動，活化的PI3K將磷脂酰肌醇二磷酸磷酸化為磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸（phosphatidylinositol-3， 4， 5-triphosphate，PIP3），AKT通過3-磷酸肌醇依賴的蛋白1和雷帕霉素靶標C2 的磷酸化激活，然后與PIP3 結(jié)合，磷酸化的AKT 導致mTORC1 激活，進而調(diào)控促增殖和遷移mRNA 翻譯[24]。有研究表明，人羊膜來源的MSCCM通過上調(diào)P-AKT蛋白水平激活PI3K/AKT通路，從而促進細胞增殖并抑制凋亡，及加速小鼠皮膚燒傷模型的傷口愈合[25]。本研究結(jié)果表明，uMSC-CM可增加P-PI3K、P-AKT蛋白表達水平，進一步分析發(fā)現(xiàn)uMSC-CM可能通過激活PI3K/AKT信號通路，促進輻照后成纖維細胞增殖、遷移并抑制凋亡，從而加速CRWI創(chuàng)面愈合。

綜上所述，uMSC-CM 作為一種新的無細胞療法在CRWI創(chuàng)面治療中具有廣闊的應用前景，其促愈作用可能與激活PI3K/AKT信號通路促進成纖維細胞增殖、遷移和抑制凋亡有關(guān)，但CRWI由于輻射和創(chuàng)傷的相互作用使得傷口愈合過程非常復雜，uMSC-CM對CRWI創(chuàng)面愈合的影響還可能與其他信號通路和修復細胞激活有關(guān)，這將成為下一步研究工作的重點。

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（責任編輯：曾 玲）