【摘 要】目的：通過CRISPR Screen正向基因篩選技術(shù)，篩選出他莫昔芬耐藥靶點(diǎn)基因免疫球蛋白結(jié)合蛋白1（immunoglobulinbinding protein 1，IGBP1）。驗(yàn)證IGBP1在臨床乳腺癌患者腫瘤組織中是否高表達(dá)，并探討IGBP1對(duì)雌激素受體陽(yáng)性（ER+）乳腺癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和耐藥性等表型的影響，為診斷和治療提供潛在靶點(diǎn)。方法：應(yīng)用公共數(shù)據(jù)庫(kù)分析IGBP1在乳腺癌患者腫瘤組織及配對(duì)癌旁組織中的表達(dá)是否有所不同。Kaplan-Meier Plotter用于預(yù)測(cè)IGBP1對(duì)乳腺癌患者總體生存率（the overallsurvival，OS）是否有所影響。應(yīng)用慢病毒感染ER+乳腺癌細(xì)胞，再進(jìn)行功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證IGBP1過表達(dá)及敲低對(duì)ER+乳腺癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和耐藥性的影響。最后用公共數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定出可能與IGBP1正、負(fù)相關(guān)的基因。結(jié)果：公共數(shù)據(jù)庫(kù)的結(jié)果表明，IGBP1在乳腺癌組織中高表達(dá)。生存分析表明，IGBP1高表達(dá)的患者的OS較差。細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)顯示，過表達(dá)IGBP1的細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期明顯快于對(duì)照組細(xì)胞，耐藥性增強(qiáng)；而敲低IGBP1的結(jié)果相反。與IGBP1正相關(guān)的基因里有已知的癌基因如NOP53。結(jié)論：IGBP1在ER+乳腺癌中高表達(dá)，IGBP1的過表達(dá)和敲低均影響ER+乳腺癌細(xì)胞系的增殖、細(xì)胞周期和耐藥性，提示IGBP1在ER+乳腺癌中可能能夠改善其耐藥，表明IGBP1可能作為ER+乳腺癌的潛在治療靶點(diǎn)之一。

【關(guān)鍵詞】免疫球蛋白結(jié)合蛋白1；乳腺癌；雌激素受體陽(yáng)性；他莫昔芬耐藥

【中圖分類號(hào)】R737.9 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【收稿日期】2024-08-31

乳腺癌是最常見的惡性腫瘤之一。根據(jù)對(duì)中國(guó)女性的調(diào)查，乳腺癌在女性癌癥新增病例中排名第二[1]。根據(jù)2023圣加侖共識(shí)，在臨床治療中將癌癥主要分為4種分子亞型，即Luminal A型、LuminalB型、HER-2過表達(dá)型和TNBC型[2]。不同亞型的癌癥在危險(xiǎn)因素、發(fā)病率、治療敏感性和預(yù)后方面存在顯著差異[3，8]。其中，Luminal A型和Luminal B型乳腺癌可以從內(nèi)分泌治療中受益更多，因?yàn)樗鼈兊拇萍に厥荏w是陽(yáng)性的[9]，HER-2 過表達(dá)型對(duì)靶向治療更敏感[10-11]，而TNBC 型缺乏明確的靶點(diǎn)[12-13]。目前，內(nèi)分泌治療是ER+乳腺癌的主要藥物治療方法。

臨床實(shí)踐中常見的內(nèi)分泌治療藥物包括激素受體拮抗劑、激素受體降解劑和芳香化酶抑制劑[14]。激素受體拮抗劑如他莫昔芬在ER+乳腺癌患者內(nèi)分泌治療中的應(yīng)用大大改善了患者的預(yù)后。然而，約40% 接受他莫昔芬治療的患者會(huì)產(chǎn)生獲得性耐藥[15-16]。獲得性耐藥的出現(xiàn)對(duì)臨床患者的預(yù)后構(gòu)成了巨大威脅。他莫昔芬耐藥性仍然是ER+乳腺癌的臨床挑戰(zhàn)。近年來，ER的變化被認(rèn)為是他莫昔芬耐藥性的重要機(jī)制[14]，但是調(diào)節(jié)ER途徑的確切機(jī)制尚未完全明確。

免疫球蛋白結(jié)合蛋白1（immunoglobulin bindingprotein 1，IGBP1）參與抗原與特定B細(xì)胞受體的結(jié)合，主要是通過特異性結(jié)合蛋白磷酸酶2A（proteinphosphatase 2A，PP2A），并調(diào)節(jié)PP2A 的催化活性[17]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，IGBP1通過PP2A途徑激活細(xì)胞周期并抑制細(xì)胞凋亡[18]。IGBP1的高表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌[19]和肺腺癌等疾病的預(yù)后不良有關(guān)[20-22]。來源于該基因的LncRNA IGBP1-AS1 的過表達(dá)在體內(nèi)外對(duì)乳腺癌細(xì)胞的侵襲和增殖具有抑制作用[23]。這表明IGBP1在癌細(xì)胞中可能起癌癥啟動(dòng)子的作用。通過這項(xiàng)研究，本課題組表明靶向IGBP1可以改善ER+乳腺癌的耐藥性，表明IGBP1可能是ER+乳腺癌的潛在治療靶點(diǎn)之一。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞培養(yǎng)

人ER+乳腺癌細(xì)胞（MCF-7和T47D）和三陰性乳腺癌細(xì)胞（BT-549和MDA-MB-231）在培養(yǎng)箱中以5% CO2和37 ℃維持在補(bǔ)充有丙酮酸鹽的高葡萄糖DMEM（Gibco，ThermoFisher Scientific，Waltham，MA，USA）、10% 胎牛血清（FBS）（ExCell Bio）和1% 青霉素/鏈霉素（Thermo Fisher Scientific，Walterham，MA，US）中。

1.2 RNA分離、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和定量實(shí)時(shí)PCR

使用總RNA 提取試劑盒（Tiangen，Beijing，China）從培養(yǎng)的細(xì)胞中提取總RNA，然后用4×RT混合物（MedChemEx?press，Shanghai，China）進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。定量RT-PCR在10 μLPCR 混合物中使用SYBR Premix Ex TaqTM Ⅱ（MedChemEx?press）在Bio-Rad CFX96 實(shí)時(shí)PCR 系統(tǒng)（Bio-Rad Laborato?ries，Inc，Hercules，CA，USA）上進(jìn)行。熱循環(huán)條件包括在95 ℃下進(jìn)行2 min的初始循環(huán)，然后在95 ℃、58 ℃和72 ℃下分別進(jìn)行39個(gè)循環(huán)30 s、30 s和20 s。每組進(jìn)行3次獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)。將相對(duì)基因表達(dá)以GAPDH標(biāo)化，并使用2?ΔΔCt方法進(jìn)行評(píng)估。

1.3 蛋白質(zhì)印跡分析

使用了以下抗體：抗IGBP1（IGBP1 多克隆抗體）（Pro?teintech，14952-1-AP）、抗GAPDH（Proteinteech，60004-1-Ig）、抗CCND1（Proteintetech，60186-1-Ig），抗P21（Protein?tench，10355-1-AP）和抗ER（Proteinteght，21244-1-AP）。用預(yù)冷PBS（4 ℃）洗滌2次后，在冰上獲取細(xì)胞。使用含有蛋白酶抑制劑（Beyotime，Shanghai，China）和磷酸酶抑制劑（Beyotime，Shanghai，China）的RIPA 裂解緩沖液（Beyotime，Shanghai，China）制備蛋白質(zhì)裂解液，并使用BCA檢測(cè)試劑盒（Beyotome，Shanghai，China）測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。通過10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS–PAGE）（Bio-Rad Laboratories，Inc.）分離每組提取的蛋白質(zhì)（20 μg/10 μL/泳道）。在室溫下用快速阻斷緩沖液（New Cell amp; MolecularBiotech，Suzhou，China）阻斷10 min 后，將膜與特異性一抗（稀釋度1∶1 000）在4 ℃下孵育過夜。隨后，用含吐溫-20的Tris緩沖鹽水（TBST）洗滌3次后，在室溫下將膜用二抗（稀釋率1∶1 000）處理60 min。使用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光底物（Bio-Rad Laboratories，Inc.）通過化學(xué)發(fā)光觀察蛋白質(zhì)條帶，并使用化學(xué)成像系統(tǒng)檢測(cè)免疫反應(yīng)條帶。GAPDH被用作對(duì)照。

1.4 慢病毒感染過表達(dá)和雜合敲除質(zhì)粒及shRNA的構(gòu)建

IGBP1的正向引物為5′-GGACGAAGTAGAGTGGC-3′，反向引物為5′-AGGTCGGTGGAAGCA-3′。根據(jù)制造商的指南，按照標(biāo)準(zhǔn)方案，使用Lipofectamine 3000（Thermo FisherScientific，Waltham，MA，USA）進(jìn)行質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染。由于是雜合敲除，其與敲減組在后面的功能表型和蛋白質(zhì)水平驗(yàn)證中顯示出相似的結(jié)果。

1.5 患者和樣本

從重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院接受治療的乳腺癌患者身上獲得配對(duì)的乳腺臨床人體標(biāo)本，包括癌組織和癌旁組織。這些患者通過病理活檢被診斷為浸潤(rùn)性乳腺癌，并在同一醫(yī)院接受了手術(shù)。根據(jù)重慶醫(yī)科大學(xué)臨床診斷病理中心進(jìn)行的免疫組織化學(xué)結(jié)果，確定患者的ER 和孕激素受體（PR）狀態(tài)。研究方案經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)審查和批準(zhǔn)，所有參與的患者均提供了參與研究的知情同意書。

1.6 IHC分析

收集的人體組織最初使用4%甲醛緩沖液固定。隨后，將包埋的組織切成4 μm厚的切片。然后將這些組織切片在60 ℃下熱孵育2 h 以促進(jìn)脫蠟，然后在115 ℃下高壓滅菌3 min 并在檸檬酸緩沖液（pH 6.0）中修復(fù)抗原。使用0.3%的H2O2溶液淬滅內(nèi)源性過氧化物酶活性15 min。接下來，用正常山羊血清阻斷溶液處理切片，使其非特異性結(jié)合45 min，然后在4 ℃下以1∶100的稀釋度與特異性一抗一起孵育過夜。隨后，將切片在室溫下暴露于山羊抗兔二抗30 min。使用3，3′-二氨基聯(lián)苯胺可視化蛋白質(zhì)表達(dá)，并用Leica顯微鏡（Leica，Germany）捕獲圖像。

1.7 細(xì)胞增殖和藥物敏感性試驗(yàn)

將細(xì)胞鋪在96孔板上進(jìn)行增殖試驗(yàn)，每孔約有3 000個(gè)細(xì)胞懸浮在100 μL中。使用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（CCK-8）試劑（Beyotime，Shanghai，China）評(píng)估細(xì)胞存活率。在2 h的孵育期后，在450 nm處測(cè)量細(xì)胞的吸光度。在藥物敏感性實(shí)驗(yàn)中，每孔放置5 000個(gè)細(xì)胞并孵育24 h。隨后，用不同濃度（0、4、8、12、16、20 μmol/L）的4-羥基他莫昔芬（4-OHT）處理細(xì)胞72 h。使用與上述相同的方法測(cè)定細(xì)胞存活率。

1.8 5-乙炔基-2′-脫氧尿苷染色

根據(jù)制造商的方案，使用BeyoClickTM EdU 細(xì)胞增殖試劑盒（C0075S，Beyotime，Shanghai，China）評(píng)估癌癥乳腺細(xì)胞的增殖。最初，將2×105 個(gè)細(xì)胞鋪在12 孔板上，孵育24 h。隨后，將細(xì)胞在37 ℃下用EdU工作溶液（10 μmol/L）在黑暗中孵育2 h。之后，用PBS洗滌細(xì)胞3次，然后用4%多聚甲醛固定15 min。固定后，用0.1%的Triton X-100使細(xì)胞通透15 min，并用PBS洗滌3次。接下來，用DAPI（C0075S，Beyo?time，Shanghai，China）染色5 min。使用熒光顯微鏡（Leica，Germany）捕獲圖像，其中在孵育時(shí)進(jìn)行DNA復(fù)制的細(xì)胞顯示紅色熒光，而所有細(xì)胞核顯示藍(lán)色熒光（DAPI），將所得的兩張圖進(jìn)行疊合顯示紅色熒光所占的比例，即增殖細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的比例（Merge）。

1.9 細(xì)胞周期測(cè)定和流式細(xì)胞術(shù)分析

吸取培養(yǎng)上清液后，用不含鈣和鎂離子的PBS洗滌細(xì)胞1次。2～5 min后停止胰酶消化。然后將樣品轉(zhuǎn)移到離心管中，以1 000 r/min的速度離心5 min。該過程重復(fù)1～2次，包括洗滌和離心步驟。用洗滌液將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)至1×106/mL。隨后，將樣品轉(zhuǎn)移到BD FACS Verse 流式細(xì)胞儀中進(jìn)行檢測(cè)。使用FlowJo軟件對(duì)獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

1.10 集落形成試驗(yàn)

將ER+乳腺癌細(xì)胞（MCF-7 和T47D）接種到6 孔板中。孵育2周后，用4%多聚甲醛固定細(xì)胞15 min。隨后，在室溫下用結(jié)晶紫染色20 min后觀察。

1.11 生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析

選擇TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中的ESR1及其下游，以探討它們?cè)谌橄侔┲信cIGBP1的正負(fù)相關(guān)。對(duì)于基因集功能富集分析，本研究使用KEGG rest API 獲得最新的KEGG 通路基因注釋，作為背景將基因映射到背景集。CPTAC數(shù)據(jù)庫(kù)包含基因組測(cè)序數(shù)據(jù)和蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)。本研究使用CPTAC 分析IGBP1在腫瘤和鄰近組織中的豐度差異，并將P 值臨界值設(shè)置為0.05。Kaplan-Meier Plotter 是一個(gè)常用的生存分析網(wǎng)站。進(jìn)入網(wǎng)站癌癥板塊，檢索IGBP1并設(shè)置參數(shù)，將其分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，檢查其表達(dá)水平對(duì)患者OS的影響，以P 值和HR表示。

1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)結(jié)果均表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s），并使用GraphPad Prism 9（San Diego，CA，USA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和制圖。使用單因素方差分析進(jìn)行多組比較，2組之間的比較使用Student’s t 檢驗(yàn)進(jìn)行。所有實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)3次。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 IGBP1在癌癥中的表達(dá)明顯上調(diào)，其高表達(dá)提示患者預(yù)后較差

免費(fèi)網(wǎng)站CPTAC整理了不同腫瘤樣本中每個(gè)可檢索基因編碼蛋白的表達(dá)值，可以計(jì)算出IGBP1在乳腺癌及其相應(yīng)正常組織中的表達(dá)水平。如圖1A所示，可以看出IGBP1在乳腺癌中的表達(dá)高于正常組織。通過免費(fèi)網(wǎng)站上的Kaplan-Meier Plotter生存分析，發(fā)現(xiàn)IGBP1的高表達(dá)表明患者的預(yù)后較差（圖1B，Plt;0.05）。接下來，使用CPTAC 數(shù)據(jù)庫(kù)分析IGBP1 在癌癥四種亞型中的表達(dá)：Luminal A 型、Luminal B型、HER-2過表達(dá)型和TNBC型。結(jié)果顯示，其在前兩種類型的乳腺癌中的表達(dá)顯著高于正常組織和TNBC型（圖1C）。在上述不同亞型的乳腺癌細(xì)胞系中，對(duì)所選蛋白質(zhì)表達(dá)水平的驗(yàn)證也表明，IGBP1在ER+乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)增加，但在雌激素受體陰性（ER-）乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)減少（圖1D，E，Plt;0.001）。上述結(jié)果表明，IGBP1的表達(dá)隨ER狀態(tài)的不同而不同，在ER+乳腺癌中IGBP1表達(dá)增加，而編碼ER-α蛋白的基因?yàn)镋SR1，表明IGBP1 與ESR1 的表達(dá)呈正相關(guān)，提示IGBP1可能影響ER+乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展。同時(shí)，IHC染色結(jié)果的比較也證實(shí)了CPTAC中獲得的結(jié)果。IGBP1在乳腺癌組織中的表達(dá)明顯高于配對(duì)癌旁組織。圖1F顯示了選定的典型IHC染色圖像。

2.2 IGBP1的過表達(dá)促進(jìn)ER+乳腺癌細(xì)胞的增殖

為了分析IGBP1在ER+乳腺癌中的作用，本研究通過包裝慢病毒構(gòu)建了IGBP1過表達(dá)和雜合敲除質(zhì)粒，并感染了兩種ER+乳腺癌細(xì)胞系細(xì)胞（MCF-7 和T47D）。本研究使用WB 驗(yàn)證了IGBP1 的過表達(dá)和雜合敲除效率（圖2A，Plt;0.05）。通過分析PRISM基因依賴性CRISPR Screen數(shù)據(jù)集，發(fā)現(xiàn)IGBP1可能促進(jìn)細(xì)胞增殖（圖2B）。接下來，使用CCK-8 方法檢測(cè)體外細(xì)胞增殖能力，結(jié)果如圖2C 和D 所示。IGBP1過表達(dá)后，ER+乳腺癌細(xì)胞的增殖能力顯著提高（圖2C），而IGBP1的敲低明顯降低了ER+乳腺癌細(xì)胞的增殖能力（圖2D）。通過EdU實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IGBP1對(duì)ER+乳腺癌細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)IGBP1被雜合敲除時(shí)，細(xì)胞增殖明顯減慢（圖2E）。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)過表達(dá)和敲低IGBP1的細(xì)胞表明，IGBP1過表達(dá)加速了細(xì)胞周期，而敲除IGBP1導(dǎo)致細(xì)胞周期積聚在S期（圖2F），表明DNA復(fù)制過程受阻。結(jié)果表明，IGBP1的過表達(dá)可影響體外培養(yǎng)的ER+乳腺癌細(xì)胞的增殖和細(xì)胞周期。

2.3 敲低IGBP1增加ER+乳腺癌細(xì)胞對(duì)他莫昔芬的敏感性

他莫昔芬的CRISPR篩選表明，IGBP1可能介導(dǎo)他莫昔芬耐藥性（圖3A）。對(duì)GEO數(shù)據(jù)集的進(jìn)一步分析顯示，他莫昔芬耐藥后IGBP1表達(dá)上調(diào)。他莫昔芬耐藥MCF-7（MCF-7-TAMR）細(xì)胞中IGBP1的表達(dá)明顯高于親本細(xì)胞（圖3B）。蛋白質(zhì)印跡分析顯示，MCF-7-TAMR細(xì)胞中IGBP1的表達(dá)上調(diào)（圖3C）。然后本課題組檢查了IGBP1在他莫昔芬敏感性中的作用。本研究制備了過表達(dá)和敲低IGBP1的MCF-7和T47D細(xì)胞，并用不同劑量的4-OHT對(duì)其處理72 h后進(jìn)行CCK-8檢測(cè)，以檢測(cè)細(xì)胞存活率并顯示對(duì)4-OHT的耐藥性。本研究發(fā)現(xiàn)，在用4-OHT 處理的MCF-7 細(xì)胞中，過表達(dá)IGBP1 增加了細(xì)胞對(duì)4-OHT 的耐藥性及半數(shù)抑制濃度（IC50）（圖3D）。相反，降低T47D細(xì)胞中IGBP1的表達(dá)降低了它們對(duì)4-OHT的耐藥性及IC50（圖3E）。集落形成試驗(yàn)還表明，當(dāng)細(xì)胞用2 μmol/L 4-OHT處理時(shí)，IGBP1過表達(dá)的MCF-7細(xì)胞的存活率更高（圖3F）?；谶@些發(fā)現(xiàn)，證明低IGBP1表達(dá)會(huì)增加ER+乳腺癌細(xì)胞對(duì)他莫昔芬的敏感性。

2.4 IGBP1相關(guān)基因的生物學(xué)功能分析

自從IGBP1在癌癥中的功能得到證實(shí)以來，本課題組在不同的數(shù)據(jù)庫(kù)中研究了與癌癥相關(guān)的途徑和分子功能。首先，本課題組在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中探索了與IGBP1呈正相關(guān)和負(fù)相關(guān)的基因（圖4A）。對(duì)于基因集功能富集分析，使用KEGG rest API獲得最新的KEGG通路基因注釋，作為背景將基因映射到背景集。最小基因集大小設(shè)置為5，最大基因集大小設(shè)為5 000。P 值小于0.01且FDR小于0.25被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在陽(yáng)性富集的GO圖中，與氧化磷酸化、早期雌激素反應(yīng)和脂肪酸代謝相關(guān)的基因以及與凋亡、p53信號(hào)通路和DNA修復(fù)相關(guān)的基因顯著富集（圖4B）。在陰性富集中，與G2/M 檢查點(diǎn)、有絲分裂紡錘體、干擾素α/γ 和MTORC1信號(hào)通路相關(guān)的基因富集，表明與IGBP1呈負(fù)相關(guān)（圖4B）。同時(shí)，基因集功能富集分析顯示ER相關(guān)途徑顯著正富集（圖4C）

本研究在TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)中選擇了ESR1 及其下游CCND1，發(fā)現(xiàn)它們與IGBP1呈正相關(guān)（圖4D）。為了驗(yàn)證上述結(jié)論，在蛋白質(zhì)水平驗(yàn)證了IGBP1過表達(dá)和雜合敲除對(duì)ER和細(xì)胞周期相關(guān)分子的影響，這與上述公共數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得的結(jié)果一致。IGBP1過表達(dá)后，ER和CCND1的表達(dá)上調(diào)，而p21 的表達(dá)下調(diào)（圖4E）。在IGBP1 雜合敲除后，ER 和CCND1的表達(dá)下調(diào)，而p21的表達(dá)上調(diào)（圖4F）。這些結(jié)果表明，IGBP1通過ER信號(hào)通路介導(dǎo)其促癌作用。

3 討 論

乳腺癌仍然是全世界女性發(fā)病率和死亡率較高的疾病之一，這突出表明迫切需要深入了解其發(fā)展和新的治療方法。癌癥的進(jìn)展，甚至因他莫昔芬耐藥性而死亡，已成為威脅ER+乳腺癌患者生存率的主要問題[24]。在他莫昔芬治療期間導(dǎo)致他莫昔芬耐藥性的確切機(jī)制尚不清楚。近年來，大量證據(jù)表明，ER的改變被認(rèn)為是他莫昔芬耐藥性的重要機(jī)制[14]。

本研究首次檢測(cè)了IGBP1 在癌癥中的表達(dá)水平及其在內(nèi)分泌治療中的作用。IGBP1參與抗原與特定B 細(xì)胞受體的結(jié)合，主要是通過特異性結(jié)合PP2A 并參與調(diào)節(jié)PP2A 的催化活性[17]。文獻(xiàn)報(bào)道IGBP1通過PP2A途徑激活細(xì)胞周期并抑制凋亡[18]。先前的研究表明，IGBP1的高表達(dá)與各種疾病的預(yù)后不良有關(guān)，包括食管鱗狀細(xì)胞癌[19]、肺腺癌[20-22]、狼瘡腎炎[25]和胼胝體發(fā)育不全等[26-29]。LncRNAIGBP1-AS1 可通過下調(diào)IGBP1 降低乳腺癌的增殖和侵襲能力[23]，提示IGBP1可促進(jìn)癌癥的發(fā)生和發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)IGBP1在乳腺癌組織和細(xì)胞中的蛋白表達(dá)升高，其過表達(dá)促進(jìn)了ER+乳腺癌細(xì)胞的增殖。

此外，本研究還探討了IGBP1對(duì)最常見的內(nèi)分泌療法他莫昔芬耐藥性的影響。本課題組觀察到，在ER+乳腺癌中，IGBP1的過表達(dá)顯著增加了他莫昔芬的耐藥性，而IGBP1敲低顯著降低了ER+乳腺癌細(xì)胞對(duì)他莫昔芬的耐藥性。這表明IGBP1可能是干預(yù)ER+乳腺癌他莫昔芬耐藥性的潛在靶點(diǎn)。在敲低或雜合敲除IGBP1后，ER+乳腺癌對(duì)他莫昔芬的耐藥性可能有一定的改善，這表明IGBP1可能是ER+乳腺癌的潛在治療靶點(diǎn)。本研究還發(fā)現(xiàn)IGBP1表達(dá)與ER表達(dá)相關(guān)，IGBP1的表達(dá)與ESR1表達(dá)呈正相關(guān)。這將是未來調(diào)查的重點(diǎn)。例如，對(duì)AI的耐藥性通常源于ESR1基因突變。本課題組將進(jìn)一步深入探索相關(guān)通路分子。

總之，來自公共數(shù)據(jù)庫(kù)、臨床乳腺癌患者的腫瘤標(biāo)本和體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)表明，IGBP1在乳腺癌中高度表達(dá)，且在ER+ 乳腺癌中表達(dá)更高。IGBP1的過表達(dá)和敲低影響ER+乳腺癌細(xì)胞系的增殖、細(xì)胞周期和他莫昔芬耐藥性，表明IGBP1可能改善ER+乳腺癌治療中的耐藥性問題。這意味著IGBP1 可能作為ER+乳腺癌的潛在治療靶點(diǎn)。此外，本課題組發(fā)現(xiàn)IGBP1可能通過ER信號(hào)通路介導(dǎo)上述致癌作用。未來，IGBP1在ER信號(hào)通路上的具體激活機(jī)制可能會(huì)被探索。

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（責(zé)任編輯：周一青）