摘要：枯萎病是國(guó)內(nèi)外黃瓜生產(chǎn)中普遍發(fā)生的真菌性土傳病害。采用浸根接種法對(duì)抗感黃瓜枯萎病材料進(jìn)行苗期人工接菌表型鑒定。結(jié)果表明，21A130表現(xiàn)為高抗，9930表現(xiàn)為感病。通過(guò)對(duì)抗感材料接菌后0、96 h的根部樣品進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析，結(jié)果表明，接菌后96 h的根部差異表達(dá)基因（DEGs）中有263個(gè)為上調(diào)，347個(gè)為下調(diào)；GO與KEGG分析富集分析顯示，DEGs主要富集在逆境反應(yīng)、應(yīng)激反應(yīng)、鐵離子結(jié)合、氧化還原酶活性等條目與苯丙烷生物合成、植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、MAPK信號(hào)通路、碳代謝、植物病原菌互作等通路上。其中，10個(gè)DEGs顯著上調(diào)表達(dá)，2個(gè)DEGs顯著下調(diào)表達(dá)，1個(gè)DEGs下調(diào)表達(dá)且RT-qPCR與RNA-seq結(jié)果均一致，特別是上調(diào)表達(dá)的CsCHI在抗病材料的根部表達(dá)量高，差異達(dá)到35.4倍，調(diào)控幾丁質(zhì)酶合成，通過(guò)減少真菌生物量積累增強(qiáng)抗性；下調(diào)表達(dá)的CsAAPI在感病材料的根部表達(dá)量高，差異達(dá)到8.3倍，通過(guò)調(diào)控天冬氨酸蛋白酶發(fā)揮抗病作用。

關(guān)鍵詞：黃瓜；枯萎病抗性；轉(zhuǎn)錄組分析；差異表達(dá)基因；表觀特征

中圖分類(lèi)號(hào)：S436.421.1⁺3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2024）21-0123-10

收稿日期：2024-03-03

基金項(xiàng)目：河北省果菜類(lèi)蔬菜現(xiàn)代種業(yè)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（編號(hào)：21326309D-4）。

作者簡(jiǎn)介：隋繼超（1998—），男，河北承德人，碩士研究生，從事黃瓜遺傳育種與分子生物學(xué)研究。E-mail：18732477343@163.com。

通信作者：閆立英，博士，教授，從事黃瓜遺傳育種與分子生物學(xué)研究，E-mail：yanliying66@126.com；謝 洋，博士，副教授，從事蔬菜栽培生理及分子生物學(xué)研究，E-mail：xieyangly123@163.com。

黃瓜（Cucumis sativus L.）是我國(guó)重要蔬菜作物^［1］?？菸∈菄?guó)內(nèi)外黃瓜生產(chǎn)中普遍發(fā)生的真菌性土傳病害。黃瓜枯萎病在我國(guó)吉林省首次發(fā)生^［2］，現(xiàn)已成為嚴(yán)重危害黃瓜生產(chǎn)的病害。尖孢鐮刀菌黃瓜專(zhuān)化型（Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum）為黃瓜枯萎病致病菌，包括4個(gè)生理小種，在我國(guó)由4號(hào)生理小種導(dǎo)致枯萎病發(fā)生^［3］。該病原菌主要從傷口處危害黃瓜的根或根頸部，導(dǎo)致植株枯萎，黃瓜枯萎病發(fā)病率一般在10%～30%之間，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致絕收^［4］。生產(chǎn)上黃瓜枯萎病防治方法主要為農(nóng)業(yè)防治、生物防治與化學(xué)防治，其中常用南瓜做砧木嫁接栽培防治枯萎病，但嫁接耗費(fèi)人工，同時(shí)影響黃瓜果實(shí)的風(fēng)味品質(zhì)^［5-6］。因此，選育抗病品種^［7］是防治枯萎病的最佳途徑。

黃瓜枯萎病抗病性鑒定方法有苗期鑒定和田間鑒定^［8］，以苗期抗病性鑒定為主^［9］，主要包括菌土接種法^［10-11］、灌根接種法^［12］、胚根接種法^［13］、下胚軸注射接種法^［14］、葉盤(pán)法^［15］、浸根接種法^［16］，目前多采用《黃瓜枯萎病鑒定技術(shù)規(guī)程》（NY/T 1857.3—2010）所規(guī)定的浸根接種法。種質(zhì)資源是黃瓜育種的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)黃瓜種質(zhì)資源進(jìn)行精準(zhǔn)評(píng)價(jià)，可為黃瓜新品種選育、重要性狀基因挖掘及分子設(shè)計(jì)育種^［17］提供重要材料基礎(chǔ)。

目前，較多研究在轉(zhuǎn)錄水平上分析植物抗病機(jī)理。研究表明，病原體相關(guān)蛋白（PR）中幾丁質(zhì)酶主要通過(guò)減少真菌生物量積累來(lái)增強(qiáng)植物對(duì)枯萎病的抗性，其中編碼黃瓜Ⅰ類(lèi)幾丁質(zhì)酶的CsChi23可有效調(diào)控黃瓜對(duì)枯萎病菌的抗性反應(yīng)^［18］；通過(guò)對(duì)黃瓜抗枯萎病品種的sRNA-seq和RNA-seq數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合分析，發(fā)現(xiàn)了可能參與黃瓜枯萎病抗性反應(yīng)的miRNA及其靶基因（miR319a-JRL3、miR6300-BEE1、miR6300-DAHP1和miR6300-PERK2）^［19］；以黃瓜抗枯萎病品種為試驗(yàn)材料，結(jié)合BSA-seq技術(shù)與轉(zhuǎn)錄組技術(shù)共同發(fā)掘到了5個(gè)候選基因（Csa2G007990、Csa2G009430、Csa2G009440、Csa2G008780和Csa2G009330）^［12］；通過(guò)比較黃瓜自交系材料的BSA-seq與轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析發(fā)掘16個(gè)候選基因，通過(guò)基因功能注釋初步確定3個(gè)候選基因CsFAR1-1、CsFAR1-2、CsFAR1-3^［15］。然而，利用不同遺傳材料挖掘到的黃瓜枯萎病抗性基因并不相同。因此，有必要開(kāi)展黃瓜枯萎病抗感材料的精確表型鑒定及對(duì)抗性顯著差異種質(zhì)資源進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析。

本研究采用《黃瓜抗枯萎病鑒定技術(shù)規(guī)程》（NY/T 1857.3—2010）浸根接種法^［16］進(jìn)行黃瓜枯萎病苗期抗性鑒定，并對(duì)鑒定材料進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，通過(guò)挖掘候選基因?yàn)辄S瓜枯萎病抗病分子育種提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

黃瓜枯萎病抗感材料21A130與9930來(lái)源于河北科技師范學(xué)院黃瓜課題組。試驗(yàn)接種所用病菌為生理小種4號(hào)，來(lái)源于中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院張小蘭實(shí)驗(yàn)室。

1.2 接種鑒定

本試驗(yàn)于2023年9—12月在河北科技師范學(xué)院科研樓進(jìn)行，采用《黃瓜抗枯萎病鑒定技術(shù)規(guī)程》（NY/T 1857.3—2010）所規(guī)定的浸根接種法^［16］進(jìn)行黃瓜枯萎病的苗期抗性鑒定，抗感材料各播種10株，3次重復(fù)。以中農(nóng)6號(hào)為對(duì)照，自主鑒定黃瓜枯萎病抗性，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所同時(shí)進(jìn)行鑒定。病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)、病情指數(shù)計(jì)算方法與抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)均參考《黃瓜抗枯萎病鑒定技術(shù)規(guī)程》（NY/T 1857.3—2010）。

1.3 樣品準(zhǔn)備與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

用病原菌處理子葉展平期的黃瓜幼苗，在子葉展平期接菌后0、96 h取幼苗根部為待測(cè)序樣品，3次重復(fù)，各自命名為R21A130_0 h（抗病材料接菌后 0 h）、R21A130_96 h（抗病材料接菌后96 h）、S9930_0 h（感病材料接菌后0 h）、S9930_96 h（感病材料接菌后96 h），共計(jì)12份樣品。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序工作由諾禾致源科技股份有限公司進(jìn)行。

1.4 參考基因組比對(duì)與新基因預(yù)測(cè)

過(guò)濾原始數(shù)據(jù)，去除帶接頭、含N、低質(zhì)量reads（Qphred≤20的堿基數(shù)占reads全長(zhǎng)50%以上）。用HISAT2將有效數(shù)據(jù)對(duì)比到參考基因組，獲取reads定位信息^［20］。過(guò)濾原始數(shù)據(jù)、檢查GC含量與測(cè)序錯(cuò)誤率后得到有效數(shù)據(jù)，用于數(shù)據(jù)分析。

1.5 定量分析與差異基因鑒定

根據(jù)基因比對(duì)信息，統(tǒng)計(jì)覆蓋各個(gè)基因起始至終止的reads數(shù)量。基因表達(dá)定量使用的是FPKM方法^［21］。對(duì)各樣本所有基因表達(dá)量進(jìn)行計(jì)算后，進(jìn)行主成分分析（PCA）^［22］。之后采用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析其表達(dá)數(shù)據(jù)，獲得假設(shè)檢驗(yàn)概率（P值）和多重假設(shè)檢驗(yàn)校正FDR值（P_adj值），篩選不同狀態(tài)下各樣本表達(dá)差異顯著的基因。篩選標(biāo)準(zhǔn)為|log₂（FoldChange）|gt;1.0且P_adj≤0.05^［23］。

1.6 差異基因韋恩圖與富集分析

利用諾禾云平臺(tái)制作各比較組合韋恩圖。采用R包c(diǎn)lusterProfile對(duì)差異基因集進(jìn)行GO功能富集和KEGG通路富集分析，顯著性富集閾值為P_adj值小于0.05^［24］。分別選取GO富集與KEGG富集最顯著的30個(gè)通路和20個(gè)通路制作散點(diǎn)圖。

1.7 熒光定量PCR分析

選擇抗感枯萎病黃瓜材料接菌后96 h（R21A130_96 h vs S9930_96 h）中差異顯著且表達(dá)量較高的13個(gè)差異基因?yàn)楹蜻x基因進(jìn)行熒光定量PCR。采用Primer 5.0設(shè)計(jì)引物，參考前人報(bào)道信息設(shè)計(jì)內(nèi)參引物^［25］。試驗(yàn)采用的RNA樣本由測(cè)序公司返回，cDNA反轉(zhuǎn)錄與RT-qPCR程序參考天根生化科技有限公司試劑盒，設(shè)置3次重復(fù)。采用2^-ΔΔC_T法計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)量，使用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析與作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃瓜抗感枯萎病材料表型鑒定

由表1可知，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所鑒定結(jié)果表明，21A130平均病情指數(shù)為0.0，表現(xiàn)為高抗，9930平均病情指數(shù)為51.8，表現(xiàn)為感病。且自主鑒定與委托鑒定結(jié)果一致，說(shuō)明本研究的抗感枯萎病材料表型穩(wěn)定，可用于黃瓜枯萎病抗性轉(zhuǎn)錄組分析。

2.2 黃瓜枯萎病轉(zhuǎn)錄組樣本表型分析

由圖1可知，4個(gè)樣本（R21A130_0 h、R21A130_96 h、S9930_0 h、S9930_96 h）中，抗病材料接菌后0、96 h病情等級(jí)均為0級(jí)，感病材料接菌后0 h病情等級(jí)為0級(jí)，接菌后96 h病情等級(jí)為4級(jí)（參考“1.2”節(jié)黃瓜枯萎病鑒定標(biāo)準(zhǔn)）。由此可知，接菌后96 h的黃瓜枯萎病抗感材料表型差異明顯。

2.3 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量分析

結(jié)果表明，分別在12個(gè)樣本（R21A130_0 h_1、R21A130_0 h_2、R21A130_0 h_3、R21A130_96 h_1、R21A130_96 h_2、R21A130_96 h_3、S9930_0 h_1、S9930_0 h_2、S9930_0 h_3、S9930_96 h_1、S9930_96 h_2、S9930_96 h_3）中獲得54.93、53.30、48.28、46.83、42.83、46.07、44.61、47.78、45.83、44.68、48.79、58.74 Mb的有效數(shù)據(jù)（表2）。有效數(shù)據(jù)比對(duì)到外顯子區(qū)域比例較高（86.49%），比對(duì)到內(nèi)含子區(qū)域的reads比例極低（6.17%），比對(duì)到基因區(qū)間的reads比例較低（7.34%），說(shuō)明比對(duì)結(jié)果具有可靠性（圖2）。

2.4 基因定量分析

由圖3可知，組內(nèi)樣本R21A130_0 h_1與R21A130_0 h_2與R21A130_0 h_3、R21A130_96 h_1與R21A130_96 h_2與R21A130_96 h_3、S9930_0 h_1與S9930_0 h_2與S9930_0 h_3、S9930_96 h_1與S9930_96 h_2與S9930_96 h_3的相對(duì)表達(dá)量關(guān)系較近，而組間樣本R21A130_0 h、R21A130_96 h、S9930_0 h、S9930_96 h的相對(duì)表達(dá)量關(guān)系較遠(yuǎn)。由此可見(jiàn)，抗、感黃瓜枯萎病材料在基因表達(dá)水平上有顯著差異，相同枯萎病抗性的材料不同時(shí)期的基因表達(dá)水平也具有顯著差異。3次重復(fù)皮爾遜相關(guān)系數(shù)r²均大于0.92（圖4），PCA分析發(fā)現(xiàn)，組間樣本R21A130_0 h、R21A130_96 h、S9930_0 h、S9930_96 h 分散，組內(nèi)樣本R21A130_0 h_1與R21A130_0 h_2與R21A130_0 h_3、R21A130_96 h_1與R21A130_96 h_2與R21A130_96 h_3、S9930_0 h_1與S9930_0 h_2與S9930_0 h_3、S9930_96 h_1與S9930_96 h_2與S9930_96 h_3分別聚在一起，說(shuō)明樣本選擇合理，試驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠（圖5）。

2.5 差異基因鑒定與韋恩圖分析

按照顯著差異表達(dá)基因篩選標(biāo)準(zhǔn)（DESeq2，P_adjlt;0.05，|log₂FoldChange|gt;1.0），發(fā)現(xiàn)不同表型的材料接菌后0 h（R21A130_0 h vs S9930_0 h）的根部差異基因數(shù)量較多（上調(diào)596，下調(diào)1 274），接菌后 96 h（R21A130_96 h vs S9930_96 h）的根部差異基因數(shù)量較少（上調(diào)263，下調(diào)347），前者差異基因的數(shù)量是后者的3.1倍。相同表型的材料接菌后96、0 h的差異基因數(shù)量多，抗病材料（R21A130_0 h vs R21A130_96 h）：上調(diào)3 090，下調(diào)2 399；感病材料（S9930_0 h vs S9930_96 h）：上調(diào)2 586，下調(diào)2 348。這些差異基因與植物抗病性有關(guān)（圖6）?？垢胁牧宵S瓜接菌后0 h和接菌后96 h 2對(duì)比較組（R21A130_0 h vs S9930_0 h與R21A130_96 h vs S9930_96 h）中，共有552個(gè)共同的差異基因，分別有5 361個(gè)和638個(gè)特異于接菌后0 h和接菌后 96 h 的比較組中。不同接菌時(shí)期抗感材料的2對(duì)比較組（R21A130_0 h vs R21A130_96 h與S9930_0 h vs S9930_96 h）中，共有6 173個(gè)共同的差異基因，分別有3 876個(gè)和2 686個(gè)特異于抗病材料和感病材料的比較組中。綜合4對(duì)比較組，鑒定到共有66個(gè)差異基因特異于抗感黃瓜枯萎病材料接菌后96 h的根部，暗示這些基因與黃瓜抗枯萎病差異性狀調(diào)控相關(guān)（圖7）。

2.6 差異基因富集分析

為了更深入對(duì)黃瓜枯萎病抗性相關(guān)基因進(jìn)行鑒定，選擇最大表型差異的接種后96 h抗感樣品（R21A130_96 h vs S9930_96 h）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。GO富集分析結(jié)果表明，差異基因主要富集在應(yīng)激反應(yīng)（GO：0050896）、逆境反應(yīng)（GO：0006950）、四吡咯結(jié)合（GO：0046906）、鐵離子結(jié)合（GO：0005506）、轉(zhuǎn)運(yùn)活性（GO：0005215）、氧化還原酶活性（GO：0016705）、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性（GO：0022857）等條目上（圖8）。KEGG富集分析顯示，差異基因主要富集在苯丙烷生物合成（csv00940）、植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（csv04075）、MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（csv04016）、氨基酸生物合成（csv01230）、碳代謝（csv01200）、植物病原菌互作（csv04626）等通路上（圖9）。

通過(guò)DEGs富集在KEGG通路上的情況發(fā)現(xiàn)，苯丙烷生物合成、植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、氨基酸生物合成、MAPK信號(hào)通路、碳代謝、植物病原菌互作等通路上的基因顯著上調(diào)或下調(diào)表達(dá)。其中，各通路參與的DEGs中，苯丙烷生物合成通路包括CsCCR1、CsPALY、CsPER10、CsC84A1、CsPER4、CsPERN、CsPER1、Cs4CLL9、CsPER7、CsPER21、CsPER47、CsPER5、CsPER51和CsBBE15；植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路包括CsAHP4、CsLAX2、CsSAU72、CsAI5L2、CsTGA9、CsP2C75、CsLAX1、CsPYL4、CsGH31、CsSAU50和CsPRB1；氨基酸生物合成通路包括CsTD1、CsAROF、CsDAPAT、CsCYSK、CsKPRS1、CsPGK、CsTHA1和CsSAT1；MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路包括CsCHI2、CsP2C75、CsPYL4、CsPRB1和CsCHIL；碳代謝信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路包括CsHXK2、CsTD1、CsCYSK、CsKPRS1、CsPGK、CsACO12、CsSAT1和CsKPRS1；植物病原菌互作通路包括CsCNGC4、CsCML18、CsCNGC2、CsKCS12和CsPRB1（表3）。

2.7 RT-qPCR驗(yàn)證

對(duì)黃瓜枯萎病抗感材料接菌后0、96 h的FPKM值進(jìn)行分析，選取13個(gè)差異倍數(shù)較大的候選基因，包括MAPK信號(hào)通路相關(guān)基因CsCHI，激酶基因CsNADKC、CsMIK2、CsLRKS5，轉(zhuǎn)移酶基因CsO-FTFP、CsZOX、CsOMT3，轉(zhuǎn)錄因子CsMYB62，細(xì)胞色素基因CsC82A3，多聚半乳糖醛酸酶基因CsPGLR，以及各類(lèi)蛋白基因CsAAPI、CsRLP20、CsNAC30。對(duì)這13個(gè)候選基因進(jìn)行RT-qPCR 驗(yàn)證，引物序列見(jiàn)表4。結(jié)果表明，所有DEGs相對(duì)表達(dá)量與RNA-seq表達(dá)量趨勢(shì)一致，測(cè)序結(jié)果可靠（圖10）。

3 討論

在本研究中，挖掘出13個(gè)黃瓜枯萎病抗性候選基因。其中，CsMIK2調(diào)控MDIS1相互作用的受體樣激酶，在真菌誘導(dǎo)劑中具有關(guān)鍵作用^［26］。CsLRKS5調(diào)控L型含有凝集素結(jié)構(gòu)域的受體激酶，由于其細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域和凝集素蛋白相似，而凝集素蛋白可以與真菌和細(xì)菌壁的成分結(jié)合，因此推測(cè)該激酶參與了植物對(duì)病原菌的響應(yīng)^［27］。CsZOX調(diào)控玉米素O-木糖基轉(zhuǎn)移酶，參與了廣泛的生理學(xué)過(guò)程，其中包括激素調(diào)節(jié)、次生代謝、抗逆反應(yīng)、脫毒反應(yīng)等等^［28］。CsO-FTFP調(diào)控O-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶家族蛋白，研究表明O-巖藻糖基化在植物抗病方面具有重要作用^［29］。CsOMT3調(diào)控O-甲基轉(zhuǎn)移酶，可以催化類(lèi)黃酮合成O-甲基化衍生物，在植物根瘤固氮等進(jìn)程及抗蟲(chóng)、抗病等抗逆反應(yīng)中具有重要作用^［30］。CsPGLR調(diào)控多聚半乳糖醛酸酶，可降解果膠并分解細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，與病原物防御有關(guān)^［31］。CsRLP20調(diào)控富亮氨酸重復(fù)N端結(jié)構(gòu)域，可能參與植物抗逆性反應(yīng)，發(fā)育調(diào)控及激素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等過(guò)程，LRR家族蛋白可能對(duì)黃瓜抗枯萎病產(chǎn)生一定作用^［32］。轉(zhuǎn)錄因子CsMYB62參與調(diào)控植物的初生和次生代謝過(guò)程以及響應(yīng)生物和非生物脅迫等，包括高溫、干旱等限制植物生長(zhǎng)的環(huán)境因素，植物為了生存會(huì)在轉(zhuǎn)錄水平到代謝水平做出快速反應(yīng)^［33］。CsNAC30調(diào)控NAC結(jié)構(gòu)域蛋白，參與包括次生壁的形成、細(xì)胞分裂、生長(zhǎng)發(fā)育、衰老以及生物與非生物逆境反應(yīng)等多個(gè)過(guò)程^［34］。CsCHI調(diào)控幾丁質(zhì)酶，已有研究表明，CsChi23可增強(qiáng)黃瓜枯萎病抗性，可抗真菌病害^［18］。CsAAPI調(diào)控天冬氨酸蛋白酶抑制劑，天冬氨酸蛋白酶在擬南芥中具有抗病作用^［35］。CsNADKC調(diào)控鈣調(diào)素-鈣依賴(lài)性NAD激酶，該蛋白激酶與植物抗逆性有一定關(guān)系^［36］。CsC82A3調(diào)控細(xì)胞色素P450 82A3，可保護(hù)生物體免受有毒化合物的侵害^［37］。

本研究鑒定的候選基因中，CsCHI、CsMIK2、CsLRKS5、CsZOX、CsO-FTFP、CsOMT3、CsPGLR、CsRLP20、轉(zhuǎn)錄因子MYB62、CsNAC30顯著上調(diào)表達(dá)，CsAAPI與CsNADKC顯著下調(diào)表達(dá)，CsC82A3下調(diào)表達(dá)，以上基因在調(diào)控黃瓜枯萎病抗病性方面可能發(fā)揮重要作用。特別是上調(diào)表達(dá)的CsCHI基因與前人報(bào)道的黃瓜抗枯萎病基因CsChi23均調(diào)控幾丁質(zhì)酶的合成^［18］，CsCHI在抗黃瓜枯萎病根部的表達(dá)量較高于感病材料表達(dá)量，在抗、感枯萎病材料（R21A130_96 h vs S9930_96 h）中表達(dá)差異倍數(shù)達(dá)到了35.4倍，該基因主要通過(guò)調(diào)控幾丁質(zhì)酶的合成來(lái)減少真菌生物量積累，增強(qiáng)抗性。此外，在接菌后96 h下調(diào)表達(dá)的CsAAPI在抗黃瓜枯萎病的根部（R21A130_0 h）表達(dá)量較低，而在感病材料的根部（S9930_0 h）該基因表達(dá)量較高；在抗、感枯萎病材料（R21A130_96 h vs S9930_96 h）中表達(dá)差異倍數(shù)達(dá)到了8.3倍，該基因調(diào)控天冬氨酸蛋白酶抑制劑，天冬氨酸蛋白酶已報(bào)道在擬南芥中具有抗病作用。在調(diào)控黃瓜枯萎病抗病性方面，這2個(gè)基因可能發(fā)揮重要作用。研究結(jié)果為黃瓜枯萎病抗病性相關(guān)基因的挖掘與黃瓜抗枯萎病分子育種提供了理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

［1］張圣平，苗 晗，薄凱亮，等. “十三五”我國(guó)黃瓜遺傳育種研究進(jìn)展［J］. 中國(guó)蔬菜，2021，1（4）：16-26.

［2］楊侃侃，劉曉虹，陳 宸，等. 黃瓜枯萎病研究進(jìn)展［J］. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2019，405（6）：121-124.

［3］周紅梅，毛愛(ài)軍，張麗蓉，等. 黃瓜枯萎病接種方法及抗性遺傳的研究［J］. 華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2010，25（4）：186-190.

［4］陳勝萍，付麗軍，陳 志，等. 黃瓜抗枯萎病育種研究進(jìn)展［J］. 河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，15（11）：50-53.

［5］李藝珅，宋曉飛，楊艷紅，等. 28份旱黃瓜種質(zhì)資源分枝性評(píng)價(jià)與雜交后代主要農(nóng)藝性狀分析［J］. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023，52（4）：107-115.

［6］焦自高，王崇啟，董玉梅，等. 嫁接對(duì)黃瓜生長(zhǎng)及品質(zhì)的影響［J］. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2000，32（1）：26.

［7］韓金星，洪日新，周 林，等. 西瓜、黃瓜、甜瓜等瓜類(lèi)枯萎病研究進(jìn)展［J］. 中國(guó)瓜菜，2009，22（2）：32-35.

［8］吳之濤，李 卓，張莉，等. 新疆黃瓜品種對(duì)枯萎病的抗性鑒定評(píng)價(jià)［J］. 北方園藝，2016（11）：119-122.

［9］李亞莉，侯 棟，岳宏忠，等. 黃瓜抗枯萎病研究進(jìn)展［J］. 甘肅農(nóng)業(yè)科技，2018，49（5）：77-80.

［10］祝久香. 黃瓜枯萎病拮抗細(xì)菌的篩選、發(fā)酵及生防機(jī)理研究［D］. 長(zhǎng)沙：中南林業(yè)科技大學(xué)，2019：72-73.

［11］姚夢(mèng)碟. 土壤pH值對(duì)黃瓜枯萎病發(fā)生的影響［D］. 沈陽(yáng)：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2020：1-8.

［12］Dong J P，Xu J，Xu X W，et al. Inheritance and quantitative trait locus mapping of Fusarium wilt resistance in cucumber［J］. Frontiers in Plant Science，2019，10：1425.

［13］翁祖信，徐新波，馮東昕，等. 黃瓜枯萎病生理小種研究初報(bào)［J］. 中國(guó)蔬菜，1989，1（1）：19-21.

［14］楊 凡，唐艷領(lǐng)，牛莉莉，等. 黃瓜穴盤(pán)苗期枯萎病抗性鑒定方法及枯萎病脅迫下的生理響應(yīng)［J］. 中國(guó)瓜菜，2022，35（3）：81-85.

［15］和婷婷. 基于鐮刀菌酸的黃瓜枯萎病抗性鑒定方法及其應(yīng)用研究［D］. 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2022：34-35.

［16］中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部. 黃瓜主要病害抗病性鑒定技術(shù)規(guī)程 第3部分：黃瓜抗枯萎病鑒定技術(shù)規(guī)程：NY/T 1857.3—2010［S］. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2010：1-5.

［17］張紅梅，翟 文，金海軍，等. 利用InDel標(biāo)記分析23份黃瓜種質(zhì)的遺傳多樣性及核心種質(zhì)資源篩選［J］. 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2019，35（4）：28-33.

［18］Bartholomew E S，Xu S，Zhang Y Q，et al. A chitinase CsChi23 promoter polymorphism underlies cucumber resistance against Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum［J］. New Phytologist，2022，236（4）：1471-1486.

［19］Xu J，Zhang N Y，Wang K，et al. Chitinase Chi 2 positively regulates cucumber resistance against Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum［J］. Genes，2021，13（1）：62.

［20］Azimian J，Hervan E M，Azadi A，et al. Transcriptome analysis of a Triticum aestivumlandrace（Roshan）in response to salt stress conditions［J］. Plant Genetic Resources（Characterization and Utilization），2021，19（3）：261-274.

［21］Mortazavi A，Williams B A，McCue K，et al. Mapping and quantifying mammalian transcriptomes by RNA-Seq［J］. Nature Methods，2008，5（7）：621-628.

［22］Mereghetti L，Sitkiewicz I，M.Green N，et al. Principal component analysis（PCA）plot showing transcriptome differences between expression microarray data of GBS NEM316 strain incubated in human blood at 37 ℃［J］. PLoS One，2009，4（9）：e7145.

［23］Saetan W，Tian C X，Yu J W，et al. Comparative transcriptome analysis of gill tissue in response to hypoxia in silver sillago （Sillago sihama）［J］. Animals，2020，10（4）：628.

［24］Xu Y X，Chen J W，Yang Z H，et al. Identification of RNA expression profiles in thyroid cancer to construct a competing endogenous RNA（CeRNA）network of mRNAs，long noncoding RNAs（lncRNAs），and microRNAs（miRNAs）［J］. Medical Science Monitor，2019，25：1140-1154.

［25］謝 洋，邢雨蒙，周?chē)?guó)彥，等. 黃瓜二倍體及其同源四倍體果實(shí)轉(zhuǎn)錄組分析［J］. 生物技術(shù)通報(bào)，2023，39（3）：152-162.

［26］Coleman A D，Maroschek J，Raasch L，et al. The Arabidopsis leucine-rich repeat receptor-like kinase MIK2 is a crucial component of early immune responses to a fungal-derived elicitor［J］. New Phytologist，2021，229（6）：3453-3466.

［27］王夢(mèng)龍，彭小群，陳竹鋒，等. 植物凝集素類(lèi)受體蛋白激酶研究進(jìn)展［J］. 植物學(xué)報(bào)，2020，55（1）：96-105.

［28］Shang X L，Xie R R，Tian H，et al. Putative zeatin O-glucosyltransferase OscZOG1 regulates root and shoot development and formation of agronomic traits in rice［J］. Journal of Integrative Plant Biology，2016，58（7）：627-641.

［29］翟佳琪. 擬南芥蛋白O-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶的功能研究及修飾蛋白組分析［D］. 大連：大連醫(yī)科大學(xué)，2022：1-8.

［30］陳建華，李曉曼，楊文鈺，等. 植物甲基化類(lèi)黃酮及其O-甲基轉(zhuǎn)移酶研究進(jìn)展［J］. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2021，33（6）：1072-1079.

［31］陳玉嘯. 樹(shù)莓多聚半乳糖醛酸酶基因RiPG2功能分析［D］. 哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2023：1-5.

［32］Zhang D，Meng K X，Hao Y H，et al. Comparative proteomic analysis of cucumber roots infected by Fusarium oxysporum f.sp.cucumerium Owen［J］. Physiological and Molecular Plant Pathology，2016，96：77-84.

［33］劉 靜，王 陽(yáng)，姚珂心，等. 四季秋海棠BsMYB62基因酵母雙雜交誘餌載體的構(gòu)建及互作蛋白的篩選［J］. 福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2021，36（4）：418-425.

［34］趙艷青. 哈氏黃瓜（Cucumis sativus var.hardwickii）NAC轉(zhuǎn)錄因子家族的生物信息學(xué)分析及低溫下表達(dá)分析［D］. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2019：1-7.

［35］王亞銳，吳 燕. 植物天冬氨酸蛋白酶的功能研究進(jìn)展［J］. 生命科學(xué)，2016，28（3）：384-390.

［36］楊萬(wàn)年，何之常. 鈣調(diào)素依賴(lài)性NAD激酶及其在植物體內(nèi)的功能［J］. 武漢植物學(xué)研究，1999，17（增刊1）：99-104.

［37］宋 展，高 鑫，吳 冕，等. 細(xì)胞色素P450酶的結(jié)構(gòu)、功能與應(yīng)用研究進(jìn)展［J］. 微生物學(xué)通報(bào)，2020，47（7）：2245-2254.