關鍵詞：食品檢驗超高效液相色譜-串聯質譜法涼茶非法添加化學藥物

0引言

涼茶以其獨特的營養(yǎng)價值而深受大眾喜愛。一般地，涼茶被認為是起源于嶺南地區(qū)，以天然植物（主要是草藥）為原材料制成，對人體健康具有多種益處的一類飲料的統(tǒng)稱[1]。通常人們會使用單種或多種不同的天然植物原料，熬制出不同類型的涼茶，以實現預防疾病和保健的目的。相關研究表明，涼茶中普遍含有多酚類、黃酮類、萜類、揮發(fā)油、生物堿、有機酸和多糖等多種有效成分[2-7]。因此，涼茶在抗氧化、消炎抑菌、抑制病毒和免疫激活等方面具有一定的效用[8-11]。經過多年的發(fā)展和沉淀，廣東涼茶在2006年5月獲國務院批準，列入第一批國家級非物質文化遺產，成為中醫(yī)保健文化的重要組成部分。

然而，一些商家受利益驅使在涼茶中違規(guī)添加多類西藥成分，如茶堿、氨溴索、甲硝唑、異丙嗪和愈創(chuàng)甘油醚等[12，13]，以此提高所售涼茶的療效，從而吸引更多消費者，這些非法添加藥物對人體健康存在巨大的風險。

茶堿和氨溴索具有止咳、止痛和平喘等效果，常被違法添加到止咳茶、感冒茶和清熱解毒茶等涼茶中，研究表明，長期過量使用茶堿和氨溴索可能會對神經產生損傷，導致人體出現癲癇、心律失常和腸道功能紊亂[14-16]；甲硝唑對厭氧細菌有較好的抑制作用，因此常被違法添加在痤瘡茶或牙痛茶中，但使用不當可能會引起皮膚過敏和肝臟損傷[17-19]；異丙嗪常用于緩解惡心和嘔吐癥狀、過敏性疾病、暈動病和普通感冒，以及作為鎮(zhèn)靜劑在短期治療失眠使用，易被違法添加在感冒茶、咳喘茶和安神茶等涼茶中，長期過量服用可能對中樞神經和肝腎功能產生副作用[20，21]；愈創(chuàng)甘油醚具有祛痰、肌肉松弛和安神定驚的作用，容易被不良商家違法添加到安神茶、化痰茶等涼茶中，但長期過量服用可能導致急性雙側輸尿管梗阻和潛在發(fā)育毒性[22，23]。一般而言，商家對涼茶的非法添加的藥物劑量沒有概念，消費者在不知情的狀態(tài)下長期飲用此類含有非法添加化學藥物的涼茶，會對健康產生巨大的風險。

盡管國家食品藥品監(jiān)督管理總局已于2017年發(fā)布了食品補充檢驗方法BJS201713《飲料、茶葉及相關制品中對乙酰氨基酚等59種化合物的測定》和BJS201714《飲料、茶葉及相關制品中二氟尼柳等18種化合物的測定》，但對于消炎、止咳類等化學藥物的監(jiān)管和限制仍存在較大的優(yōu)化空間[24]。

現階段，針對涼茶中西藥等化學藥物成分違法添加的檢測手段主要集中在高效液相色譜法、薄層色譜-表面拉曼光譜法、近紅外光譜法、液相色譜-高分辨質譜聯用法、液相色譜-質譜聯用法、免疫分析法等[25-30]。其中，液相色譜-質譜聯用法最為普遍，該方法靈敏度高，適用性強，可同時實現定性定量檢測，適于普及和推廣。因此，本研究采用超高效液相色譜-串聯質譜技術，建立了涼茶中非法添加茶堿、氨溴索、甲硝唑、異丙嗪和愈創(chuàng)甘油醚等5種化學藥物的快速測定方法，為涼茶的日常監(jiān)督提供技術支持。

1材料與方法

1.1材料、試劑與儀器

茶堿、氨溴索、甲硝唑、異丙嗪和愈創(chuàng)甘油醚標準品（濃度均為100μg/mL）。

甲醇、乙腈、甲酸（色譜純），所有溶液采用超純去離子水（電阻率＞18.2MΩ·cm）配制。

超高效液相色譜-串聯質譜儀（配ESI源）；色譜柱；3-18K低溫高速離心機；渦旋振蕩器；超純水系統(tǒng)；天平（感量0.01g）；

涼茶樣品為隨機購于廣東省內零售市場的感冒茶、止咳茶、牙痛茶等共50份。

1.2標準溶液配制

標準儲備液質量濃度為100mg/L，開封后貯存于–18℃冰箱中，有效期6個月。使用時用甲醇稀釋成質量濃度為1mg/L的混合標準中間液，用空白樣品基質溶液配制成適當濃度的混合標準系列工作溶液。

1.3樣品處理

準確稱取1g試樣（精確至0.01g）置于50mL容量瓶中，用甲醇水溶液（體積比，1∶1）定容至刻度，渦旋振搖2min，9000r/min離心2min，取上清液經微孔濾膜（0.45μm，有機相）過濾，供超高效液相色譜-串聯質譜分析。

1.4色譜條件

分析柱：WatersAcquityUPLCBEHC181.7μm（2.1mm×100mm）；流動相：A為0.1%甲酸水溶液；B為乙腈；洗脫梯度見表1；流速：0.3μL/min；柱溫：30℃；進樣量：2μL。

1.5質譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI源）；檢測方式：多反應離子監(jiān)測（MRM）；掃描方式：正離子掃描；毛細管電壓：5500V；脫溶劑溫度：500℃；氣簾氣壓力：35psi1；霧化氣壓力：55psi；輔助氣壓力：55psi；參考監(jiān)測離子對和參考參數見表2。

2結果與分析

2.1質譜條件的優(yōu)化

采用直接進樣的方式，將5種化合物質量濃度為100ng/mL的混合標液注入離子源，在ESI正離子的模式下進行一級質譜分析，得到母離子和子離子。優(yōu)化其電噴霧電壓、碰撞氣、脫溶劑溫度、氣簾氣壓力、霧化氣壓力、干燥氣壓力等參數。采用MRM監(jiān)測模式，對已獲得的離子對進行二級質譜碎裂，得到最優(yōu)錐孔電壓和碰撞能量，優(yōu)化后的質譜參數見表2。

2.2色譜條件的優(yōu)化

流動相的組成和比例直接影響物質的分離和靈敏度[31]。由于甲酸相對分子量小，更利于離子化和質譜的解析。同時考慮到5種化合物均為正離子模式，流動相中添加適量甲酸可增強目標分析物離子化效率，提高靈敏度。本研究比較了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-甲酸水3種流動相體系。其中使用甲醇-水、乙腈-水作為流動相時，均出現了峰型變寬和拖尾現象，此外，茶堿定性離子（m/z181.0/96.0）響應較低且不穩(wěn)定，未能達到檢測要求。同時，對0.1%、0.05%、0.01%這3種不同濃度的甲酸添加量作對比，結果表明，對于正離子化合物，甲酸濃度越低，靈敏度越低，峰型越差。在實驗過程中發(fā)現，愈創(chuàng)甘油醚的響應偏低，且受甲酸濃度影響。因此，選用乙腈-0.1%甲酸水作為流動相，5種化合物均能達到較優(yōu)的響應。

2.3基質效應研究

在質譜定量方法中，基質效應普遍存在，它由基質中的干擾物與目標化合物競爭電離所致[32]，選用空白基質曲線校正法可有效提高目標化學物的回收率。研究發(fā)現，在陰性涼茶中分別添加3個水平的待測物，各水平進行6次平行測定，比較溶劑曲線校正法和基質曲線校正法，甲硝唑的平均回收率從65.4%提高至94.7%；氨溴索的平均回收率從77.5%提高至90.6%。其余3種化合物使用基質曲線校正法均可達到滿意的回收率。故本實驗選用陰性涼茶樣品配制空白基質曲線，5種化合物定量離子對質量色譜圖見圖1～圖5。

2.4方法學驗證

以待測化合物定量離子的色譜峰面積作為縱坐標，以相對應濃度作為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明，在相應線性范圍內，5種化合物線性關系良好，r均大于0.994。檢出限為0.5mg/kg，S/N均大于3，定量限為1mg/kg，S/N均大于10。在陰性涼茶樣品中分別添加1mg/kg、2mg/kg和10mg/kg等3個水平的待測物，各水平進行6次平行測定，考察方法的回收率和精密度。結果顯示，本研究方法回收率為87.2%～98.9%，相對標準偏差（RSD）為1.05%～3.47%，如表3、表4所示。

2.5實際樣品檢測情況

在廣東省內零售市場隨機購買，標稱為感冒茶、止咳茶、牙痛茶等50份樣品。所有涼茶均未檢出茶堿、氨溴索、甲硝唑、異丙嗪和愈創(chuàng)甘油醚成分。

3結論

本研究建立了超高效液相色譜-串聯質譜法同時測定涼茶中的茶堿、氨溴索、甲硝唑、異丙嗪和愈創(chuàng)甘油醚等5種化合物。能在5min內對目標化合物進行快速篩查。本方法操作簡單、高效，峰型較優(yōu)，方法學驗證結果滿意，可以滿足日常檢測要求，能為涼茶非法添加化學藥物情況的監(jiān)管提供可靠技術支撐。