[摘要]目的采用加權基因共表達網絡分析（weightedgeneco-expressionnetworkanalysis，WGCNA）方法篩選并鑒定阿爾茨海默?。ˋlzheimer’sdisease，AD）相關的衰老基因。方法從GEO數(shù)據庫中選擇GSE132903作為分析數(shù)據集，篩選AD差異表達基因（differentialexpressedgene，DEG），采用火山圖和熱圖進行差異基因可視化分析；從MsigDB、AgingAltas、CellAge三個數(shù)據庫中下載衰老和衰老相關基因（agingandsenescence-associatedgene，ASAG）；WGCNA篩選與AD臨床特征相關性最高的基因模塊，并采用基因本體（geneontology，GO）、京都基因與基因組百科全書（KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes，KEGG）對模塊內基因進行富集分析；取DEG、WGCNA關鍵模塊基因及ASAG的交集基因得到AD衰老相關差異表達基因（ADage-relateddifferentialexpressedgene，ARDEG），使用STRING數(shù)據庫進行蛋白質-蛋白質相互作用（protein-proteininteraction，PPI）網絡分析尋找關鍵節(jié)點基因；使用GeneMANIA數(shù)據庫分析ARDEG的共表達網絡和相關功能；最后將篩選到的關鍵基因在已知AD患者數(shù)據庫Alzdata中進行驗證。結果共篩選出226個DEG，611個ASAG，8個ARDEG。PPI篩選出排名前5位的關鍵基因分別為SYP、STXBP1、VAMP2、CPLX1和STX1A。Alzdata數(shù)據庫驗證發(fā)現(xiàn)除海馬區(qū)VAMP2和額葉皮層STXBP1無明顯改變、額葉皮層CPLX1無表達外，5個關鍵基因在AD其余腦區(qū)中表達均下調，且VAMP2、STXBP1和STX1A已在AD早期出現(xiàn)差異表達，CPLX1與Tau病理過程有關，SYP、STXBP1與β-淀粉樣蛋白和Tau病理過程均有關。結論SYP、STXBP1、VAMP2、CPLX1和STX1A均為ARDEG，有望成為AD潛在的診斷和治療靶點。

[關鍵詞]阿爾茨海默??；加權基因共表達網絡分析；衰老基因；生物信息學

[中圖分類號]R749.16[文獻標識碼]A[DOI]10.3969/j.issn.1673-9701.2024.28.004

ScreeningofagingkeygenesinAlzheimer’sdiseasebasedonWGCNA

LIXiaolin1，SUIXin2，MANZiteng1，CHENGTiantian1，SONGJuan1，BAOYanan1，LINYu1，YANGHongyan1

1.SchoolofPharmacyofQiqiharMedicalUniversity，Qiqihar161006，Heilongjiang，China;2.DepartmentofNeurology，theThirdAffiliatedHospitalofQiqiharMedicalUniversity，Qiqihar161000，Heilongjiang，China

[Abstract]ObjectiveUsingtheweightedgeneco-expressionnetworkanalysis（WGCNA）toexplorethekeygenesofagingassociatedwithAlzheimer’sdisease（AD）.MethodsGSE132903wasselectedfromGEOdatabaseastheanalysisdataset.Thedifferentialexpressedgenes（DEGs）ofADwerescreened，andvisualizedwithvolcanoandheatmap.Agingandsenescence-associatedgenes（ASAGs）weredownloadedfromMsigDB，AgingAltasandCellAgedatabases.WGCNAscreenedthegenemoduleswiththehighestcorrelationwithAD，andgenesofkeymodulessubsequentlyperformedwithgeneontology（GO），KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes（KEGG）enrichmentanalysis.ADage-relateddifferentialexpressedgenes（ARDEGs）wereobtainedbytakingintersectiongenesofDEGs，keymodulegenesofWGCNAandASAGs.Protein-proteininteraction（PPI）networkanalysiswasperformedusingtheSTRINGdatabasetofindkeynodegenes.Theco-expressionnetworksandassociatedfunctionsofkeygeneswereanalyzedusingtheGeneMANIAdatabase.ThekeygeneswerevalidatedinAlzdatadatabase.Results226DEGs，606ASAGsand8ARDEGswereobtained.Thetop5keygenesselectedbyPPIwereSYP，STXBP1，VAMP2，CPLX1andSTX1A.Alzdatadatabaseverifiedthattheexpressionsof5keygenesinotherbrainregionsofADweredown-regulated，exceptfornosignificantchangesofVAMP2inhippocampusandSTXBP1infrontalcortex，aswellasnoexpressionofCPLX1infrontalcortex.ThedifferentialexpressionofVAMP2，STXBP1andSTX1AappearedintheearlystageofAD，andCPLX1wasrelatedtothepathologicalprocessofTau.SYPandSTXBP1wererelatedtothepathologicalprocessesofamyloidβ-proteinandTau.ConclusionSYP，STXBP1，VAMP2，CPLX1andSTX1AareARDEGs，whichareexpectedtobepotentialdiagnosticandtherapeutictargetsforAD.

[Keywords]Alzheimer’sdisease;Weightedgeneco-expressionnetworkanalysis;Aginggene;Bioinformatics

阿爾茨海默?。ˋlzheimer’sdisease，AD）是一種起病隱匿且進行性發(fā)展的神經系統(tǒng)退行性疾病，臨床上以記憶減退、失語、失認為主要特征[1-2]。AD的發(fā)病機制迄今未明，且患者的病理生理改變早于臨床癥狀出現(xiàn)，現(xiàn)有的治療手段只能延緩AD的進程[3]。隨著社會步入老齡化時代，AD的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢，嚴重影響老年人的身心健康和日常生活質量，加重患者及其家庭的經濟負擔，已成為嚴重的社會問題，深入研究AD的發(fā)病機制和治療策略迫在眉睫。衰老是AD的關鍵危險因素，衰老細胞在組織中積累，通過釋放炎癥因子，導致與年齡相關的病理改變。臨床證據表明，神經炎癥在AD患者出現(xiàn)輕度認知障礙前即已發(fā)生，說明早期神經炎癥可能由大腦中衰老細胞積累所驅動；而AD病理改變又促進衰老進程，進一步增加衰老細胞的負擔和衰老大腦中的炎癥。β-淀粉樣蛋白（amyloidβ-protein，Aβ）的積聚和Tau病理驅動的衰老也是導致AD進程加重的原因[4]。因此，抗衰老靶向藥物可預防或減輕AD的發(fā)生和發(fā)展。本研究采用加權基因共表達網絡分析（weightedgeneco-expressionnetworkanalysis，WGCNA）篩選與AD相關的衰老基因，并在AD患者中進行驗證，尋找AD衰老生物標志物，為AD的診斷和治療提供新的靶點。

1資料與方法

1.1數(shù)據收集和處理

從GEO公共數(shù)據庫（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/geo）中以關鍵詞“Alzheimer’sdisease”搜索并篩選微列陣數(shù)據集，本研究選取來源于GPL10558平臺的GSE132903數(shù)據集進行分析，該數(shù)據集包含AD患者97例和非癡呆對照者98例。

1.2差異表達基因篩選

使用limmaR包對數(shù)據集進行標準化和規(guī)范化處理，輸出同時滿足|log2foldchange（log2FC）|>1且P<0.05的基因作為差異表達基因（differentialexpressiongene，DEG）。使用R軟件ggplot2繪制火山圖，ComplexHeatmap工具包繪制熱圖，進行可視化分析。

1.3衰老相關基因篩選

從MsigDB（https：//www.gsea-msigdb.org/gsea/msigdb）、AgingAltas（https//ngdc.cncb.ac.cn/aging/index）、CellAge（https：//genomics.senescence.info/cells/）3個衰老數(shù)據庫中，依次以“Senescencegene”為關鍵詞搜索、下載衰老相關基因集，對3個衰老數(shù)據庫得到的基因集取并集，重復的基因只計一次，最終得到衰老和衰老相關基因（agingandsenescence-associatedgene，ASAG）合集。

1.4WGCNA

利用WGCNA方法選擇適當?shù)能涢撝郸聵嫿o標度網絡，采用動態(tài)剪切樹法進行層次聚類；計算基因顯著性（genesignificance，GS）及模塊顯著性（modulesignificance，MS），選取相關系數(shù)最高的模塊為關鍵模塊，模塊中的基因作為候選基因。

1.5AD衰老相關差異表達基因的篩選

取DEG、ASAG及WGCNA關鍵模塊基因的交集基因作為AD衰老相關差異表達基因（ADage-relateddifferentialexpressedgene，ARDEG），即AD和衰老共同的差異表達基因，進行后續(xù)分析。

1.6差異基因功能富集分析

利用David數(shù)據庫（https：//david.ncifcrf.gov）進行基因本體（geneontology，GO）功能分析和京都基因與基因組百科全書（KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes，KEGG）通路富集分析。GO分析包括生物過程（biologicalprocess，BP）、細胞組分（cellularcomponent，CC）和分子功能（molecularfunction，MF）三部分，KEGG主要分析基因相關的代謝通路。

1.7蛋白質-蛋白質相互作用網絡構建及關鍵基因篩選

通過STRING在線分析軟件（http：//www.string-db.org）構建蛋白質-蛋白質相互作用（protein-proteininteraction，PPI）網絡。利用Cytoscapes軟件中的Cytohubba插件，綜合多種算法篩選出評分較高的ARDEG作為關鍵基因。GeneMANIA數(shù)據庫（http：//genemania.org/）分析ARDEG關鍵基因的共表達網絡和相關功能。

1.8關鍵基因在已知AD患者數(shù)據庫中的驗證

為進一步驗證關鍵基因在AD中的表達情況，借助已有的AD患者數(shù)據庫（www.Alzdata.org）對篩選出的ARDEG關鍵基因進行驗證。關鍵基因表達改變以log2FC形式展示，P值為調整后的P值。同時采用趨同功能基因組（convergentfunctionalgenomics，CFG）方法對關鍵基因進行評估，以進一步篩選在AD中發(fā)揮關鍵作用的核心基因。CFG評分范圍0～5分，分值越高說明該基因與AD相關性越強。

2結果

2.1DEG篩選結果

共篩選出226個DEG，其中78個基因表達上調，148個基因表達下調。圖1為DEG的火山圖和熱圖。

2.2WGCNA分析結果

根據無尺度網絡擬合指數(shù)和平均連接度，計算并選取相關系數(shù)為0.87，軟閾值為12，構建無尺度網絡。動態(tài)剪切樹法進行基因聚類。通過計算分析各基因模塊與臨床表型之間的關系，繪制共表達模塊與臨床表型的相關性熱圖，共獲得16個基因共表達模塊。選擇與AD表型相關性最強的黑灰色模塊（cor=-0.45，P<0.01）對其進行散點圖分析，GS與MS在黑灰色模塊中呈正相關（r=0.39，P=5.3×10-11）。設置篩選條件為GS>0.1，MS>0.8，校正后P<0.01，進一步篩選黑灰色模塊中的關鍵樞紐基因。剔除非編碼基因后，共篩選出105個基因作為候選關鍵基因，見圖2。

A.軟閾值篩選；B.基因聚類；C.生物模塊與臨床表型相關性分析；D.關鍵生物模塊特征與模塊基因的相關性分析

2.3GO和KEGG富集分析結果

對DEG及WGCNA關鍵模塊內的基因進行GO功能注釋和KEGG信號通路富集分析，結果顯示DEG主要富集在化學突觸傳遞等生物學過程、神經元投射等細胞成分、可溶性N-乙基馬來酰亞胺敏感因子附著受體（solubleN-ethylmaleimidesensitivefactorattachmentreceptors，SNARE）綁定等分子功能及突觸囊泡周期等信號通路。WGCNA關鍵模塊基因主要參與突觸囊泡內吞等生物學過程、突觸囊泡膜等細胞成分、蛋白結合等分子功能及突觸囊泡周期等信號通路富集，見圖3。

2.4ARDEG的篩選及鑒定結果

從MsigDB、AgingAltas、CellAge三個衰老數(shù)據庫中檢索ASAG，取并集，共得到611個ASAG。對DEG、ASAG及WGCNA關鍵模塊基因取交集，得到8個ARDEG，分別為SYP、VAMP2、STXBP1、CPLX1、STX1A、PTPRN、NRGN和CKMT1A，見圖4。

A.DEG的GO富集分析；B.DEG的KEGG通路富集分析；

C.WGCNA關鍵模塊基因的GO富集分析；D.WGCNA關鍵模塊基因的KEGG通路富集分析

2.5PPI網絡構建及關鍵基因篩選結果

通過STRING在線分析軟件構建ARDEG的PPI網絡，見圖5A。除去一個孤立的節(jié)點（CKMT1A），采用Cytohubba插件，使用最大集團中心性、最大相鄰成分、節(jié)點連接度和邊緣滲濾分量等算法篩選出評分較高的前5位關鍵基因，分別為SYP、STXBP1、VAMP2、CPLX1和STX1A。通過GeneMANIA數(shù)據庫構建關鍵基因共表達網絡，篩選出與關鍵基因存在相互作用的基因20個，見圖5B。

2.6關鍵基因驗證

將篩選到的關鍵基因輸入Alzdata數(shù)據庫進行驗證，除VAMP2在海馬區(qū)、STXBP1在額葉皮層無明顯改變和CPLX1在額葉皮層無表達外，5個關鍵基因在AD其余腦區(qū)中表達均下調，見圖6。CFG評分由高到低分別為：STXBP1（4分）、VAMP2（3分）、CPLX1（3分）、SYP（1分）、STX1A（1分）。其中STXBP1、VAMP2、STX1A在AD早期已存在差異表達，CPLX1與Tau蛋白有關，STXBP1、SYP與Aβ和Tau形成均具有相關性，見表1。

3討論

本研究通過WGCNA對GSE132903數(shù)據集進行分析，篩選出與AD臨床特征高度相關的黑灰色模塊，進一步將該模塊內的基因與AD的DEG、ASAG取交集，得到8個ARDEG，構建PPI網絡，最終篩選出排名前5位的關鍵基因：SYP、STXBP1、VAMP2、CPLX1和STX1A。

SYP（synaptophysin，突觸生長蛋白）是一種鈣結合糖蛋白，廣泛分布于神經突觸前膜的囊泡膜，釋放Ca2+依賴性神經遞質，參與突觸小泡的進入和再循環(huán)，是突觸前末梢的特異性標志蛋白[5]。SYP表達水平可反映突觸的密度、分布面積和功能狀態(tài)，從而反映突觸的可塑性[6]。SYP被天冬酰胺內肽酶剪切后，可影響突觸囊泡的再循環(huán)，導致突觸功能障礙和認知障礙，促進AD發(fā)病[7]。研究發(fā)現(xiàn)AD模型小鼠腦組織及AD患者腦海馬區(qū)域的SYP表達均下調[5，8]；臨床尸檢已證實AD患者前額葉和海馬等腦區(qū)SYP表達下調，且其表達水平與臨床癥狀呈負相關[9]。突觸蛋白丟失是散發(fā)性AD的早期發(fā)病機制之一[10]。本研究發(fā)現(xiàn)SYP在AD患者各腦區(qū)表達顯著下調，與上述研究結果一致，提示SYP可能通過影響突觸可塑性參與AD的發(fā)生發(fā)展，可成為AD潛在的治療靶點。

STXBP1（syntaxin-bindingprotein1，突觸結合蛋白1）可與突觸素1的N端結合，促進整合膜蛋白受體復合物的形成和神經遞質的釋放[11-12]。研究發(fā)現(xiàn)STXBP1缺失可導致轉錄和翻譯的廣泛失調，影響突觸的發(fā)育，進而使神經元細胞在突觸形成前的未成熟階段死亡[13]。STXBP1在大鼠大腦中形成淀粉樣原纖維聚集體，并在大鼠腦和細菌表達系統(tǒng)中表現(xiàn)出淀粉樣蛋白特性，參與淀粉樣蛋白聚集[14]。本研究發(fā)現(xiàn)STXBP1在AD早期已出現(xiàn)表達下調，且與Aβ及Tau形成密切相關，提示STXBP1可作為AD診斷和治療的靶點。

VAMP2（vesicle-associatedmembraneprotein2，囊泡相關膜蛋白2）是SNARE復合體的重要組成部分，分布于囊泡膜上，參與神經遞質釋放[15]。VAMP2可作為輕度認知障礙患者向AD轉變的標志物[16]。研究發(fā)現(xiàn)散發(fā)性AD患者早期腦脊液中VAMP2水平降低[17]。糖原合酶激酶3是一種在神經元的發(fā)育和成熟過程中非常重要的蛋白激酶。研究發(fā)現(xiàn)糖原合酶激酶3的激活可抑制VAMP2順向軸突轉運，導致VAMP2在胞體的聚集和軸突遠端含量的降低，進一步加劇軸突轉運障礙，影響突觸可塑性[18]。本研究發(fā)現(xiàn)VAMP2在AD患者各腦區(qū)表達下調，且在AD早期就已經出現(xiàn)，提示VAMP2可作為AD認知功能下降的標志物，進行早期篩查。

CPLX1（complexin-1，復合素1）是突觸前結構中重要的神經遞質釋放調節(jié)蛋白，可與鈣感受器一起調控鈣依賴性神經遞質的快速釋放，加速突觸囊泡胞吐作用[19]。補益脾胃的方藥可提高SAMP8小鼠海馬CPLX1水平，調節(jié)突觸功能，促進神經遞質釋放，改善小鼠學習記憶能力[20]。逍遙散可通過上調CPLX1改善大鼠的焦慮抑郁癥狀，說明CPLX1可能是藥物發(fā)揮抗焦慮抑郁作用的關鍵靶點[21]。AD患者常伴焦慮、失眠、抑郁等癥狀；本研究發(fā)現(xiàn)CPLX1在AD患者腦區(qū)下調，提示可通過上調CPLX1水平緩解AD患者的失眠、抑郁等精神狀況。

STX1A（syntaxin-1A，突觸融合蛋白-1A）是突觸蛋白家族的一種突觸前質膜蛋白，與其他蛋白共同組成SNARE復合物，對調節(jié)神經遞質的突觸前釋放至關重要[22]。STX1A位于突觸前膜的囊泡里，是重要的離子通道調節(jié)蛋白，可調節(jié)神經遞質的釋放，影響大腦神經系統(tǒng)的發(fā)育[23]。研究發(fā)現(xiàn)STX1A基因敲除小鼠表現(xiàn)出異常行為，可能與破壞5-羥色胺能神經系統(tǒng)有關[24]。STX1A基因變異與兒童多動癥易感性有關[25]。STX1A與AD相關的研究較少，本研究發(fā)現(xiàn)STX1A在AD早期各腦區(qū)中的表達水平下調，提示STX1A可作為AD早期檢測的生物標志物。

綜上，本研究通過WGCNA分析得到5個AD與衰老共同的關鍵基因SYP、STXBP1、VAMP2、CPLX1和STX1A，均在突觸通路上富集，具有成為AD早期診斷和治療靶點的潛力，值得進一步深入研究。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻]

[1] TIWARIS，ATLURIV，KAUSHIKA，etal.Alzheimer’sdisease：Pathogenesis，diagnostics，andtherapeutics[J].IntJNanomedicine，2019，14：&nbsp;5541–5554.

[2] ZHANGC.EtiologyofAlzheimer’sdisease[J].DiscovMed，2023，35（178）：757–776.

[3] ZHANGY，CHENH，LIR，etal.Amyloidβ-basedtherapyforAlzheimer’sdisease：Challenges，successesandfuture[J].SignalTransductTargetTher，2023，8（1）：248.

[4] GUERREROA，DESTROOPERB，ARANCIBIA-CáRCAMOIL.CellularsenescenceatthecrossroadsofinflammationandAlzheimer’sdisease[J].TrendsNeurosci，2021，44（9）：714–727.

[5] 闕然.miR-671介導γ-氨基丁酸對突觸素的調節(jié)在低聚果糖改善AD模型小鼠認知功能中的作用[D].沈陽：中國醫(yī)科大學，2021.

[6] ZHUXK，WANGP，LIUHJ，etal.ChangesandsignificanceofSYPandGAP-43expressioninthehippocampusofCIHrats[J].IntJMedSci，2019，16（3）：394–402.

[7] MENGLX，ZOUL，XIONGM，etal.AsynapsinIcleavagefragmentcontributestosynapticdysfunctioninAlzheimer’sdisease[J].AgingCell，2022，21（5）：e13619.

[8] QINS，HUXY，XUH，etal.RegionalalterationofsynapsinIinthehippocampalformationofAlzheimer’sdiseasepatients[J].ActaNeuropathol，2004，107（3）：209–215.

[9] MAD17gZh1eFIcShldsDvliTVvw4YN6R0YpOYaRSpiKQVk=RTINSB，DOWLINGAL，LIANEKHAMMYJ，etal.Synaptophysinandsynaptojanin-1indownsyndromearedifferentiallyaffectedbyAlzheimer’sdisease[J].JAlzheimersDis，2014，42（3）：767–775.

[10] ANSARIMA，RAOMS，AL-JARALLAHA.InsightsintoearlypathogenesisofsporadicAlzheimer’sdisease：Roleofoxidativestressandlossofsynapticproteins[J].FrontNeurosci，2024，17：1273626.

[11] LAMMERTSEHCA，VANBERKELAA，IACOMINOM，etal.HomozygousSTXBP1variantcausesencephalopathyandgain-of-functioninsynaptictransmission[J].Brain，2020，143（2）：441–451.

[12] ABRAMOVD，GUIBERSONNGL，BURRéJ.STXBP1encephalopathies：Clinicalspectrum，diseasemechanisms，andtherapeuticstrategies[J].JNeurochem，2021，157（2）：165–178.

[13] VANBERKELAA，KOOPMANSF，GONZALEZ-LOZANOMA，etal.Dysregulationofsynapticanddevelopmentaltranscriptomic/proteomicprofilesupondepletionofMUNC18-1[J].eNeuro，2022，9（6）：1–14.

[14] CHIRINSKAITEAV，SINIUKOVAVA，VELIZHANINAME，etal.STXBP1formsamyloid-likeaggregatesinratbrainanddemonstratesamyloidpropertiesinbacterialexpressionsystem[J].Prion，2021，15（1）：29–36.

[15] 康蓓佩.miR-34b/VAMP2通路在鉛暴露影響突觸囊泡形成中的作用及機制研究[D].西安：第四軍醫(yī)大學，2015.

[16] COSTAAS，F(xiàn)ERRIE，GUERINIFR，etal.VAMP2expressionandgenotypearepossiblediscriminatorsindifferentformsofdementia[J].FrontAgingNeurosci，2022，14：858162.

[17] GOOSSENSJ，CERVANTESGONZáLEZA，DEWITN，etal.Evaluationofcerebrospinalfluidlevelsofsynapticvesicleprotein，VAMP-2，acrossthesporadicAlzheimer’sdiseasecontinuum[J].AlzheimersResTher，2023，15（1）：186.

[18] 朱鈴強.糖原合酶激酶3在阿爾茨海默病發(fā)病中的作用及干預措施探討[D].武漢：華中科技大學，2007.

[19] MOHRMANNR，DHARAM，BRUNSD.Complexins：Smallbutcapable[J].CellMolLifeSci，2015，72（22）：4221-4235.

[20] 雷筱菁，第五永長，屈夏夏，等.補益脾胃元氣方藥對SAMP8小鼠海馬突觸活性帶蛋白cplx1/2及stx1表達的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2020，35（11）：5811–5815.

[21] 高耀，李肖，趙慧亮，等.基于iTRAQ蛋白質組學技術探討逍遙散對慢性溫和不可預知應激大鼠海馬組織的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2021，36（6）：3256–3261.

[22] LUPPEJ，STICHT&nbsp;H，LECOQUIERREF，etal.HeterozygousandhomozygousvariantsinSTX1Acauseaneurodevelopmentaldisorderwithorwithoutepilepsy[J].EurJHumGenet，2023，31（3）：345–352.

[23] CUPERTINORB，SCHUCHJB，BANDEIRACE，etal.Replicatedassociationofsynaptotagmin（SYT1）withADHDanditsbroaderinfluenceinexternalizingbehaviors[J].EurNeuropsychopharmacol，2017，27（3）：239–247．

[24] FUJIWARAT，SNADAM，KOFUJIT，etal.HPC-1/syntaxin1Ageneknockoutmiceshowabnormalbehaviorpossiblyrelatedtoadisruptionin5-HTergicsystems[J].EurJNeurosci，2010，32（1）：99–107.

[25] WANGM，GUX，HUANGX，etal.STX1Agenevariationscontributetothesusceptibilityofchildrenattention-deficit/hyperactivitydisorder：Acase-controlassociationstudy[J].EurArchPsychiatryClinNeurosci，2019，269（6）：689–699.

（收稿日期：2024–06–16）

（修回日期：2024–09–08）