摘要：目的 探究發(fā)酵小麥胚芽提取物主要活性成分2，6-二甲氧基-1，4-苯醌（DMQ）抑制NLRP3炎癥小體活化并緩解小鼠感染性休克的作用機制。方法 細胞學(xué)水平： 在BMDM細胞中，經(jīng)脂多糖（LPS）預(yù)處理、DMQ 干預(yù)后，利用尼日利亞菌素（Nigericin）、ATP、尿酸鈉結(jié)晶（MSU）分別活化經(jīng)典NLRP3炎癥小體以及胞內(nèi)轉(zhuǎn)染LPS活化非經(jīng)典NLRP3炎癥小體。利用聚脫氧腺苷酸（Poly A：T）活化AIM2炎癥小體。在THP-1細胞中，利用Nigericin活化經(jīng)典NLRP3炎癥小體，通過Western blotting和ELISA方法測定NLRP3炎癥小體活化產(chǎn)物的表達水平。蛋白分子水平：利用免疫共沉淀探究DMQ阻斷NLRP3炎癥小體活化的具體機制。動物水平：將8 周齡雄性C57BL/6J 小鼠隨機分為空白對照組、感染性休克LPS 組、DMQ 20 mg/kg 治療組、DMQ 40 mg/kg治療組，6只/組，待DMQ治療組小鼠預(yù)注射相應(yīng)濃度DMQ后，對照組小鼠注射無菌PBS，其余3組小鼠腹腔注射相同劑量LPS，利用ELISA檢測DMQ干預(yù)對LPS誘導(dǎo)的小鼠感染性休克模型中血清和腹腔灌洗液中TNF-α和IL-1β分泌水平的影響。DMQ預(yù)處理后注射LPS觀察記錄小鼠36 h內(nèi)的生存狀態(tài)并繪制生存曲線。結(jié)果 DMQ可有效抑制小鼠BMDM細胞和人THP-1細胞中經(jīng)典NLRP3炎癥小體活化（Plt;0.05），在小鼠BMDM細胞中對非經(jīng)典NLRP3炎癥小體活化也起到有效抑制作用（Plt;0.05），DMQ對AIM2炎癥小體活化無影響（Pgt;0.05）。進一步實驗結(jié)果揭示DMQ可阻斷ASC和NLRP3之間的相互作用。DMQ治療組可顯著降低小鼠血清和腹腔液中IL-1β的分泌水平（Plt;0.05）并延長小鼠生存時間（Plt;0.05）。結(jié)論 發(fā)酵小麥胚芽提取物主要活性成分DMQ通過阻斷ASC和NLRP3之間的相互作用有效抑制NLRP3炎癥小體活化并緩解LPS誘導(dǎo)的小鼠感染性休克。

關(guān)鍵詞：2，6-二甲氧基-1，4-苯醌；NLRP3 炎癥小體；感染性休克；發(fā)酵小麥胚芽提取物

核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域受體蛋白3（NLRP3）小體是由NOD樣受體家族中NLRP3、接頭蛋白ASC和效應(yīng)蛋白caspase-1 前體組成的一類多聚蛋白復(fù)合物［1］。

NLRP3 炎癥小體是先天免疫系統(tǒng)的一個重要組成部分，普遍存在于免疫細胞中，它在多種刺激下（如微生物感染和細胞損傷）通過激活caspase-1，促進炎性細胞因子IL-1β/IL-18的分泌，從而介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，同時還可剪切GSDMD進而誘導(dǎo)細胞焦亡［2］。NLRP3 炎癥小體的正?；罨瘜S持機體穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要［3］。NLRP3炎癥小體失調(diào)可導(dǎo)致大量炎性因子分泌，參與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展，例如神經(jīng)退行性疾病、代謝紊亂疾病、自身免疫炎性疾病與心血管疾病，其中包括癲癇［4］、酒精性肝炎［5］、慢性粒細胞白血?。?］和動脈粥樣硬化［7］等。NLRP3炎癥小體與多種炎性相關(guān)疾病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。目前 NLRP3炎癥小體相關(guān)疾病的臨床治療以IL-1β為靶點［8］，例如IL-1β抑制劑Canakinumab。但是靶向IL-1β的治療手段存在具有非特異性和局限性的弊端，因此篩選出一種特異性好且作用顯著的NLRP3炎癥小體抑制劑尤為重要。

發(fā)酵小麥胚芽提取物，商品名為愛維麥（Avamer），是一種在2002年在匈牙利被注冊為可應(yīng)用于癌癥患者的特殊營養(yǎng)品。有研究表明愛維麥具有獨特的抗癌的作用［9］。愛維麥可導(dǎo)致腫瘤細胞中MHC Ⅰ類蛋白的下調(diào)，增加NK細胞識別、殺傷轉(zhuǎn)移性腫瘤細胞的敏感性，可在化療、手術(shù)、放療后抑制轉(zhuǎn)移性腫瘤的擴散和增殖［10］。除此之外，在人HT29 結(jié)腸癌細胞中，愛維麥可抑制細胞的核糖核苷酸還原酶活性，誘導(dǎo)細胞凋亡［11］。天然化學(xué)物質(zhì)2，6-二甲氧基-1，4-苯醌（DMQ）是發(fā)酵小麥胚芽提取物中的主要生物活性成分［12］，存在于各種植物中，可以調(diào)節(jié)多種生物過程，例如電子傳遞活性［13］和氧化磷酸化［14］。DMQ通過調(diào)節(jié)AKT/mTOR信號通路和增強線粒體功能來增加骨骼肌質(zhì)量和性能，可能有助于骨骼肌萎縮的治療和預(yù)防［15］。據(jù)報道，DMQ具有良好的抗炎活性，能劑量依賴性地抑制LPS誘導(dǎo)的NO生成［16］。DMQ還具有顯著的抗腫瘤活性，對TPA誘導(dǎo)的皮膚致癌作用有預(yù)防作用［16］、對4-（甲基亞硝胺）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）誘導(dǎo)的小鼠肺腫瘤有明顯抑制作用［17］，還可以抑制胃癌細胞生長和誘導(dǎo)胃癌細胞凋亡。DMQ可以降低胃癌細胞中的mTOR信號通路Ki-67、磷酸化mTOR和磷酸化p70S6K的表達，是一種新型mTOR蛋白激酶抑制劑［18］。除此之外，DMQ在脂肪生成抑制中也發(fā)揮重要作用，可顯著降低各種脂肪形成轉(zhuǎn)錄因子的表達，包括過氧化物酶體增殖物激活受體-γ（PPARs-γ），CCAAT/增強子結(jié)合蛋白α（CEBPα）以及脂肪細胞蛋白2（aP2）和脂肪酸合酶［19］。以上研究表明，DMQ對炎癥、腫瘤以及脂肪生成均表現(xiàn)出良好的抑制效果，鑒于NLRP3炎癥小體在惡性腫瘤、高脂誘發(fā)的2型糖尿病等疾病發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，但目前尚未有DMQ對NLRP3 炎癥小體活化影響的報道。因此，本研究通過體內(nèi)外實驗探究發(fā)酵小麥胚芽提取物主要活性成分DMQ對NLRP3炎癥小體活化的影響，以期為NLRP3炎癥小體相關(guān)炎性疾病的治療提供潛在的藥物治療方案。

1 材料和方法

1.1 實驗動物和細胞株

6～8周齡的SPF級C57BL/6J雄性小鼠購自江蘇集萃藥康生物科技股份技術(shù)有限公司，所有小鼠均飼養(yǎng)于無特定病原體（SPF）環(huán)境，溫度22～24℃，光照時間為8：00～22：00，保持光照循環(huán)14 h光照10 h黑暗，定期觀察小鼠生活狀態(tài)，及時調(diào)整飼養(yǎng)條件，實驗嚴格按照實驗動物管理規(guī)范進行。急性單核細胞白血病細胞系（THP-1）購自武漢普諾賽生命科技有限公司。本研究所有動物實驗均經(jīng)蚌埠醫(yī)科大學(xué)倫理委員會審核批準（倫動科批字［2020］第57號）。

1.2 試劑

2，6-Dimethoxy-1，4-benzoquinone（上海陶術(shù)生化，純度99.46%）；高糖DMEM培養(yǎng)基；RPMI 1640 培養(yǎng)基；OPTI-MEM培養(yǎng)基；胎牛血清（Gibco）；紅細胞裂解液、NP-40 裂解液（Beyotime）；巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）（Navoprotein）；尼日利亞菌素（Nigericin，MCE）；三磷酸腺苷（ATP）、尿酸鈉結(jié)晶（MSU）（Sigma）；聚脫氧腺苷酸（Poly A：T）、脂多糖（LPS）、三酰酯肽（Pam3CK4）、佛波醇（PMA）、Lipofectamine2000（Invitrogen）；ELISA試劑盒（Mouse IL-1β、TNF-α、IL-6，Human IL-1β ELISA kit）（Ramp;D）；Anti-mouse caspase-1（p20）、Anti-NLRP3（AdipoGen）；Anti-mouse IL-1β（Ramp;D）、Anti- β-actin（Proteintech）；Anti-human p20、Anti-IgG、Anti-ASC（Cell Signaling Technology） ；Protein G Agarose（Merck）。

1.3 細胞提取與培養(yǎng)

小鼠骨髓來源巨噬細胞（BMDM）的獲取與培養(yǎng)：首先選取SPF級6～8周齡的雄性小鼠，經(jīng)頸脫臼法處死后，浸泡酒精消毒，取腿骨存放于1.5 mL EP管，在經(jīng)紫外滅菌超30 min 的超凈工作臺中剪去腿骨兩端，用20 mL注射器吸取DMEM培養(yǎng)基反復(fù)沖洗獲取腿骨中的細胞，離心后快速棄掉上清，根據(jù)細胞量加入2～3 mL紅細胞裂解液，靜置裂解2～3 min，于完全DMEM培養(yǎng)基中加入M-CSF 用于分化細胞，置于細胞培養(yǎng)箱并及時觀察細胞生長狀態(tài)。BMDM細胞呈細長梭形貼壁生長，通過流式細胞術(shù)鑒定巨噬細胞表面標志物（F4/80+CD11b+）。THP-1細胞的復(fù)蘇與培養(yǎng)：從液氮中取出凍存的THP-1細胞，在37 ℃水浴鍋快速化凍，皿中提前加入1640完全培養(yǎng)基，離心后棄上清，重懸之后分入各皿中，置于細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)并及時觀察細胞生長狀態(tài)。

1.4 細胞刺激

鏡下觀察細胞生長密度和分化狀態(tài)，選取生長狀態(tài)良好的BMDM/THP-1細胞，接種至12孔細胞培育板培養(yǎng)過夜。LPS（100 ng/mL）預(yù)處理4 h 后加入不同劑量DMQ，30 min 后加入多種經(jīng)典NLRP3 炎癥小體的激活劑，如Nigericin、ATP 和MSU。其中Nigericin 活化25 min、ATP活化35 min、MSU活化3.5 h。對于非經(jīng)典NLRP3 炎癥小體，我們首先用Pam3CK4（200 ng/mL）對BMDM細胞預(yù)處理3.5 h后，胞內(nèi)轉(zhuǎn)染LPS（2 μg/mL）活化非經(jīng)典NLRP3 炎癥小體。LPS（100 ng/mL）預(yù)處理4 h 后，Poly A：T（1 μg/mL）胞內(nèi)轉(zhuǎn)染4 h 活化AIM2炎癥小體。

1.5 酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）

將捕獲抗體稀釋后包被于固相載體上，室溫孵育過夜，PBST洗板洗去未結(jié)合捕獲抗體。加入封閉液孵育2 h，PBST洗板去除殘余封閉液。加入待測樣本（細胞上清液/血清/腹腔灌洗液）孵育1.5 h，PBST洗板去除未結(jié)合樣本。加入檢測抗體孵育1 h，PBST洗板去除未結(jié)合檢測抗體。加入辣根過氧化物酶（HRP），避光孵育25 min，PBST洗板去除多余HRP。加入底物TMB后等待顯色，10 min后加入10%H2SO4終止反應(yīng)，5 min內(nèi)于450 nm處讀取吸光度，繪制標準曲線并計算各細胞因子分泌水平。

1.6 Western blotting檢測

檢測caspase-1（p20）和IL-1β蛋白分子的表達：首先收集細胞上清液，離心棄細胞沉淀，利用甲醇氯仿法提取蛋白，加入1.5×Sample Buffer，金屬浴10 min。檢測Pro-caspase-1（Pro-casp1）、Pro-IL-1β蛋白表達：向細胞培養(yǎng)板中加入1.5×Sample Buffer，裂解后收集至1.5 mL EP管中，100 ℃金屬浴10 min。電泳步驟：首先根據(jù)蛋白分子量選擇適當(dāng)濃度的聚丙烯酰胺凝膠，之后將蛋白轉(zhuǎn)印到經(jīng)甲醇激活的PVDF膜上，室溫條件下用5 %BSA封閉1 h，使用PBST洗除殘余BSA。隨后，加入一抗抗體并于4 ℃條件孵育過夜，次日PBST洗去未結(jié)合一抗抗體。加入二抗抗體在室溫條件下孵育1.5 h，PBST洗去未結(jié)合二抗抗體，及時使用凝膠成像系統(tǒng)對條帶進行顯影。

1.7 免疫共沉淀

選取生長狀態(tài)良好的BMDM細胞接種至6 孔板中，用LPS進行預(yù)刺激，3 h后加DMQ于37 ℃溫箱孵育30 min，加入Nigericin 活化NLRP3 炎癥小體。待細胞活化后棄上清，加入NP-40裂解液充分裂解細胞，離心取上清，分為Input 組和IP 組。Input 組直接加入5×Sample Buffer，于100 ℃金屬浴煮10 min。IP組加入相應(yīng)抗體（Anti-IgG/Anti-NEK7/Anti-ASC），轉(zhuǎn)盤4 ℃過夜。離心10 min棄上清加入Beads（Protein G），轉(zhuǎn)盤于4 ℃條件孵育1 h，離心棄上清后加入5×Sample Buffer，金屬浴10 min。

1.8 構(gòu)建動物模型

1.8.1 構(gòu)建小鼠感染性休克模型

挑選SPF級8周齡、體質(zhì)量在20～21 g 的雄性C57BL/6J 小鼠隨機分組（6 只/組）：空白對照組（Control組）、感染性休克組（LPS組）、DMQ 20 mg/kg 治療組（LPS+DMQ 20 mg/kg）和DMQ40 mg/kg治療組（LPS+DMQ 40 mg/kg）。DMQ治療組小鼠腹腔注射DMQ（20 mg/kg、40 mg/kg） 50 min 后，Control組小鼠注射無菌PBS，另外3組小鼠腹腔注射等劑量的LPS（20 mg/kg），4 h后摘眼球取血、室溫靜置3 h離心獲得眼球血上層血清。頸脫臼法處死小鼠，用1 mL注射器收集小鼠腹腔灌洗液。ELISA檢測各組小鼠血清和腹腔灌洗液中炎性細胞因子IL-1β和TNF-α分泌水平。

1.8.2 繪制生存曲線

用兩種濃度（20 mg/kg、40 mg/kg）的DMQ預(yù)處理小鼠50 min 后，注射LPS 后觀察各組小鼠36 h 內(nèi)的死亡時間和存活率，使用GraphPadPrism 8.0軟件繪制模型生存曲線。

1.9 統(tǒng)計學(xué)分析

數(shù)據(jù)分析和生存曲線的繪制均使用GraphPadPrism 8.0 軟件完成。所有數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標準差表示，并采用獨立樣本t 檢驗來分析兩組數(shù)據(jù)的差異，生存曲線采用Log-rank 法比較，Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DMQ抑制Nigericin 誘導(dǎo)的經(jīng)典NLRP3 炎癥小體活化

在鼠BMDM細胞中，Western blotting檢測結(jié)果顯示，IL-1β和p20蛋白表達隨DMQ增加呈劑量依賴性的降低趨勢（Plt;0.05，圖1A），但對Pro-IL-1β和Pro-casp1蛋白表達無影響（Pgt;0.05，圖1A）。ELISA結(jié)果顯示，IL-1β的分泌可隨DMQ增加呈劑量依賴性的抑制趨勢（Plt;0.05，圖1B），但對NF-κB信號通路產(chǎn)生的促炎細胞因子TNF-α和IL-6的分泌無顯著影響（Pgt;0.05，圖1C、D）。在人THP-1 細胞中，Western blotting 結(jié)果顯示，p20 蛋白表達隨DMQ劑量增加呈降低趨勢（Plt;0.05，圖1E），但對Pro-casp1 的蛋白表達無顯著影響（Pgt;0.05，圖1E）。ELISA結(jié)果顯示，IL-1β的分泌可被DMQ劑量依賴性地抑制（Plt;0.05，圖1F）。

2.2 DMQ抑制ATP、MSU誘導(dǎo)的經(jīng)典NLRP3炎癥小體活化

Western blotting 結(jié)果顯示，IL-1β和p20 蛋白表達隨DMQ劑量增加而降低（Plt;0.05，圖2A），但對Pro-IL-1β和Pro-casp1蛋白的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05，圖2A）。ELISA 結(jié)果顯示，在ATP、MSU 誘導(dǎo)經(jīng)典NLRP3炎癥小體活化后，IL-1β的分泌可隨DMQ增加呈劑量依賴性的抑制趨勢（Plt;0.05，圖2B、C）在MSU誘導(dǎo)經(jīng)典NLRP3 炎癥小體活化后，Western blotting 結(jié)果顯示，IL-1β和p20蛋白表達隨DMQ增加呈劑量依賴性的降低趨勢（Plt;0.05，圖2D），但對Pro-IL-1β、Pro-casp-1蛋白的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05，圖2D）。

2.3 DMQ抑制胞內(nèi)轉(zhuǎn)染LPS誘導(dǎo)的非經(jīng)典NLRP3 炎癥小體

Western blotting 結(jié)果顯示，IL-1β和p20 蛋白表達隨DMQ增加呈劑量依賴性的抑制趨勢（Plt;0.05，圖3A），但對Pro-IL-1β和Pro-casp1 蛋白的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05，圖3A）。ELISA結(jié)果顯示，IL-1β的分泌可隨DMQ增加，呈劑量依賴性的抑制趨勢（Plt;0.05，圖3B）。

2.4 DMQ對Poly A：T誘導(dǎo)的AIM2炎癥小體無影響

Western blotting 結(jié)果顯示，與DMQ 抑制Nigericin 活化的NLRP3炎癥小體相比，DMQ對AIM2炎癥小體活化產(chǎn)生的各組分蛋白表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05，圖4A～E）。ELISA結(jié)果顯示，DMQ可顯著抑制Nigericin 誘導(dǎo)的IL-1β分泌，但對Poly A：T 誘導(dǎo)的IL-1β分泌無抑制作用（Pgt;0.05，圖4F）。

2.5 DMQ抑制NLRP3和ASC的相互作用

免疫共沉淀結(jié)果顯示，NEK7、ASC與NLRP3存在相互作用，加入DMQ未能阻斷NLRP3和NEK7之間的相互作用（Pgt;0.05，圖5A～C），但可顯著抑制下游NLRP3和ASC之間的相互作用（Plt;0.05圖5D～F）。

2.6 DMQ可有效緩解LPS誘導(dǎo)的小鼠感染性休克

ELISA結(jié)果顯示，與空白對照組相比，腹腔注射LPS 可導(dǎo)致感染性休克組小鼠血清和腹腔灌洗液中IL-1β、TNF-α的分泌明顯增加，DMQ治療組中小鼠血清和腹腔灌洗液中IL-1β的分泌水平隨DMQ濃度增加呈而下降（Plt;0.05，圖6A、C），但對TNF-α的分泌水平無影響（Pgt;0.05，圖6B、D）。DMQ給藥50 min后腹腔注射LPS，觀察并及時記錄小鼠36 h 內(nèi)生存狀態(tài)。結(jié)果顯示，感染性休克組小鼠于第10 h開始死亡，29 h時小鼠全部死亡。DMQ 20 mg/kg 治療組于25 h 開始有小鼠死亡（Plt;0.05，圖6E），DMQ 40 mg/kg 治療組于28 h 開始有小鼠死亡（Plt;0.05，圖6E）。

3 討論

NLRP3炎癥小體在人類先天免疫系統(tǒng)扮演著不可或缺的角色，其正?；罨瘜S持機體穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要，激活caspase-1并促進Pro-IL-1β和Pro-IL-18剪切為成熟的IL-1β和IL-18，以響應(yīng)微生物感染和細胞損傷［20， 21］，但其異常失調(diào)可導(dǎo)致大量炎性因子釋放并引發(fā)多種炎性相關(guān)疾病，如感染性休克［22］、冷吡啉相關(guān)周期性綜合征［23］、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎［24］和缺血性中風(fēng)［25］等，因此，靶向抑制NLRP3炎癥小體活化可以成為干預(yù)相關(guān)炎性疾病的新思路［26］。

小麥胚芽含有多種礦物質(zhì)和微量元素以及人體必需的營養(yǎng)物質(zhì)，具有高營養(yǎng)、低毒性、易獲取的優(yōu)點。由于小麥胚芽易受氧化影響，為方便保存，日常食用的小麥在加工過程中基本去除了富含營養(yǎng)的胚芽，造成多種營養(yǎng)素流失。被去除的小麥胚芽多作為副產(chǎn)品或用于制作動物飼料，故深度開發(fā)和有效利用小麥胚芽資源尤為重要。近年來對于發(fā)酵小麥胚芽提取物的研究主要集中在其抗癌方面，對其抗炎功效研究不足。

當(dāng)機體感受到病原微生物或其他危險信號的攻擊時，NLRP3炎癥小體被活化從而介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，維持機體免疫穩(wěn)態(tài)［27］。本研究利用Nigericin活化NLRP3炎癥小體，通過檢測Pro-casp1、Pro-IL-1β 和活化后的caspase-1（p20）以及IL-1β 分泌水平來觀察DMQ 對NLRP3 炎癥小體活化的影響，明確DMQ 可以抑制NLRP3炎癥小體的活化，但不影響Pro-IL-1β、Pro-casp1蛋白表達水平，相比于其他mTOR抑制劑如紅景天苷（Salidroside）對Nigericin 抑制濃度為50 μmol/L［28］，醌類化合物如大黃素（Emodin）對Nigericin抑制濃度約為50 μmol/L［29］，DMQ僅在10 μmol/L濃度就表現(xiàn)出更顯著的抑制作用。此外， DMQ在經(jīng)典NLRP3 炎癥小體的激活劑ATP、MSU誘導(dǎo)的NLRP3炎癥小體活化中也表現(xiàn)出良好的抑制效果，證明了DMQ抑制NLRP3炎癥小體活化的非單一性。Caspase-11 可通過識別胞內(nèi)LPS 激活非經(jīng)典NLRP3 炎癥小體［30］，實驗結(jié)果表明，DMQ同樣可以抑制非經(jīng)典NLRP3炎癥小體的活化。

AIM2 炎癥小體和NLRP3 炎癥小體一樣，可以活化caspase-1，在抗病毒免疫反應(yīng)中起重要作用［31］，為探究DMQ對NLRP3炎癥小體的作用是否具有特異性，利用DMQ干預(yù)Poly A：T激活A(yù)IM2炎癥小體，實驗結(jié)果表明DMQ對AIM2炎癥小體激活并無抑制作用，表明DMQ僅特異性抑制NLRP3炎癥小體活化。

免疫共沉淀結(jié)果顯示，DMQ可有效抑制NLRP3和ASC之間的結(jié)合，但對NEK7 和NLRP3 之間的結(jié)合無抑制作用，表明DMQ可直接影響NLRP3炎癥小體組裝活化。

在LPS 誘導(dǎo)的小鼠感染性休克模型中，LPS 使炎性細胞因子IL-1β和TNF-α的分泌顯著增加，DMQ在20 mg/kg的濃度即可降低IL-1β的分泌水平，有效緩解小鼠感染性休克，延長小鼠生存時間。與天然產(chǎn)物二氫丹參酮Ⅰ緩解小鼠感染性休克的效果相比，DMQ在40 mg/kg藥物濃度時效果更明顯，小鼠存活率高于二氫丹參酮Ⅰ［32］。DMQ對于TNF-α的分泌水平無顯著影響。以上結(jié)果表明DMQ可有效緩解NLRP3炎癥小體介導(dǎo)的感染性休克，提示DMQ有作為治療NLRP3炎癥小體相關(guān)疾病候選藥物的潛力。

綜上所述，DMQ能夠有效地抑制多種刺激劑在鼠BMDM細胞和人THP-1 細胞中誘導(dǎo)的NLRP3 炎癥小體活化，阻斷ASC和NLRP3 之間的相互作用，進而影響NLRP3炎癥小體的組裝和活化過程，緩解LPS誘導(dǎo)的小鼠感染性休克。本研究結(jié)果表明，DMQ對調(diào)節(jié)NLRP3 炎癥小體活化中有著明顯抑制作用，這為日后探索進一步DMQ抑制NLRP3炎癥小體活化的作用機制提供了實驗依據(jù)，有利于更好的深度開發(fā)和有效利用小麥胚芽的資源，同時為感染性休克及其他NLRP3炎癥小體相關(guān)炎性疾病了治療提供新的選擇和思路。

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（編輯：余詩詩）

基金項目：國家自然科學(xué)基金（82071775）；安徽省自然科學(xué)基金（2108085QH349）；慢性疾病免疫學(xué)基礎(chǔ)與臨床安徽省重點實驗室開放課題基金（AHIAI2022K01）；安徽省科研編制計劃優(yōu)秀青年科研項目（2022AH030140）；蚌埠醫(yī)學(xué)院2023 年度研究生科研創(chuàng)新計劃項目（Byycx23070）；2022 年安徽省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目（S202210367134）