【摘要】目的 分析流式細(xì)胞儀在腎移植術(shù)后慢性腎衰竭患者免疫功能監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值，為臨床治療提供參考。方法 選取2021年10月至2022年10月益陽(yáng)市中心醫(yī)院收治的45例行腎移植手術(shù)的慢性腎衰竭患者，將其納入手術(shù)組；將同期未行腎移植手術(shù)的45例慢性腎衰竭患者納入非手術(shù)組，進(jìn)行回顧性分析。比較兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群（CD4+T淋巴細(xì)胞百分比、CD3+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+比值）水平、自然殺傷細(xì)胞（NK）水平及不良反應(yīng)發(fā)生情況。結(jié)果 手術(shù)組患者CD4+T淋巴細(xì)胞百分比、CD3+T淋巴細(xì)胞百分比、NK水平均低于非手術(shù)組，CD4+/CD8+比值水平高于非手術(shù)組（均P<0.05）。兩組患者不良反應(yīng)總發(fā)生率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 流式細(xì)胞儀在腎移植術(shù)后慢性腎衰竭患者免疫功能監(jiān)測(cè)中具有積極意義，能夠有效對(duì)患者的免疫情況進(jìn)行預(yù)警和提示，從而指導(dǎo)臨床后續(xù)治療，值得臨床應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】流式細(xì)胞儀；腎移植；T淋巴細(xì)胞亞群；自然殺傷細(xì)胞

【中圖分類號(hào)】R446.11 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2096-2665.2024.20.0093.03

DOI：10.3969/j.issn.2096-2665.2024.20.030

腎移植是慢性腎衰竭患者的主要治療方法之一，腎移植術(shù)后使用免疫抑制劑（如他克莫司、嗎替麥考酚酯等）對(duì)預(yù)防術(shù)后排斥反應(yīng)至關(guān)重要[1]。若患者服用過(guò)小劑量的免疫抑制劑可能會(huì)引起移植器官的排斥反應(yīng)，甚至導(dǎo)致移植失敗，從而使患者不得不進(jìn)行二次透析，影響患者預(yù)后。雖然長(zhǎng)期使用免疫抑制劑可有效減少移植器官的排斥反應(yīng)，但會(huì)增加患者感染（特別是肺部細(xì)菌和病毒感染）的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，從而影響患者預(yù)后[2-3]。 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)被認(rèn)為是評(píng)估腎移植術(shù)后慢性腎衰竭患者免疫功能的有效方法，有助于醫(yī)師準(zhǔn)確識(shí)別患者免疫系統(tǒng)的變化，對(duì)預(yù)防排斥反應(yīng)或感染具有重要意義[4]。基于此，本研究選取90例慢性腎衰竭患者為研究對(duì)象，分析流式細(xì)胞儀在腎移植術(shù)后慢性腎衰竭患者免疫功能監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年10月至2022年10月益陽(yáng)市中心醫(yī)院收治的45例行腎移植手術(shù)的慢性腎衰竭患者，將其納入手術(shù)組；將同期未行腎移植手術(shù)的45例慢性腎衰竭患者納入非手術(shù)組，進(jìn)行回顧性分析。非手術(shù)組患者中男性30例，女性15例；年齡37～75歲，平均年齡（63.44±10.70）歲。手術(shù)組患者中男性32例，女性13例；年齡39～76歲，平均年齡（63.18±10.82）歲。兩組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。本研究經(jīng)益陽(yáng)市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴符合《慢性腎衰竭中西醫(yī)結(jié)合診療指南》[5]中慢性腎衰竭的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)臨床檢查確診；⑵年齡＞18歲；⑶手術(shù)組患者術(shù)后群體反應(yīng)性抗體（PRDJZUEbUsdSD9HWavm7RERg==A）結(jié)果為（-）；⑷臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并肝功能障礙者；⑵合并惡性腫瘤或嚴(yán)重心腦血管系統(tǒng)疾病者；⑶血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)異常者；⑷妊娠后哺乳期女性；⑸合并嚴(yán)重感染疾病者。

1.2 檢測(cè)方法 使用一次性使用真空采血管（康緣愛(ài)電子有限公司，鄂械注準(zhǔn)20222223906，型號(hào)： EDTA.K2）采集兩組患者空腹靜脈血5 mL，采用逆向抽取法取適量全血樣品于試管底部（注意不要讓全血樣品接觸到試管壁），加入適量熒光標(biāo)記抗體，后蓋好管帽，輕晃3 s，于室溫下避光孵育25 min后上機(jī)檢測(cè)。在檢測(cè)前，使用質(zhì)控球?qū)υ搩x器進(jìn)行標(biāo)定與校準(zhǔn)，使其熒光探測(cè)CV值＜2％。采用流式細(xì)胞儀[碧迪醫(yī)療器械（上海）有限公司，國(guó)械注進(jìn)20152221424，型號(hào)： BD FACSCanto Ⅱ]檢測(cè)兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群（CD4-+、 CD3+、 CD8+T淋巴細(xì)胞百分比）水平、自然殺傷細(xì)胞（NK）水平。

1.3 觀察指標(biāo) ⑴T淋巴細(xì)胞亞群。記錄兩組患者CD4+、 CD3+、 CD8+T淋巴細(xì)胞百分比，并計(jì)算CD4+/CD8+比值。⑵自然殺傷細(xì)胞（NK）。記錄兩組患者NK水平。⑶不良反應(yīng)發(fā)生情況。觀察并記錄兩組患者檢測(cè)過(guò)程中不良反應(yīng)的發(fā)生情況，包括頭暈乏力、惡心嘔吐、面色蒼白、心悸。不良反應(yīng)總發(fā)生率=不良反應(yīng)總發(fā)生例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 20.00統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以（x）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[例（％）]表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者T淋巴細(xì)胞亞群比較 手術(shù)組患者CD4+、 CD3+T淋巴細(xì)胞百分比均低于非手術(shù)組， CD4+/CD8+比值高于非手術(shù)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2 兩組患者NK水平比較 手術(shù)組患者NK水平為（11.36±3.26） %，低于非手術(shù)組的（16.70±3.77） %，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t值=7.187， P＜0.001）。

2.3 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生情況比較 兩組患者不良反應(yīng)總發(fā)生率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

慢性腎衰竭疾病進(jìn)展緩慢，通常由糖尿病、高血壓、慢性腎小球腎炎等疾病引起，主要臨床表現(xiàn)為疲勞、水腫、尿量減少、貧血、高血壓等，臨床常見(jiàn)治療方法包括控制基礎(chǔ)病、透析、腎移植等[6]。此外，該病患者在腎移植術(shù)后需接受免疫抑制劑藥物治療，以調(diào)節(jié)其免疫系統(tǒng)、改善腎功能，降低腎移植失敗及感染的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[7]。

T淋巴細(xì)胞亞群與移植器官免疫細(xì)胞亞群存在差異，且與移植器官免疫應(yīng)答啟動(dòng)時(shí)的白細(xì)胞抗原（HLA）抗體水平及機(jī)體的排斥反應(yīng)有關(guān)[8]。此外，T淋巴細(xì)胞亞群可直觀地反映腎移植術(shù)后慢性腎衰竭患者的免疫狀況，有助于對(duì)患者腎臟功能進(jìn)行早期評(píng)價(jià)和干預(yù)[9]。臨床常采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)患者T淋巴細(xì)胞亞群水平，該儀器能夠在短時(shí)間內(nèi)分析數(shù)萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，利用熒光標(biāo)記的單克隆抗體或熒光染料對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行多項(xiàng)特性的分析，進(jìn)而獲取多重信息[10]。

CD4+T淋巴細(xì)胞是人體內(nèi)最重要的免疫反應(yīng)細(xì)胞，其活化程度能夠反映機(jī)體的免疫狀態(tài)。腎移植術(shù)后慢性腎衰竭患者的CD4+T淋巴細(xì)胞被激活，進(jìn)而分泌多種細(xì)胞因子，對(duì)維持機(jī)體的免疫平衡起重要作用[11-12]。NK作為一種重要的免疫細(xì)胞，可有效殺死病毒感染的靶細(xì)胞。當(dāng)腎移植患者發(fā)生病毒感染后，其N(xiāo)K水平明顯降低，提示NK可能在巨細(xì)胞病毒感染中發(fā)揮重要作用。而CD8+T淋巴細(xì)胞百分比水平的升高則與機(jī)體發(fā)生排斥反應(yīng)（發(fā)熱、尿少、血尿，可能伴有移植腎區(qū)出血等）有關(guān)[13]。當(dāng)機(jī)體發(fā)生排斥反應(yīng)時(shí)，CD8+T淋巴細(xì)胞的異常升高，釋放大量免疫活性物質(zhì)，進(jìn)而影響腎臟的正常代謝功能，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過(guò)率下降，腎小管重吸收功能受損，嚴(yán)重威脅患者生命健康。

本研究結(jié)果顯示，手術(shù)組患者CD4+T淋巴細(xì)胞百分比、CD3+T淋巴細(xì)胞百分比、NK水平均低于非手術(shù)組，CD4+/CD8+比值水平高于非手術(shù)組。這提示流式細(xì)胞儀能夠有效檢測(cè)出腎移植術(shù)后慢性腎衰竭患者的T淋巴細(xì)胞亞群水平，從而評(píng)估患者的免疫功能情況，有利于對(duì)該疾病進(jìn)行早期診斷、早期治療。分析原因?yàn)?，本研究使用前向與側(cè)向的散射光作為門(mén)控裝置，可保證淋巴細(xì)胞的純度，提高測(cè)量結(jié)果的可重復(fù)性，具有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值[14]。此外，該儀器細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果更準(zhǔn)確、自動(dòng)化程度更高、使用更便捷，可準(zhǔn)確有效地反映腎移植術(shù)后慢性腎衰竭患者的免疫排斥反應(yīng)（如宿主抗移植物反應(yīng)、移植物抗宿主反應(yīng)、急性排斥反應(yīng)、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)等），從而及時(shí)發(fā)現(xiàn)患者的感染情況并及時(shí)采取干預(yù)措施[15-16]。本研究結(jié)果還顯示，兩組患者不良反應(yīng)總發(fā)生率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示流式細(xì)胞儀檢測(cè)具有一定的安全性，不會(huì)引起受試者較大的不適，更易被接受。

綜上所述，流式細(xì)胞儀在腎移植術(shù)后慢性腎衰竭患者免疫功能監(jiān)測(cè)中具有積極意義，能有效地對(duì)患者具體免疫情況進(jìn)行預(yù)警，從而指導(dǎo)臨床后續(xù)治療，值得臨床應(yīng)用。但本研究仍存在一定缺陷，如為確保研究的順利實(shí)施，受到時(shí)間限制納入樣本量較少，因此，在后續(xù)的研究中仍需要擴(kuò)大樣本量、開(kāi)展多中心的研究繼續(xù)探究流式細(xì)胞儀在腎移植術(shù)后慢性腎衰竭患者免疫功能監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值，為臨床治療提供參考。

參考文獻(xiàn)

楊秀彥，李錚，高燕，等.腎移植術(shù)后糖尿病的臨床危險(xiǎn)因素分析及預(yù)測(cè)模型建立[J].中華器官移植雜志， 2023， 44（9）： 533-540.

王曉勃.T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)應(yīng)用于腎移植術(shù)后排斥反應(yīng)與巨細(xì)胞病毒感染鑒別中的價(jià)值分析[J].臨床研究， 2018， 26（10）： 128-129.

王慶豐，顧艷紅，周春娟，等. BD FACSPresto快速CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)儀與流式細(xì)胞儀CD4+細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果比較分析[J].中國(guó)艾滋病性病， 2023， 29（7）： 819-820.

RIMAC V， INES B， KORALJKA G， et al.Evaluation of the bd stem cell enumeration kit on the bd facscanto II flow cytometer using bd facscanto clinical and bd facsdiva software [J].International Journal of Laboratory Hematology， 2020， 43（1）： 61-67.

中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腎臟疾病專業(yè)委員會(huì).慢性腎衰竭中西醫(yī)結(jié)合診療指南[J].河北中醫(yī)， 2016， 38（2）： 313-317.

戴芳，吳新梅，王冬穎，等.以腎外癥狀為主要表現(xiàn)的慢性腎衰竭誤診原因分析[J].臨床誤診誤治， 2023， 36（3）： 15-18.

陳家歡，李丹丹，孫艷，等.傳統(tǒng)與光譜流式細(xì)胞儀對(duì)自發(fā)熒光樣本檢測(cè)的比較[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床， 2023， 43（5）： 809-816.

侯敬財(cái)，余意，陳偉翔，等.腎移植術(shù)后淋巴細(xì)胞亞群變化與腎功能的相關(guān)性分析[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥， 2024， 31（7）： 74-77.

李偉，程豐，王鎖剛.免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)在器官移植患者中的應(yīng)用[J].腎臟病與透析腎移植雜志， 2021， 30（6）： 586-590.

段萃娟，凌愛(ài)琴，張翠，等.流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞亞群的常見(jiàn)問(wèn)題及其解決方案[J].武警醫(yī)學(xué)， 2021， 32（10）： 832-835.

李春景，周佩軍，徐達(dá)，等. CD4+T細(xì)胞內(nèi)ATP含量檢測(cè)在腎移植受者免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2011， 31（7）： 971-974.

吳琴鋒，任雄，孫麗，等.便攜式T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)儀與流式細(xì)胞儀檢測(cè)HIV感染者CD4+T淋巴細(xì)胞一致性分析[J].江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué)， 2024， 35（4）： 528-529.

熊海云，張雷，王立明，等.腎移植后外周血CD4+及CD8+T細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)的臨床意義[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)， 2011， 15（53）： 9957-9960.

張燕，周更生，袁丹，等.三種流式細(xì)胞儀檢測(cè)HIV/AIDS患者CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)相關(guān)性和一致性的比較[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志， 2022， 38（8）： 1158-1163.

王維維，奚迪，袁向亮，等.不同流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群的比較研究[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志， 2016， 39（5）： 361-365.

方佩琪，孫林，顧梅秀，等.碧迪FACS CantoⅡ流式細(xì)胞儀性能評(píng)價(jià)及實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志， 2019， 34（2）： 94-99.