徐瓊芳 鐘斐 李子帥

基金項(xiàng)目：湖南省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目（21C1525）

作者單位：1永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院（郵編425100）；2泉州市中醫(yī)院中醫(yī)婦產(chǎn)科

作者簡(jiǎn)介：徐瓊芳（1983），女，副教授，主要從事生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病的中醫(yī)藥防治方面研究。E-mail：yymkzj@163.com

摘要：目的 探討淫羊藿苷調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）/CXC型趨化因子受體4（CXCR4）信號(hào)軸對(duì)多囊卵巢綜合征（PCOS）大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響。方法 將從PCOS模型組大鼠卵巢組織中成功分離的顆粒細(xì)胞分為PCOS組、淫羊藿苷低劑量組、淫羊藿苷中劑量組、淫羊藿苷高劑量組、重組大鼠SDF-1蛋白（Rr-SDF-1）組、淫羊藿苷高劑量+Rr-SDF-1組，另取從正常對(duì)照組大鼠卵巢組織中成功分離的顆粒細(xì)胞作為對(duì)照組。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)卵巢顆粒細(xì)胞上清液中卵泡刺激素（FSH）、睪酮（T）、黃體生成素（LH）水平；CCK-8法、EdU染色檢測(cè)顆粒細(xì)胞增殖；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顆粒細(xì)胞凋亡；Western blot檢測(cè)顆粒細(xì)胞中Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）、裂解的胱天蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)。結(jié)果 與對(duì)照組比較，PCOS組FSH水平、光密度（OD）450值、EdU陽(yáng)性細(xì)胞率降低，T、LH水平、細(xì)胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）。與PCOS組比較，淫羊藿苷低、中、高劑量組FSH水平、OD450值、EdU陽(yáng)性細(xì)胞率均依次升高，T、LH水平、細(xì)胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平均依次降低；Rr-SDF-1組對(duì)應(yīng)指標(biāo)變化趨勢(shì)與上述相反（P＜0.05）。與淫羊藿苷高劑量組比較，淫羊藿苷高劑量+Rr-SDF-1組FSH水平、OD450值、EdU陽(yáng)性細(xì)胞率降低，T、LH水平、細(xì)胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）。結(jié)論 淫羊藿苷可能通過(guò)抑制SDF-1/CXCR4信號(hào)通路抑制PCOS大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡。

關(guān)鍵詞：淫羊藿苷；基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1/CXC型趨化因子受體4信號(hào)通路；多囊卵巢綜合征；顆粒細(xì)胞；增殖；凋亡

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.11958/20231504

The effect of icariin on apoptosis of ovarian granulosa cells in polycystic ovary syndrome rats by regulating the SDF-1/CXCR4 signaling pathway

XU Qiongfang1， ZHONG Fei2， LI Zishuai1

1 Medical College of Yongzhou Vocational Technical College， Yongzhou 425100， China; 2 Department of Obstetrics and Gynecology， Quanzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine

Abstract： Objective To investigate the effect of icariin on apoptosis of ovarian granulosa cells in rats with polycystic ovarian syndrome （PCOS） by regulating stromal cell-derived factor-1 （SDF-1）/CXC chemokine receptor-4 （CXCR4） signal axis. Methods Granular cells successfully isolated from ovarian tissue of rats in the PCOS model group were grouped into the PCOS group， the low-dose icariin group， the medium-dose icariin group， the high-dose icariin group， the Rr-SDF-1 group and the high-dose icariin+Rr-SDF-1 group. Granular cells successfully isolated from ovarian tissue of rats in the normal control group were taken as the control group. Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was applied to detect levels of follicle-stimulating hormone （FSH）， testosterone （T） and luteinizing hormone （LH） in supernatant of ovarian granulosa cells. CCK-8 method and EdU staining were applied to detect granulosa cell proliferation. Flow cytometry was applied to detect granulosa cell apoptosis. Western blot assay was applied to detect the expression of Bcl-2 associated X （Bax）， Cleaved aspartate-specific cysteine protease-3 （Cleaved Caspase-3）， SDF-1， and CXCR4 proteins in granulosa cells. Results Compared with the control group， the FSH level， OD450 value and EdU positive cell rate were decreased in the PCOS group， and T and LH levels， apoptosis rate， Bax， Cleaved Caspase-3， SDF-1 and CXCR4 protein expression increased （P＜0.05）. Compared with PCOS group， the FSH level， OD450 value and EdU positive cell rate were increased sequentially in the icariin low， medium and high dose groups， T and LH levels， apoptosis rate， Bax， Cleaved Caspase-3， SDF-1 and CXCR4 protein expression levels were decreased sequentially， and change trends of corresponding indicators were opposite to the above in the Rr-SDF-1 group （P＜0.05）. Compared with the high-dose icariin group， FSH level， OD450 value and EdU positive cell rate were decreased in the high-dose icariin+Rr-SDF-1 group， and T and LH levels， apoptosis rate， Bax， Cleaved Caspase-3， SDF-1 and CXCR4 protein expression levels were increased （P＜0.05）. Conclusion Icariin may inhibit the apoptosis of ovarian granulosa cells in PCOS rats by inhibiting the SDF-1/CXCR4 signaling pathway.

Key words： icariin; stromal cell-derived factor-1/CXC chemokine receptor-4 signaling pathway; polycystic ovarian syndrome; granular cells; proliferation; apoptosis

多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）是育齡女性中最常見(jiàn)的復(fù)雜內(nèi)分泌疾病，其特征是生殖障礙、內(nèi)分泌異常和代謝紊亂［1］。此外，PCOS可能會(huì)增加子宮內(nèi)膜癌、代謝性心血管病的風(fēng)險(xiǎn)［2-3］。在臨床實(shí)踐中，PCOS患者通常采用克羅米芬和二甲雙胍藥物治療；但尚無(wú)法治愈，主要是緩解相應(yīng)癥狀和預(yù)防潛在問(wèn)題的發(fā)生［4］。因此，迫切需要開(kāi)發(fā)治療PCOS的新方法。淫羊藿苷是淫羊藿的主要活性成分，具有抗炎和抗氧化等多種生物活性［5］。有研究報(bào)道，淫羊藿苷可抑制PCOS卵巢顆粒細(xì)胞凋亡［6］，但具體機(jī)制尚不完全明確。另有研究顯示，激活基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）/CXC型趨化因子受體4（CXC chemokine receptor-4，CXCR4）通路可誘導(dǎo)卵巢早衰小鼠卵巢損傷［7］。據(jù)此，筆者推測(cè)淫羊藿苷是否通過(guò)調(diào)節(jié)SDF-1/CXCR4信號(hào)通路抑制PCOS大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡。鑒于此，本研究擬探究淫羊藿苷對(duì)PCOS大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)雌性SD大鼠24只，3周齡，體質(zhì)量50～60 g，購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（粵）2022-0002，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)使用許可證號(hào)：SYXK（湘）2022-0016。所有實(shí)驗(yàn)程序均經(jīng)本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)：202110-X38）。

1.1.2 主要試劑與儀器 淫羊藿苷購(gòu)自上海脈鉑醫(yī)藥科技有限公司；脫氫表雄酮購(gòu)自信陽(yáng)市沐凡生物科技有限公司；重組大鼠SDF-1蛋白（Rr-SDF-1）購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司；大鼠卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）、睪酮（testosterone，T）、黃體生成素（luteinizing hormone，LH）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒購(gòu)自上海杏宜生物科技有限公司；EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒購(gòu)自廣州復(fù)能基因有限公司；Annexin V FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京索來(lái)寶生物科技有限公司；兔源一抗卵泡刺激素受體（follicle stimulating hormone receptor，F(xiàn)SHR）、Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bcl-2 associated X，Bax）、裂解的胱天蛋白酶-3（Cleaved aspartate-specific cysteine protease-3，Cleaved Caspase-3）、SDF-1、CXCR4、GAPDH及辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔二抗均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。DM2500M型熒光顯微鏡購(gòu)自德國(guó)徠卡公司；MK3型酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific公司；BD FACSCalibur型流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)BD公司；Gel Doc XR型凝膠成像系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)伯樂(lè)公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 PCOS模型的構(gòu)建及分組 通過(guò)連續(xù)21 d皮下注射脫氫表雄酮（溶于0.2 mL豆油，60 mg/kg，每日1次）的方式構(gòu)建PCOS模型。從造模的第16天開(kāi)始，若連續(xù)4 d觀察到大鼠的陰道涂片出現(xiàn)角質(zhì)細(xì)胞，則為造模成功［8］。按照隨機(jī)數(shù)字表法將SD大鼠分為正常對(duì)照組和PCOS模型組，每組12只。PCOS模型組大鼠按照上述方法構(gòu)建PCOS模型，正常對(duì)照組大鼠皮下注射等體積的豆油代替脫氫表雄酮，其余操作同造模過(guò)程。末次處理24 h后，將大鼠禁食12 h，2%戊巴比妥鈉麻醉并處死大鼠，無(wú)菌條件下解剖并取出卵巢，然后剪取0.2 g卵巢組織用于分離卵巢顆粒細(xì)胞。

1.2.2 卵巢顆粒細(xì)胞的分離與鑒定 生理鹽水沖洗大鼠卵巢組織，除去輸卵管和脂肪，將卵巢組織置于DMEM/F12培養(yǎng)基中，用醫(yī)用針頭穿刺竇卵泡釋放顆粒細(xì)胞，并使顆粒細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中，將顆粒細(xì)胞經(jīng)過(guò)濾、純化、重懸、洗滌后，置于37 ℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞完全貼壁后，除去未貼壁細(xì)胞。利用顯微鏡（×100）觀察培養(yǎng)3 d的細(xì)胞形態(tài)。顆粒細(xì)胞的鑒定：將細(xì)胞（1×105個(gè)/孔）置于24孔培養(yǎng)板（含載玻片）中，待細(xì)胞爬片至密度約為70%時(shí)，用4%多聚甲醛固定細(xì)胞，加入兔源一抗FSHR（1∶5 000）孵育過(guò)夜，再滴加DyLight 488標(biāo)記的山羊抗兔二抗（1∶4 000）在室溫下孵育1 h，DAPI染核后，利用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞中FSHR表達(dá)情況，以呈綠色熒光的細(xì)胞熒光強(qiáng)度作為判斷FSHR陽(yáng)性表達(dá)的依據(jù)。

1.2.3 細(xì)胞分組 將從正常對(duì)照組、PCOS模型組大鼠卵巢組織中成功分離的顆粒細(xì)胞分別命名為對(duì)照組和PCOS組，再取PCOS組顆粒細(xì)胞，分別用15 μmol/L、30 μmol/L、60 μmol/L淫羊藿苷［6］處理24 h，并命名為淫羊藿苷低、中、高劑量組；用20 μg/L Rr-SDF-1［9］處理24 h，命名為Rr-SDF-1組；用60 μmol/L淫羊藿苷和20 μg/L Rr-SDF-1共同處理24 h，命名為淫羊藿苷高劑量+Rr-SDF-1組。處理結(jié)束后收集各組顆粒細(xì)胞或顆粒細(xì)胞上清液用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 ELISA檢測(cè)卵巢顆粒細(xì)胞上清液中FSH、T、LH的水平 取1.2.3中處理24 h后的顆粒細(xì)胞懸液200 μL，3 000 r/min離心15 min收集上清液，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)卵巢顆粒細(xì)胞上清液中FSH、T、LH水平。

1.2.5 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖 將顆粒細(xì)胞（1×105個(gè)/孔）接種于96孔板中，按照1.2.3所述進(jìn)行對(duì)應(yīng)處理后，向各孔中加入10 μL CCK-8溶液，在37 ℃下避光孵育1 h后，酶標(biāo)儀測(cè)量450 nm處的光密度（OD）值。

1.2.6 EdU染色檢測(cè)顆粒細(xì)胞增殖 取1.2.3中處理24 h后的各組顆粒細(xì)胞（1×105個(gè)/孔），用100 μL 50 μmol/L EdU溶液孵育顆粒細(xì)胞2 h后，利用50 μL細(xì)胞固定液固定細(xì)胞30 min，100 μL 1×Apollo染色液孵育30 min，再用100 μL 1×Hoechst 33342反應(yīng)液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行核染色，通過(guò)熒光顯微鏡觀察EdU陽(yáng)性細(xì)胞形成情況，EdU陽(yáng)性細(xì)胞率（%）=EdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/Hoechst 33342陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)×100%。

1.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顆粒細(xì)胞凋亡 取1.2.3中處理24 h后的各組顆粒細(xì)胞，將顆粒細(xì)胞重懸于預(yù)冷的結(jié)合緩沖液中，并調(diào)整細(xì)胞密度為1×105個(gè)/mL。取200 μL細(xì)胞懸液，經(jīng)Annexin V-FITC和PI溶液避光染色15 min。1 h內(nèi)上機(jī)完成檢測(cè)，并評(píng)估顆粒細(xì)胞凋亡。

1.2.8 Western blot檢測(cè)顆粒細(xì)胞中Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá) RIPA裂解緩沖液用于提取1.2.3中處理24 h后的各組顆粒細(xì)胞總蛋白，每組細(xì)胞設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，提取的蛋白經(jīng)BCA法定量后，取30 μg蛋白樣品進(jìn)行10%十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（100 V恒壓）分離，再將凝膠上的蛋白樣本以0.65 mA/cm2的恒流電轉(zhuǎn)移2 h轉(zhuǎn)至PVDF膜上，PVDF膜經(jīng)5%脫脂奶粉封閉1.5 h后，在4 ℃下將膜與兔源一抗Bax（1∶5 000）、Cleaved Caspase-3（1∶5 000）、SDF-1（1∶4 000）、CXCR4（1∶3 000）、GAPDH（1∶4 000）孵育過(guò)夜，TBST漂洗后，再將膜與山羊抗兔二抗（1∶5 000）在室溫條件下孵育1 h。加入ECL試劑可視化蛋白，使用Image-Pro Plus 6.0軟件評(píng)估目的蛋白灰度值。以GAPDH為蛋白內(nèi)參。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad Prism 9.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（[x] ±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較行SNK-q檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 卵巢顆粒細(xì)胞的形態(tài)觀察及鑒定 培養(yǎng)3 d的卵巢顆粒細(xì)胞呈紡錘體形態(tài)，見(jiàn)圖1。免疫熒光染色顯示，與對(duì)照組（0.98±0.08）比較，PCOS組（8.63±0.37）細(xì)胞中FSHR陽(yáng)性表達(dá)水平升高（t=49.501，P＜0.01），見(jiàn)圖2。

2.2 淫羊藿苷對(duì)各組卵巢顆粒細(xì)胞上清液中FSH、T、LH水平的影響 與對(duì)照組比較，PCOS組卵巢顆粒細(xì)胞上清液中FSH水平降低，T、LH水平升高（P＜0.05）。與PCOS組比較，淫羊藿苷低、中、高劑量組卵巢顆粒細(xì)胞上清液中FSH水平依次升高，T、LH水平依次降低；Rr-SDF-1組卵巢顆粒細(xì)胞上清液中FSH水平降低，T、LH水平升高（P＜0.05）。與淫羊藿苷高劑量組比較，淫羊藿苷高劑量+Rr-SDF-1組卵巢顆粒細(xì)胞上清液中FSH水平降低，T、LH水平升高（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 淫羊藿苷對(duì)各組卵巢顆粒細(xì)胞增殖的影響 與對(duì)照組比較，PCOS組卵巢顆粒細(xì)胞OD450值、EdU陽(yáng)性細(xì)胞率降低（P＜0.05）。與PCOS組比較，淫羊藿苷低、中、高劑量組卵巢顆粒細(xì)胞OD450值、EdU陽(yáng)性細(xì)胞率均依次升高；Rr-SDF-1組卵巢顆粒細(xì)胞OD450值、EdU陽(yáng)性細(xì)胞率降低（P＜0.05）。與淫羊藿苷高劑量組比較，淫羊藿苷高劑量+Rr-SDF-1組卵巢顆粒細(xì)胞OD450值、EdU陽(yáng)性細(xì)胞率降低（P＜0.05），見(jiàn)表2，圖3。[Tab.2 Comparison of OD450 value， EdU positive cell rate and apoptosis rate of ovarian granulosa cells between the seven groups

2.4 淫羊藿苷對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響 與對(duì)照組比較，PCOS組卵巢顆粒細(xì)胞凋亡率升高（P＜0.05）。與PCOS組比較，淫羊藿苷低、中、高劑量組卵巢顆粒細(xì)胞凋亡率依次降低；Rr-SDF-1組卵巢顆粒細(xì)胞凋亡率升高（P＜0.05）。與淫羊藿苷高劑量組比較，淫羊藿苷高劑量+Rr-SDF-1組卵巢顆粒細(xì)胞凋亡率升高（P＜0.05）。見(jiàn)圖4、表2。

2.5 淫羊藿苷對(duì)各組卵巢顆粒細(xì)胞中Bax、Cleaved Caspase-3蛋白及SDF-1/CXCR4通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 與對(duì)照組比較，PCOS組卵巢顆粒細(xì)胞中Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）。與PCOS組比較，淫羊藿苷低、中、高劑量組卵巢顆粒細(xì)胞中Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平均依次降低；Rr-SDF-1組卵巢顆粒細(xì)胞中Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）。與淫羊藿苷高劑量組比較，淫羊藿苷高劑量+Rr-SDF-1組卵巢顆粒細(xì)胞中Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）。見(jiàn)表3、圖5。

3 討論

PCOS通常表現(xiàn)為L(zhǎng)H水平升高、FSH水平降低，高水平的LH會(huì)促進(jìn)卵泡膜細(xì)胞合成大量T，而處于較低水平的FSH則會(huì)抑制卵巢顆粒細(xì)胞中芳香化酶活性，進(jìn)而抑制T向雌激素轉(zhuǎn)化，此時(shí)形成的高雄激素環(huán)境會(huì)使卵泡排出受阻，最后形成卵巢多囊性改變［10］。本研究成功分離并鑒定出PCOS卵巢顆粒細(xì)胞，結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，PCOS組卵巢顆粒細(xì)胞上清液中FSH水平降低，T、LH水平升高，表明PCOS卵巢顆粒細(xì)胞激素代謝紊亂，符合PCOS卵巢顆粒細(xì)胞的特征。有研究顯示，PCOS癥狀可以通過(guò)增加顆粒細(xì)胞增殖和減少顆粒細(xì)胞凋亡來(lái)緩解［11-13］。因此，PCOS的發(fā)病與顆粒細(xì)胞增殖和凋亡的失調(diào)密切相關(guān)。因此，促進(jìn)卵巢顆粒細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡可能是改善PCOS的有效策略之一。

淫羊藿苷是淫羊藿中的主要活性化合物，具有強(qiáng)大的抗炎特性，還可以改善卵巢功能［14-15］。有研究顯示淫羊藿苷可改善PCOS大鼠卵巢細(xì)胞凋亡［16］；能改善自身免疫原發(fā)性卵巢功能不全小鼠受損卵巢的結(jié)構(gòu)及其功能［17］；還可促進(jìn)卵巢儲(chǔ)備功能減退患者卵巢顆粒細(xì)胞增殖［18］。以上研究表明淫羊藿苷對(duì)卵巢具有保護(hù)作用。本研究結(jié)果亦顯示，淫羊藿苷可上調(diào)PCOS大鼠卵巢顆粒細(xì)胞OD450值和EdU陽(yáng)性細(xì)胞率，抑制細(xì)胞凋亡率及卵巢顆粒細(xì)胞中促凋亡相關(guān)蛋白Bax、Cleaved Caspase-3表達(dá)，且呈劑量依賴性，表明淫羊藿苷可促進(jìn)卵巢顆粒細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡，且呈劑量依賴性。提示淫羊藿苷可能成為治療PCOS的潛在有效藥物。

SDF-1是一種CXC趨化因子，也是CXCR4的唯一配體，SDF-1和CXCR4結(jié)合形成信號(hào)通路可以調(diào)節(jié)多種生理活性，包括細(xì)胞增殖、凋亡等［19］。抑制SDF-1/CXCR4信號(hào)通路可促進(jìn)骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞增殖及抑制細(xì)胞凋亡［20］。本研究結(jié)果顯示，與PCOS組比較，Rr-SDF-1組卵巢顆粒細(xì)胞中SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)水平升高，卵巢顆粒細(xì)胞增殖能力減弱，凋亡能力增強(qiáng)，且Rr-SDF-1為SDF-1激活劑，證實(shí)SDF-1/CXCR4信號(hào)通路參與PCOS大鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖及凋亡過(guò)程。此外，本研究發(fā)現(xiàn)，淫羊藿苷可呈劑量依賴性地抑制PCOS大鼠卵巢顆粒細(xì)胞中SDF-1、CXCR4蛋白表達(dá)，故筆者推測(cè)淫羊藿苷可能通過(guò)抑制SDF-1/CXCR4信號(hào)通路抑制PCOS大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡。為了驗(yàn)證該猜想，本研究在高劑量淫羊藿苷作用的基礎(chǔ)上再加SDF-1激活劑Rr-SDF-1來(lái)干預(yù)PCOS大鼠卵巢顆粒細(xì)胞，結(jié)果顯示，Rr-SDF-1減弱了高劑量淫羊藿苷對(duì)顆粒細(xì)胞凋亡的抑制作用。進(jìn)一步提示淫羊藿苷可能通過(guò)抑制SDF-1/CXCR4信號(hào)通路抑制PCOS大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡。

綜上所述，淫羊藿苷可能通過(guò)抑制SDF-1/CXCR4信號(hào)通路抑制PCOS大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡。但該作用機(jī)制較為復(fù)雜，具體通過(guò)SDF-1/CXCR4信號(hào)通路下游的哪些蛋白發(fā)揮作用有待進(jìn)一步探討。

參考文獻(xiàn)

［1］ 宋玉，朱爭(zhēng)艷，黃桓，等. 蝦青素通過(guò)調(diào)節(jié)Klotho表達(dá)和Wnt/β-? Catenin信號(hào)通路對(duì)多囊卵巢綜合征大鼠的改善作用［J］. 天津醫(yī)藥，2023，51（10）：1098-1103. SONG Y，ZHU Z Y，HUANG H，et al. The improvement effect of astaxanthin on rats with polycystic ovary syndrome by regulating Klotho expression and Wnt/β-Catenin signaling pathway［J］. Tianjin Med J，2023，51（10）：1098-1103. doi：10.11958/20221727.

［2］ BAHRI KHOMAMI M，JOHAM E，BOYLE A，et al. Increased maternal pregnancy complications in polycystic ovary syndrome appear to be independent of obesity-A systematic review，meta-analysis，and meta-regression［J］. Obes Rev，2019，20（5）：659-674. doi：10.1111/obr.12829.

［3］ RASOOL S U A，ASHRAF S，NABI M，et al. Elevated fasting insulin is associated with cardiovascular and metabolic risk in women with polycystic ovary syndrome［J］. Diabetes Metab Syndr，2019，13（3）：2098-2105. doi：10.1016/j.dsx.2019.05.003.

［4］ LI X，ZHU L，LUO Y. Long non-coding RNA HLA-F antisense RNA 1 inhibits the maturation of microRNA-613 in polycystic ovary syndrome to promote ovarian granulosa cell proliferation and inhibit cell apoptosis［J］. Bioengineered，2022，13（5）：12289-12297. doi：10.1080/21655979.2022.2070965.

［5］ SHAO Y，SUN L，YANG G，et al. Icariin protects vertebral endplate chondrocytes against apoptosis and degeneration via activating Nrf-2/HO-1 pathway［J］. Front Pharmacol，2022，13：937502. doi：10.3389/fphar.2022.937502.

［6］ 邵梅，王家傳. 淫羊藿素對(duì)多囊卵巢綜合征顆粒細(xì)胞凋亡和自噬的影響［J］. 中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2021，37（20）：2830-2833. SHAO M，WANG J C. Effect of icaritin on the apoptosis and autophagy of granulosa cells in polycystic ovary syndrome［J］. The Chinese Journal of Clinical Pharmacology，2021，37（20）：2830-2833. doi：10.13699/j.cnki.1001-6821.2021.20.028.

［7］ LUO Q，YIN N，ZHANG L，et al. Role of SDF-1/CXCR4 and cytokines in the development of ovary injury in chemotherapy drug induced premature ovarian failure mice［J］. Life Sci，2017，179：103-109. doi：10.1016/j.lfs.2017.05.001.

［8］ 孫彩萍，張丹，張珂. 干擾CLDN6基因表達(dá)通過(guò)調(diào)控MAPK/ERK信號(hào)通路對(duì)多囊卵巢綜合征大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響［J］. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2022，31（2）：96-101，106. SUN C P，ZHANG D，ZHANG K. The effect of interference with CLDN6 gene expression on the apoptosis of ovarian gran-ular cells in rats with polycystic ovary syndrome by regulating the MAPK/ERK signa-ling pathway［J］. Progress in Obstetrics and Gynecology，2022，31（2）：96-101，106. doi：10.13283/j.cnki.xdfckjz.2022.02.004.

［9］ 葛新，曹章，呂鵬威，等. miR-206抑制SDF-1/CXCR4信號(hào)活化誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞遷移和增殖［J］. 腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2016，29（4）：294-298. GE X，CAO Z，LYU P W，et al. miR-206 suppresses breast cancer cell migration and proliferation induced by SDF-1/CXCR4 Signaling［J］. Journal of Basic and Clinical Oncology，2016，29（4）：294-298. doi：10.3969/j.issn.1673-5412.2016.04.005.

［10］ 劉亞敏，董文霞，薛鵬坤，等. 金匱腎氣丸通過(guò)調(diào)控PI3K-AKT-mTOR及PI3K-AKT-GLUT4通路干預(yù)多囊卵巢綜合征大鼠的作用機(jī)制研究［J］. 中藥藥理與臨床，2023，39（1）：1-7. LIU Y M，DONG W X，XUE P K，et al. Intervention effect of Jinkui Shenqi wan（金匱腎氣丸）on polycystic ovary syndrome in rats by regulating PI3K-AKT-mTOR and PI3K-AKT-GLUT4 pathways［J］. Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica，2023，39（1）：1-7. doi：10.13412/j.cnki.zyyl.20221118.002.

［11］ CHEN L，KONG C. LINC00173 regulates polycystic ovarian syndrome progression by promoting apoptosis and repressing proliferation in ovarian granulosa cells via the microRNA-124-3p（miR-124-3p）/jagged canonical Notch ligand 1（JAG1） pathway［J］. Bioengineered，2022，13（4）：10373-10385. doi：10.1080/21655979.2022.2053797.

［12］ 陳麗敏，汪佳佳，董智鈺. 微小RNA 761對(duì)人卵巢顆粒細(xì)胞增殖和凋亡的影響［J］. 中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2021，37（20）：2783-2785，2805. CHEN L M，WANG J J，DONG Z Y. Effects of microrNA 761 on proliferation and apoptosis of human ovarian granulocyte cells［J］. The Chinese Journal of Clinical Pharmacology，2021，37（20）：2783-2785，2805. doi：10.13699/j.cnki.1001-6821.2021.20.016.

［13］ GUO H，LI T，SUN X. LncRNA HOTAIRM1，miR-433-5p and PIK3CD function as a ceRNA network to exacerbate the development of PCOS［J］. J Ovarian Res，2021，14（1）：19-27. doi：10.1186/s13048-020-00742-4.

［14］ HE C，WANG Z，SHI J. Pharmacological effects of icariin［J］. Adv Pharmacol，2020，87：179-203. doi：10.1016/bs.apha.2019.10.004.

［15］ TANG Y，LI Y，XIN D，et al. Icariin alleviates osteoarthritis by regulating autophagy of chondrocytes by mediating PI3K/AKT/mTOR signaling［J］. Bioengineered，2021，12（1）：2984-2999. doi：10.1080/21655979.2021.1943602.

［16］ ZUO L，HAI Y，ZHANG R，et al. Therapeutic potential of icariin in rats with letrozole and high-fat diet-induced polycystic ovary syndrome［J］. Eur J Pharmacol，2023，953：175825. doi：10.1016/j.ejphar.2023.175825.

［17］ CHEN H，SONG L，XU X，et al. The effect of icariin on autoimmune premature ovarian insufficiency via modulation of Nrf2/HO-1/Sirt1 pathway in mice［J］. Reprod Biol，2022，22（2）：100638. doi：10.1016/j.repbio.2022.100638.

［18］ 李美玲. 淫羊藿苷通過(guò)調(diào)節(jié)卵巢顆粒細(xì)胞增殖與分泌功能改善DOR患者IVF助孕結(jié)局的臨床與機(jī)制研究［D］. 南京：南京中醫(yī)藥大學(xué)，2020. LI M L. Effects of icariin on the proliferation and secretion of ovarian granulosa cells to improve the outcome of IVF of DOR patients with Kidney Yang Deficiency［D］. Nanjing：Nanjing University of Chinese Medicine，2020. doi：10.27253/d.cnki.gnjzu.2020.000232.

［19］ YU P，CHENG L，XIA W M，et al. KLF9 inhibits the proliferation，invasion，and migration of renal cell carcinoma through the SDF-1/CXCR4 axis［J］. Kaohsiung J Med Sci，2023，39（6）：587-595. doi：10.1002/kjm2.12671.

［20］ 王雷，余德濤，邢禎全. 依托考昔抑制SDF-1/CXCR4信號(hào)通路影響骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞增殖、凋亡及炎性因子表達(dá)［J］. 現(xiàn)代免疫學(xué)，2021，41（6）：468-472. WANG L，YU D T，XING Z Q. Etoricoxib affects osteoarthritis chondrocytes' proliferation，apoptosis and expression of inflammatory factors by inhibiting SDF-1/CXCR4 signaling pathway［J］. Current Immunology，2021，41（6）：468-472. doi：1001-2478（2021）06-0468-05.

（2023-11-06收稿 2023-12-20修回）

（本文編輯 陳麗潔）