楊睿 魏瓊 孫逸坤 趙夢(mèng)竹 程序 劉夢(mèng)華 張冬梅

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81973780）

作者單位：北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院/中醫(yī)內(nèi)科學(xué)教育部和北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（郵編100700）

作者簡(jiǎn)介：楊睿（1993），女，主治中醫(yī)師，主要從事中醫(yī)藥防治心血管疾病方面研究。E-mail：Reyoung12@126.com

△通信作者 E-mail：chaweto@126.com

摘要：目的 探討缺氧狀態(tài)下大鼠心肌細(xì)胞H9c2來源外泌體對(duì)血管新生的影響。方法 采用混合氣體法制備H9c2細(xì)胞缺氧模型，以正常培養(yǎng)細(xì)胞為對(duì)照。分別提取2組細(xì)胞分泌的外泌體，采用納米顆粒跟蹤分析檢測(cè)外泌體的濃度和粒徑，透射電子顯微鏡觀察外泌體的形態(tài)和大小，Western blot驗(yàn)證外泌體標(biāo)志蛋白。制備人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）缺氧模型，并與H9c2外泌體共同孵育，分為常氧組、缺氧組、缺氧+正常H9c2外泌體（EXO-C）組和缺氧+缺氧H9c2外泌體（EXO-M）組。通過CCK-8法、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Matrigel體外三維成形實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)HUVEC增殖、遷移、成管能力。結(jié)果 外泌體鑒定結(jié)果顯示常氧組和缺氧組H9c2外泌體樣本顆粒濃度均處于1×107～1×1012/mL，粒徑大小40～160 nm；形態(tài)特征均為球形或茶托狀結(jié)構(gòu)，大小均一，形態(tài)完整；外泌體標(biāo)志蛋白腫瘤易感基因101（TSG101）、CD63、CD9均有表達(dá)，無陰性蛋白鈣聯(lián)蛋白（Calnexin）的表達(dá)。與常氧組比，缺氧組HUVEC增殖能力、遷移面積、遷移率均顯著下降，參與成管的長(zhǎng)度及分支數(shù)、節(jié)點(diǎn)數(shù)均減少（P＜0.01）；與缺氧組比，EXO-M組HUVEC細(xì)胞增殖能力下降，遷移面積減少、遷移率下降，參與成管長(zhǎng)度及分支數(shù)進(jìn)一步減少（P＜0.05）；與EXO-C組相比，EXO-M組增殖能力下降，細(xì)胞遷移面積減少，遷移率下降（P＜0.01）。結(jié)論 缺氧H9c2來源的外泌體對(duì)HUVEC增殖、遷移、成管能力有一定程度的抑制作用。

關(guān)鍵詞：外泌體；心肌梗死；內(nèi)皮細(xì)胞；低氧；血管新生

中圖分類號(hào)：R54，R363文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.11958/20231930

Effects of hypoxia H9c2 exosome on proliferation，migration and tube formation of HUVEC

YANG Rui， WEI Qiong， SUN Yikun， ZHAO Mengzhu， CHENG Xu， LIU Menghua， ZHANG Dongmei△

Dongzhimen Hospital， Ministry of Education and Beijing Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine

Internal Medicine， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100700， China

△Correspongding Author E-mail： chaweto@126.com

Abstract： Objective To investigate the role of H9c2-derived exosomes in regulating angiogenesis in rat cardiomyocytes under hypoxia. Methods The hypoxia model of H9c2 cells was prepared by mixed gas method （the hypoxia model group）， and the normal cultured cells were used as the control group. The exosomes secreted by the two groups of cells were extracted respectively. The concentration and particle size of exosomes were detected by nanoparticle tracking analysis. The morphology and size of exosomes were detected by transmission electron microscopy. Western blot assay was used to verify the exosome marker proteins. The hypoxia model of human umbilical vein endothelial cells （HUVEC） was established. HUVECs were incubated with H9c2 exosomes and divided into the normoxia group， the hypoxia group， the hypoxia + normal H9c2 exosomes （EXO-C） group and the hypoxia + hypoxia H9c2 exosomes （EXO-M） group. The proliferation， migration and tube formation of HUVECs were detected by CCK-8 method， cell scratch test and Matrigel in vitro three-dimensional forming test. Results The results of exosome identification showed that the particle concentration of H9c2 exosome samples was 1×107-1×1012 particles/mL and the particle size was 40-160 nm in the normoxia group and the hypoxia group. The morphological characteristics were spherical or saucer-like structure， uniform in size and complete in shape. Exosome marker proteins TSG101， CD63 and CD9 were expressed， and there was no expression of negative protein Calnexin. Compared with the normoxic group， the proliferation ability， migration area and migration rate of HUVEC were significantly decreased in the hypoxic group， and the length of tube， the number of branches and the number of nodes were decreased （P＜0.01）. Compared with the hypoxia group， the proliferation ability of HUVEC cells was decreased， the migration area was decreased， the migration rate was decreased and the length and number of branches involved in tube formation were further decreased in the EXO-M group （P＜0.05）. Compared with the EXO-C group， the proliferation ability of the EXO-M group decreased， the cell migration area decreased and the migration rate decreased （P＜0.01）. Conclusion Exosomes derived from hypoxic H9c2 can inhibit the proliferation， migration and tube formation of HUVEC.

Key words： exosomes; myocardial infarction; endothelial cells; hypoxia; angiogenesis

急性心肌梗死（AMI）具有高發(fā)病率和高死亡率，為心血管系統(tǒng)的危急重癥［1］。其發(fā)病機(jī)制主要是心臟冠狀動(dòng)脈血供急劇減少或中斷而導(dǎo)致相應(yīng)區(qū)域心肌細(xì)胞的氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，進(jìn)而引發(fā)部分心肌壞死。治療性血管新生作為AMI后的一種特殊治療手段，可在原有的受阻血管基礎(chǔ)上，通過刺激新生血管網(wǎng)的生成來建立有效的側(cè)支循環(huán)，以彌補(bǔ)原本動(dòng)脈供血的不足，重新恢復(fù)心臟缺血區(qū)氧氣和營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，從而達(dá)到治療的目的［2］。研究表明，外泌體可通過調(diào)節(jié)心肌梗死（MI）后血管生成相關(guān)因子的表達(dá)，調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和管腔形成，從而促進(jìn)或抑制血管新生［3-4］。作為細(xì)胞間通訊的重要載體，外泌體對(duì)微環(huán)境的改變響應(yīng)迅速，是血管新生調(diào)控過程中的重要因素。但目前缺氧條件下心肌細(xì)胞來源外泌體對(duì)血管新生的影響尚存爭(zhēng)議。心肌細(xì)胞缺氧模型和內(nèi)皮細(xì)胞缺氧模型是體外模擬AMI的常用模型，而血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、成管能力是血管新生過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。因此，本研究采用混合氣體法制備細(xì)胞缺氧模型并提取細(xì)胞外泌體，通過人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）增殖、遷移、成管實(shí)驗(yàn)，探討缺氧狀態(tài)下大鼠心肌細(xì)胞H9c2來源外泌體對(duì)血管新生的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 （1）細(xì)胞。大鼠心肌細(xì)胞H9c2來源于大鼠胚胎心肌細(xì)胞系，購于國(guó)家生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源庫（編號(hào)：1101RAT-PUMC000219）。HUVEC購于中喬新舟生物科技（上海）有限公司。（2）主要試劑及儀器。ECM培養(yǎng)基購自中喬新舟生物（上海）有限公司；胎牛血清購于Gibco公司；CD9抗體、CD63抗體購于安諾倫（北京）生物科技有限公司，TSG101抗體購于Abcam公司，Calnexin抗體購于圣克魯斯生物技術(shù)（上海）有限公司；CCK-8試劑盒購自日本同仁化學(xué)研究所；外泌體提取試劑盒、外泌體專用培養(yǎng)基購自宇玫博生物科技（上海）有限公司；胰酶中和液、牛源纖維黏連蛋白購自美國(guó)Sciencell研究實(shí)驗(yàn)室；Matrigel基底膠、磷酸鹽緩沖液（PBS）、DMEM高糖培養(yǎng)基購自索萊寶科技（北京）有限公司；HRP-山羊抗小鼠IgG（H+L）、HRP-山羊抗兔IgG（H+L）購自博士德生物（中國(guó)）有限公司。MCO-20AIC二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱購于日本SANYO公司；MiniGalaxy A缺氧培養(yǎng)箱購于英國(guó)RS biotech公司；IMT-2倒置相差顯微鏡購于日本Olympus公司；納米顆粒跟蹤分析儀購于德國(guó)Particle Metrix公司；透射電子顯微鏡購于北京中榆科技有限公司。

1.2 研究方法

1.2.1 H9c2缺氧模型建立及分組 將H9c2細(xì)胞分為正常對(duì)照組和模型組。模型組采用混合氣體法制備H9c2細(xì)胞缺氧模型。細(xì)胞置于缺氧培養(yǎng)箱（37 ℃、1%O2、5%CO2、94%N2）中分別培養(yǎng)0、24、30、48、54 h，建立缺氧H9c2細(xì)胞模型；正常對(duì)照組細(xì)胞置于常規(guī)培養(yǎng)箱（37 ℃、5%CO2）中培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間。向2組細(xì)胞中加入CCK-8工作液，取空白孔加入等量CCK-8工作液作為空白對(duì)照組，避光孵育1.5 h，檢測(cè)各組光密度（OD）值，計(jì)算H9c2細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率=（模型組OD值-空白對(duì)照組OD值）/（正常對(duì)照組OD值-空白對(duì)照組OD值）×100%。根據(jù)細(xì)胞存活率確定最佳缺氧干預(yù)時(shí)間。

1.2.2 外泌體的提取 選擇最佳缺氧干預(yù)時(shí)間造模，分別收集模型組和正常對(duì)照組H9c2細(xì)胞上清樣品，向上清液中加入外泌體濃縮液，4 ℃靜置2 h以上。靜置后采用4 ℃、10 000×g離心60 min，保留沉淀為外泌體粗品。外泌體粗品用PBS重懸，4 ℃、12 000 ×g離心2 min，保留上清液。將上清液轉(zhuǎn)入外泌體純化柱上室中，4 ℃、3 000×g離心10 min，離心后收集外泌體純化柱管底的液體，即純化后的外泌體懸液。

1.2.3 納米顆粒跟蹤分析（NTA）檢測(cè)外泌體的濃度和粒 徑 用去離子水清洗樣本池，以聚苯乙烯微球標(biāo)準(zhǔn)品110 nm校準(zhǔn)；再次以1×PBS buffer清洗樣本池，用粒子矩陣ZetaView PMX 110在405 nm發(fā)射光下對(duì)分離得到的外泌體進(jìn)行濃度測(cè)定；PBS稀釋2組外泌體（約1×107～1×109/mL為宜），測(cè)定其大小及質(zhì)量。每個(gè)樣本重復(fù)檢測(cè)3次。

1.2.4 透射電子顯微鏡觀察外泌體的形態(tài)和大小 將8 μL外泌體懸液加到載樣銅網(wǎng)上，靜置1 min；濾紙吸去多余的外泌體樣品后滴加15 μL 2%醋酸雙氧鈾，室溫染色1 min，干燥 5 min后，100 kV下拍攝電鏡照片。

1.2.5 Western blot檢測(cè)外泌體標(biāo)志蛋白表達(dá) 將提取純化后的外泌體加入等量的外泌體專用裂解液，冰上裂解10 min；BCA法測(cè)定蛋白濃度。根據(jù)蛋白定量結(jié)果，向提取的外泌體樣品中加入SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液，100 ℃煮樣20 min，電泳1 h，200 mA恒流條件下轉(zhuǎn)膜100 min；5%脫脂奶粉的TBST溶液室溫封閉1 h，孵育一抗TSG101（1︰1 000）、CD63（1︰1 000）、CD9（1︰1 000）、Calnexin（1︰200），4 ℃冰箱孵育過夜；TBST洗滌后用二抗（1∶5 000）孵育1 h；TBST再次洗滌，置于發(fā)光液中避光反應(yīng)1～5 min后曝光，根據(jù)蛋白預(yù)染Marker位置判斷目標(biāo)條帶的位置。

1.2.6 CCK-8法檢測(cè)不同濃度外泌體對(duì)HUVEC增殖的影響 HUVEC分為常氧H9c2外泌體干預(yù)組（EXO-C組）和缺氧H9c2外泌體干預(yù)組（EXO-M組），分別用含外泌體終質(zhì)量濃度為0、5、10、20、30 mg/L的專用培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h，加入CCK-8工作液避光孵育3 h，檢測(cè)并確定外泌體干預(yù)的最佳濃度。

1.2.7 CCK-8法檢測(cè)H9c2外泌體對(duì)缺氧HUVEC增殖的影響 將HUVEC分為常氧組、缺氧組、EXO-C組、EXO-M組。常規(guī)培養(yǎng)待細(xì)胞融合率＞70%時(shí)換含0.5%胎牛血清的ECM培養(yǎng)基同步化24 h。缺氧組、常氧組換外泌體專用培養(yǎng)基，EXO-C組換含合適濃度常氧H9c2外泌體的專用培養(yǎng)基，EXO-M組換含對(duì)應(yīng)濃度缺氧H9c2外泌體的專用培養(yǎng)基。缺氧組、EXO-C組、EXO-M組置于缺氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，常氧組置于正常培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。按1.2.6中CCK-8法檢測(cè)HUVEC增殖情況，每個(gè)樣本均設(shè)6個(gè)復(fù)孔，重復(fù)6次取均值。

1.2.8 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)H9c2外泌體對(duì)缺氧HUVEC遷移的影響 取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)期的HUVEC，均勻接種于提前包被好的6孔板（6孔板底部劃線，使得每孔有3條平行線穿過），每孔加入2.5 mL細(xì)胞懸液，按照1.2.7所述方法造模及分組；待細(xì)胞融合成片且無較大細(xì)胞空隙時(shí)，用200 ?L槍頭垂直于標(biāo)記線在底部劃線；吸棄培養(yǎng)基后用PBS沖洗細(xì)胞，去除劃下和凋亡的細(xì)胞；各組均換用基礎(chǔ)ECM培養(yǎng)基，培養(yǎng)0 h、12 h后于倒置顯微鏡下拍照，每個(gè)樣本均設(shè)6個(gè)復(fù)孔，重復(fù)6次取均值。使用Image J軟件對(duì)2次照片之間劃痕面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算遷移率。遷移率（%）=（A0-AX）/A0×100%，A0表示初始劃痕面積，AX表示測(cè)量時(shí)的殘留面積。

1.2.9 Matrigel基質(zhì)膠檢測(cè)H9c2外泌體對(duì)缺氧HUVEC成管能力的影響 取50 ?L Matrigel基質(zhì)膠，平鋪于4 ℃預(yù)冷的96孔板內(nèi)，37 ℃孵育30 min使其凝固；按照1.2.7所述方法造模及分組；胰酶消化后收集各組細(xì)胞懸液，離心后加入基礎(chǔ)ECM培養(yǎng)基重懸，按2×105 個(gè)/mL將細(xì)胞接種于含凝固Matrigel基質(zhì)膠的96孔板中，每孔100 ?L，37 ℃培養(yǎng)箱中孵育6 h后，倒置顯微鏡下觀察各組HUVEC成管情況并拍照記錄，每個(gè)樣本均設(shè)6個(gè)復(fù)孔，重復(fù)6次取均值。使用Image J軟件對(duì)成管情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，GraphPad Prism8、Photoshop進(jìn)行繪圖。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（[x] ±s）表示，2組比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較用單因素方差分析，多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同缺氧時(shí)間對(duì)H9c2心肌細(xì)胞存活率的影響 缺氧24、30、48、54 h時(shí)細(xì)胞存活率較缺氧0 h下降，缺氧48 h時(shí)細(xì)胞存活率較缺氧24、30 h均下降（P＜0.05），見圖1。為保證既能成功制備心肌細(xì)胞缺氧模型，又能提取較多的外泌體以順利開展后續(xù)研究，本研究選取缺氧48 h作為造模條件。

2.2 NTA檢測(cè)血清外泌體的顆粒濃度和粒徑 常氧組H9c2外泌體樣本的顆粒濃度為1.6×1011/mL，粒徑峰值95.1 nm，峰面積占比93.4%，峰形尖銳，無雜峰（圖2A）；缺氧組H9c2外泌體樣本的顆粒濃度為9.4×1010/mL，粒徑峰值94.5 nm，主峰面積占比86.8%，且峰形尖銳，無雜峰（圖2B）。本實(shí)驗(yàn)所提取的常氧組和缺氧組H9c2外泌體的樣本顆粒濃度在1×107～1×1012/mL，粒徑大小40～160 nm。

2.3 透射電子顯微鏡檢測(cè)血清外泌體的形態(tài)和大小 透射電子顯微鏡下常氧組H9c2外泌體樣本（圖3A）和缺氧組H9c2外泌體樣本（圖3B）的形態(tài)特征均為典型的球形或茶托狀結(jié)構(gòu)，直徑在100 nm左右，大小均一，形態(tài)完整。

2.4 外泌體的標(biāo)志蛋白表達(dá) 外泌體陽性標(biāo)志蛋白TSG101、CD63、CD9在常氧/缺氧H9c2外泌體樣本（圖4A、B）和H9c2細(xì)胞（圖4C、D）中均有表達(dá)，外泌體陰性蛋白Calnexin在細(xì)胞樣本中有少量表達(dá)，在外泌體樣本中未見表達(dá)。

2.5 不同濃度H9c2外泌體對(duì)HUVEC細(xì)胞活力的影響 用不同濃度的2組H9c2外泌體分別與正常HUVEC共孵育24 h后，與對(duì)照組（0 mg/L EXO-C組）相比，常氧H9c2外泌體濃度為20 mg/L、30 mg/L時(shí)，HUVEC細(xì)胞活力下降（F=5.016，P＜0.05）；與對(duì)照組（0 mg/L EXO-M組）相比，各濃度的缺氧H9c2外泌體均能顯著抑制HUVEC的活力（F=7.682，P＜0.01）。外泌體濃度相同時(shí)進(jìn)行比較，當(dāng)外泌體濃度為10 mg/L時(shí)，EXO-M組對(duì)HUVEC活力的抑制程度大于EXO-C組（t=3.041，P＜0.05），故后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇10 mg/L為外泌體干預(yù)濃度。見圖5。

2.6 各組HUVEC增殖情況 與常氧組比，缺氧組HUVEC增殖率顯著下降；與缺氧組比，EXO-C組和EXO-M組HUVEC增殖率均下降；與EXO-C組比，EXO-M組增殖率進(jìn)一步下降（P＜0.05），見圖6。

2.7 各組HUVEC遷移能力情況 與常氧組比，缺氧組HUVEC細(xì)胞遷移面積減小，遷移率下降（P＜0.05）；與缺氧組比，EXO-M組HUVEC遷移面積進(jìn)

3 討論

3.1 缺氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞來源的外泌體抑制血管新生 外泌體可以來源于多種類型的細(xì)胞，包括一般不被認(rèn)為是典型分泌細(xì)胞的心肌細(xì)胞。在AMI造成的缺氧環(huán)境誘導(dǎo)下，心肌細(xì)胞可以釋放大量外泌體。研究表明，暴露于中度缺氧2 h可使心肌細(xì)胞釋放的外泌體數(shù)量增加2倍［5］。但缺氧條件誘導(dǎo)心肌細(xì)胞分泌的外泌體對(duì)血管新生的調(diào)控作用尚未達(dá)成一致。有研究表明，心肌梗死后的心肌細(xì)胞外泌體中富含的miR-19a-3p能減弱心肌梗死后小鼠的心臟功能，并通過缺氧誘導(dǎo)因子-1α抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和血管生成［6］。另有研究表明心肌細(xì)胞在低氧情況下釋放含有高表達(dá)CircHIPK3的外泌體，可以通過抑制miR-29a活性來促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)心肌內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)程和增殖，并減少梗死面積［7］。為了進(jìn)一步探索心肌細(xì)胞來源的外泌體與AMI后血管新生的關(guān)系及其作用機(jī)制，本研究采用缺氧培養(yǎng)模擬體外心肌梗死后心臟環(huán)境，造模成功后提取心肌細(xì)胞外泌體并進(jìn)行鑒定，再觀察不同組別外泌體對(duì)HUVEC細(xì)胞的影響。結(jié)果顯示，H9c2心肌細(xì)胞來源的外泌體均對(duì)HUVEC細(xì)胞增殖、遷移、成管能力有一定程度的抑制作用，其中，缺氧誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞來源外泌體的抑制作用更明顯。由此，筆者認(rèn)為缺氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞來源的外泌體可以抑制血管新生。

3.2 缺氧H9c2來源的外泌體可能通過其內(nèi)載物調(diào)控血管新生 張春祥等［8］認(rèn)為MI后心肌細(xì)胞來源的外泌體可以部分反映心臟的病理狀態(tài)，其可能會(huì)加重心臟損傷，也可能具有一定的治療作用。既往也有實(shí)驗(yàn)證明外泌體治療可改善MI動(dòng)物模型心功能、減輕炎癥反應(yīng)、減少細(xì)胞凋亡和自噬等［9］。因此，在本實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步深入研究缺氧H9c2心肌細(xì)胞來源外泌體抑制血管新生的具體機(jī)制有助于實(shí)現(xiàn)在分子水平上的精準(zhǔn)調(diào)控，對(duì)推進(jìn)外泌體治療AMI進(jìn)程具有重要意義。

外泌體被稱為“細(xì)胞間信息傳遞的使者”，可以直接與鄰近細(xì)胞相互作用，也可以間接通過體循環(huán)與遙遠(yuǎn)的受體細(xì)胞相互作用。作為生物體中天然存在且可以提取的一種內(nèi)源性物質(zhì)，外泌體具有靶向特異性、良好的生物相容性、不易被免疫清除以及易通過多種生物屏障等特點(diǎn)，是機(jī)體內(nèi)重要的信息運(yùn)載體。外泌體主要通過攜帶的內(nèi)容物包括脂質(zhì)、代謝物、蛋白質(zhì)、microRNAs、mRNAs、LncRNAs和DNA等［10］來發(fā)揮作用，其特有的雙層脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)使得被包裹物不受外界酶解物影響，可以更穩(wěn)定高效地遠(yuǎn)距離輸送內(nèi)容物到受體細(xì)胞發(fā)揮生物學(xué)作用。因而，當(dāng)微環(huán)境變化后，外泌體數(shù)量改變或內(nèi)容物成分改變均可能引起一系列生物學(xué)反應(yīng)。有研究表明，在缺氧處理的心肌細(xì)胞分泌的外泌體中，miRNAs表達(dá)譜出現(xiàn)顯著差異，許多與血管新生相關(guān)的miRNAs，如miR-211、miR-143等被高度選擇性地分選入外泌體［11］。侯永波等［12］也認(rèn)為不同微環(huán)境下的心肌細(xì)胞分泌的外泌體由于內(nèi)容物有所差異，因而會(huì)發(fā)揮出不同的心肌修復(fù)能力。因此，既往已知的關(guān)于缺氧后心肌細(xì)胞分泌的外泌體與血管新生關(guān)系的研究結(jié)果之所以存在不一致性，也可能與其重點(diǎn)研究的外泌體內(nèi)容物不同有關(guān)，這提示研究外泌體內(nèi)容物對(duì)深入了解外泌體如何在細(xì)胞通訊間發(fā)揮作用具有重要意義。

基于本次研究發(fā)現(xiàn)缺氧H9c2心肌細(xì)胞來源的外泌體對(duì)HUVEC細(xì)胞增殖、遷移、成管能力具有抑制作用，筆者認(rèn)為缺氧環(huán)境下外泌體可能參與介導(dǎo)心肌細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間的信息傳遞，缺氧H9c2來源外泌體中可能存在抗血管新生的調(diào)控分子，但其具體調(diào)控機(jī)制尚不清楚，有待后續(xù)研究進(jìn)一步探討。

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（2024-01-10收稿 2024-03-05修回）

（本文編輯 李鵬）