胡月 寧亞婷 黎洪霞 羅逢健 尹榮秀 張新忠

摘要：手性農藥存在一個或多個對映體，其對映體在生物活性、毒性、環(huán)境行為、降解代謝等方面可能存在差異。茶葉作為三大無酒精飲品之一，其質量安全問題備受關注。雖然目前更關注手性農藥外消旋體殘留總量，但隨著分析技術的發(fā)展，同時為了更好地發(fā)揮藥效、減少殘留及對非靶標物危害，充分了解茶葉中手性農藥對映體的立體選擇性行為，分析在茶葉中的殘留降解規(guī)律，建立對映體的殘留限量標準顯得尤為重要。綜述了茶葉中手性農藥對映體殘留檢測技術現狀，如液相色譜法、氣相色譜法和超臨界流體色譜法等方法，并對手性農藥對映體在茶葉中的殘留降解行為和風險評估進行歸納和展望，為后續(xù)深入開展茶葉中手性農藥對映體的相關研究提供借鑒。

關鍵詞：茶葉；手性農藥；對映體；殘留分析；風險評估

中圖分類號：S571.1；S482??????????????? 文獻標識碼：A???????? ??????文章編號：1000-369X（2024）03-363-23

Research Progress in the Residue Analysis and Risk Assessment of Chiral Pesticides in Tea

HU Yue1，2， NING Yating1，2， LI Hongxia2， LUO Fengjian1， YIN Rongxiu3*， ZHANG Xinzhong1*

1. Tea Research Institute， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Hangzhou 310008， China;

2. Graduate School of Chinese Academy of Agriculture Sciences， Beijing 100081， China;

3. Tea Research Institute， Guizhou Provincial Academy of Agricultural Sciences， Guiyang 550006， China

Abstract： Chiral pesticides have one or more enantiomers， and their biological activity， toxicity， environmental behavior， degradation and metabolism may be different. Tea， as one of the three major beverages， has attracted much attention in terms of quality and safety. However， more attention is currently paid to the total amount of pesticide racemate residues. With the development of analytical techniques， it is particularly crucial to fully understand the stereoselective behavior of the chiral pesticide enantiomer in tea， as well as to examine residue degradation in tea and to set the maximum residue limits for enantiomers. This would help to improve the efficacies of chiral pesticides and reduce their residues and toxicities to non-target organisms. In this paper， the current status of chiral pesticide separation and residue detection technology in tea were reviewed， such as liquid chromatography， gas chromatography and supercritical fluid chromatography. In addition， it provided a summary of the residue degradation behaviors and risk assessment of chiral pesticide enantiomers in tea， which would be useful as a guide for further in-depth studies on chiral pesticide enantiomers in tea.

Keywords： tea， chiralpesticide， enantiomer， residue analysis， risk assessment

手性是指自然界存在的、物質本身與其鏡像分子呈左右手對稱，但又不能重疊的現象。一個原子連有4個不同原子或官能團，則被稱為手性中心，碳（C）、氮（N）、磷（P）、硫（S）等都可作為手性中心。手性對映體是彼此成鏡像、又不能重疊的一對立體異構體，有左旋、右旋之分，二者互為1︰1的混合物稱為外消旋體。手性農藥（Chiral pesticides）是指含一個或多個手性中心化合物的農藥。目前全球市場上手性農藥約占25%，我國農藥市場上含手性結構的農藥占40%左右，大部分以外消旋體形式銷售使用，只有約7%以單一或富含一種對映異構體形式銷售[1]。

茶樹易發(fā)生病蟲害，從而影響產量和質量。近年來，雖然茶樹病蟲害綠色防控發(fā)展良好，但施用化學農藥仍然是防治茶樹病蟲害最快捷有效的方式。截至目前，我國茶園登記允許使用的81種農藥化合物有效成分中有24種具有手性結構（圖1），占比約30%，受合成、制備技術水平和成本等影響，絕大部分手性結構化合物農藥仍以外消旋體產品為主進行銷售，在茶葉和環(huán)境土壤水中的殘留物大部分也是外消旋體；我國茶園禁限用農藥化合物共63種，其中17種具有手性結構，占比達27%；GB 2763—2021規(guī)定茶葉及飲料類食品中農藥最大殘留限量（Maximum residue limit，MRL）標準110項，其中37種化合物具有手性結構，占比達34%（表1）。隨著研究的深入，關于手性農藥對映體殘留降解、毒理及其代謝轉化研究越來越多，發(fā)現手性農藥對映體的生物活性和環(huán)境毒理存在較大差異，左旋和右旋異構體表現出不同的生物活性和立體選擇性，如S-茚蟲威具有較高的殺蟲活性，而R-茚蟲威殺蟲活性較低甚至沒有，S-茚蟲威對蜜蜂和茶尺蠖的毒性遠大于R-茚蟲威[2]；（-）-戊菌唑在葡萄和土壤中優(yōu)先降解[3]。使用生物活性高的對映單體農藥可以提高藥效并減少環(huán)境污染。

過去將外消旋體視作同一化合物可能會導致錯誤的判斷，不能更深入、更科學地評價手性結構化合物農藥，因此必須從對映體水平開展活性、毒性、環(huán)境安全等評價。本文對茶葉中手性農藥殘留分析和風險評估進行總結，歸納、綜述其檢測方法、殘留降解行為等，并對未來科研發(fā)展和應用進行展望。

1 茶葉中手性農藥種類及其毒性

茶葉中涉及的手性農藥，根據化合物結構不同可大致分為有機氯類、有機磷類、擬除蟲菊酯類、三唑類及其他類。

1.1 有機氯類農藥

有機氯類農藥（Organochlorine pesticides，OCPs）是一類結構中含有氯元素，用于防治植物病蟲害的有機化合物農藥。OCPs主要分為兩大類，一類是以苯為原料的氯苯類，一類是以環(huán)戊二烯為原料的氯化亞甲基萘類，前者包括α-六六六、滴滴涕、三氯殺螨醇、百菌清等，后者包括氯丹、七氯、艾氏劑等。OCPs主要通過氯基干擾和抑制目標生物體中神經系統(tǒng)的生理過程發(fā)揮作用，如和各類激素受體特異性結合激活通路產生各種毒性作用[4]。超過50%的OCPs有手性結構。OCPs具有持久性、高毒性、生物蓄積性和半揮發(fā)性的特點[5]，嚴重污染環(huán)境，很多已被列為持久性有機污染物（Persistent organic pollutants，POPs），如艾氏劑、狄氏劑、異狄氏劑、滴滴涕、氯丹、六氯苯等；截至2022年9月，我國農業(yè)部發(fā)布禁限用48種農藥中有10種是有機氯農藥（六六六、滴滴涕、毒殺芬、氯丹、滅蟻靈、艾氏劑、狄氏劑、三氯殺螨醇、硫丹和林丹）[6]，大部分具有手性結構。由于部分OCPs具有持久殘留性，通過食物鏈富集對健康產生危害，已逐漸被其他高效低毒類農藥替代，這類農藥目前在茶葉中的殘留量很低，除特殊生長環(huán)境的茶園外，幾乎可以忽略不計。目前GB 2763—2021對茶葉及飲料中7種OCPs規(guī)定了MRLs，均未對手性對映體進行區(qū)分（表1）。

1.2 有機磷類農藥

有機磷類農藥（Organophosphate pesticides，OPPs）是一類結構中含有磷元素的有機化合物農藥，廣泛用于植物病蟲害防治。OPPs通過磷?；c酶的活性部位結合來抑制乙酰膽堿酯酶（AChE）的活性，導致乙酰膽堿堆積刺激動物神經過度興奮而產生中毒現象。OPPs具有急性毒性、易降解、殘留期短的特點，逐漸替代有機氯類農藥，但是殘留的OPPs進入人體后仍會產生潛在危害[7]。常見的50余種OPPs中有一半化合物具有手性結構，主要是含有P=S或P=O鍵的正四面體結構。手性有機磷農藥對映體之間也存在不同的生物活性，包括毒性、酶抑制活性和生物降解能力等，如（-）-甲胺磷對乙酰膽堿酯酶的活性抑制是（+）-甲胺磷的8～12.4倍，而（+）-甲胺磷對大型溞的急性毒性是（-）-甲胺磷的7倍[8]；敵百蟲對映體對乙酰膽堿酯酶的抑制差異為（-）-敵百蟲＞（+）-敵百蟲＞Rac-敵百蟲[9]；水胺硫磷對藻類和大型溞的氧化應激和毒性具有明顯的對映選擇性，表現為（+）-水胺硫磷＞Rac-水胺硫磷＞（-）-水胺硫磷[10]。目前，我國茶園登記許可使用的OPPs共10種，如草甘膦、噠嗪硫磷和敵百蟲等，其中具有手性中心結構的有馬拉硫磷和敵百蟲（圖1）。由于OPPs的高毒性，水胺硫磷、甲胺磷和硫線磷等23種高毒農藥被列入茶園禁限用農藥名單，GB 2763—2021對茶葉及飲料中32種有機磷農藥制定了MRLs，如敵百蟲為2 mg·kg-1、馬拉硫磷為0.5 mg·kg-1、水胺硫磷為0.05 mg·kg-1等（表1）。

1.3 擬除蟲菊酯類農藥

擬除蟲菊酯類農藥（Synthetic pyrethroid pesticides，SPPs）是一類由人工合成的模擬天然除蟲菊素的有機化合物殺蟲劑。SPPs通過改變鈉通道門控電壓的動力學干擾神經膜中鈉離子通道，導致鈉離子通道打開時間過長，影響神經信號的傳遞[11]，具有高效、低毒、廣譜的特點。相比OCPs和OPPs，其生物活性和環(huán)境相容性較好，被廣泛用于農作物的種植和生產中。但SPPs對光、熱較穩(wěn)定，自然環(huán)境下降解較慢，更容易導致殘留問題，從而對健康產生危害。絕大多數SPPs具有手性結構，含有一個或多個手性中心，具有多個對映體，但其殺蟲活性往往只存在一個或幾個異構體上。如溴氰菊酯有3個手性中心8個對映體，其中只有（R，R，S）-溴氰菊酯和（R，S，S）-溴氰菊酯具有殺蟲活性[12]；氰戊菊酯有4個對映體，其中（S，S）-氰戊菊酯的殺蟲活性最高，約為外消旋體的4倍[13]；崔璇[14]研究發(fā)現，（+）-高效氯氟氰菊酯對茶尺蠖的半致死濃度（LC50）遠大于10 000 mg·L-1，為無效體，（-）-高效氯氟氰菊酯對茶尺蠖的殺蟲活性是外消旋體的9倍。目前，我國茶園登記許可使用的擬除蟲菊酯類農藥有8種，如高效氯氟氰菊酯、高效氯氰菊酯、甲氰菊酯、溴氰菊酯、聯苯菊酯和氯菊酯等，幾乎均具有手性中心結構（圖1）。氰戊菊酯被列入茶園禁限用名單，GB 2763—2021對茶葉及飲料中10種擬除蟲菊酯類農藥制定了MRLs，如溴氰菊酯為10 mg·kg-1、甲氰菊酯為5 mg·kg-1、氰戊菊酯和S-氰戊菊酯為0.1 mg·kg-1等（表1）。

1.4 三唑類農藥

三唑類農藥（Triazole pesticides，TPs）是一類化學結構主鏈上含有羥基（或酮基）、取代苯基和1，2，4-三唑基團的有機化合物農藥，通過抑制麥角甾醇的合成，抑制病菌的附著胞形成，使菌絲生長和孢子形成受阻，從而抑制真菌性病害[15-16]。TPs具有藥效高、持效期長、內吸性好、殺菌譜廣等特點[17]。目前，商品化的三唑類農藥有30余種，其中80%具有手性結構[18]，如多效唑有2個手性中心共4個立體異構體，殺菌活性為（2R，3R）-多效唑＞（2S，3R）-多效唑＞（2R，2S）-多效唑＞（2S，3S）-多效唑，而（2S，3S）-多效唑則具有較強植物生長調節(jié)作用[19]；R-烯唑醇殺菌活性遠高于S-烯唑醇，S-烯唑醇的植物生長調節(jié)活性高于R-烯唑醇；苯醚甲環(huán)唑對水稻4種致病菌（稻瘟病菌、稻惡苗病菌、稻立枯病菌和稻曲病菌）的生物活性差異表現為（2S，4R）-苯醚甲環(huán)唑＞（2R，4R）-苯醚甲環(huán)唑＞（2R，4S）-苯醚甲環(huán)唑＞（2S，4S）-苯醚甲環(huán)唑[20]。目前，我國茶園登記許可使用的三唑類殺菌劑農藥僅有苯醚甲環(huán)唑，具有兩個手性中心（圖1），GB 2763—2021中對茶葉及飲料中三唑類農藥苯醚甲環(huán)唑的MRL為10 mg·kg-1。

1.5 其他化學合成類農藥

除有機氯類、有機磷類、擬除蟲菊酯類殺蟲劑和三唑類殺菌劑外，常見農藥還有酰胺類除草劑、苯氧羧酸類除草劑以及一些雜原子農藥等，其部分化合物也具有手性結構，如苯氧羧酸類除草劑2，4-滴丙酸（DCPP）、喹禾靈、吡氟氯禾靈等，由于丙酸酯α位被芳氧基取代而具有手性，其生物活性多集中表現在R-體上，S-體幾乎沒有活性。另外，噁二嗪類化合物茚蟲威具有殺蟲譜廣、見效快等特點，最初上市亦為外消旋體產品，隨后研究發(fā)現主要殺蟲活性為S-茚蟲威，逐漸被高比例的S-茚蟲威富集產品或S-茚蟲威單體產品代替[2]。新煙堿類農藥是當前農業(yè)上很多農藥的替代品種，這類農藥在茶湯沖泡中浸出率高，不建議在茶園中施用。呋蟲胺是最早商品化的新一代手性新煙堿類殺蟲劑，有1個手性碳中心2個對映體，其中S-呋蟲胺既是高活體也是高毒體，對蚯蚓和蜜蜂的毒性遠高于R-呋蟲胺，而R-呋蟲胺也表現出較好的殺蟲活性且在作物中優(yōu)先降解，因此開發(fā)高比例的R-呋蟲胺農藥有利于保持殺蟲活性，同時降低對非靶標生物和生態(tài)環(huán)境的負效應[21]。繩慧珊[22]研究發(fā)現，呋蟲胺對茶尺蠖的觸殺活性大小為S-呋蟲胺＞Rac-呋蟲胺＞R-呋蟲胺。目前，我國茶園登記許可使用的有呋蟲胺、吡丙醚和茚蟲威等（圖1），溴甲烷、克百威和滅多威等被列入茶園禁限用名單，GB 2763—2021對茶葉及飲料中其他類農藥制定MRLs的有呋蟲胺（20 mg·kg-1）、仲丁威（0.05 mg·kg-1）和克百威（0.02 mg·kg-1）等，后續(xù)要注意高浸出率農藥施用風險。

不同手性農藥對映體的生物活性、毒性和環(huán)境效應等都可能存在較大差異，造成了在茶葉等農產品中的殘留差異。因此，對茶園手性農藥，如果只從外消旋體層面開展研究可能會引起錯誤判斷，無法有效保障茶葉質量和飲用安全，有必要全方位對手性農藥對映體進行活性、毒性、殘留降解代謝等評價，而在評價之前，建立合適的手性農藥對映體分析方法是研究的基礎。

2 茶葉中手性農藥對映體拆分檢測方法

2.1 手性農藥對映體拆分方法

手性化合物對映單體可以通過化學直接不對稱合成和外消旋體拆分獲得。相比于化學直接合成法，手性拆分隨著手性色譜柱填料等技術發(fā)展，其成本更低、操作更簡單方便。目前常用手性對映體拆分方法包括結晶拆分法、化學拆分法、微生物酶拆分法和色譜拆分法，其中色譜拆分法簡單快速、分離效果好、應用最廣泛[23]，主要有液相色譜法、氣相色譜法和超臨界流體法等。

液相色譜法有正相和反相色譜模式，正相色譜主要以正己烷、異丙醇等為流動相，通過氫鍵、π-π和偶極-偶極作用力使對映體分離，反相色譜通常以水或含水緩沖液與有機溶劑改性劑（如甲醇或乙腈）為流動相，強極性流動相更容易和手性固定相形成氫鍵和疏水作用等成為手性識別的關鍵因素。如王鵬等[24]以正己烷-異丙醇為流動相，用CDMPC手性固定相成功拆分戊唑醇和三唑酮對映異構體，并比較了流動相中異丙醇的含量對拆分的影響，發(fā)現減少異丙醇含量有利于增加兩種農藥對映體的分離度，該課題組后續(xù)以甲醇-水為流動相，在反相液相色譜條件下對己唑醇、烯唑醇、粉唑醇、三唑酮和戊唑醇對映體實現了拆分[25]。

氣相色譜更適合非極性、熱穩(wěn)定性良好、易于揮發(fā)的物質。如Kuang等[26]用BGB-172柱成功分離氯氰菊酯和聯苯菊酯對映體，建立了GC-ECD方法檢測茶葉中兩種農藥對映體。Wang等[27]采用氣質聯用方法、BGB-176柱分離乙酰甲胺磷與甲胺磷對映體。寧亞婷等[28]比較了液相色譜和氣相色譜條件下不同色譜柱分離cis-聯苯菊酯和高效氯氟氰菊酯對映體的效果，發(fā)現用氣相色譜法、BGB-172柱能很好實現兩種農藥手性對映體的分離。

超臨界流體技術具有分離效率高、有機溶劑耗費少、綠色環(huán)保等優(yōu)點。如馮碩立等[29]采用超臨界流體色譜技術，在Chiralpak IB柱上對三唑酮、己唑醇、戊唑醇、烯效唑、腈菌唑和惡醚唑6種三唑類殺菌劑實現了手性拆分?？娙~隆[30]以超臨界CO2為流動相，在Chiralpak AD-3柱上對甲基異柳磷、異硫磷、水胺硫磷、丁烯氟蟲腈、氟蟲腈和乙蟲腈6種手性農藥實現對映體分離。

在色譜拆分中，手性固定相是識別和分離手性化合物對映體的關鍵，如多糖類衍生物型、Pirkle型和環(huán)糊精等，其中多糖類衍生物手性固定相因其廣泛的手性識別能力、較好的穩(wěn)定性和耐用性等優(yōu)點而得到廣泛的應用[23]。張?zhí)熨n等[31]采用自制的含苯甲酰胺連接臂的β-環(huán)糊精手性固定相（TCDP），以乙腈-水作為流動相，實現了反相液相色譜下腈菌唑對映體完全分離；張文華等[32]利用多糖類手性色譜柱Acquity Trefoil AMY1結合超高效合相色譜法成功實現6種三唑類農藥16種對映體的拆分；周勵等[33]采用多糖衍生物耐溶劑型手性色譜柱Chiralpak IH，以乙腈-水為流動相，在反相色譜條件下同時拆分了多效唑、己唑醇、糠菌唑3種手性農藥對映異構體，取得了較好的效果。除手性固定相之外，拆分條件的改變，如色譜柱和流動相的溫度、流動相的組成及比例、流速和改性劑等都會對對映體的分離度產生較大影響[34]。如齊艷麗等[35]考察了合相色譜拆分時手性固定相、改性劑種類及比例、系統(tǒng)備壓、流動相流速和色譜柱溫度等因素對三唑類手性農藥對映體分離的影響，發(fā)現改性劑對化合物的洗脫能力大小順序為甲醇＞乙醇＞異丙醇＞乙腈；以異丙醇為改性劑時，化合物保留因子隨著異丙醇比例的升高而降低，分離因子及分離度也逐漸減小，分離度隨著流速的增加而減小，溫度變化無顯著影響。色譜法在手性農藥對映體拆分上應用廣泛，但該方法需要借助儀器設備，操作復雜，需要專業(yè)技術人員和大量的時間成本等。所以，近年來也有研究者開發(fā)出基于抗原抗體特異性反應的免疫分析法[36]、基于分子印跡聚合物的分子印跡技術[37]等方法用于手性化合物拆分。

2.2 茶葉基質中手性農藥對映體殘留檢測方法

2.2.1 液相色譜法

液相色譜（Liquid chromatography，LC）是以液體為流動相，選擇不同類型填料作為固定相，利用不同化合物在固液之間的吸附交換分配實現分離的技術，適用于極性大、不耐熱、不易揮發(fā)的物質，具有分離速度快、分離效率高、操作簡便、選擇性好、靈敏度高等特點[38]。和對映體色譜拆分方法相同，液相色譜殘留檢測分為正相液相色譜模式和反相液相色譜模式，其中正相液相色譜多以正己烷、異丙醇等為流動相，由于正己烷等不適合質譜離子化，因此正相色譜常與紫外檢測器等聯用進行分析，在農藥殘留檢測中應用較少；反相液相色譜一般以水相和/或有機相（如甲醇、乙腈等）混合作為流動相，因為流動相適合離子化，具有背景信號強度低、樣品制備過程簡單等優(yōu)點，常與紫外檢測器、質譜等多種檢測器聯用分析不同性質的化合物，在手性農藥化合物對映體分離和殘留分析應用中迅速發(fā)展。通常根據化合物的不同性質選擇不同的色譜類型和檢測器進行檢測。

紫外檢測器和熒光檢測器是液相色譜儀常見的選擇型檢測器，前者基于溶質分子吸收紫外光的原理設計，后者適用于本身能發(fā)射或衍生化后能產生熒光的化合物。大多數有機磷和有機氯農藥都有紫外特征吸收，因此，紫外檢測器在早期農藥檢測研究中應用廣泛。如Zheng等[39]用分散液液微萃取（DLLME）提取凈化結合液相色譜紫外檢測（HPLC-UV），選擇紫外波長220 nm對茶葉中手性農藥己唑醇對映體進行分離檢測，在20～2 000 μg·L-1內線性良好，平均回收率為83.0%～90.0%，相對標準偏差（RSD）為2.6%～5.6%，檢測限（LOD）為6 μg·L-1，定量限（LOQ）為20 μg·L-1。手性衍生化法是指將對映體與手性衍生化試劑反應生成非對映體復合物的方法，具有發(fā)色團或熒光等結構的衍生化試劑可用熒光檢測器檢測，可提高檢測能力，例如，Inoue等[40]采用手性衍生化，以Acquity BEH C18柱分離，超高效液相色譜-熒光檢測法測定綠茶、紅茶、茉莉花茶和烏龍茶中的2，4-滴丙酸，結果顯示對映異構體在50～5 000 μg·L-1內線性良好，平均回收率為82.4%～97.6%。

高效液相色譜法（High performance liquid chromatography，HPLC）和超高效液相色譜法（Ultra performance liquid chromatography，UPLC）的出現使得液相色譜法得到進一步發(fā)展，提高了分析通量、分離速度和檢測靈敏度，同時質譜技術能高效快速地分離和鑒定各類物質，提高了分析能力，目前在農藥殘留分析領域多采用超高效液相色譜和單極/多極質量分析器串聯使用。Liu等[41]采用QuEChERS方法凈化，Chiralpak AD-RH柱分離，液相色譜串聯線性離子阱質譜法（LC-MS/MS-Qtrap）測定，建立了茶葉中水胺硫磷、多效唑、茚蟲威、三唑醇和三唑酮5種手性農藥殘留分析方法，結果顯示，對映體的平均回收率為75.9%～

112.4%，RSD小于10%，LOD為0.2～1.0 μg·kg-1，LOQ為0.5～5.0 μg·kg-1。蔣明明等[42]采用Chiralpak IG柱分離，超高效液相色譜-串聯質譜法（UPLC-MS/MS）檢測普洱生茶和熟茶中三唑酮、苯霜靈和丙環(huán)唑3種農藥8種對映體，結果顯示，對映體在2.5～500.0 μg·L-1內線性良好，平均回收率為70.1%～110.6%，RSD為1.2%～13.5%，LOQ為5～10 μg·kg-1；曾小娟等[43]采用Chiralpak IG柱分離測定曬青毛茶和普洱茶中的水胺硫磷、茚蟲威和呋蟲胺3種農藥6個對映體，結果顯示，對映體在2～200 μg·L-1內線性良好，平均回收率為73.57%～123.7%，RSD為2.6%～18.7%，LOQ為2.5～250.0 μg·kg-1。Zhang等[3]建立了Lux Cellulose-2柱分離，UPLC-MS/MS檢測茶葉中戊菌唑對映體的方法，平均回收率為94.5%～107.8%，RSD小于8.0%，LOQ為12.5 μg·kg-1。

此外，液相色譜與質譜聯用檢測方面高分辨質譜的應用，如飛行時間（TOF）和軌道阱（Orbitrap）等，可快速準確獲得化合物的精確質量，因其高通量、分析速度快、靈敏度高、分辨率高和定性準確等特點，通常和四極桿串聯進行定性定量分析[44]，近年來被廣泛應用于茶葉等復雜基質農藥殘留檢測。本課題組[45-46]采用Lux Cellulose-1柱分離，UPLC-Q-TOF/MS測定，建立了茶鮮葉、紅茶、綠茶、普洱茶及紅茶茶湯中茚蟲威和順式-氟環(huán)唑對映體殘留分析方法，方法回收率為61.0%～129.7%，RSD小于17.1%，不同茶葉的LOQ為2.0～4.7 μg·kg-1，茶湯中LOQ小于0.17 μg·L-1。Liu等[47]用Chiral Cel OJ-3R柱分離，LC-HRMS測定普洱茶、紅茶中氟啶蟲胺腈對映體降解殘留，結果顯示，各對映體在2～100 μg·L-1內線性良好，平均回收率為72.4%～92.7%，RSD小于10%，LOD為0.2 μg·kg-1，LOQ為0.5 μg·kg-1；Chen等[48]采用AD-RH柱分離，UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS定量分析茶鮮葉和綠茶中氟蟲腈對映體，平均回收率為90%～106%，RSD小于10%，LOQ為10 μg·kg-1。

大部分農藥母體化合物和代謝物之間存在毒性差異。如吡丙醚的大多數代謝物對大鼠肝細胞的48 h急性毒性均大于母體，對大鼠肝細胞會造成一定的凋亡并產生2～3級損傷[49]。隨著社會大眾對食品安全的重視，農藥降解代謝產物備受關注，其對環(huán)境和人類的潛在風險不容忽視。Liu等[50]用Chiralpak AG分離，UPLC-HRMS分析普洱生茶和熟茶加工過程中環(huán)氧蟲啶對映體和代謝物的殘留，母體和代謝物分別在0.2～50 μg·L-1和0.05～10 μg·L-1內線性良好，平均回收率為82.5%～98.2%，RSD小于8.6%，LOD分別為0.2 μg·kg-1和0.1 μg·kg-1，LOQ為1 μg·kg-1。Zhang等[51]用Lux Cellulose-3柱分離氟噻唑吡乙酮對映體及其代謝物IN-E8S72，UPLC-MS/MS分析，母體和代謝物分別在2.5～2 500 μg·L-1和10～5 000 μg·L-1內線性良好，LOD分別為0.7 μg·L-1和3.0 μg·L-1，平均回收率為53.3%～125.3%，RSD為1.4%～

16.0%。鐘青等[52]用Lux Cellulose-2柱分離茚蟲威對映體及其7種降解產物，UPLC-MS/MS測定，在5～5 000 μg·L-1內線性良好，平均回收率為76.9%～108.4%，RSD小于16.4%，母體的LOQ在鮮葉、綠茶和紅茶中為5 μg·kg-1，在綠茶茶湯和紅茶茶湯中為0.5 μg·L-1，代謝物分別小于10 μg·kg-1和1 μg·L-1。

2.2.2 氣相色譜法

氣相色譜法（Gas chromatography，GC）是以氣體為流動相，利用樣品組分在固定相中的吸附能力和溶解度，以及在氣相和固定相之間不同的分配系數來實現分離。GC對于LC更適合非極性、熱穩(wěn)定性好、易揮發(fā)物質的分析，具有載氣成本低、進樣量小、靈敏度高和檢測限低等優(yōu)點，一般根據化合物結構性質不同串接不同類型檢測器，如電子捕獲檢測器（ECD）、火焰光度檢測器（FPD）、質譜檢測器（MSD）等。

潘蓉等[53]用BGB-176柱分離，建立了GC-FPD法分析茶葉中乙酰甲胺磷及代謝物甲胺磷對映體殘留，平均回收率為50.8%～

66.4%，RSD小于7%，LOD為3～10 μg·kg-1，LOQ為10～30 μg·kg-1。Jiao等[54]采用CycloSil-B柱分離，GC-FPD法分析比較乙酰甲胺磷及甲胺磷在茶樹細胞懸浮液和離體帶葉茶枝中對映體降解代謝行為，在茶枝中平均回收率為68.4%～94.0%，RSD為3.4%～9.2%；在細胞懸浮液中平均回收率為86.0%～96.0%，RSD為0.3%～3.2%，兩種基質中的LOQ為12.5～50 μg·kg-1。寧亞婷等[28]用BGB-172柱分離，GC-ECD法檢測茶葉中順式-聯苯菊酯和高效氯氟氰菊酯對映體殘留，結果顯示，兩組對映體分別在2.5～800.0 μg·L-1和2.5～200.0 μg·L-1內線性良好，平均回收率分別為68.2%～123.4%和61.6%～102.6%，RSD小于14.6%，LOD低于1 μg·L-1，LOQ為2～5 μg·kg-1。氣相色譜法雖然適于低沸點、易氣化的手性農藥對映體殘留分析，但高溫下可能導致化合物降解或異構化，存在一定的局限性。

2.2.3 毛細管電泳法

毛細管電泳（Capillary electrophoresis，CE）也稱為高效毛細血管電泳（HPCE），是一類以高壓直流電場為驅動力、毛細管為分離通道的分離分析技術，利用樣品中各組分的淌度與分配行為存在的差異實現分離。CE技術用于手性拆分檢測時，通常依靠添加手性選擇劑構建手性分離環(huán)境，使對映體呈現不同的質荷比或淌度，從而實現對映體分離檢測，具有使用方便、分離效率高、操作簡單、自動化程度高等特點[55]。國內外關于CE在手性農藥殘留方面的研究主要集中在水[56]和土壤[57-58]，不同的手性農藥對映體如甲霜靈、聯苯菊酯、育畜磷、抑霉唑、馬拉硫磷等均得到了較好的分離[59]，為后續(xù)應用于茶葉手性農藥殘留分析提供新的思路。

Jarman等[57]使用CE技術，以γ-CD為手性添加劑分離了土壤中5種手性農藥（甲霜靈、咪唑喹啉酸、地蟲硫磷、育畜磷和2，4-滴丙酸）對映異構體；Pérez-Fernández等[60]將CD和手性表面活性劑膽汁酸鹽合用，采用膠束毛細管電泳在10 min內拆分順式-聯苯菊酯對映體，分離度為2.8；李佳等[61]用毛細管區(qū)帶電泳分離，以5 332 mg·L-1乙酸鈉緩沖液（pH=5.8，內含15 976 mg·L-1 DM-β-CD）為分離電解液，在234 nm波長下對精喹禾靈和S-對映體進行手性分離，分離度為2.7，用于精喹禾靈對映體的定性定量分析；Yi等[62]在50 mmol·L-1磷酸氫鈉（內含30 mmol·L-1 HP-β-CD，pH=10.1）、20 kV電壓、15 ℃分離溫度和214 nm條件下，開發(fā)了一種快速簡單的咪唑喹啉酸對映異構體的CE分離檢測方法，研究發(fā)現咪唑喹啉酸對映異構體在降解速率上存在差異。

2.2.4 超臨界流體色譜法

超臨界流體色譜法（Supercritical fluid chromatography，SFC）是以超臨界流體（如二氧化碳）為流動相的色譜方法。SFC綜合GC和LC的優(yōu)點，充分利用超臨界流體良好萃取劑的特性，是一種綠色環(huán)保、高效經濟的色譜分離技術，目前在手性化合物對映體分析上得到廣泛應用。王麗[63]利用QuEChERS方法提取凈化，以Chiralpak IC-3手性柱分離，異丙醇為流動相改性劑，SFC-MS/MS法測定，建立了茶葉中甲胺磷、乙酰甲胺磷對映體分析方法并用于實際樣品測定，結果表明，對映體在5～200 μg·L-1內線性良好，平均回收率為70.53%～110.61%，RSD為2.92%～13.30%，LOD為5 μg·kg-1，LOQ為10 μg·kg-1。Zhang[64]等采用乙腈/水（V乙腈∶V水=2∶1）提取，Cleanert TPT固相萃取柱凈化，Chromega Chiral CCA手性柱分離，建立了SFC-Q-TOF/MS法檢測茶葉中烯唑醇對映體殘留，流動相為CO2/異丙醇（V二氧化碳∶V異丙醇=96∶4），結果表明，對映體在10～1 000 μg·L-1內線性良好，在紅茶中平均回收率為85.6%～90.6%，RSD小于9.5%，LOD為1 μg·L-1，LOQ為10 μg·kg-1，方法在檢測速度、準確度及環(huán)境友好度上具有優(yōu)勢。

近年來，基于SFC原理發(fā)展的超高效合相色譜法（Ultra performance convergence chromatography，UPC2），結合了UPLC和SFC的優(yōu)點，具有傳質性好、分離效果佳、峰形窄和綠色環(huán)保等特點，常用于殘留分析研究。趙悅臣等[65-66]用Chromega Chrial CCA柱分離，以CO2/異丙醇（（V二氧化碳∶V異丙醇=95∶5）為流動相，利用超高效合相色譜-四極桿飛行時間質譜（UPC2-Q-TOF/MS）分析測定，建立了茶葉中丙環(huán)唑、烯唑醇、順式-氟環(huán)唑和乙酰甲胺磷對映體殘留分析方法，結果表明，茶葉中各對映體在10～1 000 μg·L-1內線性良好，回收率為63.9%～101.9%，RSD為2.7%～9.7%，LOQ為10 μg·kg-1。張新忠等[67]將該方法應用于紅茶中腈菌唑對映體的殘留分析，結果表明，對映體在10～1 000 μg·L-1內線性良好，回收率為84.1%～86.4%，RSD小于9.6%，LOQ為10 μg·kg-1，方法準確可靠，滿足殘留分析要求。更多的茶葉中手性農藥對映體殘留分析應用見表2。

3 茶樹生長和茶葉加工過程中手性農藥對映體降解代謝研究

環(huán)境中的手性農藥因環(huán)境作用可能會導致對映體在吸收、降解和轉化方面存在差異，從而產生不同的環(huán)境行為，表現出立體選擇性。茶葉作為一種健康飲品，其農藥殘留問題引起廣泛關注。目前已有研究開展了吡蟲啉、啶蟲脒[68]、高效氟氯氰菊酯[69]、己唑醇[70]、聯苯菊酯、茚蟲威和蟲螨腈[71]等農藥在茶樹生長及茶葉加工和沖泡過程的遷移轉化規(guī)律研究，但對具有手性結構的農藥對映體殘留降解的研究較少。研究手性農藥對映體從茶園到茶杯的殘留降解行為，對評估茶園中手性農藥應用具有重要意義，可為減施增效、開發(fā)高效低毒的新型農藥提供科學依據。

3.1 手性農藥對映體在茶樹鮮葉生長過程中的降解

農藥噴施到茶葉后，由于其理化性質、外界條件以及茶芽的生長稀釋作用共同影響農藥的消解速度[72]。茶葉加工通常采摘茶樹新梢幼嫩部位，通過不同加工工藝制成不同的茶類，研究不同農藥在茶葉生長過程中的消解速率可獲得生產實踐中的安全間隔期。

研究表明，乙酰甲胺磷對映體的消解呈現先快后慢的趨勢，（+）-乙酰甲胺磷消解速率略快于（-）-乙酰甲胺磷，半衰期分別為1.8 d和1.9 d，而甲胺磷殘留量先增加后降低，5 d時，（+）-甲胺磷和（-）-甲胺磷殘留量達到最大，分別為1.25 mg·kg-1和0.67 mg·kg-1，對映體分數（EF值）隨時間從0.516增加到0.734，表現出選擇性降解[72-73]。Jiao等[54]建立了體外代謝模型，研究乙酰甲胺磷在茶樹細胞懸浮液和離體帶葉茶枝上降解代謝行為，發(fā)現帶葉片的離體茶枝上手性農藥代謝更接近完整植株，（±）-乙酰甲胺磷易被莖葉的切口處吸收，并在葉片和莖段內部轉化為（±）-甲胺磷，乙酰甲胺磷未表現出選擇性差異，而其代謝物甲胺磷在葉片中表現出差異，離體葉片中（+）-甲胺磷殘留量是（-）-甲胺磷的1.5倍，這一結果與田間試驗結果類似。黎洪霞[74]研究發(fā)現，吡丙醚在茶鮮葉上發(fā)生選擇性降解，（+）-吡丙醚降解速率比（-）-吡丙醚快，半衰期分別是2.37 d和2.66 d。Zhang等[45]研究發(fā)現，在茶鮮葉上（+）-茚蟲威降解比（-）-茚蟲威快，半衰期分別是5.9 d和8.0 d。Zhong等[2]研究發(fā)現，在茶樹種植過程中存在（-）-茚蟲威向（+）-茚蟲威轉化的現象。此外，Zhang等[75]研究發(fā)現，茚蟲威對映體的降解速率受劑型的影響，施用乳油制劑后茚蟲威的降解速率比施用懸浮劑快，可能由于乳油制劑中的茚蟲威會從茶葉表面蠟質層快速滲透。另外，研究表明，呋蟲胺[22]、高效氯氟氰菊酯、順式-聯苯菊酯[28]、順式-氟環(huán)唑[45]、氟蟲腈[48]、烯唑醇[64]和氟噻唑吡乙酮[76]在茶樹鮮葉生長過程中的降解無顯著對映體選擇性差異。手性農藥對映體在茶樹鮮葉生長過程中的消解動態(tài)研究概況如表3所示。

3.2 手性農藥對映體在茶葉加工過程的降解

農藥理化性質和農產品加工條件的不同，影響其在農產品加工過程中的變化，清洗、去皮等過程可以降低農藥殘留，而發(fā)酵、干燥等加工方式可能會使農藥轉化代謝[77]。隨著茶葉加工工藝水平不斷提升，新型加工方式應用越來越廣泛，對農藥殘留影響也愈發(fā)復雜，如干燥過程中茶葉水分降低，會使殘留的農藥富集濃縮，而高溫、光照等又可促進農藥揮發(fā)或分解，最終可能使茶產品中農藥殘留量降低。

Gupta等[68]研究指出，茶葉加工過程中萎凋和干燥對農藥殘留影響較大，揉捻和發(fā)酵對農藥殘留無顯著影響。Wang等[76]研究發(fā)現，在紅茶和綠茶加工過程中，（+）-氟噻唑吡乙酮更易降解，干燥對選擇性降解的影響最大。乙酰甲胺磷在茶葉加工過程中降解也具有類似規(guī)律[53]，其在紅茶加工中的降解率明顯高于綠茶加工，除了揉捻和發(fā)酵過程對對映體降解有影響外，干燥對乙酰甲胺磷降解的影響最大，這可能與其為強極性農藥有關。Zhang等[45]對順式-氟環(huán)唑、茚蟲威對映體在綠茶加工中的降解研究發(fā)現，從鮮葉到成茶的加工過程中，兩種農藥的EF值逐漸上升，（+）-順式-氟環(huán)唑向（-）-順式-氟環(huán)唑轉化，而R-茚蟲威向S-茚蟲威轉化，表現出和茶樹鮮葉生長中一致的趨勢。此外，紅茶的發(fā)酵和普洱茶的萎凋工序對農藥的降解也產生一定影響[64]。Zhang等[64]研究發(fā)現，紅綠茶的揉捻以及紅茶的發(fā)酵過程是降解的關鍵工序，EF值表明加工過程中無對映體選擇性降解；Liu等[47]研究發(fā)現，紅茶的萎凋、揉捻和干燥過程以及普洱茶的萎凋和干燥過程是導致氟啶蟲胺腈降解的關鍵工序，但兩種茶葉加工中均未發(fā)現對映體選擇性降解，而環(huán)氧蟲啶對映體表現出對映體選擇性降解，其EF值隨著加工進程逐漸下降，1R，2S-環(huán)氧蟲啶降解速率更快[50]。

農藥在茶葉加工過程中受到光、熱等處理更易發(fā)生降解代謝，產生代謝產物。如Chen等[48]對氟蟲腈在綠茶加工過程中的降解研究發(fā)現，經過攤晾、殺青和干燥等步驟后，綠茶中氟蟲腈及其代謝物的殘留量升高，施藥5 d后采摘的鮮葉加工中S-氟蟲腈優(yōu)先降解，導致R-氟蟲腈的富集。Zhong等[2]研究茶葉加工中茚蟲威降解發(fā)現，IN-KG433是其主要代謝產物，其次是IN-JT333-1，且在紅茶、綠茶加工中表現出不同的行為，在綠茶加工過程中逐漸增加，在紅茶中逐漸減少，而R-茚蟲威在綠茶加工過程中不斷減少且會轉化為S-茚蟲威，干燥過程中的高溫又導致S-茚蟲威降解引起EF值快速上升，紅茶加工中萎凋和揉捻對茚蟲威對映體降解影響較大，進一步驗證了Zhang等[45]的研究結果。黎洪霞[74]發(fā)現在茶葉加工中，吡丙醚的EF值變化主要受干燥、殺青和萎凋的影響，（+）-吡丙醚降解速度較快，殘留以（-）-吡丙醚為主，代謝物4'-OH-Pyr殘留量較高，加工中代謝物變化規(guī)律和母體一致，表現出選擇性降解且隨著加工過程，EF值先降低后升高再降低。

3.3 手性農藥對映體在茶湯沖泡過程中的遷移轉化

茶葉主要通過沖泡后飲用茶湯，干茶中殘留的農藥會通過沖泡遷移到茶湯中，從而可能對人體產生影響。農藥在茶湯中的浸出率與茶葉沖泡方式（如沖泡溫度、沖泡時間）以及農藥的性質存在一定關系，其中主要因素是水溶性和辛醇-水分配系數。例如，乙酰甲胺磷及甲胺磷有較高的水溶性和較低的辛醇-水分配系數，因此在茶湯中表現出極高的浸出率，且干茶和茶渣中對映體EF值存在顯著差異，表明在茶葉沖泡過程中乙酰甲胺磷和甲胺磷均存在立體選擇性[53]。Wang等[76]研究氟噻唑吡乙酮對映體在茶湯中的浸出規(guī)律發(fā)現，綠茶茶湯中（-）-氟噻唑吡乙酮和（+）-氟噻唑吡乙酮的殘留量及浸出率均大于紅茶，其中紅茶中浸出率為35.6%～55.7%，綠茶中浸出率為51.4%～65.6%，但對映體之間的浸出率無顯著差異。

飲茶時的沖泡溫度較高，有些沖泡方法需要長時間加熱，而茶葉中殘留的農藥化合物在高溫下可能轉化生成某些降解產物從而帶來潛在的健康風險，因此有必要明確農藥在沖泡過程中產生的降解代謝物，進行全面的安全性評價。如吡丙醚幾乎不溶于水，沖泡后吡丙醚在茶湯中的殘留量遠低于茶渣，（±）-吡丙醚在茶湯中的總浸出率均不超過10.4%，且表現出對映體選擇性，殘留以（-）-吡丙醚為主，吡丙醚的3種代謝物（4'-OH-Pyr、5''-OH-Pyr和DPH-Pyr）在茶湯中浸出率高于母體，主要代謝物4'-OH-Pyr表現出對映選擇性，以（-）-4'-OH-Pyr為主，茶湯沖泡次數對吡丙醚及其代謝物對映體的EF值影響較小[74]。Zhong等[2]研究發(fā)現，茚蟲威在茶湯中的浸出率較低，而其代謝物IN-MK638和IN-MF014的浸出率可達到89.9%和83.9%，因此飲茶時需要注意某些代謝物的殘留風險。

4 手性農藥對映體在茶園土壤環(huán)境中的選擇性行為

茶樹是喜酸性土壤的植物，其外在生長與內在代謝物積累都和土壤環(huán)境有著密切的關聯。茶樹生長過程中噴施的農藥中未被利用的部分會流失進入土壤環(huán)境生態(tài)系統(tǒng)中，這部分殘留在土壤中的農藥可能會對土壤生態(tài)安全造成威脅，導致土壤酸化、理化性質變化、生物多樣性減少等。同樣，生態(tài)環(huán)境中的手性農藥在不同的環(huán)境介質作用下，其對映體可能會產生吸收、降解代謝和遷移擴散等差異，表現出不同的環(huán)境行為，在對映體水平開展土壤中手性農藥行為研究有助于科學評估土壤農藥殘留風險，降低對茶園生態(tài)影響。

已有研究表明，手性農藥對映體在土壤中表現出不同的選擇性降解行為。李曉剛等[78]研究發(fā)現，茚蟲威對映體在4種土壤中降解速率差異顯著，在酸性土壤中降解速率較慢，在有機質含量較高的土壤中對映體降解立體選擇性更明顯，土壤中EF值始終大于0.5。R-呋蟲胺在中性的砂質土壤中優(yōu)先降解，而在酸性和堿性的粉質土壤中表現相反，S-呋蟲胺優(yōu)先降解導致R-呋蟲胺富集[79]，S-呋蟲胺既是高活體也是高毒體，在實際生產中可通過生產高比例R-呋蟲胺來降低對非靶標生物的風險。手性農藥進入土壤后可能會對土壤微生物產生影響，薛鵬飛等[80]研究發(fā)現，氟環(huán)唑對映體在土壤中的降解無顯著差異，但（+）-氟環(huán)唑和外消旋體對土壤微生物的干擾作用比（-）-氟環(huán)唑更顯著。Zhang等[3]研究了戊唑醇對映體在土壤中的降解行為，發(fā)現施藥7 d后表現為（+）-戊唑醇富集。Zhang等[45]研究發(fā)現，（-）-順式-氟環(huán)唑和（+）-順式-氟環(huán)唑在土壤中的半衰期無顯著差異，而（-）-茚蟲威和（+）-茚蟲威在土壤中的半衰期差異顯著，（+）-茚蟲威降解更快。此外，還有一些關于高效氯氟氰菊酯[81]、炔螨特[82]、硫丹[83]等茶園土壤中手性農藥外消旋體的殘留降解研究，這些對后續(xù)茶園茶葉-土壤系統(tǒng)中研究手性農藥對映體的歸趨、全面評價環(huán)境風險具有重要參考意義。

5 茶葉中手性農藥風險評估

茶葉是日常生活中的必需品和重要的國際貿易產品，農藥殘留問題影響著茶葉質量安全和進出口國際貿易[84]，進行茶葉中農藥殘留安全風險評估是保障茶葉質量安全的重要環(huán)節(jié)。我國根據《中華人民共和國食品安全法》等制定了《食品中農藥殘留風險評估指南》[85]，通過分析農藥毒理學和殘留化學試驗結果，對因膳食攝入農藥殘留產生健康風險的可能性及程度進行評價，包括毒理學評估、殘留化學評估和膳食攝入評估。

5.1 毒理學評估

農藥毒理學評估通過在實驗動物體上開展一系列毒理學研究獲得包括急性、慢性、長期、致癌性、遺傳和生殖毒性等數據。手性農藥作為一類特殊化學結構的農藥，其對映體通常會表現出不同的生物活性和毒性，存在高效體、低效體和無效體。目前，少量手性農藥以高活性的光學單體形式進行生產和銷售，如精喹禾靈、精甲霜靈等。手性農藥進入環(huán)境中可能會對非靶標生物產生影響，包括急性毒性、氧化應激和內分泌干擾等[86]。石琳琳等[87]研究丁氟螨酯對土壤中蚯蚓的毒性影響發(fā)現，（+）-丁氟螨酯更容易在蚯蚓體內富集且其急性毒性更大，表現出更高的生態(tài)毒理風險。劉思宏[88]研究發(fā)現，R-呋蟲胺對蜜蜂的毒性大于外消旋體和S-呋蟲胺，同時R-呋蟲胺對蜜蜂學習記憶的亞致死效應較低。但Liu等[89]研究發(fā)現，S-呋蟲胺可誘導蚯蚓產生更強的氧化應激反應，顯著引起蚯蚓體內丙二醛含量升高以及嚴重的DNA損傷，從而抑制了蚯蚓生長和繁殖。夏瑋彤[90]研究了仲丁威對映體對3種非靶標生物蛋白核小球藻、斑馬魚胚胎和HepG2細胞急性毒性影響，發(fā)現S-仲丁威的毒性是R-仲丁威的1.3～1.7倍。李玲等[10]研究發(fā)現，水胺硫磷對大型溞的毒性遠高于對水華微囊藻的毒性，均表現為（+）-水胺硫磷＞Rac-水胺硫磷＞（-）-水胺硫磷，（+）-水胺硫磷會引起超氧化物歧化酶活性顯著下降。

研究農藥降解代謝產物也是關注手性農藥毒性的關鍵。如丁氟螨酯在溶解度范圍內對大型溞無明顯的急性毒性和慢性毒性，但其代謝物A-2、AB-1 dimer、AB-1和AB-11會明顯增強急性毒性從而抑制大型溞活動，其環(huán)境風險不容忽視，在評價丁氟螨酯安全性時不可忽視對其代謝物的殘留[91]。張召賢[92]研究發(fā)現，丙硫菌唑的代謝物脫硫丙硫菌唑比母體具有更好的殺菌活性，R-丙硫菌唑的活性是S-丙硫菌唑的9～639倍，母體和代謝物均具有明顯的類甲狀腺激素和雌激素效應，代謝物的激素活性高于母體，表明代謝過程是增毒過程，S-丙硫菌唑具有更高的類激素活性。姚國君[93]研究順式-氯氰菊酯及其主要代謝物順式-菊酸和3-苯氧基苯甲酸對蚯蚓的毒性發(fā)現，兩種代謝物的毒性均高于母體，順式-菊酸+3-苯氧基苯甲酸和順式-菊酸+3-苯氧基苯甲酸+順式-氯氰菊酯的聯合毒性顯示為拮抗作用。以上研究表明，進行手性農藥風險評估時，要充分考慮代謝物對環(huán)境及非靶標生物的影響。

5.2 殘留化學評估

殘留化學評估是對農藥及其有毒代謝物在食品和環(huán)境中殘留行為的評價。通過動植物代謝試驗、田間殘留試驗、加工過程和環(huán)境行為試驗等獲得的試驗結果，推薦規(guī)范殘留試驗中值（STMR）和最高殘留值（HR），必要時包括對后茬作物農藥殘留評價。進行全方位完整的代謝過程評估，可以保證所取得的數據能夠支持膳食暴露評估和風險管理決策。

對手性農藥進行殘留化學評估時，除了需要對外消旋體進行評估，還要考慮手性對映體可能存在毒性、活性不同，以及對映體之間相互轉化的情況，有必要進行單一對映體殘留風險評估。如Zhang等[75]研究茚蟲威在茶鮮葉中的殘留降解，發(fā)現茚蟲威對映體存在選擇性降解，噴施茚蟲威懸浮劑（S/R： 70/30）發(fā)現（+）-S-茚蟲威降解速率比（-）-R-茚蟲威快，田間噴施單一構型（+）-S-茚蟲威、（-）-R-茚蟲威和外消旋體制劑發(fā)現，（+）-S-茚蟲威構型穩(wěn)定，在降解過程中未發(fā)生構型轉化；但（-）-R-茚蟲威噴施后，檢出（+）-S-茚蟲威，表明（-）-R-茚蟲威會向（+）-S-茚蟲威轉化。潘蓉[72]在茶園噴施乙酰甲胺磷，發(fā)現（+）-乙酰甲胺磷和（-）-乙酰甲胺磷的半衰期分別為1.8 d和1.9 d，高濃度噴施的情況下，乙酰甲胺磷的EF值在0～14 d逐漸降低，14 d后大幅增加，施藥35 d后鮮葉中未檢測出兩種對映體。Li等[94]通過研究吡丙醚在茶葉中的殘留降解行為明確其半衰期為2.74 d，施藥3 d后消解率達到82.5%，建議施用后采收安全間隔設為5 d，茶葉中吡丙醚的推薦最大殘留限量值設為5 mg·kg-1。秦立新等[95]研究發(fā)現，吡丙醚在安徽和重慶兩地茶鮮葉上的半衰期分別為1.26 d和5.48 d，末次施藥后14 d采收的茶鮮葉及制成的干茶中的吡丙醚殘留量為0.01～1.13 mg·kg-1和0.04～0.37 mg·kg-1，膳食風險評估表明，對成年人群的殘留風險處于安全水平。不同劑型的農藥會影響農藥對映體在作物上的殘留降解，Zhang等[75]研究發(fā)現，懸浮劑中的茚蟲威對映體降解速度慢于乳油中的，噴施懸浮劑后的茶葉中殘留量高。在其他作物上的研究對茶葉研究同樣具有借鑒意義，如Liu等[96]研究滅菌唑在小麥上的選擇性行為和風險評估發(fā)現，S-滅菌唑、R-滅菌唑和Rac-滅菌唑的STMRs值分別為5.65、6.93、2.62 μg·kg-1，R-滅菌唑和Rac-滅菌唑的生物活性高于S-滅菌唑，但S-滅菌唑在植物和環(huán)境中的殘留更久，對人體健康產生的風險更大。

5.3 膳食攝入評估

膳食攝入評估是指在毒理學和殘留化學評估的基礎上，根據我國居民膳食消費量，估算農藥的膳食攝入量，包括長期膳食攝入和短期膳食攝入評估，結合殘留化學評估結果，計算國家估算每日攝入量（NEDI）和國家估算短期攝入量（NESTI）。根據國際及我國的實踐經驗，目前農藥殘留膳食暴露評估主要關注：一般人群（一般指1歲以上人群）、兒童（多為1～6歲）和特殊人群（育齡婦女、老年人）等。

手性農藥殘留污染會通過呼吸、飲食等途徑進入人體，對于非職業(yè)群體，其主要來源于飲食暴露，通過食物、水體蓄積手性農藥。孫彥[97]研究了9種手性農藥（聯苯三唑醇、苯霜靈、己唑醇、戊唑醇、粉唑醇、三唑酮、多效唑、腈菌唑和甲霜靈）在人體的飲食暴露途徑，結果發(fā)現，人體尿樣中僅三唑酮未檢出，其余檢出農藥的殘留水平表現為女性高于男性、成人高于兒童，蔬菜類和谷物類是膳食暴露主要來源，農藥膳食暴露呈現為女孩＞男孩＞成年女性＞成年男性，己唑醇和甲霜靈的風險最高。姚小珊[98]對土壤、人體尿液中3種手性農藥殘留進行分析發(fā)現，滅菌唑和甲霜靈在土壤中表現出選擇性殘留，R-體殘留量高，敵草胺無選擇性，在人體尿液中同樣是R-甲霜靈殘留量較高，而敵草胺無明顯規(guī)律，殘留濃度與采樣者性別、年齡無明顯的線性相關性。顧元琳[99]研究4種水果中烯唑醇風險評估發(fā)現，外消旋體在梨、桃、棗、蘋果的NEDI值分別是0.011 1～0.037 3、0.023 3～0.078 5、0.004 81～0.016 20、0.000 78～0.002 63 μg·kg-1·d-1，風險小于1.57%，是可接受的；在不同消費人群中，烯唑醇的HQ值隨著年齡增長而降低，膳食風險兒童高于成人，R-烯唑醇高于S-烯唑醇。

茶葉主要以沖泡飲用茶湯為主，因此進行茶葉農藥殘留風險評估主要根據農藥在茶葉上的最終殘留和茶湯沖泡數據，為合理使用農藥和安全飲茶提供科學依據，未來需要更深一步對單一對映體進行風險評估。黎洪霞[74]研究得到吡丙醚在綠茶茶湯和紅茶茶湯中的最大浸出率為13.8%，飲茶時實際攝入吡丙醚最大每日攝入量為0.117 μg·kg-1，僅為ADI值的0.12%，表明人體飲茶攝入吡丙醚的風險較低，不會影響人體健康。秦立新等[95]對吡丙醚的急性和慢性膳食攝入風險評估發(fā)現，吡丙醚的急性膳食暴露風險均為0.01%，慢性膳食暴露風險為0.13%（男）、0.15%（女），均為風險可接受。王微等[100]對黔東南州茶葉農藥殘留膳食攝入風險評估發(fā)現，22種農藥中僅克百威的慢性攝入風險為1.178%，其余風險均小于1%，急性攝入風險在0.03%～41.42%，表明黔東南州茶葉的農藥殘留慢性和急性攝入風險都在可接受范圍內。聶敏等[101]對貴州省茶葉中3種擬除蟲菊酯類農藥進行殘留降解研究及膳食風險評估發(fā)現，溴氰菊酯、聯苯菊酯和高效氯氟氰菊酯農藥的慢性膳食風險分別是0.12%、0.19%、0.03%，急性膳食風險范圍為1.50%～18.00%，NESTI值分別為1.5、1.8、0.3 μg·kg-1·d-1，采用危害指數法HI值計算得到累積攝入風險小于100%，表明風險較小，在一般人群中可接受，不會危害人體健康。朱盼等[102]采用危害指數法HI值對廣東省茶葉中8種擬除蟲菊酯類農藥（聯苯菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯）進行風險評估發(fā)現，慢性和急性累積攝入量分別為4.87×10-5、4.79×10-3 mg·kg-1·d-1，攝入量研究表明，男性高于女性、城市居民高于農村居民，所有檢出農藥的慢性和急性累積攝入HI分別為3.69×10-3和4.66×10-1，表明攝入風險較低。

6 總結與展望

茶葉是我國重要的傳統(tǒng)農產品，其質量安全問題一直備受關注，農藥殘留問題是其中一個重要因素，而手性農藥因其結構不同產生的不同藥效和毒性成為茶葉科研關注的焦點之一。為了更好發(fā)揮手性農藥作用，減少對環(huán)境污染和非靶標生物危害，進行手性農藥對映體拆分檢測并分析其在茶葉中殘留及暴露風險評估具有重要意義。隨著人們對農藥殘留研究不斷深入，為了保障飲茶安全和茶產業(yè)安全，未來茶葉中農藥管理和研究應側重以下方面：（1）科學合理開展茶園新農藥登記。農藥生產企業(yè)應充分利用現有政策優(yōu)勢，加快推進多類別、多劑型、毒性低、浸出率低和抗性低的新型農藥或生物農藥研發(fā)和登記，政府部門要加強對農藥合理使用的管理，以減少茶產品中農藥殘留問題。（2）完善農藥殘留限量標準。我國是茶葉出口大國，綠色貿易壁壘嚴重阻礙了我國茶葉出口貿易的發(fā)展，需要持續(xù)完善我國農藥殘留限量標準，提高茶葉上登記農藥及其限量標準的匹配性，保障標準的科學性和合理性，與國際接軌，突破貿易壁壘。（3）開發(fā)殘留檢測新方法。目前已有多種檢測技術在農藥殘留方面廣泛應用，如高效液相色譜法、超高效液相色譜串聯質譜法等，但由于茶葉基質復雜，目前僅關注單一手性農藥拆分和檢測，未來應注重多種手性農藥對映體的多殘留分析和手性農藥對映體與非手性農藥混合多殘留分析，開發(fā)多種手性農藥同時拆分技術，加強快速檢測研究，準確、便捷和高效定量手性農藥多殘留將是未來手性農藥殘留檢測的關鍵，有助于保障飲茶安全，促進茶產業(yè)可持續(xù)發(fā)展。

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