曾晴 嚴(yán)雅玲 嚴(yán)寒靜 何夢(mèng)玲 張宏意

摘要：1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶（DXS）是調(diào)控萜類合成途徑中MEP途徑的第一個(gè)關(guān)鍵酶，為探究廣藿香DXS基因參與其主要萜類成分廣藿香醇合成調(diào)控的分子機(jī)制，本研究依據(jù)本課題組前期獲得的轉(zhuǎn)錄組DXS基因序列，以廣藿香cDNA為模板，克隆得到PeDXS基因，對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，構(gòu)建pET-28a-PeDXS原核表達(dá)載體誘導(dǎo)蛋白表達(dá)，并采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)廣藿香根、莖、葉、芽中DXS基因表達(dá)情況。結(jié)果表明，從廣藿香葉中克隆到開(kāi)放閱讀框全長(zhǎng)為2 151 bp和1 908 bp的PeDXSI、PcDXS2基因序列，分別編碼716、635個(gè)氨基酸。預(yù)測(cè)PcDXSl蛋白分子量78.33 kDa，為穩(wěn)定非跨膜非分泌蛋白，主要定位于葉綠體；PcDXS2蛋白分子量67.92 kDa，為不穩(wěn)定非跨膜非分泌蛋白，主要定位于葉綠體。PcDXSl、PcDXS2均含有DXP_symhase_N、TranskeLpyr和Transketolase_C結(jié)構(gòu)域模塊，屬于DXS超家族。PcDXS1、PcDXS2分別與半枝蓮、糙蘇的DXS基因序列具有較高同源性。使用異丙基-B-D-硫代半乳糖苷（IPTC）誘導(dǎo)的PcDXSl、PcDXS2融合蛋白主要在沉淀中表達(dá)。PeDXS1、PcDXS2基因表達(dá)量均在根中最低，PcDXSI基因在葉中顯著高表達(dá)，PcDXS2基因在葉、芽、莖中高表達(dá)。本研究結(jié)果可為后續(xù)深入研究DXS基因在廣藿香萜類化合物合成途徑中的生物學(xué)功能及廣藿香萜類代謝途徑的基因調(diào)控奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：廣藿香；1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶（DXS）；基因克??；生物信息學(xué)分析；表達(dá)分析

中圖分類號(hào)：S567.2：Q781 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2024）04-0028-08