http：//hljnykx.haasep.cnDOI：10.11942/j.issn1002-2767.2024.06.0064

李德毓，司豆豆，彭浩，等.桑樹桑黃液體發(fā)酵及多糖提取工藝優(yōu)化

［J］.黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2024（6）：64-70.

摘要：桑樹桑黃是一種具有良好藥效的藥用多孔菌，其多糖是主要活性成分之一，具有抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)和其他藥理作用。為提高桑樹桑黃菌絲體干重及桑黃多糖得率，采用單因素和正交試驗對影響桑黃菌絲體干重的培養(yǎng)基配方及液體發(fā)酵培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化；利用超聲波輔助提取法對桑黃多糖提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，桑樹桑黃最佳培養(yǎng)基配方為馬鈴薯（去皮）200 g·L-1、乳糖32 g·L-1，胰蛋白胨10 g·L-1，NaCl 2.00 g·L-1，MgSO4·7H2O 1 g·L-1，VB1 10.0 mg·L-1，獲得菌絲體干重為2.82 g·L-1。在溫度28 ℃，接種量9%，轉(zhuǎn)速180 r·min-1，pH6.0條件下，最大菌絲量為3.12 g·L-1。桑黃多糖最佳提取工藝為超聲波功率200 W，料液比1∶60 g·mL-1，提取時間40 min，溫度50 ℃，此時桑黃多糖得率為5.54%。說明本研究優(yōu)化的桑樹桑黃培養(yǎng)基配方、發(fā)酵條件及多糖提取工藝合理、可行。

關(guān)鍵詞：桑樹桑黃；液體發(fā)酵；多糖；超聲波輔助提取法

收稿日期：2024-01-23

基金項目：陜西省教育廳科技計劃項目（20JS024）；陜南秦巴山區(qū)生物資源綜合開發(fā)協(xié)同創(chuàng)新中心項目（SLGPT2019KF02-01）；秦巴生物資源與生態(tài)環(huán)境省部共建國家重點實驗室（培育）“市校共建”科研專項（SXC-2307）；西鄉(xiāng)縣技術(shù)創(chuàng)新和新產(chǎn)品試制項目（XXKJ-2021-02）。

第一作者：李德毓（1997－），女，碩士研究生，從事微生物資源保育與應(yīng)用開發(fā)研究。E-mail：1750186028@qq.com。

通信作者：彭浩（1979－），男，碩士，副教授，從事微生物資源的保護(hù)與利用研究。E-mail：huaohao808@126.com。

桑樹桑黃（Sanghuangporus sanghuang）是一種珍稀的藥用真菌，隸屬于擔(dān)子菌門傘菌綱銹革孔菌目銹革孔菌科桑黃孔菌屬（Sanghuangporus）［1］。其主要在桑樹的枝干上產(chǎn)生［2］，多年生，無柄，生長初期呈金黃色，成熟后顏色轉(zhuǎn)變?yōu)榛?、褐甚至黑色，子實體菌蓋呈半球形，剖面呈扁平馬蹄形，表面龜裂、木質(zhì)化［3］，菌肉淺咖啡色或銹褐色［4］。由于環(huán)境因素及其生理生態(tài)的特殊性，導(dǎo)致野生桑黃子實體稀少，人工栽培尚未實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，無法滿足市場需求。

研究表明，桑黃菌絲體與子實體生物活性成分相似，而菌絲體提取物同樣具有抗腫瘤［5-6］、抗癌、抗氧化等作用［7］。由于桑黃抗癌作用的主要成分是多糖，國內(nèi)外對桑黃的研究也主要集中在液體發(fā)酵提取物所含的活性物質(zhì)上，主要包括桑黃多糖及多糖提取分離純化以及相關(guān)藥理研究。桑樹桑黃含有多糖、黃酮、萜類等［8］多種生物活性成分，其藥理活性物以多糖為主，桑黃多糖主要分為胞內(nèi)和胞外多糖。目前國內(nèi)對桑黃多糖的抗腫瘤、抗氧化、降血糖［9］、護(hù)肝、免疫調(diào)節(jié)［10-13］等藥理學(xué)方面進(jìn)行了深入研究，現(xiàn)已證明桑黃多糖在抗腫瘤方面的效果比靈芝、巴西蘑菇等傳統(tǒng)藥用菌類更好，同時還能與傳統(tǒng)抗腫瘤藥物產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)［14］。

隨著產(chǎn)業(yè)技術(shù)的發(fā)展，超聲波輔助提取法［15-16］用于從真菌或植物中提取活性物質(zhì)，與傳統(tǒng)提取方法相比，該技術(shù)具有反應(yīng)條件溫和、提取率高、周期短、成本低等優(yōu)勢［17-19］，其技術(shù)在桑黃多糖提取的研究中相對較少。

本研究采用單因素和正交試驗，篩選桑樹桑黃液體發(fā)酵的最佳培養(yǎng)基和發(fā)酵條件；利用超聲波輔助提取法對桑黃多糖進(jìn)行提取，優(yōu)化多糖最佳工藝條件，以期為提升桑黃液體發(fā)酵及多糖提取的工業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。

1" 材料與方法

1.1" 材料

1.1.1" 供試菌株

桑樹桑黃菌株由陜西理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院提供。

1.1.2" 培養(yǎng)基

PDA斜面培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200 g·L-1，葡萄糖20 g·L-1，蛋白胨5 g·L-1，KH2PO4 5 g·L-1，MgSO4·7H2O 3 g·L-1，VB110.0 mg·L-1，18 g瓊脂，pH自然。

種子液培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200 g·L-1，葡萄糖 20 g·L-1，蛋白胨5 g·L-1，KH2PO4 5 g·L-1，MgSO4·7H2O 3 g·L-1，VB110.0 mg·L-1，pH自然。

液體發(fā)酵培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200 g·L-1，葡萄糖30 g·L-1，蛋白胨10 g·L-1，KH2PO42 g·L-1，MgSO4·7H2O 1 g·L-1，VB110.0 mg·L-1，pH自然。以上培養(yǎng)基于高壓滅菌鍋內(nèi)121 ℃，滅菌20 min備用。

1.1.3" 試劑與溶液

馬鈴薯、紅糖（市售）。葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、乳糖、麥芽糖、尿素、硫酸銨、K2HPO4、CaCl2、KH2PO4、NaCl、FeSO4、蛋白胨（均為分析純）、瓊脂、牛肉粉、酵母浸粉、胰蛋白胨（生物試劑）和維生素B1，均購自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。95%乙醇和無水乙醇（分析純）購自天津市富宇精細(xì)化工有限公司。

1.1.4" 主要儀器設(shè)備

752N紫外可見分光光度計（上海儀電分析儀器）；DZKW-D-2電熱恒溫水浴鍋（北京永光明醫(yī)療儀器）；JA3003N電子天平（上海佑科儀器）；BSD-WX2200臥式智能精密搖床（上海博訊醫(yī)療設(shè)備廠）；BSP-400生化培養(yǎng)箱（上海博訊醫(yī)療設(shè)備廠）；KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器）。

1.2" 方法

1.2.1" 培養(yǎng)方法

（1）菌株活化。將保藏的菌株用接種鋤切取0.50 cm2菌塊，接種到PDA斜面培養(yǎng)基上，25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7～10 d，待菌絲長滿斜面后，于4 ℃冰箱保藏。

（2）種子液制備。將活化好的菌株用接種鋤切取0.50 cm2菌塊接種于種子液培養(yǎng)基中，裝液量為150 mL/250 mL，180 r·min-1，28 ℃恒溫培養(yǎng)7 d。

（3）發(fā)酵液培養(yǎng)。將種子液按5%比例的接種量接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，裝液量為150 mL/250 mL，180 r·min-1，28 ℃恒溫培養(yǎng)7 d。

1.2.2" 培養(yǎng)基配方單因素實驗

（1）碳源篩選。桑黃發(fā)酵液分別加入30 g·L-1的紅糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、可溶性淀粉替代液體發(fā)酵培養(yǎng)基中的葡萄糖，其余各成分比例同1.1.2中液體發(fā)酵培養(yǎng)基。裝液量為150 mL/250 mL，28 ℃，180 r·min-1培養(yǎng)7 d，確定最佳碳源。

（2）氮源篩選。桑黃發(fā)酵液分別加入10 g·L-1的尿素、牛肉粉、胰蛋白胨、酵母浸粉、硫酸銨替代液體發(fā)酵培養(yǎng)基中的蛋白胨，其余各成分比例同1.1.2中液體發(fā)酵培養(yǎng)基。發(fā)酵條件同上，確定最佳氮源。

（3）無機(jī)鹽篩選。桑黃發(fā)酵液分別加入2 g·L-1的CaCl2、K2HPO4、FeSO4、NaCl為代替液體發(fā)酵培養(yǎng)基中的KH2PO4，以只加MgSO4為對照，其余各成分比例同1.1.2中液體發(fā)酵培養(yǎng)基。發(fā)酵條件同上，確定最佳無機(jī)鹽。

1.2.3" 培養(yǎng)基配方正交試驗

在單因素實驗的基礎(chǔ)上，以菌絲體干重為評價指標(biāo)，選取碳源（A）、氮源（B）、無機(jī)鹽（C）3個因素，設(shè)置3組平行進(jìn)行正交試驗，試驗因素及水平見表1。

1.2.4" 液體發(fā)酵條件單因素實驗

（1）溫度篩選。將種子液按5%比例接種于優(yōu)化后的培養(yǎng)基中，在轉(zhuǎn)速180 r·min-1搖床上以24，26，28和30 ℃培養(yǎng)7 d。

（2）轉(zhuǎn)速篩選。將種子液按5%比例接種于優(yōu)化后的培養(yǎng)基中，在28 ℃恒溫?fù)u床上以轉(zhuǎn)速160，180，200和220 r·min-1培養(yǎng)7 d。

（3）pH篩選。將種子液按5%比例接種于優(yōu)化后的培養(yǎng)基中，分別選擇pH為4，5，6和7的培養(yǎng)基以轉(zhuǎn)速180 r·min-1培養(yǎng)7 d。

（4）接種量篩選。將種子液按5%比例接種于優(yōu)化后的培養(yǎng)基中，分別選擇7%、9%、11%、13%的接種量以180 r·min-1培養(yǎng)7 d。

1.2.5" 菌絲體干重測定

將發(fā)酵液進(jìn)行抽濾，用蒸餾水洗滌3次后，65 ℃烘干并稱量。

1.2.6" 多糖提取條件單因素實驗

對液體發(fā)酵所得的菌絲體進(jìn)行抽濾，蒸餾水洗滌2～3次，65 ℃烘干后研磨，過60目篩后備用。

（1）超聲波功率篩選。稱5份0.20 g桑樹桑黃菌絲粉末進(jìn)行超聲波輔助提取，料液比1∶20 g·mL-1，溫度40 ℃，時間40 min，設(shè)置超聲波功率為100，200，300，400和500 W，各提取1次，3組重復(fù)，確定最佳超聲波功率。

（2）料液比篩選。稱5份0.20 g菌絲粉末后同上方法提取，超聲功率100 W，溫度40 ℃，時間40 min，設(shè)置料液比（g：mL）為1∶20、1∶40、1∶60、1∶80、1∶100，處理組同上，確定最佳料液比。

（3）提取時間篩選。稱5份0.20 g菌絲粉末后進(jìn)行提取，超聲功率100 W，溫度40 ℃，料液比1∶20 g·mL-1，設(shè)置提取時間為35，40，45，50和55 min，處理組同上，確定最佳提取時間。

（4）提取溫度篩選。稱5份0.20 g菌絲粉末后進(jìn)行提取，超聲功率100 W，時間40 min，料液比1∶20，設(shè)置提取溫度為40，45，50，55和60 ℃，處理同上，確定最佳提取溫度。

1.2.7" 多糖提取條件正交試驗

在單因素實驗的基礎(chǔ)上，選取超聲波功率（A）、料液比（B）、提取時間（C）、提取溫度（D）4個因素，以多糖得率為評價指標(biāo)，設(shè)置3組平行進(jìn)行正交試驗，試驗因素及水平見表2。

1.2.8" 桑黃多糖含量測定

（1）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液配制。精密稱取1 g葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品于105 ℃下烘干至恒重。溶解并稀釋于100 mL容量瓶中，配制成10.00 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，再精密吸取1 mL儲備溶液至100 mL中，配制成0.10 mg·mL-1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。分別在試管中加入0.20，0.30，0.40，0.50，0.60，0.70，0.80和0.90 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，加蒸餾水至1 mL，并在試管中加入0.50 mL 5%苯酚溶液，再加入2.50 mL濃硫酸，搖勻并靜置10 min，然后將試管放入沸水浴中加熱20 min，冷卻至室溫，以蒸餾水為對照組，于490 nm處測吸光度。以X為濃度（mg·mL-1）、Y為吸光度（A），用Excel 2017繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到：Y=14.131X－0.0485，R2=0.997 1。

（3）桑黃多糖提取工藝流程。將菌絲體抽濾、烘干及研磨（過60目篩）→超聲提取→離心（8 000 r·min-1，20 min）→濃縮→醇沉（4倍體積無水乙醇醇沉過夜） →離心（8 000 r·min-1，20 min），即得到粗多糖，用苯酚-硫酸法測定多糖含量。

多糖得率（%）=多糖含量（mg）菌絲體質(zhì)量（g）×100

1.2.9" 數(shù)據(jù)分析" 試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2017進(jìn)行處理和分析。

2" 結(jié)果與分析

2.1" 培養(yǎng)基配方試驗結(jié)果

2.1.1" 培養(yǎng)基配方單因素實驗結(jié)果

通過考察不同碳源、氮源和無機(jī)鹽種類對桑樹桑黃菌絲體干重的影響，篩選出最佳培養(yǎng)基配方。由圖1A可知，培養(yǎng)基中不同碳源種類對桑樹桑黃菌絲體干重產(chǎn)生不同的影響，乳糖作為碳源時，菌絲體干重達(dá)到最大，為2.65 g·L-1，且顯著高于其他碳源，表明桑樹桑黃菌絲體對乳糖的利用率較高，其次為紅糖、麥芽糖、蔗糖、可溶性淀粉。

圖1B為不同氮源培養(yǎng)基對菌絲體干重的影響，添加胰蛋白胨為氮源時，菌絲體干重達(dá)到最大值，為0.37 g·L-1，牛肉粉、酵母浸粉和尿素之間無明顯差異，硫酸銨為氮源時桑黃菌絲體干重最小。

圖1C為不同無機(jī)鹽培養(yǎng)基對菌絲體干重的影響，菌絲體干重大小依次為氯化鈉+硫酸鎂＞硫酸亞鐵+硫酸鎂＞氯化鈣+硫酸鎂＞磷酸氫二鉀+硫酸鎂＞空白（含硫酸鎂），其中添加氯化鈉+硫酸鎂時，桑樹桑黃菌絲體干重最大，為1.19 g·L-1。由此可確定最佳碳源為乳糖，最佳氮源為胰蛋白胨，最佳無機(jī)鹽為氯化鈉+硫酸鎂。

2.1.2" 培養(yǎng)基配方正交試驗結(jié)果

由表3可知，影響桑樹桑黃菌絲體干重的因素主要順序為C（無機(jī)鹽）gt;A（碳源）gt;B（氮源）；最佳培養(yǎng)基配方為A3B2C2，即在乳糖32 g·L-1，胰蛋白胨10 g·L-1，氯化鈉2.00 g·L-1的條件下，菌絲體干重達(dá)到2.77 g·L-1。

2.1.3" 最佳培養(yǎng)基配方驗證試驗

根據(jù)上述試驗所得最佳培養(yǎng)基配方的配比進(jìn)行驗證試驗，設(shè)置3組平行，測得菌絲體干重分別為2.81，2.79和2.86 g·L-1，平均值為2.82 g·L-1，驗證結(jié)果與正交試驗結(jié)果相差較小。

2.2" 液體發(fā)酵條件試驗結(jié)果

2.2.1" 單因素試驗結(jié)果

由圖2A可知，隨著溫度的升高，桑黃菌絲體干重先增加后減少，當(dāng)溫度為28 ℃時菌絲干重達(dá)到最大值（3.09 g·L-1），但溫度過高也會影響菌絲干重，溫度高于28 ℃后菌絲干重明顯下降。

由圖2B可知，菌絲體干重隨著轉(zhuǎn)速的升高而增加，在轉(zhuǎn)速為180 r·min-1時達(dá)到最大，為2.98 g·L-1，隨后菌絲干重隨著轉(zhuǎn)速的增加而逐漸降低，故選擇180 r·min-1為最佳轉(zhuǎn)速。

由圖2C可知，接種量在7%～9%時，菌絲體干重隨著接種量的增加而增多，接種量為9%時菌絲體干重量達(dá)到最大，為2.83 g·L-1，而接種量大于9%后菌絲干重明顯下降。

由圖2D可知，菌絲體干重隨著pH的升高呈先增加后下降，在pH為6時菌絲干重達(dá)到最大，為2.83 g·L-1，隨后隨著pH的增加菌絲干重反而降低。

2.2.2" 最佳液體發(fā)酵條件驗證試驗

在最佳發(fā)酵條件下進(jìn)行驗證試驗，設(shè)置3組平行，測得桑樹桑黃菌絲體干重為3.12 g·L-1，驗證結(jié)果與2.2.1結(jié)果相差較小，表明該最佳發(fā)酵條件下提高了桑黃菌絲體干重且具有較好的重復(fù)性。

2.3" 多糖提取條件試驗結(jié)果

2.3.1" 多糖提取條件單因素試驗結(jié)果

由圖3A可知，超聲波功率為300 W時，多糖得率達(dá)到最大，為2.64%，隨后下降。

由圖3B可知，提取時間在45 min時多糖得率達(dá)到最大，為3.86%，隨后下降，可能是有些雜質(zhì)隨時間延長相應(yīng)地溶出來，從而影響多糖得率。

由圖3C可知，多糖得率隨溫度升高而增加，在50 ℃時多糖得率最大，為3.78%，隨后緩慢下降，這是由于隨著溫度的升高，多糖分子也加速溶解，而溫度過高會破壞多糖的生物活性，可能導(dǎo)致多糖無法提取。

由圖3D可知，料液比在1∶20～1∶40時，多糖得率隨水量的增加而逐漸上升，而料液比大于1∶40 后多糖得率明顯下降，可能是由于當(dāng)水量達(dá)到一定量的時候，多糖就會完全溶出，故料液比在1∶40多糖得率最大，為2.64%。

2.3.2" 多糖提取條件正交試驗結(jié)果

如表4所示，由R值來看，各因素對桑黃多糖提取條件的影響程度依次為料液比（B）gt;提取溫度（D）gt;超聲波功率（A）gt;提取時間（C）；由K值得出最佳提取條件為A1B3C1D2，即在超聲波功率200 W、料液比1∶60、提取時間40 min和提取溫度50 ℃條件下，桑樹桑黃多糖得率為5.51%。

2.3.3" 最佳多糖提取條件驗證試驗

通過上述正交試驗可進(jìn)一步進(jìn)行驗證試驗，設(shè)置3組平行，測得多糖得率分別為5.56%、5.48%和5.57%，平均值為5.54%，3組平行數(shù)據(jù)較穩(wěn)定并與2.3.2試驗結(jié)果相差較小。

3" 討論

由于我國對于桑黃的研究起步較晚，主要是針對桑黃液體培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)條件進(jìn)行研究［20-21］，而不同液體培養(yǎng)基配方及發(fā)酵培養(yǎng)條件對桑樹桑黃菌絲體的生長具有顯著影響。通常優(yōu)化培養(yǎng)基配方和發(fā)酵條件的方法主要是通過單因素試驗來篩選和確定各因素的適當(dāng)范圍，再通過正交試驗設(shè)計確定各水平的最佳組合。鐘石等［22］利用正交試驗發(fā)現(xiàn)野生桑黃最佳碳源為麥芽糖，最佳氮源為酵母粉，最佳無機(jī)鹽為硫酸鎂和磷酸二氫鉀；唐思煜等［23］研究表明最佳碳源為蔗糖，最佳氮源為氯化銨，最適培養(yǎng)基組成為蔗糖70 g·L-1、NH4Cl 10 g·L-1、NaCl 1 g·L-1、KH2PO4 0.50 g·L-1、MgSO4 0.50 g·L-1，在接種量5%，裝液量50 mL，培養(yǎng)7 d條件下獲得桑黃菌絲體干重為2.814 g。本研究通過對桑樹桑黃液體培養(yǎng)基配方及發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)最適碳源為乳糖，最適氮源為胰蛋白胨，最適無機(jī)鹽為氯化鈉和硫酸鎂；在pH為6，接種量9%，溫度28 ℃，轉(zhuǎn)速180 r·min-1條件下，獲得菌絲干重為3.12 g·L-1，這一結(jié)果與其他研究結(jié)果存在一定差異，造成差異的原因可能是由于桑黃菌種不同或產(chǎn)地不同，使其菌絲生長所需的碳、氮源、無機(jī)鹽及發(fā)酵培養(yǎng)條件均存在明顯差異。

不同的提取方法和提取工藝條件對桑樹桑黃多糖得率亦有影響。目前，桑黃多糖的提取方法主要有熱水浸提法［24］、酶提取法和超聲波輔助提取法［25-26］。其中超聲波輔助提取法是一種高效實用的提取方法，其提取率高、耗時短且耗能低；而熱水浸提法操作簡便，但溫度高、耗時較長導(dǎo)致提取率較低；酶提取法提取條件溫和、雜質(zhì)易除，因價格昂貴更適用于胞內(nèi)多糖的提取。李瑞雪等［24］利用熱水浸提法提取桑黃多糖，其提取工藝為提取時間2.5 h，提取溫度60 ℃，提取次數(shù)3次，料液比為1∶14，獲得桑黃多糖得率為4.97%；周慧吉等［27］研究表明，利用酶提取法提取桑黃菌絲體粗多糖得率較高，但多糖含量低；曾鵬等［28］利用超聲波提取桑黃多糖的最佳工藝條件為提取溫度為100 ℃、料液比為1∶26、提取時間為4.35 h，桑黃多糖得率為1.645%。本研究利用超聲波輔助提取法，綜合優(yōu)化料液比、提取溫度、超聲功率和提取時間4個因素，得到桑樹桑黃菌絲體中多糖得率為5.54%。因此，對桑樹桑黃進(jìn)行培養(yǎng)基配方、發(fā)酵條件及多糖提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，明確其菌絲生長特性及工藝條件，可為桑樹桑黃菌種的培養(yǎng)及其多糖的應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

4" 結(jié)論

本研究以菌絲體干重和多糖得率為主要指標(biāo)，通過單因素試驗和正交試驗相結(jié)合對桑樹桑黃液體培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)條件及多糖提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，最適桑樹桑黃生長的碳源、氮源及無機(jī)鹽分別為乳糖、胰蛋白胨和氯化鈉+硫酸鎂。正交試驗優(yōu)化的最佳培養(yǎng)基組合為乳糖32 g·L-1，胰蛋白胨10 g·L-1，NaCl 2.00 g·L-1+MgSO4·7H2O 1 g·L-1，獲得菌絲體干重為2.82 g·L-1；最佳液體發(fā)酵培養(yǎng)條件：在pH為6，接種量9%，溫度28 ℃，轉(zhuǎn)速180 r·min-1條件下，菌絲干重最高達(dá)3.12 g·L-1。采用超聲波輔助提取法對桑樹桑黃菌絲體多糖進(jìn)行提取，對其結(jié)果影響較大的是料液比，而提取時間影響較小，且最佳提取工藝條件為料液比1∶60 g，提取溫度50 ℃，超聲功率200 W，提取時間40 min，在此條件下桑樹桑黃多糖得率最高為5.54%。本研究結(jié)果可為桑樹桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)及多糖提取工藝優(yōu)化方面提供理論基礎(chǔ)，在培養(yǎng)優(yōu)化方面具有實際指導(dǎo)作用，且具有一定的實際應(yīng)用價值。

參考文獻(xiàn)：

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Optimization of Liquid Fermentation and Polysaccharide Extraction of Sanghuangporus sanghuang

LI Deyu1，2， SI Doudou1，2 ， PENG Hao1，2， CAO Weigang3， ZHENG Xiaoqin3， ZHANG Shengming4

（1.School of Biolgical Science and Engineering， Shaanxi University of Technology， Hanzhong 723001， China; 2. Shaanxi Hanzhong City Science and Technology Resources Coordination Center， Hanzhong 723001， China; 3. Qinba Ecological Protection Center， Hanzhong City， Shaanxi Province， Hanzhong 723001， China；4.Shaanxi Xixiang County Mushroom Research Institute， Shaanxi Hanzhong 723500， China）

Abstract：Sanghuangporus sanghuang is a medicinal porous bacterium with good medicinal efficacy， and its polysaccharide is one of the main active ingredients， with antitumor， antioxidant， immunomodulatory and other pharmacological effects. In order to improve the dry weight of S. sanghuang mycelia and the yield of S.sanghuang polysaccharide， single factor and orthogonal test were used to optimize the medium formula and liquid fermentation culture conditions affecting the dry weight of S.sanghuang mycelia. Ultrasonic assisted extraction method was used to optimize the extraction conditions of polysaccharide yield of S.sanghuang. The results showed that the optimal medium formula of S. sanghuang was potatoes （peeled） 200 g·L-1，lactose 32 g·L-1， tryptone 10 g·L-1， NaCl 2.00 g·L-1， MgSO4·7H2O 1 g·L-1， VB1 10.0 mg·L-1， and mycelium dry weight was 2.82 g·L-1. Under the conditions of temperature 28 ℃， inoculation amount 9%， rotational speed 180 r·min-1 and pH6， the maximum mycelium amount was 3.12 g·L-1. The optimal extraction process was as follows： ultrasonic power 200 W， solid-liquid ratio 1∶60， extraction time 40 min， temperature 50 ℃， the yield of polysaccharides was 5.54%. The results showed that the optimized culture medium formula， fermentation conditions and polysaccharide extraction technology of S. sanghuang were reasonable and feasible， which could provide reference for liquid fermentation of S. sanghuang mycelium to produce polysaccharide.

Keywords：Sanghuangporus sanghuang; liquid fermentation; polysaccharide; ultrasonic extraction