[摘要]"目的"分析研究無償獻(xiàn)血者人類免疫缺陷病毒抗原抗體酶聯(lián)免疫吸附法（human"immunodeficiency"virus"antigen"antibody"enzyme-linked"immunosorbent"assay，HIV-ELISA）單試劑反應(yīng)性結(jié)果的檢測(cè)性能，為提高實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力作參考。方法"采用伯樂酶聯(lián)免疫吸附法（BR-HIV）試劑對(duì)筆者血站2023年2月份的7069例標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，其中有120例BR-HIV單試劑反應(yīng)性，再對(duì)其該單試劑反應(yīng)性標(biāo)本采用另外3家不同廠家HIV-ELISA試劑、化學(xué)發(fā)光免疫分析（chemiluminescence"immunoassay，CLIA）、核酸檢測(cè)技術(shù)（nucleic"acid"detection"technology，NAT）、Western"blot法進(jìn)行檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)分析ELISA、CLIA、NAT、Western"blot法其檢測(cè)結(jié)果關(guān)系。結(jié)果"BR-HIV單試劑反應(yīng)性陽(yáng)性率出現(xiàn)了階段性的增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.058，Plt;0.05）。通過電話追蹤其120例標(biāo)本信息，將BR-HIV單試劑反應(yīng)性的病毒感染者與未感染者進(jìn)行比較，S/CO值感染者明顯高于未感染者；假陽(yáng)性率1.69%（120/7069）比2019年2月份假陽(yáng)性率0.22%（8/3619）明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2"=44.099，Plt;0.05）。CLIA、NAT、另外3家HIV-ELISA檢測(cè)試劑具有一致性（Kappa=1），具有等效性。Western"blot法檢測(cè)結(jié)果均為陰性。結(jié)論"曾經(jīng)感染過病毒的無償獻(xiàn)血者的標(biāo)本BR-HIV單試劑假陽(yáng)性率增高，可以用CLIA、NAT以及其他酶免試劑暫時(shí)替代檢測(cè)，減少血液的報(bào)廢，提高對(duì)捐獻(xiàn)血液的檢測(cè)能力。

[關(guān)鍵詞]"酶聯(lián)免疫吸附法；化學(xué)發(fā)光免疫分析；核酸擴(kuò)增試驗(yàn)；無償獻(xiàn)血者

[中圖分類號(hào)]"R512.91；R446""""""[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]"A""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.14.015

Analysis"of"the"influence"of"novel"coronavirus"infection"on"HIV"ELISA"results

XU"Lingli，"GE"Yujun，"XU"Jun

Department"of"Laboratory，"Jiaxing"Central"Blood"Station，"Jiaxing"314000，"Zhejiang，"China

[Abstract]"Objective"Analyze"and"study"the"detection"performance"of"single"reagent"reactivity"results"of"human"immunodeficiency"virus"antigen"antibody"enzyme-linked"immunosorbent"assay"（HIV-ELISA）"in"unpaid"blood"donors，"to"provide"reference"for"improving"the"laboratory’s"testing"capabilities."Methods"Detection"of"7069"specimens"from"our"station"in"February"2023"using"the"BR-HIV"reagent，"among"them，"there"were"120"cases"of"BR-HIV"single"reagent"reactivity，"then，"three"different"manufacturers"of"HIV-ELISA"reagents"were"used"for"the"single"reagent"reactivity"sample，"chemiluminescence"immunoassay"（CLIA），"nucleic"acid"detection"technology"（NAT）"and"Western"blot"for"detection，"statistical"analysis"of"the"relationship"between"ELISA，"CLIA，"NAT"and"Western"blot"detection"results."Results"Phased"BR-HIV"single"reagent"reactivity"increase"is"related"to"A"virus"A"infection，"the"difference"is"statistically"significant"（χ2=4.058，"Plt;0.05）."Tracking"the"information"of"120"specimens"by"phone，"data"analysis"of"BR-HIV"single"reagent"reactive"A"virus"A"infected"persons"and"uninfected"persons"S/CO"value，"infected"individuals"are"significantly"higher"than"uninfected"individuals."Infected"individuals"are"significantly"higher"than"uninfected"individuals，"the"difference"is"statistically"significant"（χ2=44.099，"Plt;0.05）."CLIA，"NAT，"and"three"other"HIV-ELISA"detection"reagents"have"consistency"（Kappa=1），"with"equivalence."The"results"of"immunoblotting"test"（Western"blot）"were"all"negative."Conclusion"The"1"positive"rate"of"BR-HIV"single"reagent"in"the"samples"of"unpaid"blood"donors"who"had"been"infected"with"A"virus"A"increased，"CLIA，"NAT，"and"other"enzyme"exempt"agents"can"be"used"instead"of"testing，"reduce"the"scrapping"of"blood，"improve"the"detection"ability"of"blood.

[Key"words]"Enzyme"linked"immunosorbent"assay;"Chemiluminescence"immunoassay;"Nucleic"acid"amplification"test;"Voluntary"blood"donors

人類免疫缺陷病毒（human"immunodeficiency"virus，HIV）屬于RNA病毒中反轉(zhuǎn)錄病毒的一種，病毒基因組是兩條相同的正鏈RNA。傳播途徑主要有3種，即血液傳播、性接觸傳播、母嬰傳播，其HIV感染者或者艾滋病患者都是傳染源[1]。HIV主要存在于感染者和患者的血液、精液、陰道分泌物、腦脊液、胸腹水、羊水和乳汁等體液中。因此，切實(shí)提高HIV的血液檢測(cè)能力，有利于保障醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床用血安全。目前，筆者血站是采用兩遍不同廠家的人類免疫缺陷病毒抗原抗體酶聯(lián)免疫吸附法（human"immunodeficiency"virus"antigen"antibody"enzyme-linked"immunosorbent"assay，HIV-ELISA）進(jìn)行初檢和復(fù)檢，以及核酸檢測(cè)技術(shù)（nucleic"acid"detection"technology，NAT）的檢測(cè)，由于近段時(shí)間出現(xiàn)ELISA法單試劑反應(yīng)性假陽(yáng)性率增高的現(xiàn)象，造成最終結(jié)果難以判斷，不但導(dǎo)致血液報(bào)廢嚴(yán)重，而且導(dǎo)致無償獻(xiàn)血者對(duì)血液結(jié)果的誤解很多，因此，探討化學(xué)發(fā)光免疫分析（chemiluminescence"immunoassay，CLIA）檢測(cè)HIV的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)有十分重要的意義，實(shí)際解決目前實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)困惑，現(xiàn)報(bào)道如下。

1""資料與方法

1.1""一般資料

收集2023年2月份的7069例標(biāo)本中有120例BR-HIV單試劑反應(yīng)性的獻(xiàn)血者標(biāo)本，采用NAT和CLIA以及另外3家不同HIV-ELISA試劑廠家對(duì)120例標(biāo)本分別進(jìn)行HIV的檢測(cè)。本研究經(jīng)浙江省嘉興市中心血站醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批號(hào)：2023001），信息資料均獲得獻(xiàn)血者的知情同意。

1.2""試劑與儀器

人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（美國(guó)Bio-Rad公司），EVO150全自動(dòng)加樣儀（瑞士Tecan公司），F(xiàn)AME24/20全自動(dòng)酶免處理儀（瑞士Hamilton公司），SUNRISE酶標(biāo)儀（瑞士Tecan公司）；萬泰人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（磁微粒化學(xué)發(fā)光法、試劑批號(hào)：220901）、萬泰Caris200n全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀；核酸檢測(cè)試劑盒及儀器（美國(guó)羅氏公司：批號(hào)G29865；西班牙蓋立復(fù)公司：批號(hào)：704700）。所有配套試劑均經(jīng)批檢合格并在規(guī)定有效期內(nèi)使用，儀器均經(jīng)過校準(zhǔn)并在正常狀態(tài)下使用，樣本的檢測(cè)均嚴(yán)格按照試劑說明書及本站制定的相關(guān)質(zhì)量體系文件執(zhí)行。

1.3""檢測(cè)方法

HIV-ELISA單試劑定性檢測(cè)采用人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（美國(guó)Bio-Rad公司）Cut"off值=0.240（灰區(qū)上限0.240，灰區(qū)下限0.216）；當(dāng)S/CO值gt;Cut"off值時(shí)或者S/CO值gt;0.216時(shí)，對(duì)血清學(xué)檢測(cè)初次試驗(yàn)為反應(yīng)性的檢測(cè)標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試，如果雙孔復(fù)試結(jié)果中有任何1孔為反應(yīng)性以及雙孔復(fù)試均為反應(yīng)性，則檢測(cè)結(jié)論為BR-HIV有反應(yīng)性。

NAT定性檢測(cè)采用省中心羅氏聯(lián)檢檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行熒光病毒NAT檢測(cè)，對(duì)羅氏NAT+的無償獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，來確定最終病毒類型。其中羅氏系統(tǒng)120例，0例有反應(yīng)性。

HIV抗原抗體的定量檢測(cè)采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)HIV的抗原抗體含量，操作嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行，當(dāng)HIV抗原檢測(cè)值gt;1Coi，為有反應(yīng)性；當(dāng)HIV抗體檢測(cè)值gt;1Coi，為有反應(yīng)性。Western"blot法為HIV抗體檢測(cè)的確證試驗(yàn)，采用新加坡MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司生產(chǎn)的試劑。

1.4""統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。采用描述性統(tǒng)計(jì)方法總結(jié)數(shù)據(jù)并進(jìn)行正態(tài)檢驗(yàn)，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，非正態(tài)連續(xù)變量采用[M（Q?，Q?）]表示。計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Fisher"χ2精確檢驗(yàn)比較組間差異，Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。一致性檢驗(yàn)，等效性采用"Kappa檢驗(yàn)，Kappa值為0～1，越接近1，說明幾種方法（試劑）的檢測(cè)結(jié)果的一致性越好；Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2""結(jié)果

2.1""BR-HIV單試劑反應(yīng)性與病毒感染情況的相關(guān)性

7069例標(biāo)本進(jìn)行BR-HIV單試劑檢測(cè)，電話追蹤其病毒是否感染過，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.058，Plt;0.05），BR-HIV單試劑反應(yīng)性與病毒感染情況有相關(guān)性，見表1。

2.2""BR-HIV單試劑有反應(yīng)性的病毒感染者與未感染者資料分析

BR-HIV單試劑有反應(yīng)性的病毒感染者的S/CO值明顯高于未感染者的數(shù)值，兩組分布基本資料情況，見表2。

2.3""BR-HIV單試劑反應(yīng)性與不同檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果分析

BR-HIV與CLIA、NAT、A試劑、B試劑、C試劑之間的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.030）。CLIA、NAT、A試劑、B試劑、C試劑之間的比較，Kappa值為1，檢測(cè)結(jié)果一致性良好。120例標(biāo)本W(wǎng)estern"blot法試驗(yàn)均為陰性，BR-HIV單試劑反應(yīng)性為假陽(yáng)性。見表3。

3""討論

2023年2月份陸續(xù)出現(xiàn)了BR-HIV單試劑反應(yīng)性的假陽(yáng)性率1.69%（120/7069）與2019年2月份假陽(yáng)性率0.22%（8/3619）比較明顯增加的現(xiàn)象，這給日常檢驗(yàn)工作帶來很多困擾：①如果將HIV假陽(yáng)性血液全部報(bào)廢，易造成血液資源浪費(fèi)；②120例BR-HIV單試劑有反應(yīng)的血液標(biāo)本確證均為陰性，思考如何降低階段性的假陽(yáng)性率。③給實(shí)驗(yàn)室的復(fù)檢工作增加了太多的工作壓力和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。為此，開展了多試劑檢測(cè)的方法，以確保血液安全有效的提供給臨床。

本次研究基于平時(shí)筆者血站進(jìn)行HIV檢測(cè)用酶聯(lián)免疫吸附法兩遍以及NAT檢測(cè)，2019版血站技術(shù)操作規(guī)程的第四部分血液檢測(cè)規(guī)定：血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)，包括ELISA、CLIA[4]。因此，當(dāng)出現(xiàn)階段性BR-HIV單試劑假陽(yáng)性反應(yīng)數(shù)量增多時(shí)，實(shí)驗(yàn)室馬上對(duì)其進(jìn)行CLIA檢測(cè)。其中120例BR-HIV單試劑有反應(yīng)性的標(biāo)本，通過CLIA的檢測(cè)均為陰性，與NAT檢測(cè)結(jié)果的總陽(yáng)性率相符合。與湯琰等[5]研究相一致，CLIA檢測(cè)HIV具有穩(wěn)定的敏感度，聯(lián)合篩查可以提高HIV篩查效率。研究顯示，CLIA技術(shù)具有敏感度、特異性強(qiáng)、安全穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)單快速、可自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于臨床感染性疾病的診斷，可為血液篩查提供更多的選擇方案[6-8]。未來國(guó)內(nèi)在血液篩查中引入化學(xué)發(fā)光試劑，發(fā)揮化學(xué)發(fā)光與NAT共同檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，提高檢測(cè)敏感度，減少漏檢，縮短檢測(cè)時(shí)間，對(duì)于保證血液質(zhì)量和臨床輸血安全具有重要意義。

根據(jù)標(biāo)本來源分析，查看國(guó)內(nèi)外的文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，Rawezh等[7]在研究中發(fā)現(xiàn)BR-HIV酶標(biāo)板上的包被物質(zhì)與曾經(jīng)感染過病毒的無償獻(xiàn)血者血液有發(fā)生反應(yīng)性的概率[7-11]。兩者之間引起反應(yīng)的主要物質(zhì)是刺突蛋白具有較大的表面積，由S1受體結(jié)合域（RBD）和S2非受體結(jié)合域（non-RBD）組成，促進(jìn)病毒融合。這種刺突蛋白或至少只有RBD結(jié)構(gòu)域已用于病毒檢測(cè)的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定。由于病毒與其他一些病毒（如登革熱和寨卡病毒）的刺突蛋白鏈在結(jié)構(gòu)上的相似性，該蛋白可以介導(dǎo)病毒與這些病毒之間的抗體交叉反應(yīng)，因此，它可能會(huì)干擾免疫測(cè)定并導(dǎo)致假陽(yáng)性診斷。Dadashi等[12]的研究報(bào)道，強(qiáng)調(diào)了在病毒大流行期間，實(shí)驗(yàn)室結(jié)果和有益治療策略對(duì)艾滋病毒患者的重要性。Suryana等[13]研究顯示，在病毒這類人群中，有關(guān)病毒與比一般人群的HIV共感染的假陽(yáng)性更高，檢測(cè)試劑有干擾因素。從本次研究數(shù)據(jù)顯示，BR-HIV單試劑有反應(yīng)性的病毒感染者的S/CO值明顯高于未感染者的數(shù)值，與伯樂試劑廠家交流得到相同的答案，并告知階段性特殊時(shí)期HIV假陽(yáng)性依然會(huì)出現(xiàn)。

如何更換合適的試劑進(jìn)行HIV的酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)，筆者血站采購(gòu)了3種ELISA法試劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室比對(duì)，從檢出陽(yáng)性率角度出發(fā)，3種試劑（A試劑、B試劑、C試劑）均能符合檢測(cè)要求。同時(shí)，也證實(shí)這3種試劑與病毒是否感染，結(jié)果無差異性。這3種試劑采用"Kappa檢驗(yàn)，Kappa值為"1，檢測(cè)結(jié)果一致性良好。由于第4代篩查試劑敏感性較高，越來越多的應(yīng)用到HIV臨床檢測(cè)中，但隨之而來的第4代試劑假陽(yáng)性問題也更容易出現(xiàn)，這就造成確證試驗(yàn)會(huì)面臨更多的陰性或不確定結(jié)果的情況[14-16]。確證試驗(yàn)的陽(yáng)性結(jié)果必須保證高特異性和高準(zhǔn)確性，而陰性和不確定結(jié)果建議進(jìn)行HIV-1核酸試驗(yàn)或2～4周后隨訪[17-18]。

綜上所述，由于曾經(jīng)感染過病毒的獻(xiàn)血者血液標(biāo)本用BR-ELISA單試劑檢測(cè)HIV，確實(shí)出現(xiàn)了階段性假陽(yáng)性增高，對(duì)后期結(jié)果的預(yù)判有干擾。通過幾種試劑的平行測(cè)試，CLIA聯(lián)合NAT技術(shù)對(duì)無償獻(xiàn)血者HIV-ELISA單試劑反應(yīng)性結(jié)果的檢測(cè)性能較符合實(shí)驗(yàn)結(jié)果。長(zhǎng)期以來，BR-HIV檢測(cè)試劑較穩(wěn)定，靈敏度得到國(guó)內(nèi)很多采供血機(jī)構(gòu)的認(rèn)同，高敏感度往往會(huì)導(dǎo)致試劑特異性降低，非特異性反應(yīng)升高。應(yīng)對(duì)該特殊時(shí)期的處理方案有以下3個(gè)建議：①保證原有實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案不變，增加CLIA聯(lián)合NAT技術(shù)對(duì)無償獻(xiàn)血者HIV-ELISA單試劑反應(yīng)性結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)。②更換試劑，待此特殊時(shí)期過后，再調(diào)整長(zhǎng)期固定的試劑廠家。③減少1遍ELISA單試劑反應(yīng)假陽(yáng)性高的試劑，用CLIA聯(lián)合ELISA法進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)?？梢愿鶕?jù)血站的檢測(cè)量以及檢測(cè)財(cái)政資金撥款情況進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略，這樣很多假陽(yáng)性的獻(xiàn)血者不僅能夠減少心理上的負(fù)擔(dān)，還能保證血源的安全穩(wěn)定，防止經(jīng)血液傳播疾病的傳播。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2023–06–29）

（修回日期：2024–02–18）