[摘要]"目的"研究胎盤(pán)11β-羥基類(lèi)固醇脫氫酶（11β-hydroxysteroid"dehydrogenase，11β-HSD）的表達(dá)差異與雙胎生長(zhǎng)不一致的關(guān)系。方法"選取2021年1月至2022年12月在嘉興市婦幼保健分娩的雙絨毛膜雙胎27對(duì)，根據(jù)雙胎出生體質(zhì)量差是否在20%及以上，分為雙胎生長(zhǎng)不一致（discordant"twins，DT）組（實(shí)驗(yàn)組）及雙胎生長(zhǎng)一致（concordant"twins，CT）組（對(duì)照組）。采用qRT-PCR法檢測(cè)兩組胎兒胎盤(pán)組織中11β-HSD1和11β-HSD2"mRNA的表達(dá)水平及差異。結(jié)果"兩組胎兒胎盤(pán)組織中11β-HSD1"mRNA的表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）；CT組A孩與B孩的11β-HSD2"mRNA表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），而DT組小孩胎盤(pán)11β-HSD2"mRNA的表達(dá)水平顯著低于DT組大孩的表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。結(jié)論"胎盤(pán)11β-HSD2的表達(dá)差異可能與雙絨毛膜雙胎生長(zhǎng)不一致的發(fā)生有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]"雙胎生長(zhǎng)不一致；胎盤(pán)；11β-羥基類(lèi)固醇脫氫酶；表達(dá)差異；雙絨毛膜雙胎

[中圖分類(lèi)號(hào)]"R714""""""[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]"A""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.14.011

Relationship"between"the"expression"difference"of"11β-HSD"in"placenta"with"discordant"twins

NI"Li1，"ZHU"Hui2

1.Department"of"Clinical"Pharmacy，"Affiliated"Hospital"of"Jiaxing"University，"Jiaxing"Maternity"and"Child"Health"Care"Hospital"in"Zhejiang"Province，"Jiaxing"314000，"Zhejiang，"China;"2.Department"of"Clinical"Obstetrics，"Affiliated"Hospital"of"Jiaxing"University，"Jiaxing"Maternity"And"Child"Health"Care"Hospital"in"Zhejiang"Province，"Jiaxing"314000，"Zhejiang，"China

[Abstract]"Objective"To"study"the"relationship"between"the"expression"difference"of"11β-hydroxysteroid"dehydrogenase"（11β-HSD）"in"placenta"with"discordant"twins."Methods"Twelve"pairs"ofnbsp;discordant"twins"（DT）"group"delivered"in"Jiaxing"Maternal"and"Child"Health"Hospital"from"January"2021"to"December"2022"were"selected"as"the"experimental"group，"and"15"pairs"of"concordant"twins"（CT）"group"were"selected"as"the"control"group."The"mRNA"expression"levels"of"11β-HSD1"and"11β-HSD2"in"fetal"placenta"of"the"two"groups"were"detected"by"qRT-PCR."Results"The"mRNA"expression"of"11β-HSD1"showed"no"significant"difference"between"two"groups"（Pgt;0.05）."The"mRNA"expression"of"11β-HSD2"did"not"statistically"significantly"differ"between"children"A"and"B"in"CT"group"（Pgt;0.05），"while"the"smaller"children"had"a"lower"mRNA"expression"of"11β-HSD2"in"DT"group"（Plt;0.05）."Conclusion"The"difference"of"placental"11β-HSD2"expression"may"be"related"to"the"occurrence"of"twin"growth"discordant.

[Key"words]"Twin"inconsistent"growth;"Placenta;"11β-Hydroxysteroid"dehydrogenase;"Expression"difference;"Dichorionic"twins

雙胎妊娠與單胎妊娠相比，具有更高的新生兒不良結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)，會(huì)顯著增加胎兒早產(chǎn)、生長(zhǎng)受限的發(fā)生率[1-4]。因生長(zhǎng)受限導(dǎo)致雙胎出生體質(zhì)量差異達(dá)到20%或更高時(shí)（即雙胎生長(zhǎng)不一致），會(huì)顯著影響新生兒圍產(chǎn)期結(jié)局[3，5-9]。

導(dǎo)致雙胎生長(zhǎng)不一致的高危因素有很多，近些年的研究都將重點(diǎn)放在了胎盤(pán)功能對(duì)胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的影響上[10-14]。11β-羥基類(lèi)固醇脫氫酶（11β-hydroxysteroid"dehydrogenase，11β-HSD）是一種在胎盤(pán)表達(dá)，能夠使活性糖皮質(zhì)激素及其非活性代謝產(chǎn)物相互轉(zhuǎn)化的酶系，已被確認(rèn)會(huì)影響人類(lèi)多種疾病的發(fā)病，但是目前尚無(wú)相關(guān)報(bào)道表明其對(duì)雙胎生長(zhǎng)不一致的作用[15]。本研究以雙絨毛膜雙胎為研究對(duì)象，通過(guò)qRT-PCR法測(cè)定胎盤(pán)中11β-HSD的表達(dá)水平，從而研究其與雙胎生長(zhǎng)不一致的關(guān)系。

1""對(duì)象與方法

1.1""研究對(duì)象

選取2021年1月至2022年12月在嘉興市婦幼保健分娩的雙絨毛膜雙胎27對(duì)，根據(jù)雙胎胎兒出生體質(zhì)量差是否在20%及以上，分為雙胎生長(zhǎng)不一致（discordant"twins，DT）組（實(shí)驗(yàn)組）及雙胎生長(zhǎng)一致（concordant"twins，CT）組（對(duì)照組）。收集兩組胎兒基本信息，DT組每對(duì)雙胎中體質(zhì)量較重胎兒為大孩、較輕胎兒為小孩，CT組因每對(duì)雙胎體質(zhì)量接近，故隨機(jī)分為A孩、B孩，本研究所有患者均簽署知情同意書(shū)，且經(jīng)筆者醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)討論審議通過(guò)[倫理審批號(hào)：2020（醫(yī)倫）-1]。納入標(biāo)準(zhǔn)：""""""①在嘉興市婦幼保健分娩；②孕婦病歷書(shū)寫(xiě)資料完整；③雙絨毛膜雙胎妊娠、胎兒無(wú)畸形，雙胎出生體質(zhì)量差20%及以上者；④剖腹產(chǎn)胎兒娩出后收集胎兒胎盤(pán)組織，進(jìn)行qRT-PCR法進(jìn)行檢測(cè)；⑤獲得患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者病歷資料不完整；②非筆者醫(yī)院出生；③胎兒先天畸形；④妊娠合并雙胎生長(zhǎng)不一致發(fā)生高危因素，如妊娠期糖尿病、妊娠期高血壓、妊娠期貧血等。

1.2""資料收集

通過(guò)院內(nèi)電子病歷系統(tǒng)，收集孕婦及新生兒相關(guān)資料：①孕婦基本信息：孕婦分娩時(shí)的年齡、胎兒娩出時(shí)的孕周、孕婦妊娠次數(shù)、分娩次數(shù)、是否通過(guò)輔助生殖技術(shù)妊娠、胎兒分娩時(shí)間、雙胎性別是否一致。②新生兒基本信息：孕期羊水深度是否有異常、臍動(dòng)脈SD值是否異常、胎兒有無(wú)臍帶繞頸、胎盤(pán)形狀是否異常、胎兒的出生體質(zhì)量等。

1.3""11β-HSD1和11β-HSD2"mRNA水平測(cè)定

剖腹產(chǎn)當(dāng)天胎兒娩出后，取胎盤(pán)組織（母胎面即有臍帶面）2cm×2cm×2cm，生理鹽水或者BPS沖洗后放入EP管中，–80℃冰箱冷凍保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)，取出組織按照廠家說(shuō)明使用Trizol試劑制備總RNA，取RNA（1μg）、4μl"5×"PrimeScript"RT"Master"Mix和"RNase-free"水（補(bǔ)足至最終體積20μl）組成混合物；37℃"15min，85℃"5s進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，PCR擴(kuò)增是在ABI"7500序列檢測(cè)系統(tǒng)上進(jìn)行的。設(shè)計(jì)引物時(shí)，采用"Primer"5.0"軟件，合成由上海生工公司進(jìn)行，內(nèi)參選擇GAPDH序列：上游：5’-CAAGGCTGTGGG"CAAGGT-3’，下游：5’-GGAAGGCCATGCCAGT"GA-3’；11β-HSD1序列：上游：5’-AAGTTGCAGTG"AGCCGAGATC-3’，下游：5’-TTCCGAGGCAGAGT"CTTGCT-3’；11β-HSD2序列：上游：5’-GGCC"AAGGTTTCCCAGTGA-3’，下游：5’-GAGGGTGT"TTGGGCTCATGA-3’。11β-HSD1、11β-HSD2標(biāo)準(zhǔn)化為內(nèi)部對(duì)照GAPDH的含量（2-??Ct）。每個(gè)樣本重復(fù)分析3次計(jì)算平均表達(dá)量。按照TaKaRa"PrimeScript?"RT"Master"Mix（Perfect"Real"Time）（Code"No."RR036Q）說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行PCR擴(kuò)增。測(cè)定均一式4份。

1.4""統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，計(jì)量資料如果符合正態(tài)分布，則以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，行t檢驗(yàn)；若不符合正態(tài)分布則以中位數(shù)（四分?jǐn)?shù)間距）[M（P25，P75）]表示，行非參數(shù)軼和檢驗(yàn)（Mann-Whitney"U"test）。計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（百分?jǐn)?shù)）[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2""結(jié)果

2.1""孕婦、胎兒基本情況比較

兩組孕婦一般臨床資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），見(jiàn)表1。兩組胎兒組間一般臨床資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），見(jiàn)表2。

2.2""胎兒胎盤(pán)11β-HSD1、11β-HSD2"mRNA的表達(dá)比較

DT組小孩胎盤(pán)11β-HSD2"mRNA的相對(duì)表達(dá)量（2-??Ct值）與DT組大孩比，其表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）；11β-HSD1"mRNA的相對(duì)表達(dá)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。而對(duì)CT組胎兒A孩與B孩胎盤(pán)11β-HSD1和11β-HSD2"mRNA的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。見(jiàn)表3。

3""討論

雙胎生長(zhǎng)不一致是雙胎妊娠比較常見(jiàn)的一種并發(fā)癥，與胎兒圍產(chǎn)期死亡率增加有關(guān)[16]。隨著輔助生殖技術(shù)的成熟，雙胎生長(zhǎng)不一致的發(fā)生率日益增長(zhǎng)，約為16%[17]。導(dǎo)致雙胎生長(zhǎng)不一致的高危因素有許多，包括妊娠期高血壓、糖尿病、輔助生殖技術(shù)的使用、孕產(chǎn)史次數(shù)多、孕期增重過(guò)多、雙胎胎兒性別不同等[18]。本文對(duì)孕婦及胎兒相關(guān)混雜因素行Fisher確切概率法檢驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)兩組孕婦及胎兒組間一般臨床資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

遺傳差異和胎盤(pán)功能障礙是雙絨毛膜雙胎生長(zhǎng)受限最常見(jiàn)的原因[19]。胎盤(pán)是聯(lián)系胎兒與母體之間的重要器官，它在胚胎發(fā)育過(guò)程中起著營(yíng)養(yǎng)供給和代謝調(diào)節(jié)的作用[20]。11β-HSD是一種在胎盤(pán)合體滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)的重要酶系，它參與糖皮質(zhì)激素（皮質(zhì)醇）的代謝調(diào)節(jié)，從而影響胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育。11β-HSD有兩個(gè)亞型：11β-HSD1、11β-HSD2，可氧化、還原糖皮質(zhì)激素[21]。有文獻(xiàn)研究了成年男性同卵雙胎臍周皮下脂肪組織11β-HSD1"mRNA的表達(dá)量差異，結(jié)果顯示，雙胎中體質(zhì)量較重者11β-HSD1"mRNA的表達(dá)水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）[22]。該文獻(xiàn)未對(duì)11β-HSD2的表達(dá)量進(jìn)行比較研究，是因其不在脂肪組織中表達(dá)[23]。該結(jié)果證明了11β-HSD的表達(dá)差異與雙胎體質(zhì)量差異存在關(guān)聯(lián)。

根據(jù)上述研究結(jié)果，本研究在兩組研究對(duì)象一般臨床資料無(wú)差異的前提下，采用qRT-PCR法檢測(cè)了11β-HSD1和11β-HSD2在兩組胎兒胎盤(pán)中的表達(dá)量。結(jié)果顯示11β-HSD1、11β-HSD2在DT組和CT組胎兒胎盤(pán)中均有表達(dá)。11β-HSD1的表達(dá)量在兩組胎兒胎盤(pán)中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。11β-HSD2在CT組A孩與B孩中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），但在DT組小孩胎盤(pán)中的表達(dá)量與DT組大孩相比，明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），這表明胎盤(pán)11β-HSD2的低表達(dá)可能與雙絨毛膜雙胎胎兒生長(zhǎng)不一致的發(fā)生相關(guān)。雙絨毛膜雙胎可以認(rèn)為是概念上的單胎，因雙胎均有獨(dú)立的胎盤(pán)跟羊膜囊，只是碰巧生長(zhǎng)在一個(gè)子宮里。因此，雙絨毛膜雙胎胎兒生長(zhǎng)受限模式可以遵循單胎胎兒生長(zhǎng)受限的模式。大量文獻(xiàn)研究已證實(shí)，單胎胎兒生長(zhǎng)受限與胎盤(pán)11β-HSD2蛋白的低表達(dá)有關(guān)[24]。

但是截至目前，對(duì)于胎盤(pán)11β-HSD的表達(dá)差異與雙胎生長(zhǎng)不一致的關(guān)系的研究還相對(duì)有限。本次研究樣本量較少，還需要進(jìn)一步積累資料來(lái)驗(yàn)證兩者之間的關(guān)系。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 任靜，"張海燕，"陳慧，"等."雙胎妊娠絨毛膜性與妊娠結(jié)局的關(guān)系[J]."新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，"2023，"46（3）："338–341.

[2] 謝育娣，"趙敏."單絨毛膜性與雙絨毛膜性雙胎妊娠結(jié)局比較分析[J]."中國(guó)婦幼保健，"2023，"38（05）："801–804.

[3] Practice"Bulletin"No."159"Summary："Management"of"preterm"Labor[J]."Obstet"Gynecol，"2016，"127（1）："190–191.

[4] WEINER"E，"BARBER"E，"FELDSTEIN"O，"et"al."The"placental"component"and"neonatal"outcome"in"singleton"vs."twin"pregnancies"complicated"by"gestational"diabetes"mellitus[J]."Placenta，"2018，"63（2）："39–44.

[5] 李姝，"余慕雪，"馮嘉麗，"等."雙胎絨毛膜性、出生胎齡、出生體質(zhì)量不一致程度與新生兒結(jié)局分析[J]."中山大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），"2023，"44（6）："1030–1037.

[6] 黃嘉琦，"魏瑗."雙胎胎兒生長(zhǎng)受限診斷與生長(zhǎng)曲線研究[J]."中國(guó)計(jì)劃生育和婦產(chǎn)科，"2023，"15（12）："10–13.

[7] HIERSCH"L，"BARRETT"J，"AVIRAM"A，"et"al."Patterns"of"discordant"growth"and"adverse"neonatal"outcomes"in"twins[J]."Am"J"Obstet"Gynecol，"2021，"225（2）："181–187.

[8] D’ANTONIO"F，"ODIBO"A"O，"PREFUMO"F，"etnbsp;al."Weight"discordance"and"perinatalnbsp;mortality"in"twin"pregnancy："systematic"review"and"Meta-analysis[J]."Ultrasound"Obstet"Gynecol，"2018，"52（1）："11–23.

[9] JAHANFAR"S，"LIM"K，"OVIDEO-JOEKES"E."Birth"weight"discordance"and"adverse"perinatal"outcomes[J]."J"Perinat"Med，"2017，"45（5）："603–611.

[10] 陳曉燕，"朱元方."影響胎兒生長(zhǎng)發(fā)育不可忽視的多因素管控[J]."中國(guó)計(jì)劃生育和婦產(chǎn)科，"2023，"15（12）："3–5.

[11] ASHWAL"E，"HIERSCH"L，"BERGER"H，"et"al."Pathologic"basis"for"the"definition"of"discordant"growth"in"dichorionic"twins[J]."Fetal"Diagn"Ther，"2021，"48（4）："279–287.

[12] SCHREY-PETERSEN"S，"BAUMER"S，"LOSSNER"U，"et"al."Adipocyte"fatty"acid-binding"protein"4"is"altered"in"growth"discordant"dichorionic，"but"not"in"monochorionic"twins[J]."J"Endocr"Soc，"2020，"4（4）："1–12.

[13] MORGAN"E"A，"SIDEBOTTOM"A，"VACQUIER"M，"et"al."The"effect"of"placental"location"in"cases"of"placenta"accreta"spectrum[J]."Am"J"Obstet"Gynecol，"2019，"221（4）："351–357.

[14] KALAFAT"E，"THILAGANATHAN"B，"PAPAGEORGHIOU"A，"et"al."Significance"of"placental"cord"insertion"site"in"twin"pregnancy[J]."Ultrasound"Obstet"Gynecol，"2018，"52（3）："378–384.

[15] 吳春麗，"李娟，"王晶，"等."關(guān)于11β-類(lèi)固醇脫氫酶的研究進(jìn)展[J]."海峽藥學(xué)，"2020，"32（4）："177–180.

[16] PARK"Y"H，"KIM"Y"N，"IM"D"H，"et"al."Neonatal"outcomes"between"discordant"monochorionic"and"dichorionic"twins[J]."J"Matern"Fetal"Neonatal"Med，"2021，"34（13）："2080–2088.

[17] 李秋影，"張慧，"陳倩，"等."輔助生殖技術(shù)對(duì)雙胎出生體質(zhì)量不一致的影響[J]."中國(guó)當(dāng)代兒科雜志，"2023，"25（12）："1239–1245.

[18] 晏紅."出生體質(zhì)量不一致雙胎臨床資料分析[D]."貴陽(yáng)："貴州醫(yī)科大學(xué)，"2022.

[19] LEWI"L，"DEVLIEGER"R，"DE"CATTE"L，"et"al.nbsp;Growth"discordance[J]."Best"Pract"Res"Clin"Obstet"Gynaecol，"2014，"28（2）："295–303.

[20] 范秀軍，"黃晨，"陳指龍，"等."妊娠期代謝性疾病與胎盤(pán)發(fā)育[J]."中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，"2018，"34（9）："959–963.

[21] 廖建華，"李婉婷，"梁真嬌."妊娠期糖尿病患者胎盤(pán)中不同亞型11β-羥類(lèi)固醇脫氫酶基因的表達(dá)水平及其臨床意義[J]."廣西醫(yī)學(xué)，"2019，"41（16）："2026–2030.

[22] VIHMA"V，"NAUKKARINEN"J，"TURPEINEN"U，"et"al."Metabolism"of"sex"steroids"is"influenced"by"acquired"adiposity-A"study"of"young"adult"male"monozygotic"twin"pairs[J]."J"Steroid"Biochem"Mol"Biol，"2017，"172（2）："98–105.

[23] KUPCZYK"D，"BILSKI"R，"KOZAKIEWICZ"M，"et"al."11Beta-HSD"as"a"new"target"in"pharmacotherapy"of"metabolic"diseases[J]."Int"J"Mol"Sci，"2022，"23（16）："8984–8998.

[24] 時(shí)雪婷."孕期母體鎘暴露通過(guò)活性糖皮質(zhì)激素過(guò)暴露損害胎盤(pán)血管生成的機(jī)制探討[D]."合肥："安徽醫(yī)科大學(xué)，"2021.

（收稿日期：2023–12–22）

（修回日期：2024–03–05）