楊淑芬
(邵陽市畜牧水產事務中心,湖南 邵陽 422000)
隨著人們生活水平的提高,其對食品的關注點從“吃得飽”變成了“吃得安全”。水產品因富含蛋白質、脂肪酸、維生素和礦物質等營養(yǎng)物質,逐漸成為人們喜愛的優(yōu)質食品。近年來,隨著我國水產養(yǎng)殖業(yè)的高質量發(fā)展,水產養(yǎng)殖品種日益豐富、養(yǎng)殖結構逐漸合理,為養(yǎng)殖業(yè)和農村經濟發(fā)展提供了重要支撐。在養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的同時,動物性食品安全問題也日益突出,水體中污染物累積以及獸藥的不合理使用,導致養(yǎng)殖環(huán)境和水產品質量安全問題成為社會公眾關注的熱點和焦點之一。
孔雀石綠是一種人工合成的三苯甲烷類抗菌藥物,可以有效殺滅水中的真菌、細菌和寄生蟲,對寄生蟲病、水霉病和小瓜蟲病等具有良好的治療效果。因其成本低廉、抗菌效果好、能提高水產品的存活率,在水產養(yǎng)殖業(yè)中被廣泛使用[1]。
硝基呋喃類藥物是一種廣譜抗生素,可以有效抵御革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌以及原蟲的侵害[2],具有較高的抗菌活性、良好的藥物穩(wěn)定性、可靠的治療效果以及較低的藥物消耗量,在養(yǎng)殖業(yè)中被用來防控各種動物疾病[3]。
氯霉素是一種人工合成的抗生素藥物,對殺滅革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌具有較好的效果,還能抑制細菌生長,具有成本低、抗菌效果好等優(yōu)點,可以有效預防和治療水產養(yǎng)殖中的疾病。此外,氯霉素還具有抗病毒和抗寄生蟲的功效,可以全面提高水產養(yǎng)殖效益[4]。
地西泮,是一種苯二氮卓類藥物,又叫安定,具有鎮(zhèn)定、催眠、抗驚厥、抗癲癇等作用,運輸中使用地西泮可以降低水產品新陳代謝,提高水產品鮮活度[5]。
氟喹諾酮是一類人工合成的廣譜抗菌藥物,能夠有效抑制革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌及支原體、衣原體和螺旋體,具有抗菌活性強、代謝活性高、價格低廉等特點,在水產養(yǎng)殖中用來預防和治療各種動物疾病[6]。
在水產養(yǎng)殖過程中,養(yǎng)殖戶為追求經濟效益和治療效果,濫用和不按休眠期使用藥物現象存在,導致水產品中出現獸藥殘留超標的情況。人們長期攝入帶有某些特定獸藥殘留的食品,會嚴重危害身體健康,例如不同程度的毒副作用、產生耐藥性、腸道菌群失調、免疫系統紊亂等[7]。
不規(guī)范超標使用獸藥會導致動物體內藥物殘留,動物排泄物中存在相應的藥物殘留,會影響附近的水源、土壤和空氣,導致生態(tài)環(huán)境失調。水體中的藥物殘留會產生抗性菌株,使水體中微生物數量增加,藥物殘留也在食物鏈中聚集,最終影響人體健康。
養(yǎng)殖戶不規(guī)范使用獸藥會制約水產養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,長期使用抗生素藥物也使得水產動物免疫力降低,產生耐藥性。獸藥殘留會降低水產品品質,導致市場銷售水產品的數量減少、效益降低,同時影響出口量,阻礙水產養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。
目前從事水產養(yǎng)殖業(yè)的主體是農民,大多缺乏專業(yè)知識,使用獸藥僅憑個人經驗,沒有專業(yè)的獸醫(yī)進行診斷,對獸藥殘留的危害認識不足,法律意識淡薄[8]。我國水產品中藥物殘留超標事件常有發(fā)生,一些養(yǎng)殖戶為了追求更高的經濟效益,濫用和超劑量使用獸藥,也有無良企業(yè)在飼料中添加禁用藥品,導致水產動物體內藥物殘留超標。
水質對水產養(yǎng)殖至關重要,有些養(yǎng)殖場靠近工業(yè)園區(qū),工業(yè)生產中“三廢”的不合理排放導致許多有害物質進入養(yǎng)殖水源中,造成水體中重金屬、藥物殘留超標,養(yǎng)殖水質污染間接導致水產品藥物殘留。
膠體金免疫層析法(GIGA)是一種抗體和抗原在檢測線(T線)和質控線(C線)產生特異性反應,從而在膠體金反應部位沉淀顯色的快速檢測方法。李倩等[9]采用膠體金免疫層析法對帶魚中氯霉素進行快速檢測,結果表明,通過優(yōu)化前處理方法可以檢出與液相色譜-質譜法結果一致的陽性樣品,檢出限達0.1 μg/kg。丘韶麟等[10]對農貿市場的水產品采用膠體金免疫層析法進行快速檢測,其中孔雀石綠陽性檢出率高于1.5%,氯霉素、硝基呋喃類代謝物陽性檢出率均高于1.0%。宋安華等[11]對農貿市場在售水產品建立膠體金免疫法,對問題較突出的水產品進行獸藥殘留快速檢測,其中孔雀石綠總體不合格檢出率為3.69%,氯霉素總體不合格檢出率為1.67%,硝基呋喃類代謝物不合格檢出率為0.94%。該方法適用于大批量樣品快速篩查和市場抽查檢測,操作簡單易學、耗時短、成本較低且靈敏度高,目前廣泛應用于動物獸藥殘留的快速篩查[12-13]。
酶聯免疫吸附法(ELISA)是在免疫學反應的基礎上,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合的一種敏感性很高的實驗技術。在檢測過程中根據酶標孔中顏色的變化及OD值對樣品進行定性或定量檢測[14]。該方法可用于大批量初篩,具備檢測效率高、成本低、靈敏度較高和特異性好等優(yōu)點[15]。何萬義等[16]采用酶聯免疫吸附法測定水產品中孔雀石綠藥物殘留,結果顯示,在0~4.05 μg/L的6個標準濃度范圍內,線性相關系數達0.998以上,樣品加標回收率為88.6%~106.6%,樣品和樣品加標的相對標準偏差(RSD)小于10%。區(qū)兌鵬等[17]對水產品中硝基呋喃類代謝物、氯霉素及氟苯尼考6種藥物殘留進行快速檢測,結果表明,6種藥物線性系數均大于0.995,樣品加標回收率為60%~144%,相對標準偏差(RSD)均在0~7.5%之間。林品言等[18]應用酶聯免疫吸附法對水產品中磺胺類藥物殘留進行檢測,結果顯示,在0.5~40.5 μg/L范圍內,相關系數達0.998以上,三種添加濃度(0.5 μg/kg、1.0 μg/kg、1.5μg/kg)平均回收率為87.5%~104.2%,相對標準偏差(RSD)小于4.32%。影響酶聯免疫法檢測的因素較多,實驗中容易出現假陽性結果。因此,目前酶聯免疫吸附法只能進行樣品初篩,陽性樣品必須采用高效液相色譜法或液相色譜-串聯質譜法進行復核,才能得到更精準的檢測結果。
高效液相色譜法(HPLC)是檢測水產品中藥物殘留最常見的一種方法。隨著技術的進步,高效液相色譜儀已經成為各實驗室的必備儀器,特別是在市縣級檢測機構,結合紫外檢測器,能夠準確地檢測處水產品中的獸藥殘留。葛寶坤等[19]采用高效液相色譜-紫外法(HPLC-UV)檢測魚和蝦中呋喃它定、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮藥物殘留量,在5~100 μg/kg范圍內線性關系良好,檢出限分別為5 μg/kg、2 μg/kg、3 μg/kg和2 μg/kg。王媛等[20]研究發(fā)現,將水產品進行衍生前處理后,經高效液相-紫外檢測器測定,在5.0~500 μg/L質量濃度范圍內存在良好的線性關系,定量限均能達到1.0 μg/kg。王明輝等[21]采用高效液相色譜法同時測定貝類中的多西環(huán)素和金霉素,研究表明在200~5 000 ng/mL范圍內,線性關系良好,相關系數均大于0.99。液相色譜法發(fā)展雖比較成熟,但是該方法對樣品前處理要求較高,靈敏度和分離度較低,還需要配合液相色譜-串聯質譜法進行驗證。
隨著技術的進步,高效液相色譜-質譜法(HPLC-MS/MS)已被廣泛應用于測定水產品中的獸藥殘留,并被認為是測定水產品中藥物殘留含量的有效手段。對比高效液相色譜,質譜的檢測器較紫外檢測器在準確定性、定量、檢測速度、檢測限等方面更具優(yōu)勢。吳剛[22]通過液相色譜-串聯質譜法測定水產品中AOZ、AHD和SEM藥物殘留量,結果表明,測定的3種硝基呋喃類代謝物的檢出限均為0.2 μg/kg,在10~200 ng/mL范圍內線性關系較好。朱欣欣等[23]采用高效液相色譜-串聯質譜法對水產品中孔雀石綠和地西泮殘留量進行檢測,結果表明孔雀石綠、地西泮在0.5~20.0 ng/mL范圍內,線性關系好,回收率為82.1%~96.1%,檢測低限為0.5 ng/mL,精密度為2.9%~7.8%。楊麗等[24]等采用超高效液相色譜-串聯質譜法測定魚肉中呋喃它酮(AMOZ)、呋喃西林(SEM)、呋喃妥因(AHD)和呋喃唑酮(AOZ)4種硝基呋喃類代謝物殘留量,研究發(fā)現,硝基呋喃代謝物在0.5~50.0 ng/mL范圍內線性關系良好,相關系數大于0.996,檢出限均為0.5 μg/kg,3種不同濃度添加水平(0.5 μg/kg、1.5 μg/kg、5.0 μg/kg)的回收率在70%~120%,符合國家標準測定要求。劉少穎等[25]利用超高效液相-串聯質譜法測定淡水魚中喹諾酮類和氯霉素殘留含量,結果表明,在0.1~200 ng/mL濃度內線性系數均大于0.99,定量限為0.02~0.49 μg/kg,回收率為67.7%~116.1%,相對標準偏差為2.64%~19.93%,檢出限為0.01~0.15 μg/kg。從多個學者的研究結果中可以明顯看出,HPLC-MS/MS較HPLC得到了技術上的突破,能滿足更低的檢測限,線性范圍寬,更適用于水產品中各種獸藥殘留的檢測分析。
水產品的質量安全關鍵在養(yǎng)殖環(huán)節(jié),如果在養(yǎng)殖過程中不能嚴格按規(guī)定使用獸藥,不重視獸藥殘留潛在的危害性,水產品的質量安全就得不到有效保障。獸藥殘留不僅會影響水產品質量,而且對人類的健康和生態(tài)環(huán)境也會造成極大威脅。因此,要加強水產品獸藥殘留檢測,減少獸藥殘留超標水產品流入市場,以保證消費者買得放心,為水產養(yǎng)殖業(yè)的長期健康發(fā)展保駕護航。