龔盼盼，白 娟，馮學花，宗茹敏，裴文清

(安徽新華學院 藥學院，安徽 合肥 230000)

炎癥是機體對于刺激，如細菌、病毒、高溫、強酸強堿、機械損傷和異物等的一種防御反應，表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和功能障礙。糖皮質激素和非甾體抗炎藥是最常見的抗炎藥物，但二者均有較強的副作用。糖皮質激素能降低機體自身抵抗力，導致水腫、腎上腺萎縮,[1]而使用非甾體抗炎藥的患者中約有1/3會出現(xiàn)胃腸道、肝毒性、腎毒性等不良反應。[2]尋找安全、有效的天然抗炎藥物是非常有必要的。

石椒草是蕓香科植物石椒草BoenninghauseniasessilicarpaLevl.的全草，主要分布于我國四川、云南等地，是彝族等少數(shù)民族常用藥。從石椒草屬植物中分離得到的天然化合物主要以苯環(huán)上有取代基的簡單香豆素類化合物居多，除此之外，石椒草中還含有生物堿、黃酮苷和揮發(fā)油等成份。[3-4]

《云南中草藥》記載石椒草：“祛風燥濕，理氣鎮(zhèn)痛，消炎。主治風寒感冒，肺炎，支氣管炎，扁桃體炎，腮腺炎，痢疾，血栓性脈管炎?！盵5]在云南部分地區(qū)，農民將石椒草拌入飼料治療奶牛的乳腺炎。[6]雖然石椒草常用于治療多種常見炎癥，但現(xiàn)階段尚未見石椒草抗炎效果及其有效部位篩選相關的研究報告。以超聲輔助法提取石椒草中5種不同極性部位的有效成分，通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗,[7]確認具有抗炎活性的有效部位，并對有效部位進行初步表征，為石椒草進一步開發(fā)和應用提供研究依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料

石椒草藥材購于亳州藥材市場，經(jīng)安徽新華學院衛(wèi)強教授鑒定為石椒草全草。阿司匹林腸溶片(批號：211108)購自石家莊康力藥業(yè)有限公司。二甲苯、石油醚等試劑購自中國醫(yī)藥集團有限公司。實驗用水為自制純化水。

1.2 儀器

TSQ Quantum Ultra質譜儀賽默飛；FA2004N電子天平上海舜宇恒平科學儀器有限公司；KQ-100DE超聲儀昆山舒美超聲儀器有限公司；HH-1數(shù)顯恒溫水浴鍋常州榮華儀器制造有限公司；RE-3000旋轉蒸發(fā)儀上海亞榮生化儀器廠；打孔器。

2 實驗方法

2.1 不同極性部位的提取

石椒草全草洗凈，干燥，粉碎。取石椒草粉末5份，每份1 kg，分別加入石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、水1 L，超聲輔助提取1 h。提取液過濾，濃縮成浸膏。

2.2 二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗模型

2.2.1 分組及給藥

取昆明種小鼠80只，隨機分為石油醚提取組、四氯化碳提取組、三氯甲烷提取組、乙酸乙酯提取組、乙醇提取組、水提取組、模型對照組(生理鹽水)、陽性對照組(阿司匹林)。每組10只小鼠，體重18-22 g，雌雄各半。小鼠稱重，按小鼠重量給藥。灌胃給藥，1次/天，連續(xù)給藥3天。浸膏用含0.5% CMC-Na生理鹽水超聲溶解，小鼠按每10 g體重每天給藥0.2 g生藥。模型對照組，小鼠按每10 g體重每天給藥0.2 mL生理鹽水。陽性對照組用阿司匹林片加生理鹽水超聲溶解，濾過，小鼠按每10 g體重每天給藥2 mg阿司匹林。第3天給藥1 h后，小鼠右耳廓涂抹二甲苯20 μL(用移液槍往耳朵兩面上各滴10 μL，再用槍頭涂抹均勻)，涂布30 min后，每組取10只小鼠處死，用8 mm打孔器分別打下左右耳片，精密稱定耳片重量，以右耳片質量減去左耳片質量計算腫脹度，以下列公式計算腫脹抑制率：

腫脹抑制率(%)=(模型組腫脹度-實驗組腫脹度)/模型組腫脹度×100

2.2.2 數(shù)據(jù)處理

2.3 有效部位的表征

采用質譜對確認的活性部位進行分析，ESI正離子模式掃描，掃描范圍M/Z 50-1000。

3 結果與分析

3.1 不同極性部位提取物的腫脹度和腫脹抑制率

以腫脹抑制率為指標考察不同組對小鼠耳廓腫脹的抑制效果。如表1所示，陽性對照組阿司匹林對小鼠耳廓腫脹有明顯抑制效果，腫脹抑制率為57.68 %。5個實驗組均對小鼠耳廓腫脹顯示出了抑制效果，其中，乙醇提取組、水提取組相對模型對照組的腫脹度顯示出了統(tǒng)計學差異(P<0.05)。乙醇提取組、水提取組的腫脹抑制率分別為71.62 %、53.41 %。將乙醇提取組、水提取組作為石椒草抗炎有效部位，進一步進行研究。

表1 不同極性部位提取物的腫脹度和腫脹抑制率

3.2 質譜表征

采用質譜對確認的活性部位即乙醇提取組、水提取組進行分析，結果見圖1和圖2。質譜圖表明乙醇提取物(圖1)抗炎有效成分的特征信號峰為m/z 103.99、318.14、259.97、274.11、593.17，水提提取物(圖2)有效成分的特征信號峰為m/z 103.99、274.11、318.14、453.16、701.38。從質譜圖中可以識別出，乙醇提取組和水提取組共同含有m/z 103.99、318.14、274.11、453.16的信號峰。除特征信號峰，乙醇提取組、水提取組在m/z 150-700之間含有多個其它信號峰。結合已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的36多種香豆素、12種生物堿、10多種揮發(fā)油和其它化合物，對準分子離子信號峰進行歸屬(見表2)。m/z 103.99可能是己醇的準分子離子峰,[8-9]m/z 259.97可能是Micropubscin的準分子離子峰,[10-11]m/z 318.14可能是hallacridone的準分子離子峰,[12]m/z 593.17可能是3-(1,1-dimethylallyl)-xanthyletin的準分子離子峰,[13]m/z 701.38可能是松風草內酯的準分子離子峰。[14]基峰即信號最強的準分子離子峰m/z 274.11，可能是含有奇數(shù)氮原子的生物堿，未在已發(fā)現(xiàn)的12種生物堿確認出歸屬。

圖1 乙醇提取部位質譜圖

圖2 水提取部位質譜圖

表2 準分子離子信號峰歸屬

4 結論

石椒草可用于治療扁桃體炎、支氣管炎、肺炎等炎癥，現(xiàn)代也開發(fā)出了石椒草咳喘顆粒、石椒草咳喘膠囊、石椒草片等藥物,[15-17]但未見石椒草抗炎活性成分相關研究的報道。采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗，確認石椒草抗炎活性有效部位為乙醇提取部位和水提取部位。民間在使用石椒草時，常采用水煎、酒服的方式，確可達到較好地抗炎效果。

對有效部位進行質譜分析，乙醇提取部位抗炎有效成分的特征信號峰為m/z 103.99、259.97、274.11、318.14、593.17，水提取物有效成分的特征信號峰為m/z 103.99、274.11、318.14、453.16、701.38。結合文獻，對其中6個信號峰進行了可能的歸屬，識別出3個香豆素成份、1個生物堿成份和1個其它化合物。根據(jù)歸屬結果，乙醇提取部位和水提取部位的抗炎作用可能來源于香豆素和生物堿的協(xié)同作用。目前，尚未見石椒草單個化學成分的抗炎效果報道，未來可對提取物進行分離純化，獲取單組分組并對其抗炎效果進一步研究。