張志聰 張曉笛 岳楓 李晉生 劉瑩 靳冉

摘要?目的：觀察安宮降壓丸對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）受損靶器官的保護(hù)作用。方法：選取18只WKY大鼠為對(duì)照組，78只SHR大鼠隨機(jī)分為SHR模型組、安宮降壓丸高劑量組（1 600 mg/kg）、安宮降壓丸中劑量組（800 mg/kg）、安宮降壓丸低劑量組（400 mg/kg）、卡托普利組（20 mg/kg），連續(xù)給藥6周。給藥前和給藥6周后分別測(cè)定大鼠的血壓。給藥6周后取胸主動(dòng)脈、左心室、大腦、腎臟組織制作病理切片，進(jìn)行蘇木素-伊紅（HE）染色，光學(xué)顯微鏡觀察各臟器組織病理組織學(xué)形態(tài)變化。結(jié)果：與SHR模型組相比，安宮降壓丸各劑量組給藥6周后收縮壓均明顯降低（P＜0.01）；安宮降壓丸能夠明顯改善SHR大鼠胸主動(dòng)脈、左心室、腦、腎的組織病理損傷。結(jié)論：安宮降壓丸在降低SHR大鼠血壓的同時(shí)，對(duì)大鼠高血壓累及靶器官胸主動(dòng)脈、心臟、腦、腎臟具有一定的保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞?自發(fā)性高血壓；安宮降壓丸；靶器官；保護(hù)作用；大鼠；實(shí)驗(yàn)研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.07.011

高血壓是心腦血管系統(tǒng)常見疾病之一。長期持續(xù)的血壓升高會(huì)導(dǎo)致心、腦、腎以及主動(dòng)脈等靶器官的病理損傷。研究表明，中藥的降壓機(jī)制多樣，能兼顧高血壓的多個(gè)病理環(huán)節(jié)，包括改善微循環(huán)、保護(hù)血管內(nèi)皮、調(diào)節(jié)血管活性物質(zhì)、逆轉(zhuǎn)血管重構(gòu)等。安宮降壓丸作為傳統(tǒng)中成藥，具有清熱鎮(zhèn)靜、平肝降壓的功效［1-2］。對(duì)于初發(fā)難治性高血壓病人，在應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)抗壓藥的基礎(chǔ)上，合并使用安宮降壓丸能夠明顯增強(qiáng)高血壓的治療效果［3］。前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，安宮降壓丸對(duì)于自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）出現(xiàn)的眩暈、易怒等高血壓臨床癥狀有所緩解，可通過調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）、改善血管內(nèi)皮功能等發(fā)揮其降壓作用。本研究團(tuán)隊(duì)在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討安宮降壓丸對(duì)于高血壓受損靶器官的保護(hù)作用，為明確安宮降壓丸的作用優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

無特定病原體（SPF）級(jí)14周齡WKY雄性大鼠18只和雄性SHR大鼠78只，體質(zhì)量260～300 g，許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于SPF級(jí)動(dòng)物室內(nèi)，日光燈照明，12 h明暗周期，自由飲水、飲食，溫度20～26 ℃，送風(fēng)每小時(shí)6～10次，濕度40%～70%。

1.2?分組與給藥??實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)6 d后，將18只WKY大鼠作為對(duì)照組，將78只SHR大鼠分為5組：SHR模型組18只，安宮降壓丸高劑量組12只，安宮降壓丸中劑量組18只，安宮降壓丸低劑

量組12只，卡托普利組18只。安宮降壓丸高劑量組（1 600 mg/kg）、中劑量組（800 mg/kg）、低劑量組（400 mg/kg）、卡托普利組（20 mg/kg），每日給藥1次，連續(xù)給藥6周。WKY對(duì)照組和SHR模型組灌胃同體積的純凈水，每周測(cè)量大鼠體質(zhì)量，調(diào)整給藥體積。

1.3?藥物試劑及儀器

安宮降壓丸（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：18035208）；卡托普利（常州制藥廠有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：18110912）；組織固定液（北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20180806）；95%乙醇（北京化工廠生產(chǎn)，批號(hào)：20190118）；100%乙醇（北京化工廠生產(chǎn)，批號(hào)：20181008）；二甲苯（北京化工廠生產(chǎn)，批號(hào)：20180605）；蘇木素（九州柏林，批號(hào)：20181130）；伊紅（九州柏林，批號(hào)：20180115）；切片石蠟58～60 ℃（Leica，批號(hào)：20180530）；BX61光學(xué)顯微鏡（日本Olympus）；TP1020全自動(dòng)組織脫水處理機(jī)（德國Leica公司）；ST5010全自動(dòng)組織切片染色機(jī)（德國Leica公司）；BP2010大鼠無創(chuàng)血壓儀（北京軟隆生物技術(shù)有限公司）。

1.4?血壓測(cè)定

采用大鼠無創(chuàng)血壓儀，在安靜、干凈的實(shí)驗(yàn)環(huán)境，分別于給藥前和給藥6周后監(jiān)測(cè)大鼠的尾動(dòng)脈收縮壓。

1.5?病理組織檢測(cè)

取各組大鼠胸主動(dòng)脈、左心室、腦、腎臟固定于甲醛溶液，經(jīng)取材修塊，梯度乙醇脫水，包埋，切片厚度4 μm，分別進(jìn)行蘇木素-伊紅（HE）染色，另取胸主動(dòng)脈進(jìn)行內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）免疫組化染色，光學(xué)顯微鏡下觀察各組織病理情況。

1.6?統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。定量資料結(jié)果符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)或F檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)?果

2.1?各組大鼠收縮壓比較

給藥前及給藥6周后，SHR模型組收縮壓明顯高于WKY對(duì)照組（P＜0.01）。給藥6周后，與SHR模型組相比，安宮降壓丸高劑量、中劑量、低劑量組及卡托普利組收縮壓均明顯降低（P＜0.01）。詳見表1。

2.2?各組大鼠胸主動(dòng)脈病理組織學(xué)變化

WKY對(duì)照組大鼠胸主動(dòng)脈結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)膜層光滑平整，平滑肌細(xì)胞排列規(guī)則，未見明顯異常。SHR模型組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)膜層欠平滑，平滑肌細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞大小各異，纖維組織排列紊亂。安宮降壓丸高、中劑量低各組大鼠胸主動(dòng)脈結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)膜層較完整，平滑肌細(xì)胞排列規(guī)則，未見明顯異常。卡托普利組大鼠胸主動(dòng)脈結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)膜層平滑，平滑肌細(xì)胞排列規(guī)則，未見明顯異常。詳見圖1。

2.3?各組大鼠胸主動(dòng)脈組織中eNOS表達(dá)比較

光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，免疫組化染色后，WKY對(duì)照組胸主動(dòng)脈組織切片細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽性細(xì)胞，可見eNOS主要表達(dá)于主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，外膜的成纖維細(xì)胞也有少量表達(dá)。與WKY對(duì)照組相比，SHR模型組大鼠胸主動(dòng)脈組織中eNOS的表達(dá)量明顯降低（P＜0.01）；與SHR模型組相比，安宮降壓丸高劑量組、低劑量組大鼠胸主動(dòng)脈組織中eNOS表達(dá)明顯增加（P＜0.05）。采用圖像分析系統(tǒng)計(jì)算平均灰度值進(jìn)行蛋白定量分析，結(jié)果見表2，各組胸主動(dòng)脈eNOS免疫組化染色見圖2。

2.4?各組大鼠左心室病理組織學(xué)變化

WKY對(duì)照組大鼠心肌細(xì)胞未見明顯肥大，細(xì)胞排列較規(guī)則，未見明顯的心肌纖維化。SHR模型組大鼠心肌細(xì)胞排列紊亂，局部心肌纖維斷裂，間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤，心肌纖維化，心肌細(xì)胞肥大，局部心肌細(xì)胞核近似長方形或圓形肥厚。安宮降壓丸高、中、低各劑量組大鼠心肌細(xì)胞排列較規(guī)則，未見明顯心肌細(xì)胞肥大，偶見間質(zhì)纖維化?？ㄍ衅绽M大鼠心肌細(xì)胞排列規(guī)則，未見明顯心肌細(xì)胞肥大，局部偶見心肌纖維化。詳見圖3。

2.5?各組大鼠腦組織病理組織學(xué)變化

WKY對(duì)照組大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞排列規(guī)則，腦血管管壁未見明顯增厚，血管周圍間隙輕微擴(kuò)張。SHR模型組大鼠腦內(nèi)血管管壁增厚、管腔狹窄，血管周圍間隙擴(kuò)大，局部神經(jīng)細(xì)胞排列紊亂。安宮降壓丸高劑量、中劑量、低劑量組大鼠腦內(nèi)血管未見明顯管壁增厚，管腔狹窄，局部小血管周圍間隙輕微擴(kuò)大，神經(jīng)細(xì)胞排列規(guī)則，未見明顯異常?？ㄍ衅绽M大鼠腦內(nèi)血管未見明顯的管壁增厚，管腔狹窄，血管周圍間隙輕微擴(kuò)張，神經(jīng)細(xì)胞排列規(guī)則未見明顯異常。詳見圖4。

2.6?各組大鼠腎臟病理組織學(xué)變化

WKY對(duì)照組大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)清晰，腎小球未見明顯的萎縮、玻璃樣變、硬化，腎小球未見明顯肥大。SHR模型組大鼠腎臟組織腎小球萎縮，玻璃樣變，小球硬化，局部腎小球代償性肥大，腎小球毛細(xì)血管擴(kuò)張，腎小囊腔狹窄，腎小管排列紊亂，腎小管擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞脫落，間質(zhì)纖維化。安宮降壓丸高劑量、中劑量、低劑量組腎臟組織結(jié)構(gòu)清晰，腎小球未見明顯病理改變，偶見局部腎小球輕微萎縮伴肥大，腎小球偶見分葉，腎小管見輕微擴(kuò)張，局部小管上皮細(xì)胞脫落?？ㄍ衅绽M大鼠局部腎小球萎縮，代償性腎小球肥大，小球內(nèi)細(xì)胞增生，腎小囊腔狹窄，局部小管上皮脫落。詳見圖5。

3?討?論

長期高血壓會(huì)導(dǎo)致血管、心臟、腦、腎臟等靶器官的損傷，會(huì)引發(fā)左心室肥厚、充血性心力衰竭、腦卒中、腎臟衰竭等并發(fā)癥［4］。

血管結(jié)構(gòu)的改變是持續(xù)高血壓的結(jié)果。持續(xù)的高血壓會(huì)使血管壁受壓，血管內(nèi)膜破壞，內(nèi)皮細(xì)胞間隙擴(kuò)大，血管的通透性增加，導(dǎo)致蛋白質(zhì)或脂質(zhì)沉積進(jìn)入血管壁，最終會(huì)使血管壁變厚，血管變硬，彈性降低［5-8］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SHR大鼠的胸主動(dòng)脈內(nèi)膜及細(xì)胞層結(jié)構(gòu)紊亂，管壁結(jié)構(gòu)不規(guī)則，安宮降壓丸能夠改善SHR大鼠的胸主動(dòng)脈病理損傷，表明其對(duì)高血壓大鼠的血管損傷具有一定的保護(hù)作用。

eNOS為結(jié)構(gòu)型一氧化氮合酶（NOS），主要分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞等組織中。eNOS能夠催化產(chǎn)生一氧化氮（NO），是體內(nèi)重要的舒張血管物質(zhì)，具有擴(kuò)張血管、調(diào)節(jié)血壓、抑制血小板聚集、抗平滑肌細(xì)胞增殖、白細(xì)胞黏附等作用［9］。eNOS表達(dá)減少導(dǎo)致NO生成減少，從而引起內(nèi)皮功能障礙，血壓升高［10］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，安宮降壓丸能夠提高SHR大鼠胸主動(dòng)脈eNOS的表達(dá)，從而發(fā)揮其保護(hù)血管和降低血壓的作用。

心臟是高血壓病損害最主要的靶器官之一。心臟改變主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞肥大，心肌間質(zhì)增生，心室壁向心性肥厚，心室腔容積減小，冠狀動(dòng)脈供血不足，這種改變稱為心臟結(jié)構(gòu)的重塑［11］。血壓升高是引起左心室肥厚的重要因素。左心室肥厚既是心肌細(xì)胞實(shí)質(zhì)成分的肥大，同時(shí)存在心肌間質(zhì)成分和血管結(jié)構(gòu)變化。這種復(fù)雜的心臟“重構(gòu)”主要表現(xiàn)在心肌細(xì)胞肥大、心肌異常纖維化、冠狀動(dòng)脈硬化等病理變化［12］。本研究中，SHR大鼠的左心室病理變化主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞排列紊亂，局部心肌纖維斷裂，心肌纖維化，心肌細(xì)胞肥大，局部心肌細(xì)胞核近似長方形或圓形肥厚。安宮降壓丸對(duì)于左心室心肌細(xì)胞的病理改變具有明顯的抑制作用。

高血壓會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)小微血管結(jié)構(gòu)的輕微改變，會(huì)使血管硬化，管腔增厚。SHR大鼠腦部血管結(jié)構(gòu)的病變即重構(gòu)性病變和肥厚性病變，從而使血管內(nèi)徑縮小，管腔變厚［13］。本實(shí)驗(yàn)中，SHR大鼠腦內(nèi)血管管壁增厚，管腔狹窄，血管周圍組織間隙擴(kuò)大。安宮降壓丸能夠有效緩解SHR大鼠腦血管的病理改變，表明其對(duì)大鼠腦血管損傷具有一定的保護(hù)作用。

長期高血壓會(huì)導(dǎo)致高血壓腎病。腎臟病理損傷由腎小球、腎小管缺血造成。主要表現(xiàn)為腎小球毛細(xì)血管壁皺縮性萎陷，毛細(xì)血管壁增厚，系膜區(qū)基質(zhì)增生，囊壁增厚、硬化，腎間質(zhì)纖維化等［14］。本實(shí)驗(yàn)中SHR大鼠模型腎臟病理組織學(xué)變化主要表現(xiàn)為腎小球萎縮，玻璃樣變，小球硬化，局部腎小球代償性肥大，腎小球毛細(xì)血管擴(kuò)張，腎小囊腔狹窄，腎小管排列紊亂，腎小管擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞脫落，間質(zhì)纖維化。安宮降壓丸能夠在一定程度上緩解SHR大鼠腎小球和腎小管的病理損傷。對(duì)于SHR大鼠腎臟具有一定的保護(hù)作用。

綜上所述，安宮降壓丸可以降低SHR大鼠的血壓，對(duì)SHR大鼠的胸主動(dòng)脈、心、腦、腎靶器官具有一定的保護(hù)作用，其保護(hù)作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

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（收稿日期：2022-08-05）

（本文編輯王麗）