郭冰娟 高杰

摘要：為研究柳樹花粉萌發(fā)率在不同培養(yǎng)基和不同貯藏溫度下的表現(xiàn)，試驗以速生柳、絳柳、金絲垂柳3種柳樹花粉作為研究對象，將蔗糖、瓊脂、硼酸組成不同比例的9個培養(yǎng)基，設4、15、25、35 ℃ 4個貯藏溫度，分析不同培養(yǎng)基和不同貯藏溫度對柳樹花粉萌發(fā)率與花粉活力的影響。結果顯示，10%蔗糖+1%瓊脂+0.10%硼酸的培養(yǎng)基對速生柳花粉萌發(fā)率具有促進作用。在25 ℃溫度條件下貯藏30 d時，3種柳樹花粉活力仍能保持較高水平，說明25 ℃溫度條件有利于柳樹花粉的萌發(fā)與貯藏。試驗結果為：速生柳采用10%蔗糖+1%瓊脂+0.10%硼酸的培養(yǎng)基，絳柳、金絲柳采用15%蔗糖+1%瓊脂+0.15%硼酸的培養(yǎng)基，在25 ℃溫度條件下培養(yǎng)和貯藏，可促進柳樹花粉萌發(fā)，保持和提高花粉活力。

關鍵詞：柳樹；培養(yǎng)基；貯藏溫度；花粉萌發(fā)

中圖分類號：S792.12

文獻標識碼：A

柳樹為楊柳科柳屬植物，喬木或直立灌木。柳樹枝呈圓柱形，無頂芽，葉多為披針形，狹而長，葉柄短；花序直立，與葉同時開放，或早于葉開放；苞片有毛或無毛，稀早落；種子多為暗褐色，規(guī)格較小。柳樹喜光、喜濕、耐寒，可以在惡劣的生態(tài)環(huán)境下生長，壽命為20～30年。柳樹在我國廣泛種植，品種較多，因此不同柳樹品種對花粉采集、種子貯藏的要求不同。研究不同培養(yǎng)基和不同貯藏溫度對促進柳樹花粉萌發(fā)具有一定的參考價值。

1? 材料和方法

1.1? ?試驗地點

試驗在河南省封丘縣林木種植基地進行，試驗地位于河南省東北部，地處黃河沖積扇形平原的北半部，位于北緯34°53′～35°14′、東經114°14′～114°46′之間，屬暖溫帶大陸性季風氣候，夏季高溫多雨，冬季寒冷干燥，年平均氣溫13.9 ℃，年平均降水量615.1 mm，年平均日照時數(shù)2 117 h，全年無霜期214 d[1]。

1.2? ?試驗設計

試驗于2020年3月21日上午采集花粉，以速生柳、絳柳、金絲垂柳3種柳樹花粉作為試驗對象，選擇不同柳樹品種比較健壯的花枝，每個品種選擇10株花枝，剪下后插入玻璃瓶中，加入清水進行培養(yǎng)，等待花枝開花。花枝開花后，將花序剪下放置硫酸紙上，在室溫條件下自然晾干，次日通過花粉篩篩取花粉，將其放入瓶中，標注好采集品種與采集時間。將采集的花粉分成4份，分別放在4、15、25、35 ℃溫度條件下避光貯藏，并記錄貯藏1、2、5、10、15、20、25、30 d的花粉情況，再將花粉放到不同比例的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h，對花粉萌發(fā)情況進行觀察后記錄數(shù)據，每個處理重復3次。

花粉培養(yǎng)基由不同比例的蔗糖、瓊脂、硼酸組成，共設9個處理（D1、D2、D3、D4、D5、D6、D7、D8、D9，表1）。按設計配制好花粉培養(yǎng)基，用玻璃棒蘸取培養(yǎng)基溶液，之后滴入凹載玻片中間，用毛筆蘸取花粉，將花粉彈在載玻片上，通過顯微鏡觀察花粉是否分布均勻，再將雙凹載玻片放到鋪設2層濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，后放到25 ℃光照培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，將光照強度設置為2 000 Lx。

1.3? ?測定項目

1.3.1 花粉萌發(fā)率 測定不同培養(yǎng)基下的花粉萌發(fā)率。從每個培養(yǎng)基處理中隨機選取3個樣品進行觀察，每個樣品的花粉粒數(shù)量應在100粒以上，根據花粉管長度≥花粉粒直徑，可以判斷花粉是否萌發(fā)。花粉萌發(fā)率計算公式：

花粉萌發(fā)率（%）[2]= 萌發(fā)的花粉數(shù) ×100花粉總數(shù)

1.3.2 花粉活力 測定不同培養(yǎng)基下的花粉活力。

從每個培養(yǎng)基處理中隨機選取3個樣品進行觀察，采用TTC染色法測定花粉活力。先準備好載玻片，用毛筆輕蘸少量花粉，將其均勻彈在載玻片上，滴入不同比例的營養(yǎng)液，再將載玻片放到恒溫箱中，恒溫箱溫度設置為25 ℃，持續(xù)15 min，

通過顯微鏡觀察載玻片上花粉的顏色，花粉顯示紅色表示有活力，花粉顯示無色表示無活力。花粉活力計算公式：

花粉活力（%）= 有活力的花粉數(shù)量 ×100總花粉數(shù)量

1.4? ?數(shù)據統(tǒng)計與處理

通過EXCEL 2010軟件整理相關資料和數(shù)據，采用SPSS 16.0軟件進行數(shù)據處理和分析[3]。

2? 結果與分析

2.1? ?不同培養(yǎng)基對柳樹花粉萌發(fā)率的影響

由表2可知，不同柳樹花粉萌發(fā)率在不同培養(yǎng)基下存在顯著差異（P＜0.05）。在瓊脂比例一定的條件下，不同柳樹花粉萌發(fā)率受蔗糖的影響最大，其次是硼酸。蔗糖比例（15%）相同時，相同柳樹花粉平均萌發(fā)率差異不顯著（P＞0.05），

其中速生柳花粉最高萌發(fā)率出現(xiàn)在D6處理，絳柳花粉最高萌發(fā)率出現(xiàn)在D5處理，金絲垂柳花粉最高萌發(fā)率出現(xiàn)在D6處理。培養(yǎng)基中，添加10%～15%蔗糖處理的不同柳樹花粉平均萌發(fā)率顯著高于添加20%蔗糖處理。

2.2? ?不同培養(yǎng)溫度對柳樹花粉萌發(fā)率的影響

由表3可知，不同柳樹花粉萌發(fā)率在不同培養(yǎng)溫度下表現(xiàn)顯著差異（P＜0.05）。速生柳、絳柳、金絲垂柳花粉最高萌發(fā)率出現(xiàn)在25 ℃培養(yǎng)溫度下，花粉萌發(fā)率分別為（57.3±5.7）%、

（68.7±12.2）%、（75.9±7.4）%，其次是在15 ℃培養(yǎng)溫度下，花粉萌發(fā)率分別為（52.5±6.0）%、（58.3±12.9）%、（67.7±3.2）%，均顯著高于35 ℃培養(yǎng)溫度下的花粉平均萌發(fā)率（P＜0.05）。不同柳樹花粉最低萌發(fā)率出現(xiàn)在4 ℃培養(yǎng)溫度下，其中速生柳花粉平均萌發(fā)率為（10.7±1.0）%，絳柳、金絲垂柳花粉基本不萌發(fā)，說明低溫條件下，3種柳樹的花粉萌發(fā)效果較差。

2.3? ?不同貯藏溫度對柳樹花粉活力的影響

從圖1～圖3可以看出，不同柳樹花粉活力在不同貯藏溫度下表現(xiàn)顯著差異（P＜0.05）。隨著貯藏時間的延長，不同柳樹花粉活力隨之下

降，在25 ℃貯藏溫度條件下，速生柳、絳柳、金絲垂柳隨著貯藏時間的延長花粉活力下降較為平緩；貯藏30 d時，3種柳樹花粉活力仍能保持在較高水平，明顯高于4、15、35 ℃貯藏溫度條件下的花粉活力，說明25 ℃貯藏溫度較適于保持和提高柳樹花粉活力[4]。

3? 結論與討論

試驗表明，不同培養(yǎng)基和貯藏溫度對柳樹花粉萌發(fā)率具有不同的影響。在不同培養(yǎng)基和不同貯藏溫度下，柳樹花粉萌發(fā)率表現(xiàn)顯著差異（P＜

0.05）。蔗糖不僅是花粉萌發(fā)的營養(yǎng)物質來源，同時也是花粉萌發(fā)的能量來源[5]。在花粉離體培養(yǎng)過程中，不同柳樹品種對培養(yǎng)基中添加的蔗糖濃度要求也不同。試驗表明，花粉萌發(fā)和生長也需要在培養(yǎng)基中添加適量的硼酸，這與一些學者的研究結論一致。

試驗顯示，在培養(yǎng)基中添加10%～15%蔗糖處理的3種柳樹花粉平均萌發(fā)率顯著高于添加20%蔗糖處理，由于柳樹品種不同，因此適宜的培養(yǎng)基也不同。在不同培養(yǎng)溫度條件下，25 ℃培養(yǎng)溫度的3種柳樹花粉平均萌發(fā)率顯著高于其他培養(yǎng)溫度的處理。在25 ℃貯藏溫度條件下，速生柳、絳柳、金絲垂柳隨著貯藏時間的延長，其花粉活力下降速度較為平緩；貯藏30 d時，3種柳樹花粉活力仍能保持較高水平，明顯高于4、15、35 ℃貯藏溫度條件下的花粉活力。試驗結果表明，在柳樹花粉萌發(fā)過程中，速生柳采用10%蔗糖+1%瓊脂+0.10%硼酸的培養(yǎng)基，絳柳、金絲柳采用15%蔗糖+1%瓊脂+0.15%硼酸的培養(yǎng)基，在25 ℃溫度條件下培養(yǎng)和貯藏，均可提高柳樹花粉萌發(fā)率，有利于柳樹花粉活力的保持和提高。

柳樹花粉在低溫干燥的條件下，長期貯藏（30 d）后仍能保持較高的活力，這說明低溫干燥條件對花粉貯藏十分有利。此外，溫度、光照、濕度也是影響柳樹花粉萌發(fā)率和花粉活力的重要因素。

參考文獻

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