任興遠，王文博，桂蘭蘭，郝潤華，王少康, ，陳希民，孫桂菊

（1.東南大學公共衛(wèi)生學院，環(huán)境醫(yī)學工程教育部重點實驗室，江蘇 南京 210009；2.中國營養(yǎng)學會營養(yǎng)與保健食品分會，北京 100069）

隨著社會經(jīng)濟發(fā)展和居民生活水平提高，超重與肥胖已經(jīng)逐步成為全球共同的重大公共衛(wèi)生問題，造成了沉重的疾病負擔[1]。研究表明，肥胖及肥胖相關疾病的患病率在全球呈現(xiàn)快速上升的發(fā)展趨勢。數(shù)據(jù)顯示，全球范圍內身體質量指數(shù)大于25 kg/m2的成年人所占比例從1980年的男性28.8%和女性29.8%增加到2013年的男性36.9%和女性38%[2]。盡管我國肥胖的患病率在全球還處于相對較低水平，但從20世紀80年代開始，我國就已經(jīng)是世界上超重、肥胖人口最多的國家[3]。根據(jù)2020年《中國居民營養(yǎng)與慢性病狀況報告》數(shù)據(jù)顯示，目前我國有超過50%的成年居民超重或肥胖，6～17、6 歲以下兒童青少年超重肥胖率分別達19%和10.4%[4]。超重和肥胖會增加多種合并癥的發(fā)病風險，包括2型糖尿病、心血管疾病、癌癥及睡眠呼吸障礙等[5-6]。目前治療肥胖的手段主要包括飲食、運動、藥物和外科治療[7-9]。由于能量代謝的復雜性，僅通過增加運動量很難降低體質量[10]，而藥物治療與手術治療又存在著一些不良反應[11]。因此利用功能性食品調節(jié)體質量的方法越來越受到人們的重視。

余甘子是藏族習用藥材，為大戟科植物余甘子的干燥成熟果實，其味甘、酸、澀，但營養(yǎng)價值豐富，是國家衛(wèi)生健康委員會（原衛(wèi)生部）批準的藥食同源物質，具有清熱涼血、消食健胃、生津止咳的功效，常用于治療血熱血瘀、消化不良、腹脹、咳嗽、喉痛、口干等疾病[12]。同時諸多研究顯示，余甘子還具有抗氧化[13]、抗癌[14]、抗菌抗炎[15]、降血脂[16]、降血壓[17-18]等作用。另外研究顯示，茶多酚具有調節(jié)腸道菌群和抗肥胖作用[19-20]。而左旋肉堿屬于類維生素，與動物體內的脂肪酸代謝密切相關[21]，能夠通過低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）調節(jié)血脂水平達到減肥效果[22]。目前，對余甘子預防肥胖功效的研究尚不多見，而對余甘子與茶多酚、左旋肉堿配伍使用的研究更是鮮見報道。本實驗旨在采用高脂飼料建立大鼠預防肥胖模型，通過單獨給予余甘子或將余甘子與茶多酚、左旋肉堿配伍使用，以評價余甘子的預防肥胖功效，為余甘子的進一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)和實驗支持。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

雄性SD大鼠（SPF級，實驗動物質量合格證號：20220004007809，實驗動物使用許可證號：SYXK（蘇）2021-0022），體質量（70.39±4.32）g，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供（實驗動物生產許可證號碼：SCXK（滬）2022-0004）。實驗動物飼養(yǎng)于東南大學丁家橋校區(qū)實驗動物中心，環(huán)境：SPF級屏障；光照：12 h明暗交替；實驗室溫度：20.0～26.0 ℃；相對濕度：40%～70%。飲用純化水，群籠飼養(yǎng)（每籠5 只），自由攝食攝水。

SD大鼠高脂飼料以及普通維持飼料由江蘇省蘇州市雙獅實驗動物飼料科技有限公司提供（飼料生產許可證號：蘇飼證（202305005））。普通維持飼料組分為玉米、面粉、麩皮、大豆油、豆粕、魚粉、糊精、苜蓿草等，含賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸等多種氨基酸和多種礦物元素，總能量為3 700 kcal/kg。供能比為蛋白質21.5%，脂肪11.1%，碳水化合物67.4%。高脂飼料配方：普通維持飼料59.4%、豬油15%、蔗糖15%、酪蛋白9%、麥芽糊精1.6%，總能量為4 483 kcal/kg，供能比為蛋白質19.5%，脂肪47.2%，碳水化合物33.3%。

余甘子粉、茶多酚粉 北京市營養(yǎng)源研究所；左旋肉堿酒石酸鹽（＞99%）瑞士Lonza公司；奧利司他（≥98%）上海源葉生物科技有限公司；水合氯醛 南京金益柏生物科技有限公司；總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、LDL-C、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）、天冬氨酸轉氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、丙氨酸轉氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、總蛋白以及瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素試劑盒 南京建成生物工程研究所；RNA提取液、Water Nuclease-Free、RT First Strand cDNA Synthesis Kit、SYBR Green qPCR Master Mix（None ROX）、引物 武漢塞維爾生物科技公司。

1.2 儀器與設備

電子天平 梅特勒-托利多（上海）儀器有限公司；KZ-III-FP低溫研磨儀 武漢塞維爾生物科技公司；D3024R臺式高速冷凍型微量離心機 大龍興創(chuàng)實驗儀器（北京）有限公司；CFX熒光定量聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）儀 美國Bio-Rad公司；NanoDrop 2000超微量分光光度計 美國Thermo Fisher Scientific公司；ELx800光吸收酶標儀 美國伯騰儀器有限公司；SW-CJ-1FD超凈工作臺 蘇州安泰空氣技術有限公司；FBZ2001-up-p標準試劑型純水儀 青島富勒姆科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 干預物制備

根據(jù)Huang Haozhou等[23]的研究方法提取余甘子粉。取20 g新鮮余甘子果肉在100 ℃的水（1∶12，g/mL）中煎煮2 次，每次1 h；以5 000×g離心15 min，取上清液在室溫下干燥，即可得到提取粉，得率約為25%。測試樣品密封儲存在陰涼干燥的地方，并在分析前通過0.22 μm尼龍過濾器過濾。茶多酚粉按照馮瑛等[24]的研究改進后進行提取，取30.00 g茶葉于室溫條件下用體積分數(shù)50%的乙醇溶液解吸10 min，加入3 300 mL的沸水提取10 min，冷卻至室溫后，4 200 r/min離心10 min，取上清液，干燥后得到茶多酚粉，得率約為20%。

1.3.2 動物實驗設計

SD大鼠適應性喂養(yǎng)7 d后，選取合格大鼠60 只，按體質量隨機分為6 組，即空白對照組（NC組）、模型對照組（MC組）、陽性對照組（PC組）、余甘子組（FP組）、余甘子茶多酚配伍組（FP-GTP組）、余甘子左旋肉堿配伍組（FP-LC組），每組10 只。NC組大鼠全程予以普通維持飼料喂養(yǎng)，MC組、PC組以及各實驗組全程予以高脂飼料喂養(yǎng)。

對大鼠進行連續(xù)7 周的灌胃。NC組和MC組每日灌胃1 mL/100 g的羧甲基纖維素鈉。FP組每日灌胃劑量為0.216 g/kgmb的余甘子粉；FP-GTP組每日灌胃劑量為0.216 g/kgmb的余甘子粉和0.022 5 g/kgmb的茶多酚粉；FP-LC組每日灌胃劑量為0.216 g/kgmb的余甘子粉和0.108 g/kgmb的左旋肉堿；PC組每日灌胃劑量為0.06 g/kgmb的奧利司他；各實驗組干預物均使用羧甲基纖維素鈉溶解，灌胃體積均為1 mL/100 g。各實驗組灌胃劑量根據(jù)各干預物人體推薦攝入量換算得到；陽性對照藥物劑量通過市售奧利司他說明書進行人鼠比例換算得到。

1.3.3 大鼠狀態(tài)觀察

觀察灌胃期間大鼠生長狀態(tài)、外貌形態(tài)和排便等情況。每天記錄投食量與剩食量，每7 d記錄一次大鼠攝食量。

1.3.4 大鼠生理指標的檢測

灌胃期內每7 d記錄大鼠體質量和體長（鼻尖至肛門距離）1 次。實驗結束后，將大鼠頸椎脫臼致死，小心分離大鼠肝、腎等臟器和腎周脂肪、睪周脂肪，用質量分數(shù)0.9%的生理鹽水漂洗干凈，并用濾紙吸干多余水分，使用電子天平稱量質量并記錄，而后置于-80 ℃條件下凍存，用于后續(xù)指標檢測。

根據(jù)肝臟、腎周脂肪、睪周脂肪的質量計算得出脂肪系數(shù)和肝臟系數(shù)。腎周脂肪系數(shù)、睪周脂肪系數(shù)以及肝臟系數(shù)分別為腎周脂肪質量、睪周脂肪質量和肝臟質量與大鼠體質量之比。

1.3.5 大鼠血清指標的測定

干預7 周后，大鼠禁食不斷水12 h，以350 mg/kgmb腹腔注射水合氯醛溶液（10 g/100 mL）麻醉大鼠，腹腔動脈取血，室溫靜置30 min后，以低溫3 000 r/min離心15 min分離血清，取血清置于-20 ℃冰箱待檢。根據(jù)試劑盒的操作步驟和要求測定大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、瘦素、脂聯(lián)素和抵抗素水平。

1.3.6 大鼠肝臟指標的測定

稱取約0.1 g肝臟組織樣本放入研缽中，加入1 mL無水乙醇，進行冰浴勻漿，以12 000 r/min、4 ℃離心10 min，取上清液待測。根據(jù)試劑盒的操作步驟和要求測定大鼠肝臟中SOD、ALT、AST、AKP活力和MDA、TC、TG、總蛋白、HDL-C以及LDL-C的水平。

1.3.7 大鼠脂肪內AMPKα-1、AMPKα-2、Sitr1mRNA表達的測定

采用Trizol法提取各組大鼠脂肪組織內的單磷酸腺苷依賴蛋白激酶（adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase，AMPK）α-1、AMPKα-2、沉默信息調節(jié)因子1（sirtuin 1，Sitr1）的總RNA，而后將其逆轉錄為cDNA。逆轉錄反應體系為20 μL，反應過程為95 ℃預變性l min，95 ℃變性15 s、58 ℃退火20 s、72 ℃延伸45 s，循環(huán)40 次。根據(jù)熔解曲線剔除異常數(shù)據(jù)，導入相對定量公式（2-ΔΔCt）逐個計算樣品基因的相對表達量。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

2 結果與分析

2.1 大鼠基本特征

實驗期間，各組大鼠體質量均正常增長，精神狀態(tài)、行為活動、攝食攝水、糞便、尿液以及各腔道分泌物等均未見明顯異常。如圖1所示，各組大鼠攝食量也無明顯差異，但NC組每周能量攝入明顯低于高脂飲食干預組。

圖1 實驗期間各組大鼠攝食量及能量攝入情況Fig.1 Food intake and energy intake of rats in each group during the experimental period

各組大鼠在不同時期的體質量變化如圖2A所示。干預開始之前，各組大鼠體質量均衡，差異無統(tǒng)計學意義。干預開始后，各組大鼠體質量在實驗期間均呈上升趨勢，其中MC組增長最快，其次是FP-GTP組，再次FP組和FP-LC組，PC組和NC組增長緩慢。干預4 周后，MC組大鼠體質量高于NC組大鼠，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），說明高脂飲食誘導大鼠肥胖模型構建成功。在干預7 周后，F(xiàn)P組、FP-GTP組、FP-LC組及PC組大鼠體質量均明顯低于MC組大鼠，且除FPGTP組外，其余各組與MC組間的差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。這說明余甘子單獨使用或與左旋肉堿配伍使用均能在一定程度上能夠控制大鼠體質量增加。

圖2 干預物對大鼠體質量（A）和體長（B）的影響Fig.2 Effects of interventions on body mass (A) and body length (B) of rats

各組大鼠在不同時期的體長變化如圖2B所示。干預開始之前，各組大鼠體長均衡，差異無統(tǒng)計學意義。干預開始之后，隨著時間的延長，各組大鼠正常生長，體長也逐漸增加。截至干預結束，各組大鼠體長一直無差異，說明高脂飲食誘導大鼠肥胖并用不同干預物進行灌胃不會對大鼠的生長發(fā)育造成顯著的影響。

2.2 余甘子對大鼠脂肪系數(shù)和肝臟系數(shù)的影響

干預7 周后各組大鼠脂肪系數(shù)和肝臟系數(shù)差異如表1所示。MC組予以高脂飼料喂養(yǎng)后導致大鼠發(fā)生肥胖，與NC組相比，MC組睪周脂肪、腎周脂肪質量明顯增加，相應的脂肪系數(shù)也明顯高于NC 組，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.0 0 1），而肝臟質量雖高于NC組，但肝臟系數(shù)差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），說明高脂飲食誘導大鼠發(fā)生肥胖不會導致大鼠的肝臟出現(xiàn)水腫、充血或增生肥大等不良生理反應。

表1 干預物對大鼠脂肪系數(shù)和肝臟系數(shù)的影響Table 1 Effects of interventions on fat coefficients and liver coefficients in rats

與MC組相比，F(xiàn)P組、FP-GTP組、FP-LC組及PC組大鼠腎周脂肪質量均較低，腎周脂肪系數(shù)也較低，且差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。此外，F(xiàn)P組和PC組大鼠睪周脂肪質量和睪周脂肪系數(shù)顯著低于MC組外（P＜0.05），F(xiàn)P-GTP組、FP-LC組大鼠睪周脂肪質量和睪周脂肪系數(shù)與M C 組大鼠間差異并不顯著（P＞0.05）。同時，各干預組肝臟質量與肝臟系數(shù)與MC組之間也無顯著差異（P＞0.05）。

從上述結果看，使用余甘子并與茶多酚、左旋肉堿配伍對大鼠進行干預，能夠對大鼠體內脂肪分布造成顯著影響，降低大鼠體內腎睪周圍脂肪堆積。

2.3 余甘子對大鼠脂代謝指標的影響

2.3.1 余甘子對大鼠血清和肝臟中脂質水平的影響

實驗干預7 周后，大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平的變化如圖3所示，MC組大鼠血清TC、TG、LDL-C水平均高于NC組，HDL-C水平低于NC組，且具有顯著性差異（P＜0.001）。與MC組相比，F(xiàn)P組、FP-LC組、PC組大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平均顯著下降（P＜0.05、P＜0.001），HDL-C水平顯著增加（P＜0.05、P＜0.001）。而FP-GTP組大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平雖低于MC組，HDL-C水平高于MC組，但差異并不顯著（P＞0.05）。

圖3 大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C濃度的變化Fig.3 Changes in serum TC,TG,HDL-C and LDL-C levels in rats

對大鼠進行解剖后取肝臟組織勻漿，測量肝臟組織中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平，結果如圖4所示，肝臟組織中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平變化情況與血清中變化情況相同。MC組大鼠肝臟組織中TC、TG、LDL-C水平均高于NC組，HDL-C水平低于NC組，且具有顯著性差異（P＜0.001）。與MC組相比，F(xiàn)P組、PC組大鼠肝臟組織中TC、TG、LDL-C水平均顯著下降（P＜0.001），HDL-C水平顯著增加（P＜0.001）。而FP-LC組和FP-GTP組大鼠肝臟組織中TC、TG、LDL-C水平雖低于MC組，HDL-C水平高于MC組，但差異整體上并不顯著（P＞0.05）。

圖4 大鼠肝臟TC、TG、HDL-C、LDL-C含量的變化Fig.4 Changes in TC,TG,HDL-C and LDL-C levels in rat liver

大鼠血清和肝臟組織中TC、TG、HDL-C、LDL-C水平變化結果顯示，高脂飲食能夠造成大鼠TC、TG、LDL-C水平升高，HDL-C水平降低，而使用余甘子或將余甘子和左旋肉堿配伍使用能夠改善高脂飲食誘導的大鼠血脂紊亂的現(xiàn)象。同時結果還顯示FP-GTP組降低TC、TG、LDL-C水平的效果差異并不顯著（P＞0.05），這說明余甘子與茶多酚配伍使用干預效果并不顯著。

2.3.2 余甘子對大鼠血清中瘦素、抵抗素、脂聯(lián)素水平的影響

瘦素、抵抗素、脂聯(lián)素均是由脂肪組織分泌的相關脂肪細胞因子，研究顯示肥胖發(fā)生后瘦素、抵抗素、脂聯(lián)素水平會發(fā)生改變[25-26]：血清中瘦素與抵抗素水平與動物脂肪組織大小呈正比[27]，在肥胖時會升高；而脂聯(lián)素水平則與體質量呈負相關[28]。

干預7 周后，各組大鼠血清中瘦素、抵抗素和脂聯(lián)素水平差異如表2所示。與NC組相比，MC組大鼠血清瘦素、抵抗素的水平明顯升高，脂聯(lián)素水平下降，且差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），說明高脂飲食喂養(yǎng)大鼠造成大鼠肥胖后，大鼠血清中瘦素、抵抗素水平升高，脂聯(lián)素水平下降。與MC組相比，各實驗組大鼠的瘦素、抵抗素水平下降，且除FP-GTP組外，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；各實驗組大鼠血清脂聯(lián)素水平也高于MC組，接近NC組的水平，且除FP-GTP組外，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。各組大鼠血清中瘦素、抵抗素、脂聯(lián)素水平差異說明使用余甘子干預可在一定程度上預防高脂飲食誘導的大鼠肥胖。

表2 干預對大鼠瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素的影響Table 2 Effects of interventions on serum concentrations of leptin,lipocalin and resistin in rats

2.4 余甘子對大鼠脂肪組織AMPKα-1、AMPKα-2、Sitr1的mRNA表達影響

如表3所示，MC組與NC組相比，大鼠脂肪組織AMPKα-1、AMPKα-2、Sitr1的mRNA表達下調，但差異并不顯著（P＞0.05），說明高脂飲食誘導大鼠肥胖可能不會使AMPKα-1、AMPKα-2、Sitr1的表達發(fā)生改變。然而與MC組相比，F(xiàn)P組及各配伍組大鼠脂肪組織內AMPKα-2的表達顯著上調（P＜0.05、P＜0.001），說明余甘子提取物可能通過影響AMPKα-2基因的表達進而預防高脂飼料對大鼠造成的肥胖。

表3 干預物對大鼠脂肪組織mRNA表達的影響Table 3 Effects of interventions on mRNA expression AMPKα-1,AMPKα-2 and Sitr1 in adipose tissues of rats

2.5 余甘子對大鼠肝損傷水平影響

肝細胞受損后會造成細胞膜通透性增加，導致分布于肝細胞線粒體和細胞質中的AST大量釋放到血液中[29]。肝損傷還會導致肝臟中肝酶活力升高，AKP和ALT大量釋放到血液中，導致AKP和ALT活力上升[30-31]。SOD活力的高低間接反映了機體清除氧自由基的能力，而MDA含量的高低又間接反映了機體內脂質過氧化的程度，間接地反映出細胞損傷的程度。同時當動物機體發(fā)生慢性肝實質性損傷如急性肝炎、肝硬化等時，會導致肝細胞合成蛋白質功能障礙，引起總蛋白減少。所以結合大鼠肝臟AKP、AST、ALT、SOD活力和MDA、總蛋白水平的差異，可以說明各組間大鼠肝臟的受損情況。

干預7 周后，各組大鼠肝臟勻漿中AKP、AST、ALT、MDA、SOD水平差異如表4所示。與NC組相比，MC組予以高脂飼料喂養(yǎng)后，造成了大鼠肥胖，導致大鼠肝臟內AKP、AST、ALT、MDA水平上升，SOD活力下降，且各項指標之間的差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），說明大鼠體內氧化應激失衡，出現(xiàn)氧化損傷，進而導致肝臟損傷。與MC組相比，余甘子及各配伍組大鼠肝臟內AKP、AST、ALT、MDA水平下降，SOD活力上升，但只有FP組各項指標均接近于NC組，且差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05、P＜0.001），而其余各組雖然ALT、MDA水平下降，SOD活力有所上升，但與MC組之間的差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。各實驗組大鼠AKP活力均有所下降，且接近于NC組水平，各組的差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05、P＜0.001）；而對于AST，各實驗組大鼠活力均下降，且接近于NC組水平，除FP-GTP組外，各組與MC組差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05、P＜0.001）。這說明余甘子提取物可預防肥胖對大鼠肝臟造成的氧化應激和臟器損傷，其中以FP組效果最好。然而各組間總蛋白水平并無顯著性差異，說明高脂飲食引起的肝損傷并不嚴重，并未出現(xiàn)慢性肝實質性損害。

表4 干預物對大鼠肝臟AKP、AST、ALT、MDA、SOD及總蛋白水平的影響Table 4 Effects of interventions on levels of AKP,AST,ALT,MDA,SOD and total protein levels in rat liver

3 討論

余甘子含有豐富的多糖類、多酚類、鞣質類、黃酮類和三萜類等藥用成分，兼具藥用價值高和安全性好的特點[32]。同時作為新食品原料，在食品領域逐漸得到廣泛應用。目前，國內余甘子的加工產品主要有果脯、蜜餞、腌制品、果酒、果汁、果醬、果干、凍干片、果茶、袋泡茶、余甘粉、含片、喉片、保健三勒漿、口服液、糖果等[33-38]。本研究用余甘子作為干預物并與茶多酚和左旋肉堿配伍使用，探討其對高脂飲食誘導大鼠肥胖的預防作用，為余甘子保健功能的開發(fā)提供科學依據(jù)。

本研究通過高脂飼料建立大鼠預防肥胖模型，并分別使用余甘子、余甘子與茶多酚配伍、余甘子與左旋肉堿配伍對實驗動物進行干預，以研究余甘子的預防肥胖功效。對MC組給予高脂飼料喂養(yǎng)7 周后，其體內TC、TG、LDL-C水平，體質量、內臟脂肪質量及其系數(shù)均顯著高于NC組，HDL-C水平低于NC組，這與肥胖患者血脂水平改變情況[39-41]相同，說明高脂飲食誘導大鼠肥胖成功。

研究還發(fā)現(xiàn)，7 周的灌胃實驗過程中，各組大鼠均正常生長，精神狀態(tài)、行為活動、攝食攝水、糞便、尿液以及各腔道分泌物等均未見明顯異常，說明僅使用余甘子干預或與茶多酚或左旋肉堿配伍使用均不會對大鼠生長產生任何副作用。與MC組相比，在余甘子的調節(jié)作用下，F(xiàn)P組大鼠體質量顯著下降，腎周脂肪和睪周脂肪含量也顯著降低，血清中TC、TG、LDL-C、瘦素、抵抗素水平顯著降低，HDL-C、脂聯(lián)素水平升高；肝臟內TC、TG、LDL-C水平下降，HDL-C水平上升。說明余甘子干預能夠改善高脂飲食誘導的大鼠血脂紊亂的現(xiàn)象，影響脂代謝相關指標。AMPK信號通路可以調節(jié)脂質代謝、氧化還原平衡、線粒體自噬等，外周組織中的AMPK的激活可以抑制脂質的合成[42-43]。AMPK是由α、β、γ亞基組成的三聚體，α亞基包括α1和α2亞型。AMPKα-1廣泛存在于人類各組織器官中，而AMPKα-2在骨骼肌、心臟和肝臟等臟器中表達較高。此次研究也發(fā)現(xiàn)了經(jīng)過余甘子干預的肥胖大鼠脂肪組織內AMPKα-2的表達顯著上調，這也證明了余甘子具有抑制大鼠體質量增加、調節(jié)大鼠血脂異常指標的作用，并通過AMPK信號通路調節(jié)能量穩(wěn)態(tài)，改善肥胖大鼠體內脂肪堆積的現(xiàn)象，進而達到預防肥胖功效。同時肝臟內AKP、AST、ALT、MDA活力下降，SOD活力上升，說明余甘子提取物可預防肥胖對大鼠肝臟造成的氧化應激和臟器損傷；然而肝臟中TP水平無明顯改變，說明高脂飲食并未造成嚴重的肝損傷，尚未影響肝臟合成蛋白質的能力。

同時，F(xiàn)P-LC組大鼠體質量較MC組也有所下降，腎周脂肪和睪周脂肪含量顯著降低，這說明余甘子與左旋肉堿配伍使用調節(jié)大鼠血脂異常指標的作用也十分顯著；但在預防肥胖功效方面，效果不如僅用余甘子進行干預的FP組。雖然有研究顯示，茶多酚能夠通過調節(jié)機體脂肪吸收和代謝達到預防肥胖功效[44-45]，但此次研究結果顯示，F(xiàn)P-GTP組大鼠體質量雖然也低于MC組大鼠，但差異不具顯著性，各項指標結果也顯示余甘子與茶多酚配伍使用不具有預防肥胖功效。這可能是由于配伍使用后二者存在某種拮抗作用影響了其本身預防肥胖的效果，亦或是因為實驗干預時間為7 周，還不足以使FPGTP組大鼠的各項指標發(fā)生顯著變化，具體機制還有待研究。

本次實驗中PC組使用臨床常見減肥藥奧利司他對肥胖大鼠進行干預，結果顯示其減肥效果十分顯著。奧利司他作為一種脂抑素的衍生產物，通過抑制胃腸道的胰脂肪酶，阻止三酰甘油水解為游離脂肪酸和單?；视王?，減少腸腔黏膜對膳食中脂肪（三酰甘油）的吸收，促使脂肪排除體外[46]。目前已有研究顯示，有些酚類物質也可以通過降低消化道對胰脂肪酶的活性抑制脂肪吸收，阻止其進去體內沉積[47]。余甘子的主要功效成分為酚類物質，主要包括沒食子酸鞣質類和逆沒食子酸鞣質類等鞣質類化合物、沒食子酸類衍生物和黏酸類衍生物等酚酸類化合物、槲皮素和山柰酚等黃酮類化合物[48]。因此余甘子預防肥胖的機制可能與奧利司他相似，通過酚類物質降低消化道對胰脂肪酶的活性達到預防肥胖的功效。此外，越來越多的研究證明沒食子酸具有強大的抗肥胖能力[49-50]，能夠減少肥胖人群的脂質過度儲存，還能特異性靶向脂肪組織，抑制脂肪的生成。另有人群調查研究結果顯示[51]，肥胖人群槲皮素攝入量明顯低于正常人群，高槲皮素攝入水平可降低肥胖風險，隨著槲皮素攝入水平的增加，肥胖率具有降低的趨勢。因此余甘子的減肥功效可能與其主要功效成分對脂質代謝的影響有關，但具體機制仍有待進一步研究。

4 結論

研究證實了余甘子通過控制肥胖大鼠TC、TG、LDL-C、瘦素、脂聯(lián)素水平的升高，改善肥胖大鼠的血脂水平，并降低肥胖大鼠的體質量、內臟脂肪質量及其系數(shù)，達到預防高脂飲食誘導大鼠肥胖的效果，且效果優(yōu)于余甘子與茶多酚或左旋肉堿配伍使用。同時研究也證實了余甘子可以作為綠色、天然、安全、高效的預防肥胖的食品，為余甘子的進一步開發(fā)利用提供了理論依據(jù)和實驗支持。