劉瑩，林旋，2，張玨，姚南珍，趙一涵

1. 廣州中醫(yī)藥大學第八臨床醫(yī)學院，廣東 佛山 528000

2. 佛山市第一人民醫(yī)院，廣東 佛山 528000

3. 佛山市中醫(yī)院，廣東 佛山 528000

糖尿病周圍神經(jīng)病變（DPN）是糖尿病常見的慢性并發(fā)癥之一，早期可見四肢麻木、感覺異常、疼痛，晚期以感覺喪失為特征，若病情進一步發(fā)展，可導致足部潰瘍、壞死，甚至需要截肢、危及生命，嚴重影響患者的生活質量并帶來沉重的經(jīng)濟負擔。目前，現(xiàn)代醫(yī)學針對DPN 以對因對癥治療為主，包括調(diào)控血糖、改善循環(huán)、抗氧化應激、營養(yǎng)神經(jīng)、止痛等[1]，這些針對DPN 單一發(fā)病機制采取的治療措施并不能達到令人滿意的臨床療效，治療存在一定局限性。中醫(yī)認識及治療疾病強調(diào)從整體出發(fā)，在中醫(yī)理論指導下形成的中藥復方對DPN 的防治具有多成分、多途徑、多靶點的綜合優(yōu)勢，可標本兼治，有效改善臨床癥狀[2]。臨床研究表明，芍藥甘草湯合桃紅四物湯治療DPN 有確切療效[3-4]，但作用機制的分析探討尚未見報道。網(wǎng)絡藥理學與分子對接技術可通過構建“活性成分-靶點基因-信號通路”網(wǎng)絡，系統(tǒng)、整體地分析中藥復方中多成分對疾病的作用機制，其特點與中醫(yī)整體觀、辨證施治原則相吻合[5]。本研究通過運用網(wǎng)絡藥理學方法及分子對接技術，分析芍藥甘草湯合桃紅四物湯治療DPN 的作用機制，以期能為芍藥甘草湯合桃紅四物湯的臨床應用及后期的深入研究提供依據(jù)與方向。

1 研究方法

1.1 芍藥甘草湯合桃紅四物湯化學成分信息及靶點基因獲取 以口服生物利用度（OB）≥30%，類藥性（DL）≥0.18 作為篩選標準，從中藥系統(tǒng)藥理數(shù)據(jù)庫和分析平臺（TCMSP）（http：//tcmspw.com/tcmsp.php）中檢索白芍、甘草、桃仁、紅花、川芎、熟地黃與當歸，篩選出各藥物的活性成分并下載對應的靶點蛋白，借助Uniprot數(shù)據(jù)庫（https：//www.uniprot.org/）將上述中藥活性成分的靶點蛋白轉換為對應的靶點基因。

1.2 DPN 靶點基因獲取 以“diabetic peripheral neuropathy” 為關鍵詞， 分別從DrugBank 數(shù)據(jù)庫（https：//www.drugbank.ca/）、PharmGKB數(shù)據(jù)庫（https：//www.pharmgkb.org/）、GeneCards 數(shù)據(jù)庫（https：//www.genecards.org/）、OMIM 數(shù)據(jù)庫（https：//omim.org/）、TTD 數(shù)據(jù)庫（http：//db.idrblab.net/ttd/）檢索靶點基因，并對收集到的數(shù)據(jù)進行整理、去重，獲得DPN 相關的靶點基因。

1.3 芍藥甘草湯合桃紅四物湯活性成分-DPN 共同靶點基因網(wǎng)絡圖構建 運用韋恩圖（Venn diagram）得到芍藥甘草湯合桃紅四物湯活性成分與DPN 的共同靶點基因，即潛在治療靶點基因。運用Cytoscape 3.9.1 軟件對藥物活性成分與潛在治療靶點基因之間的關系進行網(wǎng)絡圖像可視化處理?；钚猿煞峙c靶點基因以節(jié)點呈現(xiàn)，節(jié)點之間相互作用的關系以邊表示。以“Degree”為標準將藥物活性成分進行排序，篩選出芍藥甘草湯合桃紅四物湯治療DPN 的核心活性成分。

1.4 蛋白質相互作用（PPI）網(wǎng)絡構建 運用STRING數(shù)據(jù)分析平臺（https：//string-db.org），將置信度調(diào)整為≥0.900，生物種類限制為“Homo sapiens”，獲取芍藥甘草湯合桃紅四物湯活性成分與DPN 共同靶點基因的PPI 網(wǎng)絡圖。下載PPI 關系參數(shù)，將之導入Cytoscape 3.9.1 軟件，應用“CytoNCA”插件篩選關鍵靶點，根據(jù)介數(shù)中心性（Betweenness Centrality）、接近中心性（Closeness Centrality）、度中心性（Degree Centrality）、特征向量中心性（Eigenvector Centrality）、局部平均連通性（Local Average Centrality）篩選出核心靶點基因。

1.5 基因本體論（GO）功能富集分析和京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析 運用R 語言軟件對芍藥甘草湯合桃紅四物湯活性成分與DPN 的共同靶點基因進行GO 功能富集分析與KEGG 通路富集分析。設置P＜0.05 為條件，篩選并輸出富集分析結果排名靠前的10條GO生物功能和30條KEGG信號通路，并根據(jù)結果繪制柱狀圖、氣泡圖。

1.6 核心活性成分與核心靶點基因分子對接 以1.3 項及1.4項中篩選得到的核心活性成分與核心靶點基因分別作為配體、受體進行分子對接。首先通過Pubchem 數(shù)據(jù)庫獲取核心活性成分的小分子配體2D結構，再利用Chem3D 軟件將之轉換為3D 結構。在布魯克海文蛋白質數(shù)據(jù)庫（PDB）獲取核心靶點基因蛋白受體的三維結構，并借助Pymol 軟件進行去水分子及原配體操作。再通過AutoDockTools 軟件將配體和受體轉換為PDBQT 格式及確定活性口袋。最后通過AutoDock Vina 軟件將小分子配體和蛋白受體進行分子對接，并將對接結果可視化。

2 研究結果

2.1 芍藥甘草湯合桃紅四物湯活性成分及靶點基因 從TCMSP 數(shù)據(jù)庫中檢索得到芍藥甘草湯合桃紅四物湯共有161 個活性成分，其中白芍13 個，甘草92個，熟地黃2個，當歸2個，川芎7個，桃仁23個，紅花22 個。將上述活性成分的靶點蛋白經(jīng)Uniprot 數(shù)據(jù)庫轉換為靶點基因，共241個。

2.2 DPN 靶點獲取 通過DrugBank、PharmGKB、GeneCards、OMIM、TTD數(shù)據(jù)庫篩選獲得與DPN相關的靶點基因共5 596 個（DrugBank 數(shù)據(jù)庫116 個、PharmGKB 數(shù)據(jù)庫225個、GeneCards數(shù)據(jù)庫5 118個、OMIM 數(shù)據(jù)庫135 個、TTD 數(shù)據(jù)庫2 個），綜合各數(shù)據(jù)庫結果，去重后獲得DPN 靶點基因共5 303 個，見圖1。將DPN 的5 303 個靶點基因與芍藥甘草湯合桃紅四物湯的241 個靶點基因取交集，最終獲得藥物-疾病共同靶點基因184個，見圖2。

圖1 各數(shù)據(jù)庫中DPN相關靶點基因的分布

圖2 芍藥甘草湯合桃紅四物湯與DPN的共同靶點基因

2.3 芍藥甘草湯合桃紅四物湯活性成分-DPN 共同靶點基因網(wǎng)絡 根據(jù)芍藥甘草湯合桃紅四物湯活性成分與DPN 的共同靶點基因，反向篩選得到作用于DPN 的相關活性成分125 個。通過Cytoscape 3.9.1 軟件將芍藥甘草湯合桃紅四物湯活性成分-DPN 共同靶點基因網(wǎng)絡可視化處理，見圖3。活性成分-DPN 共同靶點基因網(wǎng)絡圖中共有309個節(jié)點，其中活性成分125 個，靶點基因184 個。圖中央呈矩陣排列的圓圈代表DPN 潛在的治療靶點基因，四周圓形排列的圓圈代表芍藥甘草湯合桃紅四物湯活性成分，不同顏色代表不同藥物的活性成分，連線代表活性成分與靶點基因間的相互作用。以“Degree”為標準，將活性成分進行排序，排名前5 的核心活性成分為MOL000098（槲皮素）、MOL000006（木犀草素）、MOL000422（山奈酚）、MOL004328（柚皮素）、MOL003896（7-甲氧基-2-甲基異黃酮），作用靶點基因分別為111、45、42、29、27個，可推測這些活性成分可能是芍藥甘草湯合桃紅四物湯治療DPN 的核心活性成分。

圖3 芍藥甘草湯合桃紅四物湯活性成分-DPN共同靶點基因網(wǎng)絡圖

2.4 PPI 網(wǎng)絡構建 將184 個共同靶點基因導入STRING 數(shù)據(jù)庫平臺構建PPI 網(wǎng)絡圖，并通過Cytoscape 3.9.1 軟件將PPI 數(shù)據(jù)進行可視化分析，見圖4。圖中靶點基因以節(jié)點呈現(xiàn)，節(jié)點之間相互作用的關系以邊表示。共有160 個節(jié)點和739 條邊，Degree 值的大小與節(jié)點的大小、顏色深淺呈正相關。調(diào)整相關參數(shù)（Betweenness Centrality≥65.871 454 98；Closeness Centrality≥0.092 928 239 5；Degree Centrality≥7；Eigenvector Centrality≥0.040 539 527 5；Local Average Centrality≥2.291 666 666 5）保留大于中位值的靶點基因，對靶點基因進行篩選，得到48 個靶點基因。對這48 個靶點基因再次進行篩選，條件為：Betweenness Centrality≥18.852 097 12；Closeness Centrality≥0.546 511 628； Degree Centrality≥11； Eigenvector Centrality≥0.106 636 494 5；Local Average Centrality≥5.25，最終得到19 個靶點基因，分別是：細胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子1A（CDKN1A）、信號傳導及轉錄激活蛋白3（STAT3）、絲裂原活化蛋白激酶3（MAPK3）、白細胞介素-6（IL6）、原癌基因（FOS）、表皮生長因子受體（EGFR）、腫瘤壞死因子（TNF）、絲裂原活化蛋白激酶14（MAPK14）、絲氨酸/蘇氨酸激酶1（AKT1）、熱休克蛋白90α 家族A 類成員1（HSP90AA1）、絲裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、細胞周期蛋白D1（CCND1）、雌激素受體1（ESR1）、核內(nèi)癌基因（MYC）、缺氧誘導因子1 亞基α（HIF1A）、信號轉導與轉錄激活因子1（STAT1）、腫瘤蛋白p53（TP53）、連環(huán)蛋白β1（CTNNB1）、V-rel網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞病毒癌基因同源物A（RELA）。以“Degree”為標準，將以上19 個靶點基因進行排序，排名前5 的核心靶點基因為STAT3、 MAPK3、 HSP90AA1、MAPK1、RELA，篩選圖見圖5。

圖4 芍藥甘草湯合桃紅四物湯與DPN共同靶點PPI網(wǎng)絡圖

圖5 芍藥甘草湯合桃紅四物湯治療DPN靶點基因相互作用網(wǎng)絡分析及篩選圖

2.5 GO 功能富集分析結果 利用R 語言軟件對184個共同靶點基因進行GO 功能富集分析，富集結果包括生物進程（BP）、細胞組成（CC）、分子功能（MF），分別為2 595、127、218 個GO 條目，共2 940 個。BP主要涉及氧化應激反應，對活性氧的反應，對肽、脂多糖（LPS）的反應，對神經(jīng)營養(yǎng)水平的反應等；CC主要涉及膜筏、囊泡腔、內(nèi)質網(wǎng)腔、神經(jīng)元細胞體；MF 主要涉及核受體活性、核類固醇受體活性、G 蛋白耦聯(lián)受體（GPCRs）活性、轉錄輔激活因子結合等。取各組排名前10的GO條目繪制柱狀圖，見圖6。

圖6 GO功能富集分析柱狀圖

2.6 KEGG 通路富集分析結果 利用R 語言軟件對184 個共同靶點基因進行KEGG 通路富集分析，共得到信號通路182條。包括脂質和動脈粥樣硬化、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K-Akt）信號通路、流體剪切應力和動脈粥樣硬化、卡波西肉瘤相關的皰疹病毒感染、人巨細胞病毒感染、糖尿病并發(fā)癥中的晚期糖基化終末產(chǎn)物-晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（AGE-RAGE）信號通路、腫瘤壞死因子（TNF）信號通路、白細胞介素-17（IL-17）信號通路、缺氧誘導因子1（HIF-1）信號通路等。富集分析結果提示上述信號通路可能為芍藥甘草湯合桃紅四物湯治療DPN的關鍵通路。根據(jù)P值大小進行排序，取排在前30 條的KEGG信號通路繪制氣泡圖，見圖7。

圖7 KEGG通路富集分析氣泡圖

2.7 核心活性成分與核心靶點基因分子對接 選取核心靶點基因 STAT3、 MAPK3、 HSP90AA1、MAPK1、RELA 的蛋白受體與核心活性成分槲皮素、木犀草素、山奈酚、柚皮素、7-甲氧基-2-甲基異黃酮的小分子配體進行分子對接，對接結合能數(shù)據(jù)見表1。對接結果顯示，此5 種核心活性成分小分子配體與核心靶點基因蛋白受體的最低結合能均小于-5 kcal/mol，表明芍藥甘草湯合桃紅四物湯的核心活性成分與核心靶點基因有較好對接活性，結合能力較強。其中木犀草素與HSP90AA1 對接結合能最低，為-10.3 kcal/mol，提示結合活性最好。5 個核心活性成分與靶點基因HSP90AA1對接的結合情況見圖8。

表1 核心活性成分與核心靶點基因的對接結合能 kcal/mol

圖8 5種核心活性成分與靶點基因HSP90AA1對接示意圖

3 討論

3.1 芍藥甘草湯合桃紅四物湯與DPN DPN 可歸屬于中醫(yī)學消渴痹證、消渴痿證等疾病范疇，屬本虛標實之證。普遍認為DPN 的發(fā)病機制多因消渴日久，燥熱傷陰耗氣，致氣陰兩虛，氣虛則無以推動血行，陰虛則生內(nèi)熱，虛火久蒸，損耗陰液，干血內(nèi)結，導致血運遲緩，氣血運行不暢，四肢筋脈失于氣血溫潤濡養(yǎng)，不榮則痛；久病入絡，脈絡痹阻，不通則痛，出現(xiàn)肢體麻木、疼痛、感覺異常等癥狀[6]。陰虛燥熱是發(fā)生DPN 的關鍵，瘀血是造成此病的重要原因，故應治以滋陰活血、柔筋緩急。

桃紅四物湯出自《醫(yī)宗金鑒》，由桃仁、紅花、川芎、熟地黃、白芍、當歸6味藥組成，具有養(yǎng)血活血之功效?，F(xiàn)代藥理研究結果證實，桃紅四物湯有降血脂、擴血管、抗疲勞、耐缺氧、補充微量元素、抗氧化損傷、抗炎、提高免疫力、神經(jīng)保護等作用[7]。芍藥甘草湯則出自《傷寒論》，由白芍、炙甘草2味藥組成，具有滋陰養(yǎng)血、緩急止痛之功效?，F(xiàn)代藥理研究結果表明，白芍的有效成分芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、白芍總苷具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗氧化、降糖降脂、抗抑郁、保肝、調(diào)節(jié)免疫等藥理作用[8]；炙甘草中黃酮類成分含量較高，具有抗炎、抗氧化、抗心律失常、調(diào)節(jié)免疫和抗菌等藥理作用[9]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，芍藥甘草湯可用于治療痙攣性、疼痛性疾病，對緩解四肢平滑肌的攣急效果顯著[10-11]。兩方合用，奏滋陰活血、柔筋緩急之效，標本兼治。

3.2 芍藥甘草湯合桃紅四物湯治療DPN 的核心活性成分及靶點基因 本研究結果提示，芍藥甘草湯合桃紅四物湯的125 個活性成分中，Degree 值排名前5 的是槲皮素、木犀草素、山奈酚、柚皮素、7-甲氧基-2-甲基異黃酮。上述5 種核心活性成分皆為黃酮類化合物，由此可見，黃酮類化合物在DPN 的治療中可能發(fā)揮著重要的作用。槲皮素具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、心血管保護、神經(jīng)保護、血糖調(diào)節(jié)等藥理作用[12]；有研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素可通過抑制炎癥反應，減少神經(jīng)細胞凋亡，促進神經(jīng)傳導，從而改善糖尿病大鼠的神經(jīng)病理性疼痛，且在體內(nèi)外可通過減輕線粒體損傷，對高血糖誘導的周圍神經(jīng)病變有神經(jīng)保護作用[13-14]。木犀草素具有抗氧化、抗炎、改善胰島素抵抗、保護神經(jīng)的作用，能防止人單核細胞白血病細胞（THP-1）巨噬細胞焦亡，減輕線粒體損傷，抑制促炎細胞因子的釋放，減少神經(jīng)元凋亡，可抑制糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展[15-16]。山奈酚具有抗氧化應激、抗炎、抑制細胞凋亡的作用，可通過減少晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）形成，增加β 細胞中胰島素的產(chǎn)生和分泌，增強細胞對葡萄糖的攝取，促進骨骼肌葡萄糖代謝和抑制肝糖異生而降低血糖[17-18]。柚皮素具有抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗糖尿病、抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤、降血脂等廣泛的生物活性[19]。有研究發(fā)現(xiàn)柚皮素可提高細胞活力，抑制細胞凋亡，緩解DPN，其作用機制可能是抑制核因子-κB（NF-κB）信號通路，緩解高糖損傷雪旺細胞過程中的炎癥反應和氧化應激反應[20]。因此，芍藥甘草湯合桃紅四物湯的活性成分可能通過抗氧化應激、抗炎、調(diào)節(jié)血糖以及保護神經(jīng)等作用，延緩DPN 病程進展，達到治療的目的。

本研究所獲得的核心程度最高的5個核心靶點基因為STAT3、MAPK3、HSP90AA1、MAPK1、RELA。作為STATs家族的一員，STAT3是連接癌癥、免疫及炎癥反應的關鍵信號分子，能夠激活JAK 激酶/信號傳導及轉錄激活蛋白（JAK/STAT）信號通路，與神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展有關[21-22]。MAPK1、MAPK3同屬于MAPK家族，參與調(diào)控細胞的增殖、分化、凋亡及炎癥反應等多種生理病理活動，與葡萄糖誘導的氧化應激所導致的神經(jīng)元凋亡、神經(jīng)元再生受損及神經(jīng)病變密切相關[23]。HSP90AA1 是熱休克家族的重要成員，可以調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長因子表達，是調(diào)節(jié)細胞增殖、凋亡的關鍵因子[24]，是DPN形成的重要分子之一。RELA 基因編碼的轉錄因子p65 是NF-κB家族中的一個重要成員，可以通過調(diào)控細胞在免疫炎癥反應中相關基因的表達水平，參與DPN 的發(fā)生、發(fā)展[25]。由此可見，上述核心靶點基因與炎癥反應、細胞代謝、神經(jīng)元功能的調(diào)節(jié)密切相關，而這些因素均可影響DNP 的發(fā)生、發(fā)展，故可為后續(xù)的實驗驗證提供方向及參考。

3.3 芍藥甘草湯合桃紅四物湯治療DPN 可能的作用機制 本研究的GO 功能富集分析結果提示，芍藥甘草湯合桃紅四物湯治療DPN 可能通過膜筏、囊泡腔、內(nèi)質網(wǎng)腔、神經(jīng)元細胞體等細胞結構，調(diào)節(jié)核受體活性、核類固醇受體活性、配體激活轉錄因子活性、GPCRs 活性、DNA 與轉錄因子結合等分子功能，影響氧化應激反應、對活性氧族的反應、對肽與LPS的反應、對營養(yǎng)水平的反應、細胞對化學應激的反應、對細胞外刺激的反應等生物進程。其中，高血糖引發(fā)的氧化應激反應可激活多元醇通路、己糖胺途徑、AGEs 形成，引發(fā)和放大神經(jīng)炎癥，導致線粒體功能障礙，神經(jīng)元及周圍神經(jīng)膠質細胞損傷、凋亡[26]。此外，氧化應激所產(chǎn)生的過量活性氧在神經(jīng)毒性方面亦起著重要作用[27]。有研究發(fā)現(xiàn)，維生素和抗氧化補充劑可顯著提高DPN 患者腓腸神經(jīng)、正中神經(jīng)的神經(jīng)傳導速度，改善臨床癥狀，延緩DPN 的進展[28]。LPS來自革蘭氏陰性腸道菌群，可合成和釋放多種細胞因子和炎性介質。有研究發(fā)現(xiàn)，高脂肪飲食喂養(yǎng)的小鼠，其血漿LPS 的循環(huán)濃度增加、體質量增加、空腹血糖升高，發(fā)生炎癥，誘導了代謝性疾病的發(fā)生，這與在正常飲食喂養(yǎng)的小鼠中注射LPS引起的代謝反應在一定程度上相似，其機制可能是LPS/CD14系統(tǒng)設置了高脂肪飲食誘導代謝性疾病發(fā)生的閾值[29]。神經(jīng)營養(yǎng)支持的水平與DPN 的發(fā)病關聯(lián)密切，神經(jīng)功能障礙和神經(jīng)血液灌注減少，可導致神經(jīng)營養(yǎng)不良，最終導致神經(jīng)損傷[30]。神經(jīng)營養(yǎng)因子包括神經(jīng)生長因子、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子等，可減輕神經(jīng)元損傷程度，促進神經(jīng)纖維的生長和周圍神經(jīng)的恢復，在周圍神經(jīng)中發(fā)揮重要的神經(jīng)保護作用[31]。GPCRs 可通過與糖、蛋白質、脂質等配體結合并發(fā)生結構改變，激活細胞內(nèi)的信號通路[32-33]，是治療糖尿病及其并發(fā)癥的新型藥物靶點之一。細胞對化學應激、細胞外刺激的反應，可激活絲裂原活化蛋白激酶和多種磷脂酶，增強細胞對應激原的抵抗力，拮抗細胞凋亡及激活炎癥細胞[34]。

本研究的KEGG通路富集分析結果顯示，芍藥甘草湯合桃紅四物湯干預DPN 的信號通路主要涉及脂質和動脈粥樣硬化、流體剪切應力和動脈粥樣硬化、PI3K-Akt 信號通路、AGE-RAGE 信號通路、IL-17信號通路、TNF 信號通路、HIF-1 信號通路等。PI3K-Akt 通路能夠通過調(diào)節(jié)雪旺細胞促進髓鞘形成、修復神經(jīng)纖維，改善高糖環(huán)境下的細胞氧化應激水平[35]，對DPN 的治療有重要意義。長期高血糖導致AGEs 在周圍神經(jīng)組織蓄積過多，與AGEs 受體（RAGE）結合后激活AGE-RAGE 信號通路，導致促炎細胞因子釋放增加、激活氧化應激反應，造成神經(jīng)損傷[36-37]，加速DPN 的發(fā)生、發(fā)展。IL-17 是重要的促炎癥細胞，參與炎癥和自身免疫性疾病的調(diào)控[38]。有研究發(fā)現(xiàn)，IL-17 信號通路可通過影響棕色和米色脂肪組織的產(chǎn)熱作用促進產(chǎn)熱和能量消耗，抑制肥胖和胰島素抵抗的發(fā)展[39]。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）是TNF 信號通路中具有代表性的炎癥因子，不僅對神經(jīng)元及神經(jīng)膠質細胞具有毒性作用，還會加重血管內(nèi)皮細胞的炎癥反應，導致內(nèi)皮細胞的損傷[40]。有研究發(fā)現(xiàn)，DPN 患者的TNF-α 水平升高，與正中神經(jīng)、腓神經(jīng)的神經(jīng)傳導速度呈負相關，提示TNF-α 可能是DPN 患者神經(jīng)傳導異常的影響因素[41]。HIF-1α 是HIF-1 的亞單位，是應答缺氧應激的關鍵轉錄因子[42]。有研究發(fā)現(xiàn)，HIF-1α 可通過促進新血管生成、擴張血管，進而改善糖尿病周圍神經(jīng)組織缺血缺氧，起到保護神經(jīng)的作用[43]。筆者認為，芍藥甘草湯合桃紅四物湯可能通過調(diào)控上述信號通路來改善胰島素抵抗、抗氧化應激、抑制炎癥反應、保護神經(jīng)細胞，達到治療DPN的目的。

分子對接結果顯示，芍藥甘草湯合桃紅四物湯的5 個核心藥物活性成分槲皮素、木犀草素、山奈酚、柚皮素、7-甲氧基-2-甲基異黃酮與核心靶點基 因 STAT3、 MAPK3、 HSP90AA1、 MAPK1、RELA 均有較好對接活性，結合能力較強，其中木犀草素與HSP90AA1 結合作用最好，驗證了芍藥甘草湯合桃紅四物湯的核心活性成分與DPN 核心靶點基因有較好的親和力。在今后的基礎試驗中可探究這些活性成分對DPN 的作用機制，為臨床治療提供思路。

綜上所述，通過運用網(wǎng)絡藥理學方法及分子對接技術，本研究發(fā)現(xiàn)芍藥甘草湯合桃紅四物湯中的黃酮類主要活性成分槲皮素、木犀草素、山奈酚、柚皮素、7-甲氧基-2-甲基異黃酮可能是治療DPN 的主要成分。芍藥甘草湯合桃紅四物湯治療DPN 以STAT3、MAPK3、HSP90AA1、MAPK1、RELA 等為核心靶點基因，涉及氧化應激反應、細胞對化學應激的反應、對肽與LPS的反應、對神經(jīng)營養(yǎng)水平的反應、對活性氧的反應等多個生物過程，并通過調(diào)控PI3K-Akt 信號通路、AGE-RAGE 信號通路、IL-17信號通路、TNF 信號通路、HIF-1 信號通路等關鍵信號通路起治療作用。在后續(xù)研究中，可對芍藥甘草湯合桃紅四物湯的活性成分進行鑒別，并對篩選出的核心靶點基因及通路進行驗證，為臨床應用奠定基礎。