收稿日期：2023-02-01

作者簡介：秦曉（1982-），女，山東省煙臺市人，工程師，2006年畢業(yè)于青島科技大學學?；瘜W與分子工程學院，研究方向：海水監(jiān)測。

摘""""" 要： 建立前處理超聲萃取結(jié)合熒光分光光度法測定海洋生物體中的石油烴的分析方法。試樣經(jīng)氫氧化鈉溶液和無水乙醇皂化后，用二氯甲烷萃取，萃取液過氧化鋁柱去除肌肉組織干擾后，氮氣吹至近干，環(huán)己烷定容，經(jīng)熒光檢測，計算出石油烴在生物體中的含量。結(jié)果表明：石油烴的方法檢出限為0.17 mg·kg-1，在20.0～25.0 mg·kg-1的質(zhì)量分數(shù)范圍下的加標回收率為90.8%～95%、相對標準偏差為4.4%～4.6%。該方法更便于操作，重復性較好，能夠更好地滿足實驗需求，并歸納總結(jié)了此實驗需注意的問題。

關(guān)" 鍵" 詞：石油烴；超聲萃?。换厥章?/p>

中圖分類號：X834"nbsp;""""" 文獻標識碼： A"""""" 文章編號： 1004-0935（2024）02-0234-04

目前海洋突發(fā)事故最為常見就是石油泄漏，漏油事故帶來的嚴重后果就是會對海洋生態(tài)環(huán)境造成極大損害。石油污染物由于組分較復雜，在環(huán)境中降解困難，處理難度較大。石油烴進入海洋環(huán)境后，會影響海洋生物的繁殖以及生長發(fā)育，進而使?jié)O業(yè)資源逐步衰退甚至枯竭。石油烴通過食物鏈在水生生物體中富集，影響水產(chǎn)品的食用安全，進而危害人體的健康。又由于受洋流和海浪的影響，海洋中的石油極易聚積于岸邊，對海灘環(huán)境造成污染，進而監(jiān)測海洋生物體中石油烴顯得尤為重要。目前檢測海洋生物體中石油烴的方法主要有紫外分光光度法、超聲萃取-氣相色譜法、紅外光譜法、熒光光度法。本文對用熒光光度法測定生物體中石油烴進行了多次分析探討，改進了萃取方式，使操作更簡捷、快速，進一步提高回收率。

1" 實驗部分

1.1" 儀器設備與試劑

熒光光度計（日立）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮）、數(shù)顯恒溫水浴振蕩器（上海博訊）、真空泵（鄭州長城科工貿(mào)）、超聲波（寧波海曙科生超聲）；氫氧化鈉（優(yōu)級純、科密歐）、無水乙醇（HPLC、科密歐）、二氯甲烷（HPLC、MREDA）、氯化鈉（優(yōu)級純、科密歐）、環(huán)己烷（HPLC、MREDA）、石油醚（HPLC、科密歐）。

1.2" 實驗方法

1.2.1" 本方法工作曲線的測定

分別量取0、0.10、0.30、0.50、0.70、0.90 mL油標準使用溶液（100 mg·L-1）于皂化瓶中；加入20 mL氫氧化鈉溶液（6 mol·L-1）和20 mL無水乙醇（優(yōu)級純），放入水浴恒溫振蕩器35 ℃中避光振蕩5 h，每小時振蕩1～2 min，至混合均勻；依次加入10 mL二氯甲烷、30 mL 飽和氯化鈉溶液和"" 100 mL水，放入超聲波中超聲10 min（注意放氣），靜置分層（若分層不好，應延長靜置時間），收集有機相；再用10 mL二氯甲烷超聲一次，合并有機相；45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干；用少量二氯甲烷溶解，全面轉(zhuǎn)移至100～200目（0.074～0.150 mm）的氧化鋁過柱，收集淋洗液，45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干；準確加入10.0 mL 環(huán)己烷溶解殘留物，將環(huán)己烷溶液移入"" 1 cm石英比色池內(nèi)，在激發(fā)波長310 nm、發(fā)射波長360 nm處進行熒光分光光度測定，以減空白后的相對熒光強度（Ii-Ib）為縱坐標、相應的石油烴含量為橫坐標，繪制工作曲線。

1.2.2" 國標法工作曲線的測定

分別量取0、0.10、0.30、0.50、0.70、0.90 mL油標準使用溶液（100 mg·L-1）于皂化瓶中；加入20 mL氫氧化鈉溶液（6 mol·L-1）在室溫下避光皂化8～12 h，加入20 mL無水乙醇（優(yōu)級純），充分搖勻，4 h后依次加入10 mL二氯甲烷、30 mL 飽和氯化鈉溶液和100 mL水，用分液漏斗萃?。ㄗ⒁夥艢猓?，靜置分層（若分層不好，應延長靜置時間），收集有機相；再用10 mL二氯甲烷萃取一次，合并有機相；50 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干；用氮吹將殘留二氯甲烷萃取液吹干；準確加入10.0 mL 石油醚溶解殘留物，將石油醚溶液移入1 cm石英比色池內(nèi)，在激發(fā)波長310 nm、發(fā)射波長360 nm處進行熒光分光光度測定，以減空白后的相對熒光強度（Ii-Ib）為縱坐標、相應的石油烴含量為橫坐標，繪制工作曲線。

1.2.3 "試樣的測定

準確稱取2～5 g（精確至0.001 g）試樣，按照上面步驟，制得樣品消化液，然后測定分析試樣的相對熒光強度（Is），以（Is - Ib）值從工作曲線上查出相應的石油烴的質(zhì)量濃度。

2" 結(jié)果分析

2.1" 工作曲線結(jié)果

測得油質(zhì)量濃度0～9.0 mg·L-1的標準曲線為y=91.58x+4.69，其中斜率K=91.58，截距a=4.69，系數(shù)r=0.999 1，線性較好，詳見圖1。

本方法與國標法比較第一大大縮短皂化時間，國標法室溫皂化12～16 h，本方法水浴35 ℃皂化" 5 h；第二增加過柱環(huán)節(jié)，在測定過程中減少組織纖維對結(jié)果的影響。從結(jié)果來看，本方法消化時間短，更便于操作，結(jié)果也較穩(wěn)定。

2.2" 檢出限

按照上述實驗步驟，進行了8次空白實驗，將測定結(jié)果換算為m=2.000 0 g時，參照《環(huán)境監(jiān)測分析方法標準制訂技術(shù)導則》 （HJ168）附錄A中方法檢出限的要求，測定結(jié)果詳見表1。

方法檢出限的公式如式（1）所示。

MDL=t（n-1，0.99）×S。"""""""" （1）

式中：MDL—方法檢出限；n—樣品的平行測定次數(shù)；

t—自由度為n-1且置信度為99%時的t 分布值（單側(cè)）；

S—n次平行測定的標準偏差。

當自由度為8且置信度為99%時，t值取2.998[7]。測定生物體中石油烴熒光光度法的方法檢出限為0.17 mg·kg-1，與國標法0.2 mg·kg-1比較，符合檢測要求。

2.3" 精密度

為了更好地驗證本方法的精密度，盡量減少整個測定過程產(chǎn)生的系統(tǒng)誤差和偶然誤差，對實際樣品按照上面的步驟進行處理以及上機測定其熒光強度，再換算為含油量，多次實驗結(jié)果見表2？

由測定結(jié)果可見，重復性相對標準偏差分別為4.4%和4.6%，優(yōu)于國標法的5.1%，表明本實驗精密度良好。

2.4" 準確度

為了更好地驗證本方法的準確度，盡量減少整個測定過程產(chǎn)生的系統(tǒng)誤差和偶然誤差，按照上述測定步驟，對實際樣品進行加標回收實驗，結(jié)果見表3。

從結(jié)果可見，對兩種實際樣品進行的加標回收實驗，加標回收率分別為90.8%和95%，滿足實驗室檢測需求，表明本實驗準確度良好。

3" 結(jié) 論

根據(jù)上面的測定步驟分析海洋生物體中的石油烴，對方法的工作曲線、精密度和準確度分別進行了分析，實驗結(jié)果表明該方法檢出限低，加標回收率較穩(wěn)定，精密度和準確度較好，能夠滿足檢測分析要求。本文研究的超聲萃取方法比國家標準方法振蕩萃取操作更簡捷，萃取更加完全，最后測定溶解液加入過柱環(huán)節(jié)減少組織纖維的干擾因素，測定結(jié)果更加穩(wěn)定。綜上所述，該方法更適用于海水生物中石油烴的測定。為了達到更好的檢測效果，還應注意以下幾點：

1）加入無水乙醇的目的主要是氫氧化鈉不溶于石油烴，溶于乙醇，進一步促進皂化反應，故先加入氫氧化鈉皂化后再加入無水乙醇和同時加入無水乙醇不會對實驗造成影響。

2）皂化效果不好會出現(xiàn)較深棕黃色及乳化現(xiàn)象，加入氯化鈉溶液增加萃取次數(shù)消除乳化，一旦出現(xiàn)上述現(xiàn)象增加萃取效果不佳時，可以增加離心過程，將制得10 mL消化液轉(zhuǎn)移到玻璃離心管離心5 min再測定效果更佳。

3）為了保證數(shù)據(jù)準確度，減少誤差，盡量多做幾個樣品空白。

4）嘗試超聲萃取和振蕩萃取兩種方式，結(jié)果表明超聲萃取比振蕩萃取操作更加簡單，便于分析，測定結(jié)果也更加精確，建議使用超聲萃取。

5）為了更好消除測定時因消解不全出現(xiàn)組織纖維對測定產(chǎn)生的干擾，在旋蒸盡干的情況下嘗試增加離心或過柱環(huán)節(jié)，經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)，過柱后再進行測定比離心后再測定，損失更小，結(jié)果更穩(wěn)定。

6）為了減少吸附在管壁上殘留對實驗造成的影響，使用的所有試管均在使用前用硝酸（1+1）浸泡24 h以上，再依次以自來水、純水沖洗至少3遍。

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Determination of Petroleum Hydrocarbons

in Marine Organisms by Ultrasonic Extraction

QIN Xiao

（Yantai Penglai District Marine Development and Fisheries Bureau， Yantai Shandong 265600， China）

Abstract： A method for the determination of petroleum hydrocarbons in marine organisms by pretreatment ultrasonic extraction combined with fluorescence spectrophotometry was established. After the sample was saponified with sodium hydroxide solution and anhydrous ethanol， it was extracted with dichloromethane. After the extraction liquid passed through the alumina column to remove the muscle tissue interference， nitrogen was used blown to the near dry， cyclohexane was used to fix volume， and the content of petroleum hydrocarbons in the organism was calculated by fluorescence detection. The results showed that the detection limit of petroleum hydrocarbon was 0.17 mg·kg-1， the recovery rate of spiked standard was 90.8%～95% in the content range of 20.0 ～25.0 mg·kg-1， and the relative standard deviation was 4.4%～4.6%. This method is more convenient to operate， has better repeatability， and can better meet the needs of the experiment. The problems that should be paid attention to in this experiment were summarized.

Key words：" Petroleum hydrocarbons; Ultrasonic extraction; Rate of recovery.