馬立勇

山東省聊城市陽谷縣畜牧獸醫(yī)事業(yè)發(fā)展中心，山東聊城 252300

0 引言

隨著我國經(jīng)濟(jì)發(fā)展，人民對生活質(zhì)量追求提升，市場對農(nóng)產(chǎn)品需求加大。為順應(yīng)市場需求，養(yǎng)牛業(yè)逐漸規(guī)?；s化，養(yǎng)殖牛數(shù)量逐漸增加，疫病發(fā)生率隨之升高，影響?zhàn)B牛業(yè)健康發(fā)展[1]。牛病毒性腹瀉（Bovine Viral Diarrhea，BVD）是由牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhea Virus，BVDV）引起的一種常見傳染病，屬于二類傳染病。一年四季均可發(fā)生，具有傳播速度快、傳播范圍廣、變異性強(qiáng)、致死率高等特點(diǎn)。最常見于散養(yǎng)犢牛群，一旦感染BVDV，致死率可達(dá)90%，給養(yǎng)牛業(yè)帶來嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失[2，3]。目前臨床對犢牛BVD治療常采用環(huán)丙沙星、林可霉素和頭孢菌素等抗生素[4]。但抗生素不合理使用，導(dǎo)致耐藥性和藥物殘留問題加劇，目前中藥在獸醫(yī)臨床上廣泛應(yīng)用，具綠色、可持續(xù)，且不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)。本試驗(yàn)探究中藥復(fù)方對犢牛BVD治療效果，為該病防治和中藥復(fù)方科學(xué)應(yīng)用提供參考。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用中藥復(fù)方主要由黃芩、大黃、生地、黨參、當(dāng)歸、柴胡等組成，購自當(dāng)?shù)刂兴幉氖袌觥Ｑ仔灾笜?biāo)白細(xì)胞介素1β、白細(xì)胞介素2、白細(xì)胞介素4、白細(xì)胞介素10、腫瘤壞死因子α；免疫指標(biāo)免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、免疫球蛋白A和CD4的ELISA檢測試劑盒均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)動物及分組

試驗(yàn)于2022年8—9月在山東省聊城市陽谷縣某私人養(yǎng)殖場進(jìn)行，該場2022年8月出現(xiàn)犢牛BVD，患牛精神不振、采食下降，出現(xiàn)腹瀉下痢，糞便呈黃白色黏稠狀，嚴(yán)重者見血樣糞便。挑選52 頭體重相近的患病犢牛，隨機(jī)分為四組，每組13 頭，即對照組、中藥復(fù)方低劑量組、中藥復(fù)方中劑量組和中藥復(fù)方高劑量組，分別口服0 g/次、100 g/次、150 g/次和200 g/次中藥復(fù)方，每日給藥2次，連續(xù)給藥5 d。試驗(yàn)期間觀察各組患病犢牛的臨床表現(xiàn)和癥狀。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

療效判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：試驗(yàn)結(jié)束時(shí)經(jīng)過給藥后患病犢牛精神和食欲恢復(fù)正常水平，腹瀉癥狀完全消失，糞便正常，硬度適中，為治愈；精神與食欲狀態(tài)好轉(zhuǎn)，腹瀉癥狀減輕，糞便逐漸成形，為有效；精神與食欲狀態(tài)未見好轉(zhuǎn)，腹瀉癥狀沒有變化甚至加重，為無效。

1.3.2 血清指標(biāo)測定

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)經(jīng)頸靜脈采集各組犢牛血樣，37 ℃靜置3 h，離心取上層血清備用待測，采用ELISA試劑盒檢測血清中炎性因子白細(xì)胞介素1β、白細(xì)胞介素2、白細(xì)胞介素4、白細(xì)胞介素10和腫瘤壞死因子α含量，以及免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、免疫球蛋白A和CD4含量。具體步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

所有數(shù)據(jù)均通過Excel軟件整理匯總，再用SPSS 26.0進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”形式表示，P＞0.05表示差異不顯著，P＜0.05表示差異顯著。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 中藥復(fù)方對犢牛BVD 的治療效果

如表1所示，對照組13 頭患病犢牛未見好轉(zhuǎn)，中藥復(fù)方低劑量組患病犢牛的有效數(shù)和治愈數(shù)分別為10 頭和6 頭，有效率和治愈率分別為76.92%和46.15%；中藥復(fù)方中劑量組患病犢牛的有效數(shù)和治愈數(shù)分別為11 頭和7 頭，有效率和治愈率分別為84.62%和53.85%；中藥復(fù)方高劑量組患病犢牛的有效數(shù)和治愈數(shù)分別為12 頭和9 頭，有效率和治愈率分別為92.31%和69.23%。

表1 中藥復(fù)方對犢牛BVD 的治療效果

2.2 中藥復(fù)方對BVD 患病犢牛炎性因子的影響

如表2所示，與對照組相比，中藥復(fù)方低、中和高劑量組患病犢牛血清中的白細(xì)胞介素1β、白細(xì)胞介素2和腫瘤壞死因子α含量顯著降低（P＜0.05），白細(xì)胞介素4含量顯著升高（P＜0.05），不同處理間白細(xì)胞介素10無顯著差異（P＞0.05）。

表2 中藥復(fù)方對BVD 患病犢牛炎性因子的影響 單位：pg/mL

2.3 中藥復(fù)方對BVD 患病犢牛免疫指標(biāo)的影響

如表3所示，與對照組相比，中藥復(fù)方中、高劑量組患病犢牛血清中的免疫球蛋白G顯著升高（P＜0.05）；中藥復(fù)方低、中和高劑量組患病犢牛血清中的免疫球蛋白A和CD4含量顯著升高（P＜0.05）。免疫球蛋白M含量隨復(fù)方中藥劑量提高有升高趨勢，但各組間差異不顯著（P＞0.05）。

表3 中藥復(fù)方對病毒性腹瀉患病犢牛免疫指標(biāo)的影響

3 討論與分析

3.1 中藥復(fù)方對犢牛BVD 的治療效果

牛病毒性腹瀉是牛養(yǎng)殖過程中的常發(fā)疾病之一，對犢牛危害極大。目前臨床上針對該病尚無特效的抗病毒藥物治療，多采用對癥治療，補(bǔ)液糾正脫水及使用抗生素來預(yù)防繼發(fā)感染[5]。隨著中獸醫(yī)治療手段推廣，臨床發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方對該病有良好治療效果。趙慶奎[6]給成年牛和犢牛分別使用西藥和中藥復(fù)方對比治療，發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方有效率達(dá)93.3%以上，明顯高于西藥治療的76.75%。王竹青[7]探討中藥復(fù)方在BVD中的治療效果，發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方對成年牛的總有效率為96%、對犢牛的總有效率為92%，均高于西藥治療組。李云[8]采用白術(shù)、烏梅、連翹、黃芩、金銀花組成中藥復(fù)方和乙酰甲喹西藥進(jìn)行對比治療試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方的有效率為88.9%、治愈率為82.2%，而西藥治療有效率為62.5%、治愈率為47.5%，兩者差異顯著，中藥復(fù)方效果更佳。本試驗(yàn)結(jié)果與上述研究結(jié)果類似，中藥復(fù)方高劑量組患病犢牛的有效率和治愈率分別為92.31%和69.23%，說明中藥復(fù)方對犢牛BVD具有良好地治療效果，其中中藥復(fù)方高劑量組效果較好。

3.2 中藥復(fù)方對BVD 患病犢牛炎性因子的影響

犢牛腹瀉在中獸醫(yī)傳統(tǒng)理論中屬于外感寒熱、肝脾不和、濕熱泄瀉所致，中藥復(fù)方是綠色天然物質(zhì)，具有安全無毒、消炎抗菌等作用。研究者主要以清熱解毒、澀腸止瀉為治療原則，開發(fā)針對犢牛病毒性腹瀉的中藥復(fù)方，取得良好進(jìn)展[9，10]。吳海濤等[11]研究發(fā)現(xiàn)，葛根多糖可有效降低腹瀉犢牛白細(xì)胞介素1β、白細(xì)胞介素2和腫瘤壞死因子α和二胺氧化酶（DAO）含量。董書偉等[12，13]根據(jù)中獸醫(yī)理論自擬中藥復(fù)方“黃白雙花口服液”，通過臨床試驗(yàn)證實(shí)該方對犢牛腹瀉治療作用，并利用生物信息學(xué)手段，結(jié)合系統(tǒng)藥理學(xué)分析該方可能通過ATK1、絲裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、白細(xì)胞介素2（IL-2）、白細(xì)胞介素6（IL-6）和白介素8（IL-8）等靶點(diǎn)，發(fā)揮抗炎抗微生物作用。上述研究與本試驗(yàn)結(jié)果一致，本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對照組相比，中藥復(fù)方低、中和高劑量組患病犢牛血清中的白細(xì)胞介素1β、白細(xì)胞介素2和腫瘤壞死因子α含量顯著升高，白細(xì)胞介素4含量顯著降低，說明中藥復(fù)方可有效減輕腹瀉犢牛的炎性反應(yīng)，其中中藥復(fù)方高劑量組效果較好。

3.3 中藥復(fù)方對BVD 患病犢牛免疫指標(biāo)的影響

新生犢牛免疫器官尚未完全發(fā)育，免疫機(jī)能低下，極易被病原菌感染導(dǎo)致BVD，且健康犢牛感染后會進(jìn)一步抑制免疫系統(tǒng)，誘發(fā)多種并發(fā)癥[14]。研究表明，患病毒性腹瀉的犢牛較健康犢牛血清中免疫球蛋白G和免疫球蛋白A含量顯著降低，更易造成腸道損傷，加劇感染[15]。中藥復(fù)方具有多種有效活性物質(zhì)，被證明對新生犢牛的血清指標(biāo)、細(xì)胞免疫和體液免疫水平均有良好改善作用[16]。呂信等[17，18]研究發(fā)現(xiàn)，中藥復(fù)方制劑明顯提高犢牛免疫機(jī)能，降低腹瀉率。本試驗(yàn)與上述結(jié)果一致，本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對照組相比，中藥復(fù)方能夠提高患病犢牛血清中的免疫球蛋白G＝、免疫球蛋白A和CD4含量升高，說明中藥復(fù)方能明顯提高病毒性腹瀉患牛的免疫機(jī)能，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，促進(jìn)機(jī)體快速恢復(fù)，其中中藥復(fù)方高劑量組效果較好。

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，中藥復(fù)方對犢牛牛病毒性腹瀉有良好治療作用，能改善炎性因子水平，提高免疫功能。且在本實(shí)驗(yàn)條件下，中藥復(fù)方的最佳添加劑量為200 g/次。