洪佳,黃金玲,楊瓊瓊,汪晶,李晶

卵巢癌的發(fā)病機(jī)制與環(huán)境因素及遺傳因素有關(guān),其中基因表達(dá)異常為主要致病病因,研究發(fā)現(xiàn)多種基因表達(dá)異常與卵巢癌病情及預(yù)后密切相關(guān),在卵巢癌病情及預(yù)后評估中敏感度及特異度高于傳統(tǒng)的病理分期[1-2]。miR-200c可通過多個信號傳導(dǎo)通路調(diào)控腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,在卵巢癌等多種惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)[3-4]。MORC家族CW型鋅指蛋白2(MORC family CW-type zinc finger 2,MORC2)為新近發(fā)現(xiàn)的促癌基因,具有調(diào)控細(xì)胞增殖、自噬及染色質(zhì)重塑等功能,為乳腺癌等多種惡性腫瘤預(yù)后不良的標(biāo)志物[5-6]。目前miR-200c和MORC2在卵巢癌病情及預(yù)后評估中的臨床價值尚無相關(guān)研究。本研究旨在探討miR-200c聯(lián)合MORC2檢測在卵巢癌病情及預(yù)后評估中的臨床價值,報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2017年1月—2019年12月武漢大學(xué)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科診治的卵巢癌患者103例為卵巢癌組,另以同期卵巢良性疾病患者60例(包括卵巢囊腫、卵巢炎等)作為對照組。2組研究對象在年齡、卡氏評分、體表面積、糖尿病史、高血壓史及HPV感染方面比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05), 見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)(WHU-1045),患者或家屬知情同意并簽署知情同意書。

表1 對照組及卵巢癌組患者臨床資料比較

1.2 卵巢癌組病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診;②初次診治,既往無卵巢癌病史,未行相關(guān)治療(包括不限于手術(shù)、化療等);③均經(jīng)增強(qiáng)CT、MR或超聲檢查明確國際婦產(chǎn)科協(xié)會(FIGO)分期,臨床病理資料明確;④患者能配合本研究,隨訪未脫落。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他良惡性腫瘤、卵巢轉(zhuǎn)移瘤等;② 合并精神神經(jīng)疾病。

1.3 觀測指標(biāo)與方法

1.3.1 miR-200c及MORC2表達(dá)檢測:卵巢癌組取腫瘤組織及癌旁組織(距離腫瘤組織>3 cm),對照組患者取卵巢活檢組織。液氮下碾磨組織標(biāo)本,使用上海碧云天公司TRIzol試劑盒(編號R0016)提取總RNA。采用實時熒光定量PCR法檢測miR-200c及MORC2表達(dá),檢測試劑盒為BeyoFastTMSYBR Green qPCR Mix(購自上海碧云天公司,編號D7260),檢測儀器為美國ABI公司7900HT Fast實時熒光定量PCR系統(tǒng)。引物序列:miR-200c上游5’-GGATAATACTGCCGGGT-3’,下游5’-GTGCGTGTCGTGGAGTC-3’;MORC2上游5’-GGAGGTTCCTTCTCCCAAAGTC-3’,下游5’-CAGAAACTGCGACACTCCGCTT-3’;U6上游5’-GCTTCGGCA GCACATATACTAAAAT-3’,下游5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’;GAPDH上游5’-TGATGGGTGTGAACCACGAG-3’,下游5’-CCCTTCCACGATGCCAAAGT-3’。PCR擴(kuò)增體系25 μl;反應(yīng)條件為:94℃預(yù)變性5 min、95℃下15 s、60℃退火40 s、61℃延伸擴(kuò)增40 s,共計38個循環(huán),最后一輪72℃反應(yīng)8 min。miR-200c選擇U6為內(nèi)參,MORC2選擇GAPDH為內(nèi)參,分別計算miR-200c、MORC2相對表達(dá)量。

1.3.2 隨訪:卵巢癌組患者每3個月隨訪1次,隨訪時間至2023年10月,隨訪內(nèi)容包括影像學(xué)檢查、腫瘤標(biāo)志物(CA153)等,統(tǒng)計患者預(yù)后狀況(生存、死亡),其中隨訪2年時出現(xiàn)死亡、腫瘤復(fù)發(fā)進(jìn)展、嚴(yán)重并發(fā)癥(完全性腸梗阻、惡病質(zhì)、直腸陰道瘺)等定義為預(yù)后不良。

2 結(jié) 果

2.1 2組miR-200c和MORC2表達(dá)比較 卵巢癌組患者腫瘤組織miR-200c、MORC2表達(dá)高于癌旁組織和對照組(P<0.01),卵巢癌組癌旁組織與對照組miR-200c、MORC2表達(dá)的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表2。

表2 對照組和卵巢癌組病變組織miR-200c和MORC2表達(dá)比較

2.2 卵巢癌患者miR-200c、MORC2表達(dá)在不同臨床病理中差異比較 卵巢癌組患者腫瘤組織miR-200c、MORC2表達(dá)在腫瘤低分化、有惡性腹水、腫瘤最大徑≥5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及FIGO分期 Ⅲ～Ⅳ期患者高于中-高分化、無惡性腹水、腫瘤最大徑<5 cm、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及FIGO Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.01),見表3。

表3 卵巢癌患者不同臨床病理因素中腫瘤組織miR-200c、MORC2表達(dá)比較

2.3 miR-200c、MORC2預(yù)測卵巢癌患者2年預(yù)后不良效能 繪制miR-200c、MORC2預(yù)測卵巢癌患者2年預(yù)后不良效能的ROC曲線,并計算曲線下面積(AUC),結(jié)果顯示:miR-200c、MORC2及二者聯(lián)合預(yù)測卵巢癌患者2年預(yù)后不良的AUC分別為0.786、0.792、0.901,二者聯(lián)合優(yōu)于miR-200c、MORC2單獨預(yù)測效能(Z=8.239、8.025,P均<0.001),見表4。

表4 miR-200c、MORC2預(yù)測卵巢癌患者2年預(yù)后不良效能分析

2.4 卵巢癌患者死亡危險因素Logistic回歸分析 以卵巢癌患者死亡為因變量(賦值:是為“1”;否為“0”),以上述結(jié)果中P<0.05項目為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示:miR-200c≥0.78、MORC2≥0.65、低分化、有惡性腹水、腫瘤最大徑≥5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期是卵巢癌患者死亡的獨立危險因素(P<0.01),見表5。

表5 卵巢癌患者死亡危險的多因素Logistic回歸分析

2.5 miR-200c、MORC2表達(dá)與卵巢癌生存期的關(guān)系 卵巢癌組miR-200c≥0.78且MORC2≥0.65的患者中位生存期(27.4±5.8)月低于miR-200c<0.78或MORC2<0.65的中位生存期(34.8±6.5)月(Log-Rankχ2=16.371,P<0.05),見圖1。

圖1 卵巢癌患者miR-200c、MORC2表達(dá)與生存期的關(guān)系

3 討 論

卵巢癌的發(fā)病機(jī)制與各種誘因?qū)е禄虮磉_(dá)異常有關(guān),其中miRNA在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸中扮演重要角色,具體機(jī)制包括調(diào)控細(xì)胞周期、凋亡、遷移、侵襲及腫瘤免疫微環(huán)境等[7]。研究發(fā)現(xiàn)miRNA貫穿卵巢癌的整個病程,與病情嚴(yán)重程度及生存期相關(guān),可作為卵巢癌病情及預(yù)后評估的標(biāo)志物,檢測miRNA變化可為卵巢癌臨床診療提供客觀證據(jù)[8-9]。miR-200c具有調(diào)控腫瘤細(xì)胞遷移侵襲、微血管生成及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等功能,與惡性腫瘤發(fā)病機(jī)制及預(yù)后相關(guān),miR-200c表達(dá)升高為預(yù)后不良的危險因素[10-11]。Kang等[12]研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組織miR-200c-3p為結(jié)直腸癌預(yù)后評估的標(biāo)志物,miR-200c-3p表達(dá)與總生存期呈負(fù)相關(guān)。Guo等[13]研究發(fā)現(xiàn)miR-200c 通過下調(diào) PTEN 表達(dá)促進(jìn)乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。Ankasha等[14]發(fā)現(xiàn)miR-200c-3p通過靶向DLC1的3'-非翻譯區(qū)而發(fā)揮在高級別漿液性卵巢癌進(jìn)展中的促進(jìn)作用。本研究中卵巢癌患者miR-200c表達(dá)顯著高于癌旁組織和對照組,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)miR-200c表達(dá)與腫瘤分化程度、惡性腹水、腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及FIGO分期相關(guān),且miR-200c≥0.78為卵巢癌患者死亡的獨立危險因素,提示miR-200c與卵巢癌發(fā)病機(jī)制、病情及預(yù)后相關(guān)。

研究發(fā)現(xiàn)MORC2在染色質(zhì)重塑、DNA損傷修復(fù)、表觀遺傳調(diào)控和轉(zhuǎn)錄調(diào)控中扮演關(guān)鍵角色,在多種惡性腫瘤中可檢測到MORC2表達(dá)異常,為惡性腫瘤潛在的治療靶點[15-16]。Saroha等[17]研究發(fā)現(xiàn)MORC2通過β-catenin信號通路促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖及遷移。Guddeti等[18]發(fā)現(xiàn)MORC2和MAX有助于糖酵解酶的表達(dá)、乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移。Liao等[19]研究發(fā)現(xiàn)MORC2高表達(dá)的三陰性乳腺癌患者對新輔助化療敏感度下降,為預(yù)后不良的標(biāo)志物。結(jié)合國內(nèi)外新近研究進(jìn)展,推測MORC2在卵巢癌中具有促癌作用,為其預(yù)后不良的影響因素。本研究中卵巢癌患者M(jìn)ORC2表達(dá)顯著高于癌旁組織和對照組,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)MORC2表達(dá)與腫瘤分化程度、惡性腹水、腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及FIGO分期相關(guān),且MORC2≥0.65為卵巢癌患者死亡的獨立危險因素,提示MORC2表達(dá)與卵巢癌病情及預(yù)后相關(guān)。

目前卵巢癌病情及預(yù)后評估指標(biāo)包括腫瘤標(biāo)志物及病理組織分期,但存在敏感度及特異度低、普適性差及可重復(fù)性低等缺點,研究卵巢癌新型標(biāo)志物在改善卵巢癌療效及預(yù)后中至關(guān)重要[20-21]。隨著檢測技術(shù)的提高及卵巢癌分子機(jī)制的闡明,基因水平的檢測在卵巢癌中的臨床價值更高,但單個基因水平的檢測指標(biāo)因缺乏組織特異性而導(dǎo)致其敏感度及特異性低,臨床上可通過多項指標(biāo)聯(lián)合檢測以顯著提高敏感度及特異度[22-23]。本研究中,miR-200c聯(lián)合MORC2預(yù)測卵巢癌2年預(yù)后不良敏感度、特異度及AUC均高于單獨預(yù)測,表明二者聯(lián)合檢測可顯著提高預(yù)測卵巢癌預(yù)后不良的效能,在卵巢癌臨床診療中應(yīng)密切監(jiān)測miR-200c及MORC2以提高診療水平。

綜上所述,卵巢癌患者miR-200c及MORC2表達(dá)顯著升高,在卵巢癌病情及預(yù)后評估中具有重要臨床價值,兩者聯(lián)合檢測時可顯著提高預(yù)測卵巢癌預(yù)后不良的敏感度及特異度。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

洪佳:設(shè)計研究方案,實施研究過程,論文撰寫;黃金玲:進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析;楊瓊瓊、汪晶:實施研究過程,資料搜集整理,論文修改;李晶:提出研究思路,分析試驗數(shù)據(jù),論文審核