王秋萍 楊邦祝 宋善敏 甘夢(mèng)蘭 李滿香 何珺 雷陽(yáng)（81）

摘要：建立了測(cè)定益母草中鹽酸水蘇堿含量的HPLC-RID方法，并測(cè)定分析了14家藥廠的益母草中鹽酸水蘇堿的含量。結(jié)果表明：以Mercury益母草專(zhuān)用柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）為色譜柱，以70%乙腈溶液為流動(dòng)相、流速1.0 mL/min、柱溫45℃的條件下采用示差檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，鹽酸水蘇堿在0.100～0.523 mg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；回歸方程為y=91 519 x+1 342.2 （R2=0.991 6），平均回收率100.07 %，RSD為0.71 %，且該方法具有重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便、快速、穩(wěn)定、易于普及等優(yōu)點(diǎn)；各廠家的益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量差異較大，14家廠家中僅有1367和8656這2家的益母草藥材符合藥典標(biāo)準(zhǔn)；鹽酸水蘇堿含量與益母草藥材性狀具有關(guān)聯(lián)性，市民、藥企和中藥商等在購(gòu)買(mǎi)益母草藥材時(shí)，建議選擇性狀為葉多、青綠、莖細(xì)的益母草藥材。

關(guān)鍵詞： 益母草；鹽酸水蘇堿； HPLC-RID；不同廠家；藥材性狀

中圖分類(lèi)號(hào)：S567.2; R917文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1006-060X（2024）02-0081-04

Determination of Stachydrine Hydrochloride in Leonuri Herba from Different

Manufacturers by HPLC-RID

WANG Qiu-ping1，2，YANG Bang-zhu1，SONG Shan-min1，GAN Meng-lan1，LI Man-xiang1，HE Jun2，LEI Yang1

（1. Guizhou Vocational College of Agriculture， Qingzhen 551400， PRC;

2. Guizhou Provincial Biochemical Engineering Center， Guizhou University， Guiyang 550025， PRC）

Abstract： A HPLC-RID method was established to determine the content of stachydrine hydrochloride in Leonuri Herba， and then the content of stachydrine hydrochloride in the Leonuri Herba samples from 14 manufacturers was determined. The results indicated that the content of stachydrine hydrochloride demonstrated a good linear relationship within the range of 0.100–0.523 mg/mL using the differential detector with the Mercury column （250 mm × 4.6 mm， 5 μm）， mobile phase of 70：30 acetonitrile-water solution， flow rate of 1.0 mL/min， and column temperature of 45℃. The regression equation was y=91 519 x+1 342.2 （R2=0.991 6）， and the average recovery rate was 100.07% （RSD of 0.71%）. The established HPLC-RID method was characterized by good repeatability， simple operation， rapid determination with stable results， and easy popularization. The content of stachydrine hydrochloride varied significantly among samples from different manufacturers， and only the samples from manufacturers 1367 and 8656 met the standards in the Chinese Pharmacopoeia. The content of stachydrine hydrochloride was associated with the medicinal characteristics of Leonuri Herba. According to the results， we suggested that users， pharmaceutical enterprises， and Chinese medicine manufacturers chose the Leonuri Herba materials with rich green leaves and fine stems.

Key words： Leonuri Herba; stachydrine hydrochloride; HPLC-RID; different manufacturers; medicinal characteristics

益母草（Leonurus japonicus Houtt.）為唇形科益母草屬植物的新鮮或干燥地上部分，別名益母艾、野麻、坤草等，全國(guó)大部分地區(qū)均有種植[1]。益母草中主要有效成分為益母草堿和鹽酸水蘇堿[2]。藥理作用研究表明，益母草中的生物堿具有顯著的興奮子宮、鎮(zhèn)痛抗炎、改善血液流變學(xué)、抗血栓等多種藥理活性[3-5]，為治療月經(jīng)不調(diào)、胎漏難產(chǎn)、產(chǎn)后惡露不盡、瘀血腹痛等婦科病及抗心肌缺血臨床治療的常用良藥[6-8]。目前市面上以益母草為單一原料制成有糖型或無(wú)糖型益母草顆粒的國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)廠家多達(dá)185家，益母草原藥材中鹽酸水蘇堿的含量檢測(cè)是益母草顆粒生產(chǎn)中的必要步驟。由于各廠家生產(chǎn)的益母草顆粒中鹽酸水蘇堿含量的差異，臨床和藥理試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，有病人在服用常規(guī)或過(guò)量益母草藥材后，人體出現(xiàn)過(guò)敏、腹瀉等不良反應(yīng)，有的甚至出現(xiàn)嚴(yán)重的肝、腎等臟器損傷[9-12]。因此，益母草藥材質(zhì)量的把控至關(guān)重要，而高效快捷的鹽酸水蘇堿檢測(cè)技術(shù)也顯得尤為迫切。目前，用于測(cè)定益母草中鹽酸水蘇堿含量的方法有HPLC-UV法、HPLC-ELSD法、HPLC-MS法、HPLC-DAD法等[13-16]，它們大多儀器昂貴、操作繁雜、維護(hù)較難，不便于在中小型企業(yè)中普及應(yīng)用。因此，亟需建立一種操作簡(jiǎn)便、快速、穩(wěn)定、易于普及的方法，以便各類(lèi)型藥企普及益母草藥材中鹽酸水蘇堿的檢測(cè)。

市售的益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量常常存在較大差異，與藥企、中醫(yī)院等具有檢測(cè)儀器相比，普通市民在購(gòu)買(mǎi)益母草藥材時(shí)很難確定其有效成分含量。而鹽酸水蘇堿含量往往與益母草藥材性狀具有很大的關(guān)聯(lián)，分析不同廠家益母草藥材性狀與鹽酸水蘇堿含量的關(guān)系，可為市民、藥企和中藥商購(gòu)買(mǎi)益母草藥材提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 主要儀器 1100 系列分析型HPLC[安捷倫科技（中國(guó)）有限公司]，Mercury益母草專(zhuān)用柱（大連依利特分析儀器有限公司），BSA124S電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]；其他為一般常規(guī)儀器。

1.1.2 試藥與試劑 鹽酸水蘇堿對(duì)照品（100%，批號(hào)122683，中國(guó)食品藥品檢定研究院），益母草藥材（貴陽(yáng)市太升中藥材市場(chǎng)的誠(chéng)信、啟源、惠源等14家中藥廠家，用廠家老板的手機(jī)尾號(hào)后4位作為該藥材的代號(hào)），乙腈（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；其他為常規(guī)試劑（分析純）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Mercury益母草專(zhuān)用柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為70%乙腈溶液；流速1.0 mL/min；柱溫45℃；示差檢測(cè)器，進(jìn)樣量10 μL，樣品上機(jī)前過(guò)0.45 μm微孔濾膜。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的對(duì)照品適量，加70%乙醇制成含鹽酸水蘇堿0.100 mg/mL的溶液，搖勻備用。

1.2.3 供試品溶液制備 參照2015版《中華人民共和國(guó)藥典》[12]制備，樣品置于70℃烘箱烘至恒重，粉碎過(guò)40目篩，以八分法對(duì)角取樣。稱取樣品粉末約1 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精準(zhǔn)加入70%乙醇25 mL，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失重量，搖勻過(guò)濾備用。

1.2.4 方法學(xué)考察 （1）專(zhuān)屬性試驗(yàn)：取對(duì)照品、供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。（2）線性關(guān)系考察：精密稱取干燥至恒重的對(duì)照品適量，加70%乙醇制成鹽酸水蘇堿濃度分別為0.100、0.201、0.300、0.402、0.523 mg/mL的溶液，搖勻，按1.2.1色譜條件進(jìn)行HPLC分析，記錄色譜圖。以鹽酸水蘇堿的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析。（3）重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品6份，按1.2.3配制供試品溶液，按1.2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)測(cè)定值計(jì)算RSD。（4）穩(wěn)定性試驗(yàn)：按1.2.3配置供試品溶液，靜置0、2、4、6、8、10、12 h后分別進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，根據(jù)測(cè)定值計(jì)算RSD。（5）精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，記錄色譜圖，按測(cè)定值計(jì)算RSD。（6）回收率試驗(yàn)：精密稱取益母草粉末2 g，按1.2.3方法制成待測(cè)樣品，取6份樣品，其中：2份精密加入0.273 mg/mL的鹽酸水蘇堿1 mL；2份精密加入0.341 mg/mL的鹽酸水蘇堿1 mL；2份精密加入0.409 mg/mL的鹽酸水蘇堿1 mL。按1.2.1色譜條件分別測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算平均回收率和RSD值。

1.2.5 不同廠家益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量的測(cè)定 按1.2.3的方法處理14個(gè)廠家的4批次益母草藥材，配制成供試品溶液，按1.2.1色譜條件分別進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算各廠家各批次藥材的鹽酸水蘇堿含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2007軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)照品及樣品的HPLC圖譜

分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液進(jìn)行HPLC分析，色譜圖如圖1所示，鹽酸水蘇堿的出峰時(shí)間約為11 min，峰型完整，無(wú)干擾。

2.2 方法學(xué)考察結(jié)果

2.2.1 線性關(guān)系考察 回歸方程為y=91 519 x+1 342.2，

R2為0.991 6，表明建立的回歸方程相關(guān)性良好。此外，回歸方程的線性范圍為0.100～0.523 mg/mL。

2.2.2 重復(fù)性試驗(yàn) 鹽酸水蘇堿含量為0.66%，其RSD值為0.23%，表明該檢測(cè)方法的重復(fù)性良好。

2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 鹽酸水蘇堿含量為0.66%，其RSD值為0.29%，表明12 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 由表1可知，鹽酸水蘇堿的平均加樣回收率為100.07 %，RSD為0.71 %，表明該檢測(cè)方法的精密度良好。

2.3 不同廠家益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量測(cè)定

由表2可知，益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量最高的是廠家1367，達(dá)0.824%，其藥材性狀為葉多、葉綠、莖細(xì)；其次為廠家8656，鹽酸水蘇堿含量達(dá)0.679%，其藥材性狀為葉多、青綠、莖細(xì)。益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量在0.30%～0.50%的廠家有5083、8299、4368、3606、1458，其藥材性狀大多為色青綠或略黃、莖略多或莖粗。益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量在0.30%以下的廠家有5918、6813、7947、4636、2356、2768、2501，其藥材性狀大多為莖多葉少、葉色略黃、莖粗。2015版《中華人民共國(guó)藥典》規(guī)定：益母草藥材按干燥品計(jì)算，其鹽酸水蘇堿（C7H13NO2·HCl）含量不得少于0.50 %[15]，表明僅有廠家1367和8656的益母草藥材符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。因此，市民、藥企和中藥商等在購(gòu)買(mǎi)益母草藥材時(shí)，應(yīng)選擇性狀為葉多、青綠、莖細(xì)的益母草藥材。

2.4 符合標(biāo)準(zhǔn)藥材復(fù)檢

從符合標(biāo)準(zhǔn)的2廠家購(gòu)買(mǎi)大批量益母草藥材，復(fù)檢其益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量分別為0.66% 和0.79%，均大于0.50%的要求。

3 小結(jié)與討論

益母草中鹽酸水蘇堿屬于強(qiáng)極性的酸堿兩性小分子化合物，反相色譜柱較難將其分離，常用的C18柱也較難將其分離[13]。該研究采用的正向酰胺柱具有良好的分離效果，克服了以上不足。

該研究所用樣品上機(jī)前均過(guò)0.45 μm微孔濾膜處理，可較好地保護(hù)色譜柱及儀器，同時(shí)也可減少污染或雜質(zhì)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。

李偉等[13]報(bào)道的益母草原藥材鹽酸水蘇堿的檢測(cè)方法為HPLC-ELSD（蒸發(fā)光散射檢測(cè)器），使用該方法需要有較高的飄移管溫度和一定的載氣體積流量，耗時(shí)耗能耗材。周超等[14]采用HPLC-MS法同時(shí)測(cè)定益母草及益母草顆粒中鹽酸水蘇堿及益母草堿含量時(shí)，流動(dòng)相需要梯度洗脫分流進(jìn)入質(zhì)譜儀，對(duì)柱溫、毛細(xì)管電壓、探頭溫度、錐孔電壓、定量離子等都有一定的要求，儀器價(jià)格較貴、操作繁雜、不易普及；該研究建立的HPLC-RID法測(cè)定益母草中鹽酸水蘇堿含量與前人研究已報(bào)道的HPLC-ELSD[13]、HPLC-MS[14]、HPLC-UV[15]、HPLC-DAD[16]法相比，具有重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便、快速、穩(wěn)定、易于普及等優(yōu)點(diǎn)，可滿足一般藥企對(duì)益母草藥材的質(zhì)量控制。

該研究對(duì)市場(chǎng)上不同廠家益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各廠家的益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量差異較大，14家廠家中僅有1367和8656這2家的益母草藥材符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。此外，鹽酸水蘇堿的含量與益母草藥材性狀有較大關(guān)聯(lián)度，鹽酸水蘇堿含量較高的益母草藥材性狀大多為葉多、青綠、莖細(xì)，含量較低的益母草藥材性狀大多為莖多葉少、葉色略黃、莖粗。因此，市民、藥企和中藥商等在購(gòu)買(mǎi)益母草藥材時(shí)，應(yīng)選擇性狀為葉多、青綠、莖細(xì)的益母草藥材。

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（責(zé)任編輯：張煥裕）