謝平 次仁旺姆 楊麗瓊 達(dá)娃卓瑪

【摘 要】 目的：修訂提高阿如久巴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：參照《中國(guó)藥典》2020版四部通用檢測(cè)方法分別測(cè)定了阿如久巴丸的水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物；采用薄層色譜法（TLC）對(duì)阿如久巴丸中訶子、紅花進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果：阿如久巴丸中訶子、紅花的薄層色譜斑點(diǎn)清晰，分離度好；阿如久巴丸藥材的水分含量平均值為6.99%；阿如久巴丸的總灰分含量平均值為21.43%，建議總灰分不得過26.0%，酸不溶性灰分平均含量為0.296%，建議酸不溶性灰分不得過0.36%；浸出物含量平均值為33.35%，建議浸出物含量不得少于27.0%。結(jié)論：所建立的方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，能夠用于阿如久巴丸的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 阿如久巴丸；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；訶子；紅花

【中圖分類號(hào)】R284.1?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2024）02-0046-05

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.02.zgmzmjyyzz202402010

Study on the Quality Standard of Zang Medicine Arujiuba pills

XIE Ping Cirenwangmu YANG Liqiong Dawazhuoma

Xizang Food and Drug Inspection and Research Institute;NMPA Key? Laboratory

of Quality Evaluation Research in Traditional Chinese Medicine.Lhasa 850000，China

Abstract：Objective Revise and improve the quality standard of Arujiuba Pills.Methods The moisture，total ash，acid insoluble ash and leachate of Arujiuba Pills were determined according to the four general test methods of the Chinese Pharmacopoeia 2020 edition;Qualitative identification of chebula and saffron in Arujiuba Pills by thin layer chromatography （TLC）.Results Thin-layer chromatography of chebula and saffron in Arujiuba Pills has clear spots and good separation;The average moisture content of the Arujiuba Pills was 6.99%;The average total ash content of Arujiuba Pills is 21.43% and it is recommended that the total ash content should not exceed 26.00%;The average acid insoluble ash content was 0.296% and it is recommended that the acid insoluble ash content should not exceed 0.36%;The average leachate content was 33.35% and it is recommended that the leachate content should not be less than 27.0%.Conclusion The method developed is simple to operate，accurate and can be used for quality control of Arujiuba Pills.

Keywords：Arujiuba Pills;Quality Standards;Thin Layer Chromatography;Chebula;Saffron

阿如久巴丸（散）系藏族驗(yàn)方，目前生產(chǎn)廠家有金哈達(dá)藏藥廠、西藏門孜康制劑中心、神猴藏藥廠等。阿如久巴丸即十味訶子丸，但為尊重傳統(tǒng)用藥習(xí)慣，在藥品注冊(cè)中由訶子、藏茜草、紅花、刀豆、豆蔻、山礬葉、紫草茸、松蒂等十一味藥味加工制成丸劑水丸，呈棕灰色至棕褐色，氣芳香，味微酸、苦。具有清腎熱、止痛、利尿等作用。臨床上用于腎炎、泌尿生殖系統(tǒng)炎癥及結(jié)石引起的尿頻、尿急、尿痛、下腹部疼痛、腰膝酸痛、拖足跛行、下肢麻木等［1-2］。

本研究通過顯微鏡觀察所收集到的制劑，能夠準(zhǔn)確描述制劑粉末的顯微特征；采用薄層色譜法進(jìn)行鑒別，對(duì)點(diǎn)樣量、展開劑進(jìn)行考察，確定最佳色譜條件；對(duì)檢查項(xiàng)下的水分、灰分以及酸不溶性灰分等進(jìn)行測(cè)定；并對(duì)浸出物含量進(jìn)行了測(cè)定。本研究對(duì)具有阿如久巴丸生產(chǎn)批準(zhǔn)文號(hào)的生產(chǎn)企業(yè)及制劑室進(jìn)行樣品和原料藥材的收集，依次對(duì)收集的樣品展開上述項(xiàng)目的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，研究過程中參考了《中國(guó)藥典》《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（藏藥）》1995年版第一冊(cè)以及十味訶子丸（阿如久巴丸）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的文獻(xiàn)報(bào)道［1，3，4］。擬定訶子、紅花和藏茜草的顯微鑒別；擬定訶子和紅花藥味的TLC鑒別。本研究對(duì)藏藥阿如久巴丸質(zhì)量控制提供了技術(shù)支持。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 正置光學(xué)顯微鏡（日本尼康，Nikon Eclipse E1000）；電子天平（AL104型，瑞士METTLER-TOLEDO有限公司）；紫外燈分析儀（ZF-I型，上海顧村電光儀器廠）；薄層層析硅膠板：①硅膠G板（青島海洋化工有限公司）；②硅膠G板（煙臺(tái)江友硅膠開發(fā)有限公司）；③硅膠G板（青島海浪硅膠干燥劑公司）。電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱、馬弗爐、可控調(diào)溫電爐、電熱恒溫水浴鍋等。

1.2 試藥 本實(shí)驗(yàn)所使用的藥材來(lái)自5個(gè)廠家共5個(gè)批次的樣品，具體情況見表1。紅花對(duì)照藥材購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院（批號(hào)：110709-200803）；訶子對(duì)照藥材購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院（批號(hào)：121015-201605）。二甲苯、中性樹膠、分析純鹽酸，超純水、甲醇、無(wú)水乙醇、碘化鉍鉀、濃硫酸等所用試劑均是國(guó)產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別 取5批阿如久巴丸樣品粉末及按處方自配阿如久巴丸粉末2g，過4號(hào)篩。將過篩后的粉末用解剖針刮出均勻涂在載玻片上，滴加稀甘油封片，蓋上蓋玻片后分別在40×、100×、400×顯微鏡下觀察。結(jié)果如圖1所示。

根據(jù)以上顯微結(jié)果，標(biāo)準(zhǔn)敘述為：取本品，置顯微鏡下觀察石細(xì)胞類方形、類多角形或呈纖維狀，直徑14～40 μm，長(zhǎng)至130 μm，壁厚，孔溝細(xì)密（訶子）。有長(zhǎng)管分泌細(xì)胞，含黃棕色至紅棕色分泌物；花粉粒類圓形、橢圓形或橄欖形，直徑約至60 μm，具3個(gè)萌發(fā)孔，外壁有齒狀突起（紅花）。非腺毛基部膨大，整體呈長(zhǎng)圓錐狀；木纖維孔紋明顯；紅棕色內(nèi)含物多散在（藏茜草）。

2.2 薄層色譜鑒別

2.2.1 訶子薄層色譜鑒別［2-5］ 稱取阿如久巴丸樣品粉末2 g，置具塞錐形瓶中，加乙酸乙酯50 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液。按處方中各藥味的比例，自配不含訶子的藥材粉末作為陰性樣品，按照供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。取訶子對(duì)照藥材0.5 g，同供試品溶液制備方法制備對(duì)照藥材溶液。將上述制備的供試品，陰性對(duì)照以及對(duì)照藥材溶液用微量進(jìn)樣器點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板，供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各取10 μL，對(duì)照藥材溶液3 μL，展開劑用三氯甲烷-丙酮-甲酸（7∶2∶1），待其預(yù)飽和20 min后，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，觀察到各批次供試品溶液與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同藍(lán)色斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰。3批供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。該鑒別方法對(duì)該藥中訶子的鑒別具有很好的適應(yīng)性，分離度好，Rf值適中，重現(xiàn)性較好。結(jié)果如圖2所示。

本研究考察了3個(gè)展開系統(tǒng)，分別為三氯甲烷-乙醇-冰乙酸（6∶1∶0.1）；三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（5∶1∶0.2）；三氯甲烷-丙酮-甲酸（7∶2∶1）。結(jié)果表明三氯甲烷-丙酮-甲酸（7∶2∶1）為展開系統(tǒng)時(shí)效果最好，斑點(diǎn)清晰，無(wú)拖尾，分離度良好，故以此為展開系統(tǒng)。同時(shí)本研究對(duì)點(diǎn)樣量也進(jìn)行了考察，對(duì)照藥材溶液、供試品溶液點(diǎn)樣量考察了3 μL、5 μL、10 μL，結(jié)果表明對(duì)照藥材和供試品溶液分別為3 μL、10 μL時(shí)，斑點(diǎn)集中、清晰、不拖尾。故確定對(duì)照藥材溶液、供試品溶液點(diǎn)樣量分別為3 μL、10 μL。本研究對(duì)方法進(jìn)行耐用性實(shí)驗(yàn)考察，采用不同廠家的薄層板考察：①硅膠G板（青島海洋化工有限公司）；②硅膠G板（煙臺(tái)）；③硅膠G板（青島海浪硅膠干燥劑公司），展開劑為三氯甲烷-丙酮-甲酸（7∶2∶1），點(diǎn)樣量為供試品溶液、對(duì)照品溶液各10 μL、3 μL，顯色劑為2%三氯化鐵乙醇溶液，于日光下檢視。

結(jié)果表明，供試品在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。Rf值適中，分離度良好，斑點(diǎn)檢視清晰，分別采用不同廠家生產(chǎn)的硅膠G板按照上述方法進(jìn)行耐用性實(shí)驗(yàn)考察，結(jié)果在不同條件下該方法均能將樣品良好的分離，斑點(diǎn)檢視清晰，結(jié)果表明該方法耐用性良好。

2.2.2 ?紅花薄層色譜鑒別［1-4］ 稱取阿如久巴丸樣品粉末3 g，置于具塞錐形瓶中，加入80%丙酮5 mL，密塞，振搖15 min，靜置，取上清液作為供試品溶液。按處方中藥材的比例，自配不含紅花的藥材粉末作為陰性樣品，按照阿如久巴丸供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。取紅花對(duì)照藥材0.5 g，同供試品溶液制備方法制備對(duì)照藥材溶液。將上述制備的供試品，陰性對(duì)照以及對(duì)照藥材溶液用微量進(jìn)樣器點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板，供試品溶液和陰性對(duì)照溶液，以及對(duì)照藥材溶液各取5 μL，展開劑為乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7∶2∶3∶0.4），待預(yù)飽和20 min后，展開，取出，晾干。供試品色譜中，觀察到各批次供試品溶液與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰。3批供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。該鑒別方法對(duì)該藥中紅花的鑒別具有很好的適應(yīng)性，分離度好，Rf值適中，重現(xiàn)性較好。結(jié)果如圖3所示。

本研究考察了3個(gè)展開系統(tǒng)，并對(duì)其比例進(jìn)行調(diào)整，分別為氯仿-丙酮-冰乙酸（6∶1∶0.1）、氯仿-乙酸乙酯-甲酸（5∶2∶0.2）、乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7∶2∶3∶0.4），結(jié)果以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7∶2∶3∶0.4）為展開系統(tǒng)時(shí)效果最好，斑點(diǎn)清晰，無(wú)拖尾，分離度良好，故以此為展開條件。同時(shí)本研究對(duì)點(diǎn)樣量也進(jìn)行了考察，對(duì)照品溶液、供試品溶液點(diǎn)樣量考察了3 μL、5 μL、10 μL，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)照藥材溶液和供試品溶液為5 μL時(shí)，斑點(diǎn)集中、清晰、不拖尾。故確定對(duì)照藥材溶液、供試品溶液點(diǎn)樣量分別為5 μL。本研究對(duì)方法進(jìn)行耐用性實(shí)驗(yàn)考察，采用不同廠家的薄層板考察：①硅膠G板（青島海洋化工有限公司）；②硅膠G板（煙臺(tái)）；③硅膠G板（青島海浪硅膠干燥劑公司），展開劑為乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7∶2∶3∶0.4），點(diǎn)樣量為供試品溶液、對(duì)照品溶液各5μL，于日光下檢視。

結(jié)果表明，供試品在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的斑點(diǎn)。Rf值適中，分離度良好，斑點(diǎn)檢視清晰，分別采用不同廠家生產(chǎn)的硅膠G板按照上述方法進(jìn)行耐用性實(shí)驗(yàn)考察，結(jié)果在不同條件下該方法均能將樣品良好的分離，斑點(diǎn)檢視清晰，表明該方法耐用性良好。

2.3 阿如久巴丸水分含量、灰分及浸出物測(cè)定

2.3.1 水分測(cè)定 根據(jù)2020版《中國(guó)藥典》四部通則0832水分測(cè)定項(xiàng)下［6］，選取第二法烘干法對(duì)阿如久巴丸進(jìn)行水分含量測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)方法：差減法精密稱取阿如久巴丸藥材粉末3 g左右，平鋪于干燥至恒重的已編號(hào)稱量瓶中，厚度不超過5 mm，疏松阿如久巴丸藥材粉末不超過10 mm，打開瓶蓋在105 ℃下干燥5 h后將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，冷卻至室溫，精密稱定重量。再在上述溫度干燥1 h，放冷，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg為止。累計(jì)烘干6 h。根據(jù)公式計(jì)算阿如久巴丸樣品中含水量。

烘干法共測(cè)定5批阿如久巴丸，其中水分含量最高的批次為8.00%，最低為6.24%，平均值為6.99%。具體結(jié)果見表2。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，阿如久巴丸不同來(lái)源樣品應(yīng)用烘干法測(cè)定水分值相差最大在1.76%。按照2020版《中國(guó)藥典》四部通則0832水分測(cè)定法測(cè)定，5批樣品的水分均小于9.0%，符合規(guī)定。

2.3.2 灰分測(cè)定 根據(jù)《中國(guó)藥典》2020版第四部通則2302灰分測(cè)定法［6］，對(duì)阿如久巴丸樣品進(jìn)行總灰分及酸不溶性灰分的檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)方法：差減法精密稱取5 g阿如久巴丸樣品于熾灼至恒重的已編號(hào)瓷坩堝中。在電爐上加熱30 min使樣品粉末碳化，待坩堝中無(wú)白煙冒出時(shí)表明樣品粉末已碳化完全。將坩堝放入馬弗爐中550 ℃下熾灼灰化2 h后取出，冷卻至150 ℃左右放入干燥器中冷卻至室溫，稱重，再放入馬弗爐中灰化1 h，取出，稱重。重復(fù)操作2次后達(dá)到恒重，累計(jì)熾灼4 h。根據(jù)公式計(jì)算阿如久巴丸中總灰分含量。

取上項(xiàng)所得的總灰分，在坩堝中加入10% 鹽酸溶液10 mL，蓋上蓋子，置水浴上加熱10 min，坩堝蓋用5 mL熱水沖洗，洗液并入坩堝中，用快速定量濾紙過濾，坩堝內(nèi)的殘?jiān)脽崴从跒V紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止。濾渣連同濾紙移置同一坩堝中，同時(shí)在另一坩堝中放入一張快速定量濾紙作為空白實(shí)驗(yàn)。坩堝及樣品105 ℃下干燥，電爐上加熱至完全碳化后，移入馬弗爐中550 ℃熾灼至恒重。根據(jù)公式計(jì)算阿如久巴丸樣品中酸不溶性灰分的含量。

空白試驗(yàn)及5批樣品結(jié)果見表3和表4，酸不溶性灰分空白試驗(yàn)結(jié)果如表3所示；阿如久巴丸的總灰分含量最高為23.10%，最低為19.87%，平均值為21.43%。試驗(yàn)結(jié)果見表4。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明阿如久巴丸的總灰分含量與酸不溶性灰分含量差異較大。推測(cè)阿如久巴丸中堿性無(wú)機(jī)成分含量較大的原因。各樣品總灰分平均為21.43%，上浮20%為25.72%。酸不溶性灰分平均含量為0.296%，上浮20%為0.355%。對(duì)阿如久巴丸的總灰分及酸不溶性灰分的檢測(cè)是保證阿如久巴丸用藥安全的一項(xiàng)重要指標(biāo)，建議總灰分不得過26.0%，酸不溶性灰分不得過0.36%，一批不合格。

2.2.3 浸出物測(cè)定 根據(jù)《中國(guó)藥典》2020年版第四部通則2201浸出物測(cè)定法［6］，測(cè)定阿如久巴丸浸出物含量。

實(shí)驗(yàn)方法：差減法精密稱取4 g阿如久巴丸樣品于250 mL錐形瓶中，精密加水100 mL，密塞，冷浸，前6 h內(nèi)時(shí)時(shí)振搖，再靜置18 h，用干燥濾器迅速濾過，精密量取續(xù)濾液20 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。根據(jù)公式計(jì)算阿如久巴丸中浸出物的含量。

差減法精密稱取5份3 g上述同一批次阿如久巴丸樣品分別置于100 mL錐形瓶中，精密加水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇及95%乙醇50 mL，密塞，稱定重量，再靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用所用溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。根據(jù)公式計(jì)算阿如久巴丸中浸出物的含量。

取同一批次的阿如久巴丸加同一溶劑95%乙醇，分別考察了冷浸法與熱浸法，結(jié)果見表5。熱浸法所得的浸出物含量高于冷浸法所得。故進(jìn)而選擇了熱浸法對(duì)5種溶劑進(jìn)行了考察，所得結(jié)果見表6。根據(jù)表6結(jié)果，最終選定95%乙醇為浸出物提取溶劑，對(duì)5個(gè)批次進(jìn)行浸出物含量考察。結(jié)果見表7。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明來(lái)自西藏雄巴拉曲制藥有限公司的阿如久巴丸的浸出物含量高，而來(lái)自西藏自治區(qū)藏醫(yī)院門孜康制劑室阿如巴丸浸出物含量低，推測(cè)原因可能與原藥材的產(chǎn)地、采收季節(jié)等因素有關(guān)，導(dǎo)致該批次的浸出物含量低。各批次浸出物含量平均值為33.35%。下浮20%為26.68%。對(duì)阿如久巴丸的浸出物含量檢測(cè)是保證該藥用藥安全的一項(xiàng)重要指標(biāo)，建議浸出物含量不得少于27.0%，有一批浸出物含量不合格。

3 結(jié)論

本研究基于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（藏藥）》1995年版第一冊(cè)和中國(guó)藥典基礎(chǔ)上［3-4］，通過顯微鑒別實(shí)驗(yàn)，制定了阿如久巴丸中訶子、紅花、藏茜草顯微鑒別方法，通過薄層色譜實(shí)驗(yàn)，制定了阿如久巴丸中訶子與紅花的薄層鑒別方法，完善了其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，能有效幫助阿如久巴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，為阿如久巴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立奠定基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2023-04-17 編輯：陶希睿）